药用蚯蚓纤溶酶的制备及其性质的研究

从爱胜蚓中制备药用纤溶酶，经工厂中试，收率为２．５２－２．７４％，纤溶活性为２４３３３－２６５６０ｍｍ＾２／ｍｇ；水解酪蛋白活性为５９８－６４０ｍＵ／ｍｇ。制备工艺重复性好，操作简易可行另报道了该酶的一些生化特性和稳定性的研究结果。     

海洋假单胞菌纤溶酶的体外溶栓实验研究

目的确证血纤维蛋白溶酶的体外溶栓作用。方法用血纤维蛋白平板法、体外血块溶解实验研究该酶的纤溶特点及对血块的溶解作用。结果可直接水解血纤维蛋白 ,溶栓活性同蝮蛇抗栓酶类似 ,但对红细胞形态没有影响。结论血纤维蛋白溶酶是一种直接纤溶酶 ,有较强的纤溶活性     

血浆纤溶酶测定的底物制备和正常值调查

纤溶酶(简称PL)是纤维蛋白溶解(纤溶)系统中的重要蛋白水解酶(原)。本文研究了用猪血浆和人血浆为底物,以刚果红显色法,测定血浆PL活性并依此法测定了225例正常人血浆PL活性的参考值。其结果如下: 材料与方法检查对象:经门诊严格体验,排除血栓性、出血性疾病、肝、肾疾病史。近期未服药物(口服避孕药史),并检测肝功、血脂、血尿常规、血小板计数等“正常”人,共225例。其中男性122例,女性103例。纤溶酶测定方法:基本原理为纤维蛋白(Fb)与刚果红结合形成不溶于水的复合物。在PL的作用下,水解出纤维蛋白降解产物(fdp),并释放出刚红果。后者在酸性条件下呈蓝色,其颜色的深浅与PL的活性呈正比。     

不同蚯蚓纤溶酶组分纤溶活性的相互作用

采用纤维蛋白平板法对从赤子爱胜蚓中纯化的4种纤溶酶(EFE-1，EFE-2，EFE-3，EFE-4)组分的单独作用及相互作用的活性进行了研究，结果表明，4种组分单独作用时以EFE-4的活性最强，其次是EFE-3，最弱的是EFE-1和EFE-2，4种组分之间存在着相互作用，其纤溶活性的大小因组合不同而不同，不同组分联合使用时，以EFE-2—4的活性最强，除EFE-1-3、EFE-3—4两组合的活性与其单独作用的活性差异不显著外，其它各组合的纤溶活性都显著地高于单独作用的活性     

纤溶酶治疗发病72小时内急性脑梗死的疗效观察

目的评价纤溶酶与三七总皂苷对比治疗急性脑梗死的疗效及安全性。方法急性脑梗死患者120例,应用投掷硬币法随机分为纤溶酶组与三七总皂苷组各60例,纤溶酶组给予纤溶酶治疗,三七总皂苷组给予三七总皂苷治疗,疗程均为14d,观察其临床疗效及神经功能缺损评分的变化。结果纤溶酶组显效36例（60．0％）及有效55例（91．7％）均明显高于三七总皂苷组的25例（41．7％）及46例（76．7％）,差异有统计学意义（P〈0．05）,2组神经功能缺损评分比较差异有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）。纤溶酶治疗后纤维蛋白原和血小板聚集率明显下降（P〈0．01）,而对凝血酶原时间无明显延长。结论纤溶酶是溶栓治疗发病72h内急性脑梗死患者的一种疗效好、安全性高的药物。     

赤子爱胜蚯蚓纤溶酶的研究：Ⅷ纤溶酶活性组分的确证

本文报告了应用电泳分离纤溶酶组分,电泳洗脱收集每个组分,然后测其活性的方法。证明赤子爱胜蚯蚓溶酶具有七个有活性组分,同时测定出在变性与变性纤维蛋白平板上溶纤行为的差异。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及抗栓活性研究

目的摸索蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶的抗血栓活性。方法采用分步盐析、透析、凝胶色谱和亲和色谱法分离纯化蚯蚓纤溶酶 ;此酶的体内抗栓活性检测采用动静脉旁路血栓形成抑制实验法。结果分离纯化得到的蚯蚓纤溶酶比活高 ,为 16 0 5IU/mg ;蚯蚓纤溶酶的体内血栓形成抑制效果比尿激酶作用显著。 结论该法分离纯化工艺简单 ,特异性好 ,纯化的纤溶酶比活高 ;体内抗栓活性比尿激酶作用显著     

赤子爱胜蚯蚓纤溶酶的研究Ⅷ纤溶酶活性组分的确证

本文报告了应用电泳分离纤溶酶组分,电泳洗脱收集每个组分,然后测其活性的方法,证明赤子爱胜蚯蚓纤溶晦具有七个有活性组分,同时测定出在变性与不变性纤维蛋白平板上溶纤行为的差异。     

延胡索纤溶酶的分离纯化及部分性质

目的从延胡索(Rhizoma corydalis)中分离纯化具有溶解纤维蛋白活性的单体蛋白单一组分,并对粗酶性质做初步研究。方法利用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换色谱从延胡索中纯化纤溶酶。结果从延胡索中纯化出两种纤溶酶,表观相对分子质量分别为33 000和59 000。粗酶用丝氨酸蛋白酶抑制剂鉴定为丝氨酸蛋白酶,ED-TA对酶活没有抑制作用。延胡索纤溶酶粗酶体外溶纤性质主要表现为激酶活性,在4~50℃活性稳定,50~75℃酶活有所下降;最适pH值为8.0,在pH 3.0左右,仍能保留大部分酶活;能抵抗胰蛋白酶水解和胃蛋白酶的作用。结论延胡索纤溶酶性质稳定,有希望研发成为一种溶栓新药。     

链霉菌产生的抗血栓活性物质研究进展

目的综述国内外研究人员从链霉菌中发现的抗血栓活性物质。方法检索了近几年国内外发表的相关文献,进行分析总结。结果人血液中的纤溶酶和纤溶酶原激活剂都属于丝氨酸蛋白酶,而链霉菌产生的具有纤溶活性的蛋白酶大多也属丝氨酸蛋白酶家族,且活性很好。结论链霉菌产生的纤溶活性蛋白酶具有诱人的应用前景,链霉菌可以作为抗血栓药物的新型来源。     

纤溶活性的药学测定方法研究

目前血栓性疾病是世界上最严重的影响人类健康的疾病,目前还缺乏很好的治疗药物。动物,植物和微生物等为开发抗血栓药物提供广阔的资源。在自然界的抗血栓药物中像尿激酶、纳豆激酶、水蛭素及蚓激酶已经被开发成新药物并在临床上起到一定作用。纤溶酶和激酶能直接降解血纤维蛋白,从而使血栓得到溶解,因此研究和开发新型的纤溶酶是目前最有效的治疗手段,建立简单快速的抗血栓活性检测方法是这项研究的基础。本文就目前国内外纤溶酶检测方法作一综述,希望为改进溶栓活性体外检测方法提供参考。     

一种新型合成水蛭肽纤溶动力学研究

目的 研究水蛭肽Hirulog-s影响单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原相互活化作用考察新型合成水蛭肽的纤溶作用特性。方法 构筑单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（pro-uPA）和纤溶酶原（plg）相互活化反应体系,添加Hirulog-s成反应体系不同浓度,比较pro-uPA和plg相互活化反应体系中纤溶酶（plm）作用于pro-uPA反应的酶促反应动力学常数（Km,kcat）,分析Hirulog-s对plm作用于pro-uPA反应的催化速率及亲和性。纤溶活性作用检测采用底物酶促反应法,酶促反应动力学常数的测定基于基于单链尿激酶型纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原的反应。 结果 在plm作用于pro-uPA的反应体系中,30 μmol·L-1 Hirulog-s与对照相比kcat值增大了3.1倍,Km值减小了1.6倍,表明Hirulog-s可以显著提高plm的最大催化速率同时增强亲和性。30 μmol·L-1 Hirulog-s与对照相比kcat/Km值增大了4.75倍,表明Hirulog-s明显提高了plm的催化效率。通过活性对比表明Hirulog-s的纤溶活性强于水蛭肽Hirulog-1。 结论 Hirulog-s促进单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原相互活化作用而发挥纤溶作用,新型合成水蛭肽从酶促反应动力学参数显示出优良的纤溶作用特性。     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤溶酶对动物血栓的溶栓作用

目的　研究尖吻蝮蛇毒 (Agkistrodonacutus)无出血活性的纤溶酶对动物血栓形成的溶栓作用。方法　采用家兔动物血栓和大白鼠静脉血栓模型 ,静脉注射尖吻蝮蛇无出血活性纤溶酶 ,分 3个剂量组 (n =6) ,其剂量分别为 0 1 4、0 7、1 4mg·kg- 1 ,用生理盐水作阴性对照。测定尖吻蝮蛇毒无出血活性的纤溶酶对动脉血栓、静脉血栓的溶栓作用。结果　给药后 ,尖吻蝮蛇毒无出血活性的纤溶酶对动脉血栓、静脉血栓湿重均有减轻作用 ,与生理盐水对照组相比 ,差异均有显著性 (P <0 0 5或P <0 0 1 )。结论　尖吻蝮蛇无出血活性纤溶酶对动物血栓有明显的溶栓作用 ,具有潜在的临床应用价值     

重组单环刺螠纤溶酶对大鼠急性心肌缺血的保护作用

目的 研究重组单环刺螠纤溶酶对大鼠急性心肌缺血的保护作用。方法 重组表达单环刺螠纤溶酶,并通过纤维蛋白平板法测定酶活力,体外抗凝试验检测抗凝效果。建立大鼠急性心肌缺血模型,观察并测定重组单环刺螠纤溶酶对大鼠心肌梗死质量比、血清学生化指标[乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、肌酸激酶（creatine kinase,CK）和天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate amino transferase,AST）]、凝血指标[凝血酶原时间（prothrombin time,PT）、部分凝血活酶时间（partial thromboplastin time,APTT）、纤维蛋白原（fibrinogen,FIB）、凝血酶时间（thrombin time,TT）]、组织型纤溶酶原激活物（tissue plasminogen activator,t-PA）及组织型纤溶酶原激活物抑制因子1（tissue plasminogen activator inhibitor,PAI-1）活性的影响。结果 与模型组相比,重组单环刺螠纤溶酶能缩小心肌梗死范围,抑制AST、LDH、CK的升高,延长PT、APTT、TT,降低FIB,降低PAI-1活性,升高t-PA活性,均具有显著性差异（P<0.01）。结论 重组单环刺螠纤溶酶能明显增强纤溶活性,降低凝血时间,说明其抑制凝血系统、活化纤溶系统的作用机制之一可能是抑制血栓形成、抗心肌缺血。重组单环刺螠纤溶酶可有效预防心肌梗死,此结果可为下一步的临床应用提供一定的理论依据。     

纤溶酶产生菌的筛选及酶活力的测定

利用纤维蛋白平板法筛选纤溶酶产生菌株并测定其纤溶酶活性。从土壤、豆豉、猪血粉中分别取样,分离到30株具有溶纤活性的菌株,其中来自土壤12株,豆豉10株,猪血粉8株。选择来自土壤,并与已报道的菌株菌落特征不同的34,37菌株号进行研究,测得其酶比活力分别为9.05,624U/mg.Pro。     

康宁宝胶丸中酶组分的室温贮存稳定性

目的 :考察康宁宝胶丸中纤溶酶、超氧化物歧化酶在室温 (10℃～ 35℃ )的稳定性。方法 :用纤维蛋白平板法、改进的连苯三酚自氧化法测定贮存 4年后的纤溶酶及超氧化物歧化酶活性。结果 :与康宁宝胶丸中酶组分起始活力比较 ,贮存 4年后 ,其纤溶酶活力不变 ,超氧化物歧化酶活力降低了 36 .5 %。结论 :康宁宝胶丸中酶组分在室温下稳定性较好。     

豆豉纤溶酶生产工艺研究

以筛选得的纤溶酶产生菌——枯草芽孢杆菌HGD107进行15L发酵罐生产豆豉纤溶酶，产物经离心、D392型树脂脱色、盐析、超滤等操作纯化，制得冻干豆豉纤溶酶产品，其比活力为530．6u／mg，纯化倍数11，活性回收率65．7％。     

快速蛋白液相色谱法纯化威廉环毛蚓纤溶酶及其活性研究

摸索威廉环毛蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶(earthw fibrinolytic enzyme，EFE)体内外的抗栓溶栓活性。通过提取，分步盐析，再经AKTAbasic蛋白快速液相色谱进一步纯化，得一组有纤溶活性的同工酶，其中一种比活较大达2000IU／mg。药理试验表明该酶有明显的抗拴溶栓活性。     

蕲蛇酶对血管内皮细胞纤维蛋白溶解功能的影响

目的　研究蕲蛇酶对体外培养人脐静脉内皮细胞纤溶活性的影响 ,探讨其抗栓作用机制。方法　采用人脐带来源的脐静脉内皮细胞进行原代及传代培养 ,以光镜、电镜、第Ⅷ因子相关抗原免疫组化等方法鉴定内皮细胞 ,采用发色底物法 (S2 2 51 )测定内皮细胞培养液中组织型纤溶酶原激活剂(t PA)及组织型纤溶酶原激活剂抑制物 (PAI)的活性 ,ELISA法测定培养液中纤维蛋白降解产物的含量。结果　所培养的细胞具有特征性Weibel palade小体 ,第Ⅷ因子特异性抗原阳性。蕲蛇酶使细胞培养液中t PA活性升高 ,t PA/PAI比值升高 ,纤维蛋白降解产物明显增加。结论　蕲蛇酶具有促进血管内皮细胞释放t PA ,提高其纤溶活性的作用。     

交联重组枯草杆菌纤溶酶聚集体的制备及其性质研究

目的制备交联重组枯草杆菌纤溶酶聚集体(CLEAs),对其酶学性质进行研究,提高重组枯草杆菌纤溶酶(rBSFE)的稳定性。方法通过微生物发酵,分离得天然rBSFE,经硫酸铵沉淀后,以戊二醛作为交联剂对其进行化学交联,得CLEAs。用常规方法测定各种因素对rBSFE稳定性的影响。结果在对耐热性、有机相中稳定性、对抗血清蛋白水解酶的能力的研究中,CLEAs均显示比游离酶更高的稳定性。在有机相N,N-二甲基甲酰胺中作用24 h后,CLEAs的活性下降速率为游离酶的50%。在小鼠体外血清中作用2.5 h后,游离酶活性下降56.3%,而CLEAs活性仅下降4.5%,稳定性显著高于游离酶。结论运用CLEA技术可以较大提高rBSFE的稳定性。