重组腺病毒载体疫苗

人腺病毒已成为极具发展前景的表达外源免疫原基因的载体之一。本文详述了携带各种病毒保护性抗原基因的重组腺病毒诱生抗病毒免疫应签以及抗病毒保护作用的能力。     

腺病毒载体在病毒性疫苗中的研究进展

基于腺病毒载体安全性好、诱导体液和细胞免疫效率高、容纳外源基因片段大、易于大规模培养等优点,其为构建新型疫苗提供了新的思路与手段.此文简要综述了腺病毒的生物学特性、腺病毒载体的构建策略、以腺病毒为载体构建病毒性疫苗的研究现状和目前存在的问题等,重点介绍了已经进入临床试验的腺病毒载体病毒性疫苗的研究进展.     

治疗性HIV腺病毒载体疫苗的生物分布

目的C57BL/6小鼠肌肉注射治疗性HIV腺病毒载体疫苗后,研究病毒载体在小鼠体内的生物分布情况,从而预测可能的毒性靶器官,考察疫苗在动物体内的代谢情况,并为疫苗的临床研究提供重要的参考资料。方法每只小鼠肌肉注射给予5×109vp。分别在给药后第3、15、30、60和85天进行组织脏器取材。用Qiagen DNA提取试剂盒进行组织脏器基因提取,用经过确认的实时定量PCR方法检测各组织脏器中病毒载体的分布情况。结果(1)病毒载体主要分布在注射位点,且随着时间的延长,注射位点中病毒载体的分布逐渐减少;(2)淋巴结、脾脏、肝脏和骨髓中有相对较少的病毒载体分布,且不断的消除,但是与注射位点中的病毒载体的分布相比非常少,随着时间的延长,可以完全消除;(3)所有动物的性腺(睾丸/子宫,附睾/卵巢)、肾脏、肺脏、脑、心脏和血液中,在不同的时间点都没有检测到病毒载体的分布。结论治疗性HIV腺病毒载体疫苗肌肉注射给药后,能引起系统毒性的可能性较小,从疫苗的生物分布角度,治疗性HIV腺病毒载体疫苗是安全的。     

腺病毒载体研究进展

与其他真核 基因表达载相相比，腺病毒载体在基因的治疗方面已显示出独特优越性，并被广泛研究和应用。但由于未经改进的腺病毒载体往往诱导机体生产砉性细胞免疫应答，从而导致重组腺病毒在体内表达短暂。近年来，一些新型腺病毒开体和宿主细胞系相继问世，腺病毒载体在基因治疗文献的应用也日益广泛，并成这基因治疗研究的焦点之一。一些进展主要表现在尽可能缺失更多的腺病基因并建立相应的互补细胞系。本文就近年来腺病毒载体的     

腺病毒载体研究新进展

与其他真核基因表达载体相比,腺病毒载体在基因治疗方面已显示出独特优越性,并被广泛研究和应用.但由于未经改进的腺病毒载体往往诱导机体产生破坏性细胞免疫应答,从而导致重组腺病毒在体内表达短暂.近年来,一些新型腺病毒载体和宿主细胞系相继问世,腺病毒载体在基因治疗方面的应用也日益广泛,并成为基因治疗研究的焦点之一.一些进展主要表现在尽可能缺失更多的腺病毒基因并建立相应的互补细胞系.本文就近年来腺病毒载体的最新研究进展作一介绍.     

人腺病毒疫苗研究进展

人腺病毒（HAdVs）主要通过飞沫、粪口途径或接触污染物传播。自被发现以来,世界各地一直暴发由其引发的严重的相关呼吸道感染,特别是在军营中暴发频率较其他场所更高。针对HAdVs暴发流行,仍然无特效抗病毒药物,疫苗是降低HAdVs感染最有效的措施。美国最早开始研究腺病毒疫苗,也是现在全球范围内唯一一个持有口服活疫苗的国家。目前我国还未有腺病毒疫苗上市。本文针对HAdVs疫苗研究进展进行综述,为疫苗研制提供参考依据。     

恒河猴重复给药腺病毒载体疫苗毒性研究

目的 探讨以5型腺病毒为载体的人用疫苗Ad5 SARS-CoV-2(LW2006)经3次皮下重复给予恒河猴所产生的毒性反应,为其安全性评价实验和临床用药提供基础数据。方法 30例恒河猴,雌雄各半,按体重均衡随机分为对照组(生理盐水)、LW2006低剂量(0.5×10¹¹ VP)组和LW2006高剂量(2.0×10¹¹VP)组。通过皮下注射连续给药3周,每周给药1次,恢复期观察4周。于给药结束、恢复观察结束后,分别剖检18只和12只恒河猴。检测观察指标包括临床观察、体重、血液、生化、尿常规、淋巴细胞亚群、细胞因子、抗核抗体、脏器重量、脏器系数和病理学检查。结果 腺病毒疫苗可引起绝大部分动物给药部位皮肤皮下血管周围局灶性/多灶性炎细胞浸润。恢复期观察结束后,以上变化与给药结束后相比,皮下反应动物比例和程度均明显降低,其余检查脏器包括免疫器官胸腺、脾和淋巴结等均未见明显异常变化。结论 在本实验条件下,以5型腺病毒为载体的人用疫苗Ad5 SARS-CoV-2可引起恒河猴给药部位皮下局部轻度刺激性反应,恢复期可逆,无其他毒理学反应。     

腺病毒载体的研究及应用进展

病毒载体能够携带外源基因并包装成感染性病毒颗粒,介导外源基因的转移和表达。腺病毒载体转导目的基因具有高效率、低致病性、高滴度以及在体内不整合入宿主细胞染色体等优点,被认为是最有效的转基因载体之一,哺乳动物来源的各种腺病毒被广泛用于基因治疗、肿瘤治疗及疫苗等领域。此文对腺病毒载体的特点及研究进展做一综述。     

一种腺病毒载体疫苗的体外生物活性和细胞毒性研究

目的探讨一个以腺病毒为载体的人用疫苗(代号LMP-Ad)在传代动物细胞株上的表达能力和细胞毒性,为动物试验提供依据。方法受试物LMP-Ad以不同感染复数(MOI=3000、1000、300、100和30)感染非洲绿猴肾细胞(Vero)、幼仓鼠肾细胞(BHK)、小鼠成纤维细胞(L929)和人胚肺二倍体细胞(KMB17)4种传代细胞株后,用免疫细胞化学染色法检测目的蛋白LMP在细胞膜上的表达情况;在MOI=3×105、3×104、3×103、3×102和30时,用MTT法和FCM检测细胞相对增殖率(RGR)和细胞死亡率。结果在4种细胞中均检测到目的蛋白的表达,其中BHK细胞呈弱阳性,而Vero和KMB17在MOI低至30时仍较好地表达目的蛋白;随着感染剂量的提高,4种细胞的RGR下降而死亡率上升,其中以Vero细胞的变化最为明显。结论受试物对上述细胞均具生物活性,并在高感染剂量时表现出对细胞的生长抑制和一定程度的损伤,4种细胞以Vero和KMB17对受试物最为敏感,更适于作为该类新药的体外研究模型。     

腺病毒载体疫苗在恒河猴体内的长期毒性试验

目的探讨以5型腺病毒为载体的人用疫苗Ad5-LMP2在恒河猴体内的药效学作用和安全性。方法恒河猴经im给予4.5×1011、1.5×1011和0.5×1011v.p·(kg·次)-1的Ad5-LMP2和等体积的磷酸盐缓冲液(对照组),每5d给药1次,共给药6次。在停药次日和停药15d时进行尿常规、血液、眼科、心电图、脏器重量和系数、大体观和病理组织学检查;给药前后定期采取猴血清并从剖检猴的脾脏分离淋巴细胞,用ELISA、病毒中和试验和ELISPOT检测腺病毒载体和目的基因蛋白产物LMP2诱导的体液和细胞免疫应答;通过PCR扩增各器官总DNA中的lmp2基因来检测Ad5-LMP2在体内的生物分布。结果在整个试验期间试验猴均未出现任何异常反应,也无动物死亡;给药组动物在整个给药期间的摄食、饮水和体重增长及上述各项常规毒理学检测中均未出现明显异常。受试物在试验猴体内诱发了较高水平的抗腺病毒中和抗体,但目的蛋白LMP2诱导的特异性细胞免疫应答未受抗腺病毒中和抗体的明显抑制;在猴的心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸(或卵巢)及给药部位均可检测到Ad5-LMP2并维持到停药后15d。结论在保证受试物药理学作用的前提下,恒河猴连续1mon肌肉注射相当人临床拟用剂量37.5倍的Ad5-LMP2,未见明显不良反应,中毒靶器官和中毒剂量未明显显示,其安全剂量大于4.5×1011v.p·(kg·次)-1。     

腺病毒载体疫苗的小鼠急性毒性试验

临床前安全评价是新药进入临床试验前必经的安全性试验阶段,根据已有的化学类药物临床前安全评价指导原则,多以急性毒性(acute toxicity)为开端。近年来随着分子生物学技术的蓬勃发展,在全新的新药开发思维模式下,涌现出大批生物制剂,其中以病毒载体向机体运送治疗性或预防性基     

腺病毒载体HIV疫苗在C57BL/6小鼠体内的生物分布评价

目的:建立腺病毒载体HIV疫苗检测的实时荧光定量PCR方法,并评价疫苗在C57BL/6小鼠体内的生物分布。方法:以gag基因片段为检测对象,建立绝对定量PCR方法。C57BL/6小鼠单次肌内注射5×109vp HIV疫苗,给药后d 3,15,30,60,85收集组织脏器,用建立的荧光定量PCR方法定量检测HIV疫苗。结果:检测方法线性范围为1×102～1×107copies.μL-1,特异性强,重复性较好。HIV疫苗主要分布在注射位点,淋巴结、脾脏和肝脏也有少量分布;疫苗的量随时间延长逐渐减少。结论:肌内注射HIV疫苗后导致广泛的分布,分布的量呈时间依赖性减少,没有生殖细胞转移的危险,HIV疫苗在小鼠体内是安全的。     

腺病毒SARS疫苗可诱导猴子的免疫反应

美国的研究者报告，一种以腺病毒为基础的疫苗在猴子体内可诱导特异性针对严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒的T细胞和病毒中和抗体反应。     

重组病毒载体疫苗的研究进展

重组病毒载体疫苗的原理是将外源基因插入病毒基因组以构建重组病毒,免疫机体后在体内表达相应蛋白并诱导特异性免疫应答。该类疫苗具有载体种类多、插入片段长、能同时诱导体液免疫和细胞免疫等优势,能克服灭活疫苗的效力维持时间短和减毒活疫苗回复突变的弊端。此文综述了重组病毒载体疫苗的最新研究进展,为将来的研究提供参考。     

痘病毒载体艾滋病疫苗研究进展

艾滋病是一种传染性强、传播速度快、传播范围广、病死率高的传染病.抗逆转录病毒药物可以抑制感染者体内病毒的复制,但不能将其完全清除.研究显示,以痘病毒为载体,经过局部基因修饰后研制的预防性艾滋病疫苗具有较好安全性和一定免疫原性.此文对痘病毒载体艾滋病疫苗的研究进展进行综述.     

DNA疫苗、重组病毒载体复合型疫苗的临床前毒理学研究

本研究中的复合型疫苗是采用双疫苗组分-DNA疫苗和重组痘病毒载体疫苗(简称“痘苗”),免疫策略为“prime-boost”方案。本研究设计了DNA单独免疫、复合型疫苗以及痘苗单独免疫1次和2次的毒性研究。并且根据其体液免疫和细胞免疫的特点,检测其免疫原性、免疫毒性相关指标,进行了     

基因治疗用腺病毒载体

腺病毒载体转基因效率高，不受靶细胞是否为分裂细胞所限；容易制得高滴度滴毒载体；生物活性评价简便；在临床基因治疗方面有了越来越多的应用。但由于较高的免疫原性，导致一过性表达及静脉反复使用困难。     

Merck进行新型HIV疫苗的概念验证性研究

Merck公司已经开始为其新型的抗HIV疫苗进行概念验证性研究。该疫苗被命名为MRKAd5HIV-1gag／pol／nef，是基于腺病毒的三价候选疫苗，将首次检测其是否能够改变HIV感染的临床过程。此项研究将招募不同种族的1500名男女志愿者，这些人感染HIV病毒的几率很高。