ATM在肿瘤放射增敏治疗中的研究进展

共济失调毛细血管扩张症(ataxia-telangiectasia,AT)是一种罕见的常染色体隐性基因紊乱遗传病,其特点有:(1)对射线及其类似物的杀伤作用异常敏感,易发生细胞凋亡;(2)易患恶性肿瘤,主要以白血病和淋巴瘤、乳腺癌为多见;(3)端粒缩短、基因组、染色体不稳定性.现就ATM与肿瘤发生及放射增敏现状综述如下.     

ATM激酶对卵巢肿瘤发展过程影响的研究

目的研究肿瘤的发展过程和DNA损伤应答之间的关系。方法选取临床卵巢标本39例,其中正常卵巢组织3例,交界性卵巢肿瘤6例,高分化卵巢肿瘤6例,中分化卵巢肿瘤7例和低分化卵巢肿瘤17例,分别对其进行组织分离细胞培养以及冷冻切片,采用免疫荧光和Western免疫印迹等技术检测ATM通路相关蛋白表达。结果在卵巢肿瘤的发展过程中,ATM通路的蛋白激酶在损伤时被激活,其激活的程度随着肿瘤由良性至恶性的转变而逐渐增加,即内源性损伤相应增多。在体外培养的卵巢癌细胞株OVCAR-8/TR和SKOV3中加入ATM抑制剂和造成DNA损伤的拓扑异构酶Ⅰ抑制剂——喜树碱（CPT）。其中使用ATM抑制剂的细胞凋亡率增高,ATM通路的下游激酶γ-H2AX免疫荧光染色减弱;而CPT处理的细胞凋亡率也增高,但-γH2AX免疫荧光染色增强。结论在卵巢肿瘤由良性到恶性的转变过程中,ATM通路起到了阻碍肿瘤的发展和增加基因组稳定性的作用。     

ATM对DNA损伤后细胞反应信号传导通路的调控作用

物理、化学及生物体自身的因素均可以导致染色体DNA的损伤，引起DNA单链或双链的断裂，受损的DNA能够继续复制并畸变或激活致癌基因。机体多通过激活细胞周期检测点、DNA修复蛋白以及保持与调控端粒功能等方式，或修复损伤的DNA，或使受损细胞凋亡，从而保持生物体DNA的稳定。本文重点讨论放射线辐射造成DNA损伤后，共济失调－毛细血管扩张症突变基因（Ataxia－telangiectasiamutatedgene，ATM基因）的产物－ATM编码蛋白（ATM）在细胞反应信号传导通路的中枢调控作用。１共济失调－毛细血管扩张症与ATM１．１共济失调－毛细血…     

白藜芦醇抑制喉癌Hep-2细胞体外生长的初步研究

目的:研究中药白藜芦醇对喉癌Hep-2细胞的作用机制. 方法:应用单细胞凝胶电泳法(SCGE),检测白藜芦醇引起Hep-2细胞的DNA损伤. 结果:5和10 mL/L白藜芦醇能引起Hep-2细胞DNA损伤并具有剂量反应关系. 实验组细胞拖尾率(%)为82.2, 94.9,尾DNA含量(%)为12.25(9.10), 23.40(13.53),尾长(μm)为10.50(9.48), 18.45(8.20),尾动量(μm)为1.80(1.60), 3.80(3.73),显著高于对照组(P<0.01). 结论:中药白藜芦醇具有致Hep-2细胞DNA损伤的作用.     

ATM蛋白激酶依赖性信号转导通路研究进展

 毛细血管扩张共济失调突变基因(ataxia telangiectasia mutated gene, ATM基因)变异导致遗传性毛细血管扩张共济失调症(ataxia telangiectasia,A T)。ATM基因编码产物——ATM蛋白激酶主要分布于增殖细胞核中。根据ATM蛋白激酶在细胞周期中作用底物如检测点激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)、奈梅亨断裂综合症蛋白1(Nijmegen breakage syndrome protein 1,Nbs1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)等不同,形成了不同的ATM蛋白激酶依赖性信号转导通路。最近研究发现,ATM蛋白激酶依赖性信号转导通路参与细胞周期多个检测点的调控,在DNA双链断裂(DNA double strand break,DSB)损伤修复过程中发挥着至关重要的作用,暗示了ATM蛋白激酶或将成为恶性肿瘤放射治疗增敏新靶点。     

ATM与肿瘤相关性研究进展

<正>毛细血管扩张-共济失调突变基因(Ataxia-telangiectasia mutated,ATM)是近年来发现的在细胞DNA双链损伤修复时具有启动效应的基因,其表达状况与细胞受损后的修复、细胞凋亡周期的调控密切相关。最近研究表明,ATM表达及调控异常与肿瘤的发生密切相关,涉及癌基因的转化、肿瘤的生长和肿瘤血管生成。因此,对ATM的深入研究对探讨肿瘤发生     

RNA干扰Slug基因表达抑制胰腺癌侵袭转移的实验研究

目的探讨RNA干扰Slug基因表达对胰腺癌转移的抑制作用。方法用脂质体转染法将表达siRNA-Slug的真核表达载体pGenesil-1-Slug-siRNA(pSlug-siRNA)和空载体pGenesil-1-Neg-siRNA(pNeg-siRNA)导入PANC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆。观察siRNA-Slug对Slug表达的沉默及对胰腺癌细胞体外侵袭转移的抑制作用,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测不同处理组细胞中Slug mRNA的表达水平,Western-blot测定蛋白表达水平。建立不同组裸鼠原位胰腺癌模型,观察Slug沉默对裸鼠原位胰腺癌转移的抑制作用。结果pSlug-siRNA组细胞内Slug mRNA及Slug蛋白的表达被有效沉默。重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验显示,pSlug-siRNA组、空白对照组、pNeg-siRNA组穿透基底膜细胞数分别为(35±10)、(228±71)、(219±72)个/高倍镜(×200),pSlug-siRNA组明显低于空白对照组和pNeg-siRNA组,差异分别有统计学意义(P<0.05)。裸鼠体...     

反义ATM在体外对喉鳞状细胞癌ATM蛋白表达影响的研究

目的：用ATM反义多核苷酸作用于喉鳞状细胞癌以研究其对ATM蛋白表达的影响,进而推测其对放射治疗的敏感性。方法：用Western blot对AS、Sen、Mis、lipo与hep -2组的ATM蛋白进行分析。结果：AS、Sen、Mis、lipo与hep -2组（对照组）的ATM蛋白相对表达量以AS - lipo组最低,...     

siRNA抑制人乳腺癌KLK6基因表达的实验研究

目的探讨siRNA沉默KLK6基因表达对乳腺癌细胞生长的抑制作用及其机制,为乳腺癌的基因诊断和治疗提供理论依据。方法针对KLK6 mRNA序列设计合成siRNA,构建2个重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6和PGCsilen-cerTMH1/GFP/Neo/Non;将重组质粒导入乳腺癌MCF-7细胞株,G418筛选获得稳定转染的细胞株;实验分为脂质体对照、阴性质粒转染对照及KLK6 siRNA重组质粒转染组,实时荧光定量PCR法检测KLK6 mRNA的表达的变化,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测量细胞生长情况。结果测序证实表达载体构建成功,在稳定转染重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6的乳腺癌MCF-7细胞株中,KLK6 mRNA抑制率(76%)明显高于阴性质粒对照组(2.7%),MCF-7细胞增殖活性显著低于阴性对照组和脂质体对照组。结论重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6可抑制乳腺癌细胞中KLK6基因的表达,并抑制乳腺癌细胞的生长。     

下调PD-L1 表达对吉非替尼耐药性非小细胞肺癌细胞的影响

目的：研究下调程序性细胞死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)表达对吉非替尼耐药性（gefitinibresistant,GR）非小细胞肺癌细胞的作用及机制。方法：通过RT-qPCR和Western blot检测各非小细胞肺癌细胞程序性细胞死亡1(programmed cell death 1,PD1)和PD-L1 mRNA和其蛋白表达水平;获得GR细胞H1703/GR,CCK-8检测细胞活性,Western blot检测PD1和PD-L1蛋白表达;转染sh-PD-L1进入H1703/GR细胞,CCK-8检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达;加入PI3K/Akt/mTOR通路激活剂IGF-1,CCK-8检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果：与人永生化肺上皮细胞株16HBE相比,非小细胞肺癌细胞株GLC82、A549、PC9、SK-MES-1、H1703、L78、H460、H661中PD1和PD-L1 mRNA及蛋白表达均上调（P<0.05、P<0....     

β-连环素在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨β-连环素(β-cat)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与NSCLC的发生、发展及临床预后的关系。方法:应用免疫组化PicTureTM通用型二步法,观察43例NSCLC患者及7例正常肺组织中的β-cat蛋白的表达。结果:在43例NSCLC中,β-cat蛋白的异常表达率为65.1%;β-cat异常表达与病理分级和淋巴结转移显著相关(P<0.05);β-cat异常表达者生存时间明显少于正常表达者。结论:β-cat蛋白表达与NSCLC的发生、发展及预后关系密切,可作为评估NSCLC进展及预后判断的有价值的指标。     

抗人非小细胞肺癌单克隆抗体对肺腺癌抑制作用的实验研究

目的:研究抗人非小细胞肺癌单克隆抗体(单抗)NJ488-1对肺腺癌的体内外抑制作用。方法:将人肺腺癌细胞SPC-A1分别与不同浓度(0、200、400、800、1 600、2 000μg/ml)的单抗NJ488-1在双层琼脂中共同培养2周,计算克隆形成率、抑制率;建立人肺癌移植瘤动物模型,腹腔注射不同剂量(200、400、800μg)单抗或生理盐水,作为单抗组和对照组,测量肿瘤体积,3周后处死小鼠,称量肿瘤湿重,计算抑瘤率;400μg/ml单抗与SPC-A1细胞作用24、48 h后,观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:软琼脂克隆形成试验中,200μg/ml单抗作用SPC-A1细胞2周后克隆抑制率为23.4%,400μg/ml达62.5%,800μg/ml及以上浓度抑制率达100%;裸鼠移植瘤实验,400、800μg单抗组平均肿瘤体积显著小于对照组(P=0.004,P=0.003);4组小鼠平均瘤重组间差异有统计学意义(P=0.044),其中400、800μg单抗组平均瘤重显著低于对照组(P=0.032,P=0.015),200μg和800μg单抗组间也存在显著差异(P=0.048),200、400、...     

三叶青总黄酮克服吉非替尼耐药的体外研究

目的 研究三叶青总黄酮克服人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞对吉非替尼的耐药性及机制。方法 首先,采用大孔吸附树脂分离纯化三叶青总黄酮。然后,将PC9/R细胞（PC9细胞的获得性吉非替尼耐药株）分为对照组（CK组）、吉非替尼组（G组）、三叶青总黄酮组（TF组）、吉非替尼联合三叶青总黄酮组（G+TF组）,运用MTT法检测不同浓度三叶青总黄酮、吉非替尼对PC9/R细胞增殖情况以及两药联用效果。G组、TF组和G+TF组分别加入吉非替尼17μM、三叶青总黄酮20或30μg/mL、吉非替尼17μM+三叶青总黄酮20或30μg/mL,CK组则不加药处理。加药24 h后,利用流式细胞术分别检测不同组别PC9/R细胞凋亡情况。最后,运用Western blot法检测不同处理后,细胞内表皮生长因子受体（EGFR）信号通路及其旁路肝细胞生长因子（HGF）/MET/磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)中各蛋白的表达水平。结果 MTT实验结果显示,与G组细胞活性[（80.24±7.12）%]比较,G+20μg/mL TF组[（40.16±1.43）%]和G+30μg/mL TF组[（29.89...     

细胞自噬对吉非替尼抑制肺癌细胞增殖的影响

目的 探讨细胞自噬对吉非替尼（Gefitinib）抑制非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖的影响。方法 采用Western blotting和LC3抗体检测自噬标志物LC3Ⅱ的含量,判断Gefitinib是否诱导NSCLC Calu6和H460细胞自噬。采用增强绿色荧光蛋白（EGFP）-LC3b质粒转染NSCLC细胞系Calu6和H460,再用40 μmol/L Gefitinib处理细胞48 h,观察绿色荧光蛋白（GFP）的分布情况。分别采用细胞自噬诱导剂依维莫司（Everolimus）、Gefitinib和Gefitinib联合Everolimus处理H460细胞,药物处理10 d后用结晶紫染色,显微镜下统计克隆数,计算不同药物刺激后细胞克隆形成数和药物对H460细胞的抑制率。结果 Western blotting检测显示,Gefitinib 40 μmol/L处理细胞48 h后,明显增加LC3Ⅱ的积累,绿色荧光呈散点状分布。经Everolimus、Gefitinib和Gefitinib联合Everolimus处理后,H460细胞克隆形成数差异有统计学意义（P<0.05）,其中Gefitinib联合Everolimus处理对H460细胞的抑制率最强,两者之间有协同作用。结论 Gefitinib能够诱导NSCLC细胞自噬,并且增加细胞自噬能增强Gefitinib对肺癌细胞增殖的抑制率。     

PHLPP在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的：探讨PHLPP在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学染色的方法检测82例NSCLC组织中PHLPP蛋白的表达情况，并结合临床及病理因素进行相关性分析。结果 PHLPP主要在细胞膜上表达，在NSCLC中63%阴性表达、11%为＋、10%为＋＋、16%为＋＋＋，PHLPP的表达与NSCLC的分化程度存在显著相关性（P=0.024），与年龄、性别、吸烟状况、病理类型及分期没有显著相关性。结论 PHLPP蛋白在人NSCLC组织中表达率为37%，与NSCLC的分化程度有相关性。     

下调叉头转录因子M1基因表达对非小细胞肺癌细胞生长与侵袭能力的影响

目的 研究用叉头转录因子M1(FoxM1)基因小干扰RNA下调非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株FoxM1基因表达后细胞增殖与侵袭能力的改变,为开发新的NSCLC靶向治疗方法提供依据.方法 设计靶向FoxM1小干扰RNA(siFoxM1),分别以siFoxM1和无关对照siRNA转染人NSCLC细胞株SPC-A-1、A549和LTEP-a-2,采用实时逆转录PCR和蛋白质印迹法检测FoxM1 mRNA和蛋白表达,采用集落形成试验、划痕试验和细胞侵袭试验研究下调FoxM1基因表达对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果 转染siFoxM1可高效特异地下调SPC-A-1、A549和LTEP-a-2细胞的FoxM1mRNA表达(分别下降83.9%、83.6%、88.6%)和蛋白表达.转染siFoxM1的SPC-A-1、A549和LTEP-a-2细胞集落形成数[分别为(136.0±15.5)、(87.0±2.6)和(121.7±9.4)个]和穿膜细胞数[分别为(19.2±2.5)、(4.2±0.8)和(6.2±1.8)个]均明显低于转染无关对照siRNA细胞[集落形成数分别为(222.3±20.5)、(164.7±14.1)和(260.7±13.5)个,穿膜细胞数分别为(81.4±6.2)、(39.2±4.6)和(35.6±3.0)个,均P<0.01];转染siFoxM1的SPC-A-1细胞划痕愈合率(52.6%±7.8%)明显低于转染无关对照siRNA细胞(85.3%±18.6%,P<0.01).结论 FoxM1基因表达下调可显著降低多种NSCLC细胞的增殖与侵袭能力,提爪FoxM1是潜在的肺癌治疗靶点.     

组织因子表达在非小细胞肺癌转移中的意义

目的探讨组织因子(TF)表达在非小细胞肺癌转移中的意义。方法利用HE染色对75例非小细胞肺癌患者的石蜡标本进行肺癌原发灶及是否有淋巴转移行病理确认;应用免疫组化SABC法检测所有肺癌组织标本中TF的表达。结果 75例非小细胞肺癌TF阳性表达49例,阳性率为65.3%;在48例发生淋巴结转移的患者中,40例肺癌原发灶TF表达为阳性(包括19例强阳性),阳性率为83.3%;27例未发生淋巴结转移的患者中,9例肺癌原发灶TF表达为阳性(包括2例强阳性),阳性率为33.3%。结论伴有淋巴转移的非小细胞肺癌原发灶高水平表达TF,TF与肿瘤的转移密切相关。     

非小细胞肺癌组织中Moesin表达及临床意义

目的:探讨膜结构伸展刺突蛋白(Moesin)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达差异与临床意义.方法:采用免疫组化法检测100例不同病理特点的非小细胞肺癌组织和50例正常非肿瘤组织中Moesin的表达,结合临床病理特点及预后分析非小细胞肺癌中Moesin阳性表达的临床意义.结果:非小细胞肺癌组织Moesin阳性表达率为90.00％(90/100),正常肺组织中阳性表达率为4.00％(2/50),两者比较差异有统计学意义(P＜0.05);Moesin在TNM不同分期的非小细胞肺癌组织及淋巴结转移标本中表达差异有统计学意义(P＜0.05);非小细胞肺癌Moesin表达阴性组和阳性组之间生存率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:Moesin在非小细胞肺癌的阳性表达与淋巴结转移、肺癌分期和患者预后有一定相关性,可作为判断非小细胞肺癌患者预后评估的参考依据.     

VEGF逆转miR-200b促进非小细胞肺癌增殖的作用

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)在miR-200b抑制非小细胞肺癌(NSCLC)增殖中的作用及机制。方法选择2013年2月至2014年5月在本院经手术治疗的65例NSCLC患者的肿瘤组织,qRT-PCR检测NSCLC组织中miR-200b与VEGF的表达,并统计分析NSCLC组织中miR-200b与VEGF表达的相关性;常规培养A549、H460及16HBE细胞,qRT-PCR检测各组细胞中miR-200b与VEGF的表达;将常规培养的A549细胞随机分为四组,即 miR-200b mimics+vector、miR-200b mimics+VEGF组、miR-200b inhibitor+scramble组、miR-200b inhibitor+VEGF-siRNA组,其中miR-200b mimics+vector组与miR-200b inhibitor+scramble组作为阴性对照,采用MTT法检测各组吸光度值(OD值)。结果 qRT-PCR结果显示,miR-200b在NSCLC组织的表达水平为(0.682±0.106),VEGF在NSCLC组织的表达水平为(2.731±0.597),相关性分析显示在NSCLC组织中miR-200b与VEGF的表达呈负相关(r=-0.514,P<0.001);miR-200b在A549、H460细胞中的表达显著低于16HBE细胞,差异有统计学意义(P=0.000),而VEGF在A549、H460细胞中的表达明显高于16HBE细胞,差异有统计学意义（P=0.000）;MTT结果显示,miR-200b mimics+VEGF组A549细胞在48 h、72 h的细胞增殖率明显高于miR-200b mimics+vector组, miR-200b inhibitor+VEGF-siRNA组A549细胞在48 h、72 h的细胞增殖率明显低于miR-200b inhibitor+scramble组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-200b与VEGF在NSCLC组织及细胞中表达呈负相关;VEGF逆转miR-200b对NSCLC细胞增殖的作用。