卷柏水部位对小鼠胸腺和脾脏的辐射防护作用

目的 观察卷柏水部位对受照射小鼠胸腺、脾脏细胞周期及凋亡率的影响.方法 设正常组、模型组、雌激素组和卷柏组;除正常组外,其它各组小鼠均接受6.0 Gy60Coy射线全身照射一次;各组小鼠分别于照射前72、48、24 h和照射后即刻灌服药物或蒸馏水.分别于照射后6、12、24 h立即断头处死小鼠,观察卷柏水部位对受照射小鼠胸腺、脾脏细胞周期及凋亡率的影响.结果 卷柏水部位可降低受照射小鼠胸腺、脾脏的Go/G1期细胞百分率,升高其G2/M、S期细胞百分率,也可明显降低其细胞凋亡率.结论 卷柏水部位可通过抑制细胞凋亡,调节受照射小鼠胸腺、脾脏的细胞周期进程,发挥其辐射防护作用.     

X射线全身照射对小鼠免疫功能的影响

目的:通过X-射线体外全身照射BALB/c小鼠建立小鼠辐射损伤模型,检测放射线对小鼠脾组织、单核巨噬细胞及T、B淋巴细胞损伤的剂量范围,探索放射线剂量与组织损伤程度之间的量效关系。方法:采用9种不同剂量的X-射线体外全身照射BALB/c小鼠,于照射后1d、60d、120d取腹腔细胞做大吞噬实验;分离脾细胞,MTT法检测T细胞增殖活性,同时取脾脏组织切片、HE染色,检测组织损伤程度;照射后120d取小鼠脾细胞用流式细胞仪检测T、B细胞数量百分比。结果:不同剂量X-射线照射的小鼠其大吞噬细胞的吞噬指数及T细胞的增殖指数之间均存在差异,且与放射剂量呈负相关性。FCM检测结果显示0.1Gy及以上剂量组与正常对照组相比较,小鼠T、B淋巴细胞数量减少(P<0.05)。0.25Gy和0.5Gy组T、B淋巴细胞数量明显高于除0.05Gy以外的其余各照射组,但是仍低于正常组(P<0.05)。脾组织切片显示,照射后1d 0.1Gy以上照射组脾脏炎性细胞浸润;60d后,4.0Gy和8.0Gy组脾脏明显萎缩、巨噬细胞增生、瘤样变,其余组损伤不明显;120d后8.0Gy组脾脏萎缩、红白髓分界不清,白髓损伤尤为严重,其余组不明显。结论:0.1Gy以上X-射线体外全身照射可引起小鼠免疫功能及组织损伤,且损伤程度与放射性强度呈剂量依赖性。     

低剂量X射线诱导小鼠胸腺细胞蛋白质表达及生物活性

目的:观察低剂量X射线照射的昆明小鼠胸腺细胞蛋白质表达及生物活性。方法:采用SephadexG-100凝胶过滤和高效液相分析75mGy全身照射组和假照射组小鼠胸腺细胞蛋白质的表达,通过小鼠脾淋巴细胞转化和人外周血淋巴细胞染色体畸变检测蛋白质表达的生物活性。结果:高效液相分析发现胸腺细胞24.5kD蛋白质照射组明显低于假照射组,这种降低的蛋白质组分在终浓度为6.25mg/L时,对ConA刺激正常小鼠脾淋巴细胞转化和X射线损伤人外周血淋巴细胞所致染色体畸变分别具有抑制和保护作用。结论:低剂量辐射兴奋效应可能与24.5kD蛋白质的表达下调有关。     

放射性胸腺损伤小鼠模型的建立

背景：胸腺对于维持机体免疫功能起着重要的作用,在放射性损伤发生时的损伤和修复机制有待于进一步研究,但目前缺乏相应的动物模型。 目的：单纯照射小鼠胸腺以构建放射性胸腺损伤模型。 方法：160只雌性BALB/C小鼠随机分为4组,每组40只,对照组予以假照射;6 Gy照射组给予⁶⁰Co γ射线6 Gy胸腺单次照射,9 Gy照射组给予胸腺单次照射9 Gy,12 Gy照射组给予胸腺单次照射12 Gy。观察各组小鼠照射后1-7 d体质量及进食水量变化,照射后1,7,14,21,28 d检测各组小鼠血象、胸腺指数及胸腺病理变化,并于照射后7 d检测小鼠食管、肺、气管病理组织学变化,照射后14 d检测小鼠外周血T细胞亚群和胸腺T细胞亚群表达。 结果与结论：与对照组相比,照射组小鼠各项指标均发生变化,但6 Gy照射组由于损伤相对较轻,在照后1周内就开始修复;12 Gy照射组出现了放射性食管、气管损伤,而9 Gy组即保留了放射性损伤的特点,也避免了其他脏器损伤带来的干扰,能反映胸腺放射性损伤后的改变。以9 Gy ⁶⁰Co γ射线单次纵膈照射可成功制作小鼠放射性胸腺损伤模型。     

电离辐射对小鼠派伊氏板细胞凋亡的影响

细胞凋亡是近年来生物学研究的热点,电离辐射作为一种外环境因素影响细胞凋亡的发生。本实验应用光镜电镜、原位末端标记(TUNEL)、流式细胞仪技术及反转录PCR法,研究了不同剂量电离辐射对小鼠派伊氏板细胞凋亡的影响及其作用机制。结果表明:常规光镜及透射电镜观察2GyX射线全身照射后,派伊代板无论是小结区还是小结间区细胞凋亡均增加,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩并有边移现象,同时可见到典型的凋亡小体及巨噬细胞吞噬小体的情况;0.075Gy、0.05Gy、0.025GyX射线全身照射后派伊氏板小结区和小结间区TUNEL阳性细胞数均有明显的时程变…     

顺铂和电子线照射对人肺癌细胞凋亡的影响

探讨单纯照射和单纯顺铂以及照射联合顺铂对肺癌细胞凋亡的影响。应用细胞培养技术,分别采用单纯照射,单纯顺铂,照射联合顺铂用于人肺癌细胞SPC—A4细胞,通过荧光染色法、DNA凝胶电泳分析等检测方法观察其诱导凋亡的差异。并进行量化以比较3种方法诱导细胞凋亡效果差异的程度。结果表明,顺铂组、照射组、顺铂联合照射组,DNA琼脂糖凝胶电泳及裂解显示凋亡发生。荧光染色法细胞凋亡的定性观察、定量分析表明,顺铂诱导的细胞凋亡呈时间依赖性,照射组中以6Gy和8Gy照射12h的凋亡率最高,在24h时凋亡率反而下降,顺铂联合照射与单纯照射及单纯顺铂相比,在对应时间段相比凋亡率前者明显高于后两者（P〈0．001）。结果表明,单纯顺铂和单纯照射及顺铂联合照射均能诱导肺癌细胞凋亡,顺铂联合照射诱导肺癌细胞的凋亡率明显高于单纯顺铂及单纯照射。     

致死剂量的γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞的凋亡规律及与bax、bcl-2和Bcl-XL表达的关系

目的：观察致死剂量γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞凋亡特征及与Bax、Bcl-2和Bcl-XL蛋白和mRNA表达的关系，为急性重度以上放射病的治疗提供依据。方法：清洁级C57小鼠250只，随机分为0、6、9、12、15和20 Gy6个剂量组.经γ线全身1次照射后，于照射后1～28d和3～12个月，活杀取胸腺和外周血，用原位末端标记(TUNEL)和麦格-姬姆萨(MGG)染色检测胸腺淋巴细胞的凋亡：用原位杂交和碱性磷酸酶免疫组化染色法，检测Bax、Bcl-2和Bcl-XL mRNA和其蛋白的表达。结果.(1)各剂量组小鼠外周血白细胞在照射后6h，出现一过性的升高，以后迅速下降.6Gy照射后7d降至最低，至照射后28d基本恢复到正常水平：(2)不同剂量的γ线照射后24h，胸腺淋巴细胞的凋亡率迅速升高；在6～12Gy范围内与照射的剂量呈正比，≥15Gy照射后变化不明显。(3)6Gy照射后24h，胸腺淋巴细胞的凋亡率达高峰，而后开始降低；但直至照射后6个月和12个月，凋亡率仍明显高于对照组。(4)6Gy照射后3h，胸腺淋巴细胞中Bax蛋白的表达即出现增加，至24h达峰值，显示出时效关系；而Bcl-2蛋白于照射后3h即明显下降，24h降至最低；Bcl-XL蛋白也在照射后24h降至最低。bax和bel-2 mRNA的检测与蛋白水平的检测一致。结论：经6～12 Gy照射后，淋巴细胞的凋亡与照射剂量成正比，≥15 Gy照射后凋亡率下降，提示≤12 Gy照射后胸腺淋巴细胞的凋亡是其死亡的主要方式。促凋亡蛋白Bax表达的增加及抗凋亡蛋白Bcl-XL表达的下降，与照射剂量和淋巴细胞的凋亡率呈现较好的对应关系，提示它们在致死剂量的照射所致胸腺淋巴细胞凋亡的调控中起着重要作用。     

RhIL-18对核辐射诱导小鼠脾细胞凋亡的抑制作用

目的探讨重组人白细胞介素18(rhIL-18)对核辐射所致小鼠脾细胞凋亡的抑制作用及其对免疫功能的调节调节。方法对32只C57小鼠分4组进行核辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用细胞死亡ELISA试剂盒测定胞浆中核小体含量,用DAN琼脂糖电泳检测凋亡细胞DNA片段,用淋巴细胞转化实验测定rhIL-18对脾细胞免疫功能的调节作用。结果与对照组比较,rhIL-18能够明显降低核辐射所致的小鼠脾细胞凋亡;提高核辐射损伤后小鼠的脾细胞细胞转化能力。结论rhIL-18可能通过抑制核辐射诱导的细胞凋亡而增强小鼠脾细胞功能。     

间充质干细胞可能通过调控免疫细胞促进再生障碍性贫血小鼠骨髓的造血功能

目的:探讨间充质干细胞(MSCs)影响再生障碍性贫血小鼠造血功能的可能免疫机制。方法:30只小鼠分3组,分别为单纯照射组、再障模型组、MSCs治疗组,建立再生障碍性贫血小鼠模型。单纯照射组仅经5Gy[60Co]γ射线照射,再障模型组经5Gy[60Co]γ射线照射后输注DBA/2小鼠胸腺淋巴结细胞1×106cell/只,MSCs治疗组经5Gy[60Co]γ射线照射后输注DBA/2小鼠胸腺淋巴结细胞1×106cell/只,3d后输注人骨髓MSCs1×106cell/只。观察各组小鼠外周血象、骨髓及外周血CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+、NK细胞变化及与造血的关系。结果:经5Gy[60Co]γ射线照射后,单纯照射组、MSCs治疗组外周血象第7d开始下降,21d血象恢复正常。再障模型组外周血象第7d开始持续性下降,至21d血象仍未恢复。照射后7d,各组小鼠间外周血CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+无明显差异,但MSCs治疗组NK细胞低于单纯照射组和再障模型组(P0.05)。照射后14d3组CD4+细胞比例均明显下降,CD8+细胞则表现不同,再障模型组与MSCs治疗组CD8+细胞比例明显高于单纯照射组,至照射后21d,MSCs治疗组CD8+、NK细胞与单纯照射组相近、而模型组则明显高于单纯照射组和MSCs治疗组;MSCs治疗组小鼠股骨病理切片中脂肪细胞比例明显低于再障模型组,与单纯照射组结果一致。结论:MSCs输注可能通过调控免疫细胞影响再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能。     

基础核医学

高天然本底辐射地区居民外周血淋巴细胞染色体稳定性畸变研究；6Gyγ射线对骨髓细胞生物力特性的影响；32^P-磷酸铬体外诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡；60^Coγ射线对大鼠肺β肾上腺素能受体再生成的抑调作用研究；三氧化二砷对鼻咽癌离体细胞的放射增敏作用；γ射线诱发小鼠γ-氨基丁酸受体结合活性改变和神经行为变化的观察；89^Sr内照射时小鼠骨髓DNA损伤的实验研究；扇贝多肽对60^Coy射线诱导的胸腺细胞凋亡的影响；盼生安对BEL-7402肝癌细胞的诱导分化作用；X射线诱导人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达上调；不同孕期雌性大鼠受137^Csγ射线照射后仔鼠脑发育的变化；早期成人股骨头缺血坏死骨显像与MRI和X线平片的对比研究；用放射性核素监测组织工程骨修复效果的实验研究；18^F-FDG PET显像对不同亚型淋巴瘤的诊断价值。     

重组色素上皮衍生因子对人视网膜微血管内皮细胞迁移及凋亡的影响

目的: 构建rAAV2-PEDF腺相关病毒,研究色素上皮衍生因子(PEDF)基因高表达对人视网膜微血管内皮细胞的作用。方法: 将PEDF基因克隆、重组到腺相关病毒载体pSNAV,得到的pSNAV-PEDF后转染BHK细胞,用含G418的培养基进行筛选,得到稳定转染pSNAV-PEDF的生产细胞系,用重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/△UL2感染细胞进行病毒包装,纯化后得到高滴度rAAV2-PEDF 病毒颗粒。按照10⁵v.g./cell的剂量进行rAAV2-PEDF病毒转染,分别设空白和阴性对照,激光共聚焦显微镜下观察GFP阳性细胞,Western blotting检测PEDF蛋白表达。Boyden小室法观察细胞迁移情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果: 通过PCR、酶切及基因测序的方法,证实rAAV2-PEDF构建成功。转染病毒48 h后,激光共聚焦显微镜下观察可见GFP阳性细胞,Western blotting检测,实验组PEDF表达明显强于其它组。rAAV2-PEDF干预正常氧条件下人视网膜微血管内皮细胞,正常对照组凋亡细胞比例为2.10%±0.53%,rAAV2-GFP组为3.40%±0.62%,rAAV2-PEDF组为1.60%±0.47%,各组间无显著差异(P＞0.05)。rAAV2-PEDF干预低氧条件下人视网膜微血管内皮细胞,单纯CoCl₂组凋亡细胞比例为4.00%±0.55%,CoCl₂+rAAV2-GFP组为6.10%±0.71%,CoCl₂+rAAV2-PEDF组为40.00%±2.10%。rAAV2-PEDF组与其它2组相比,有显著差异(P<0.05)。细胞迁移计数显示,正常对照组为33.0±2.7,rAAV2-GFP组为35.0±3.6,rAAV2-PEDF组为12.0±2.1,rAAV2-PEDF组与其它2组相比,有显著差异(P<0.05)。结论: 成功构建了rAAV2-PEDF,转染人视网膜血管内皮细胞后PEDF可稳定表达。PEDF高表达可显著抑制人视网膜微血管内皮细胞迁移并可在低氧条件下诱导其凋亡。     

结直肠癌原发灶、门静脉血和肝转移灶K-ras基因突变的研究

目的:观察结直肠癌患者门静脉血液、原发肿瘤组织及相应肝转移灶K-ras基因突变情况,分析三者的一致性,探讨结直肠癌患者门静脉血K-ras基因突变与肝转移关系。方法:实时荧光定量PCR技术和基因测序技术检测59例结直肠癌患者门静脉血液、原发肿瘤组织及15例肝转移灶K-ras基因突变,结合其临床资料分析。结果:59例结直肠癌组织中20例(33.9%)发现K-ras基因突变,18例(30.5%)结直肠癌患者的门静脉血中也发现K-ras基因突变,15例肝转移灶中8例(53.3%)发现K-ras基因突变,与原发癌组织的基因突变率差异不明显(P0.05)。18例门静脉血存在K-ras基因突变者,其相应的肿瘤组织中均发现K-ras突变。结直肠癌组织中无K-ras基因突变者,患者门静脉血未发现基因突变。8例肝转移灶发现K-ras基因突变者门静脉血亦均有K-ras基因突变,7例肝转移灶无K-ras突变者门静脉血也无K-ras突变。原发肿瘤组织、相应门静脉血和5例同时性、2例异时性肝转移灶的K-ras基因突变类型基本一致(即K-ras基因12密码子GGT突变为GAT或GTT),1例异时性肝转移灶K-ras基因突变类型为13密码子GGC突变为GAC。原发癌组织与门静脉血K-ras基因突变一致率为96.6%(57/59),肝转移灶与门静脉血K-ras基因突变情况基本一致,但突变类型有不同。结论:结直肠癌的原发灶、门静脉血及肝转移灶的K-ras基因突变较为一致,原发癌组织和门静脉血均有K-ras基因的突变,预示着肿瘤可能通过血行转移至肝脏。     

灵芝提取物对神经元缺氧复氧损伤的保护作用及其机制的离体研究

目的: 研究灵芝提取物(GLE)对原代大鼠皮层神经元氧糖剥夺-再复氧(OGD/R)损伤模型的影响,在细胞水平探讨GLE神经保护作用的机制。方法: 新生SD大鼠的皮层神经元原代培养至第7 d,用GLE预处理神经元OGD/R模型。选取OGD/R后的0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72 h作为观察点,观察GLE干预后对各个时点的细胞形态学、细胞毒作用、细胞线粒体活性、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达量的影响。结果: GLE(0.1、1、10 mg/L)能明显减少神经元LDH的释放,提高线粒体活性。流式细胞术结果证实了GLE能抑制神经元OGD/R损伤导致的凋亡,这种作用甚至能持续至OGD/R后的72 h。GLE(0.1、1、10 mg/L)下调caspase-3、caspase-8蛋白的表达,GLE (10 mg/L)还能下调caspase-9蛋白表达。结论: GLE对OGD/R诱导的神经元损伤有一定的保护作用,可能是有效防治急性缺血性卒中的神经保护药物。     

血府逐瘀汤对大鼠糖尿病性心肌病的影响

目的: 观察2型糖尿病心肌病大鼠心肌组织的病理改变以及血府逐瘀汤对于糖尿病性心肌病的治疗作用,探讨心肌病发生的病理机制。方法: 雄性Wistar大鼠42只,采用高脂高热量饮食诱导出胰岛素抵抗,加单次中等剂量(50 mg/kg)链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病动物模型。8周后采用心电图及超声心动图评价心肌受损情况;取血检测血糖、胆固醇、甘油三酯含量;心肌组织Masson染色定量左室心肌胶原纤维;TUNEL凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡,光镜和电镜观察心肌细胞结构破坏程度。结果: 与相同时点正常组比较,模型组血糖、甘油三酯、胆固醇含量升高(P<0.05),第11、14周左室收缩末期内径明显增厚(P<0.01),第14周左室舒张末期内径增厚(P<0.05),心肌组织结构破坏严重,胶原纤维含量增多(P<0.01),细胞凋亡增多;与相同时点模型组相比,血府逐瘀汤组大鼠血糖、胆固醇、甘油三酯明显降低(P<0.05),第11周左室收缩末期内径、第14周左室舒张末期内径增厚减低(P<0.05),第14周左室重量明显变轻(P<0.01),心肌组织破坏程度较轻,胶原纤维含量显著减少(P<0.01),心肌细胞亚细胞结构破坏程度较轻,细胞凋亡减少。结论: 糖尿病性心肌病时,血糖、胆固醇和甘油三酯含量升高,心肌增厚,心肌组织内胶原纤维含量增多,结构破坏严重,细胞凋亡增多;血府逐瘀汤能够降低糖尿病心肌病时血糖、胆固醇和甘油三酯水平,减轻心肌纤维化的病理改变程度,延缓糖尿病导致的心肌病进程。     

Apoptosis-Specific Protein (ASP) Identified in Apoptotic Xenopus Thymus Tumor Cells

A novel apoptosis-specific protein (ASP) has recently been identified in the cytoplasm of apoptotic mammalian cells. This paper investigates whether ASP is found in Xenopus thymus tumor-derived lymphoid cell lines undergoing apoptosis and also in apoptotic, nontransformed splenocytes. Cultured Xenopus tumor lymphoid cells induced to undergo, apoptosis by serum deprivation or treatment with the calcium ionophore, ionomycin, displayed altered morphology typical of apoptotic cells, as judged by flow cytometric light-scatter characteristics and by fluorescence microscopy of acridine-orange-stained cells. Flow cytometry of permeabilized cells and fluorescence microscopy of acetone-fixed cytospins revealed that apoptotic Xenopus tumor cells, especially those displaying loss or condensation of DNA, displayed increased expression of epitopes recognized by a rabbit polyclonal antibody against ASP. Flow cytometry confirmed that ASP is also expressed in splenocytes induced to apoptose by culture in ionomycin or following concanavalin A stimulation. No increased expression of ASP was seen when lymphoid tumor cells or splenocytes were induced into necrosis by overdose with the antifungal agent amphotericin B. Western blotting with antibody against ASP identified the emergence of several protein bands in cell lysates from apoptotic, but not necrotic, Xenopus tumor cells. The new and simple methodology for identifying apoptotic cells described here is likely to be of value to those studying immune system development and associated programmed cell death in Xenopus.     

肝癌Bel7402细胞HLA-E基因上调对NK细胞体外杀伤作用的影响

目的: 探讨肝癌Bel7402细胞人类白细胞抗原-E(HLA-E)基因上调对NK细胞体外杀伤作用的影响。方法: 体外构建Lentivirus/CMV/GFP-HLA-E慢病毒表达载体并转导肝癌Bel7402细胞,采用RT-PCR和Western blotting方法检测肝癌Bel7402细胞HLA-E基因mRNA水平和蛋白水平的表达,分析肝癌Bel7402细胞HLA-E基因上调及HLA-ABC抗体封闭靶细胞相应位点对NK细胞体外杀伤作用的影响。结果: Lentivirus/CMV/GFP-HLA-E重组慢病毒载体感染Bel7402细胞后不同时段(24 h、48 h、72 h、96 h)的HLA-E mRNA的表达明显上调,除在感染后24 h(P＜0.05)外,慢病毒过表达组在感染后48 h、72 h、96 h与Bel7402组比较,显著差异 (P＜0.01)。蛋白水平的表达亦明显上调:24 h、48 h、72 h、96 h外源性/内源性HLA-E吸光度比值与12 h比较显著差异 (P＜0.01)。未封闭的Bel7402组和Bel7402 Lenti HLA-E组比较,NK细胞的杀瘤活性差异显著(P＜0.05或P<0.01);封闭组和未封闭组比较,NK细胞的杀瘤活性差异显著(P＜0.05);Bel7402(封闭组) 和Bel7402 Lenti HLA-E(封闭组)比较,NK细胞的杀瘤活性有显著差异(P＜0.01)。结论: Lentivirus/CMV/GFP-HLA-E慢病毒表达载体能有效增加HLA-E的表达。NK细胞对HLA-E基因表达上调的Bel7402细胞的靶杀伤作用降低;抗HLA-ABC单抗封闭靶细胞相应位点后,NK细胞对靶细胞的杀伤能力普遍有所提高。     

体外定量测定细胞迁移方法的建立及应用

目的 :在体外细胞划痕损伤模型中建立定量测定ECV - 30 4细胞迁移的方法。方法 :改良了体外细胞划痕损伤模型。用显微电视图像定量处理系统定量测定细胞迁移。在体外细胞划痕损伤模型中观察了肝素 (hep arin)和凝血酶敏感蛋白 - 1(thrombospondin - 1)对ECV - 30 4迁移的影响。结果 :12 0次划痕模型中划痕损伤的平均宽为 (0 95± 0 0 8)mm ,长 (5 1 2 0± 3 4 0 )mm ,迁移细胞可在 4 8h - 72h内完全覆盖划痕区。 2 4h左右细胞迁移达高峰。在体外损伤划痕损伤模型中与对照组比 ,肝素对ECV - 30 4迁移起明显促进作用 ,TSP - 1起明显抑制作用。结论 :建立了一种在体外细胞划痕损伤模型中进行细胞迁移的定量测定方法。用此方法证明 ,肝素能促进ECV - 30 4细胞迁移 ,TSP - 1抑制迁移。     

自发性脑出血患者肺炎衣原体感染的研究

目的:探讨自发性脑出血与肺炎衣原体感染的关系。方法:检测9例自发性脑出血患者的外周血肺炎衣原体IgG、IgM抗体(微量免疫荧光法)、病变脑动脉组织肺炎衣原体DNA(PCR法)及肺炎衣原体主要外膜蛋白的表达(Western blot法)。 结果:患者IgG抗体的几何平均滴度(190.3±3.2)、IgG抗体阳性率(85.2%)、IgM抗体阳性率(30.8%)均显著高于对照组(分别为48.1±2.0、48.1%、4.8%,P<0.01,P<0.05,P<0.01);病变脑动脉中肺炎衣原体DNA检出率为88.9%(8/9);所有患者病变脑动脉都有肺炎衣原体主要外膜蛋白的表达。结论:自发性脑出血患者存在肺炎衣原体感染的证据,自发性脑出血与肺炎衣原体感染可能有关。     

Extracellular calcium is not required for gliotoxin or dexamethasone-induced DNA fragmentation: A reappraisal of the use of EGTA

The immunomodulating agent gliotoxin and related toxins cause apoptotic cell death in a variety of cell types including macrophages and thymocytes [Waring et al. (1988) J. biol. Chem., 263, 18,493-18,499; Waring et al. (1990) Int. J. Immunopharmac., 12, 445–457]. The mechanism of induction of apoptosis by gliotoxin is not yet known, although it does not require protein synthesis [Waring (1990) J. biol. Chem., 14,476-14,480], unlike dexamethasone-induced apoptosis in thymocytes. Because of the reported requirement for extracellular calcium in apoptosis induced by dexamethasone, we studied the effects of extracellular calcium on gliotoxin-induced apoptosis in macrophages. Initial experiments using calcium-depleted media showed no inhibition of apoptotic DNA fragmentation by gliotoxin. By measuring residual ⁴⁵Ca²⁺ remaining in cells pulsed with labelled calcium over the time period required for DNA fragmentation, we could demonstrate some uptake of extracellular calcium into treated cells as assessed by residual, slowly exchanging calcium. When cells were treated with the calcium chelator EGTA at 0.5-2 mM, calcium uptake was abolished but DNA fragmentation was unaffected. EGTA at higher concentrations, up to 8 mM, did inhibit DNA fragmentation without any additional inhibition of calcium uptake. Similar results were found for dexamethasone-treated thymocytes. Thymocytes treated with 8 mM EGTA, however, were not rescued from apoptosis but died by necrosis. These results indicate that extracellular calcium is not essential for apoptosis induced by these agents and that the use of high concentrations of EGTA to establish a requirement for extracellular calcium in apoptosis should be treated with caution.     

Dose-dependent opposite effect of zinc on apoptosis in mouse thymocytes

Zinc is a crucial nutritional component required for the normal development and maintenance of immune functions. It has been reported that zinc is a potent inhibitor of DNA fragmentation, the specific marker of apoptosis. The effect of zinc on apoptotic cell death has been previously studied in a narrow range of high zinc concentrations, and the role of physiological zinc doses has not yet been elucidated. In this paper we evaluate the effect of in vitro Zn²⁺ administration at concentrations higher than, corresponding to, and lower than the physiological concentration, in thymocytes from young mice. We demonstrate that Zn²⁺ has an opposite effect on apoptosis, inhibiting or increasing it depending on the Zn²⁺ concentration used. High Zn²⁺ concentrations (from 600 to 75 μM) inhibit both serum-free medium and DEX-induced thymocyte apoptosis. Low Zn²⁺ concentrations (from 15 to 7.5 μM) induce apoptosis or increase serum-free medium-induced apoptosis. The effect of low Zn²⁺ concentrations on DEX-induced apoptosis is dependent on the length of incubation, since Zn²⁺ has an additive effect with DEX in inducing DNA fragmentation at 8 h of culture, whereas it blocks DEX-induced apoptosis after 20 h incubation. Both DEX and 15 μM Zn²⁺-induced DNA fragmentation require protein synthesis, being blocked through cycloheximide. The inhibiting and inducing effects of Zn²⁺ on apoptosis are exerted on G₀/G₁ phase thymocytes. The inhibiting effect of Zn²⁺ on apoptosis is related to an increase in the number of CD4⁺CD8⁺ thymocytes. Concentrations of Zn²⁺ inducing apoptosis sometimes cause a decrease of CD4⁺CD8⁻ cells with a corresponding increase of CD4⁺CD8⁻thymocytes. These data show that in vitro Zn²⁺ has a dose-dependent opposite effect on apoptosis, suggesting that Zn²⁺ not only acts as an inhibitor but also plays a more complex role in physiological intrathymic cell selection.