白藜芦醇对脑缺血再灌注后细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 研究白藜芦醇(Res)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响.方法 48只SD雄性大鼠随机分成4组,假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、Res低剂量组(15 ms/kg,I/R+R1组)和Res高剂量组(30 ms/ks,I/R+R2组).缺血2 h再灌注24 h,TTC法测鼍脑梗死体积,原位末端标记(TUNEI)法检测脑细胞凋亡水平,免疫组化法及Western blot检测Caspase-3蛋白表达,结果 与I/R组相比,Res能明显抑制缺血区脑组织Caspase-3蛋白的表达(P<0.01),减少凋亡细胞数(P<0.01),缩小脑梗死体积(P<0.01).结论 Res对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡有抑制作用,其机制可能与Caspase-3表达下降有关.     

丹红注射液对大鼠移植肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 研究丹红注射液对大鼠移植肾缺血再灌注损伤的保护作用.方法 建立近交系雄性SD大鼠同基因肾移植模型.共设4个实验组,即假手术组,移植缺血再灌注模型组,丹红注射液预处理组,丹红注射液治疗组.检测术后24 h各组大鼠的尿素氮(Bun)和肌酐(Cr)情况,采用免疫组化法检测Bcl-2和Bax的表达,采用TUNEL检测细胞凋亡指数.结果 与假手术组相比,各组细胞凋亡率明显增加;丹红注射液预处理组与移植缺血再灌注模型组及丹红注射液治疗组相比,细胞凋亡率显著下降,均具有非常显著性差异(P<0.01).与假手术组比较,移植缺血再灌注模型组Bax表达显著增强(P<0.01),Bcl-2表达增强(P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著下降(P<0.01);丹红注射液治疗组同移植缺血再灌注模型组比较无显著性差异(P>0.05);丹红注射液预处理组与移植缺血再灌注模型组比较,Bcl-2表达增强(P<0.01),Bax表达明显下降(P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著上升(P<0.01).结论 丹红注射液可能通过下调凋亡相关基因Bax表达,上调Bcl-2基因表达,抑制细胞凋亡,从而起到对移植肾的保护作用.     

丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注后凋亡诱导因子的影响

目的研究丹红注射液对脑缺血再灌注后凋亡诱导因子（AIF）表达及神经元凋亡的影响。方法将Wistar大鼠随机分为3组,假手术组、局灶性脑缺血再灌注组（对照组）、丹红注射液治疗组（治疗组）,改良线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,各组分别于1 d、3 d、5 d取脑组织,测定AIF及神经元凋亡的变化。结果治疗组大鼠脑组织AIF及神经元凋亡在造模后的1 d、3d、5 d均明显低于对照组（P〈0.05）。结论丹红注射液可通过抑制AIF的表达,减少神经元的凋亡,对大鼠脑缺血再灌注具有脑保护作用。     

20(R)-人参皂苷Rg_3对大鼠缺血再灌注后迟发性神经元损伤的保护作用

目的观察20(R)-人参皂苷Rg_3对大鼠缺血再灌注后迟发性神经元损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法将健康雄性SD大鼠随机分为:假手术组、模型组、20(R)-人参皂苷Rg_3组和尼莫地平组。采用线栓法复制SD大鼠大脑中动脉暂时性局部脑缺血再灌注模型(MCAO),于再灌注72 h后进行大鼠神经功能学评分,用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡,用原位杂交技术检测鼠脑中Calpain和Caspase-3 mRNA的表达。结果缺血2 h再灌注72 h后,与模型组比较,20(R)-人参皂苷Rg_3可显著改善大鼠的行为障碍,显著减少神经细胞凋亡数,显著降低CalpainⅠ和Caspase-3 mRNA的表达,并呈剂量依赖性。结论 20(R)-人参皂苷Rg_3通过抑制Calpain和Caspase-3的表达对大鼠缺血再灌注后迟发性神经元损伤起保护作用。     

芍药苷对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡相关基因的影响

目的探讨芍药苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血区神经元凋亡的影响。方法建立大鼠McA0模型模拟局灶性脑缺血再灌注损伤，观察芍药苷对脑缺血再灌注损伤后动物的神经行为学评分；TUNNEL法检测神经元凋亡的数量改变；用WEST—ERBLOT法及免疫组化法检测β-P38、Fas的表达改变。结果假手术组无神经行为改变．各用药组神经行为学评分明显低于缺血再灌注组（P〈0．01），用药组间无统计学意义。与假手术组相比，缺血再灌注组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性细胞及Fas阳性细胞增多（P〈0．01）。与模型组相比，各用药组TUNEL阳性神经细胞及Fas阳性细胞表达明显减少（P〈0．01）。大鼠脑缺血再灌注后脑组织磷酸化P38蛋白表达明显增加．注射药物后蛋白磷酸化被抑制，表达减少。结论芍药苷可改变大鼠脑缺血后的神经行为，抑制P38蛋白的表达，下调Fas蛋白表达，有抗神经元凋亡作用。     

电针对大鼠缺血再灌注时肠上皮细胞Caspase-3、Bcl-2基因表达的影响

目的:研究电针对大鼠肠缺血再灌注期间肠上皮细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:采用大鼠肠缺血再灌注模型。24只大鼠随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和电针治疗组(EA组)。分别检测回肠黏膜上皮细胞Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达及细胞凋亡。结果:①凋亡细胞检测显示,I/R组凋亡细胞显著增多,EA组凋亡细胞数较I/R组显著减少。②Caspase-3表达I/R组显著多于EA组和C组;Bcl-2蛋白的表达EA组显著高于I/R组。结论:电针通过抑制Caspase-3表达和促进Bcl-2基因表达,减少缺血再灌注肠黏膜上皮细胞的凋亡,从而减轻肠黏膜损伤。     

普萘洛尔和美托洛尔处理对大鼠大脑局灶性缺血再灌注损伤后Bcl-2、Bax和NGF表达的影响

目的观察普萘洛尔、美托洛尔处理对大鼠大脑局灶性脑缺血再灌注损伤后Bcl-2、Bax和神经生长因子（NGF）表达规律的影响,探讨其脑保护作用的机制。方法 72只成年雄性Wistar大鼠（230g±10g）随机分为4组,假手术组、模型组、普萘洛尔给药组、美托洛尔给药组。每组又分为12h、24h、48h三个亚组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注模型,采用DNA原位末端缺口标记法（TUNEL）检测神经元凋亡;HE染色观察脑组织形态病理学变化;免疫组化法测定大鼠脑缺血再灌注不同时间Bax、Bcl-2与NGF的平均灰度值。结果与假手术组比较,模型组Bcl-2,Bax和NGF在缺血再灌注组12h升高,24h达高峰（P〈0.05）。普萘洛尔给药组和美托洛尔给药组的Bcl-2阳性细胞均较模型组明显增加（P〈0.05）,而Bax阳性细胞均较模型组则明显减少（P〈0.05）,但均多于假手术组（P〈0.05）。美托洛尔给药组的NGF阳性细胞与模型组无统计学意义,而普萘洛尔给药组的NGF阳性细胞较模型组显著减少（P〈0.05）。结论普萘洛尔、美托洛尔均可通过抑制Bax和促进Bcl-2表达来对大脑局灶缺血再灌注损伤后的神经元起保护作用。     

丹星通络汤对脑缺血再灌注大鼠Caspase-3表达的影响

目的：观察丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞Caspase-3蛋白表达的影响，探讨其神经保护作用机制。方法：40只健康雄性Wistar大鼠，采用大脑中动脉线栓法建立局灶脑缺血再灌注大鼠模型，并随机将大鼠分为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（L／R）、丹星通络汤大、小剂量组和尼莫地平组，每组8只。丹星通络汤组分别按15mL／kg（大剂量），7．5mL／kg（小剂量），尼莫地平组10mL／kg，术前连续灌胃给药7天，每天1次。假手术组和缺血再灌组分别灌以10mL／kg的生理盐水。大鼠局灶性脑缺血2h，然后进行再灌注。在再灌注24h断头取脑组织，采用免疫组织化学法检测脑组织中Caspase-3蛋白的表达，并与病理组织学改变进行对照。结果：丹星通络汤能明显降低大脑皮质及海马Caspase-3的表达，减轻神经细胞损伤。结论：丹星通络汤能减轻脑组织的缺血再灌注损伤，改善神经功能缺失，其作用机制可能与抑制Caspase-3蛋白表达有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase-9蛋白的表达

目的研究Caspase-9蛋白在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中表达水平的动态变化。方法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用HE染色和免疫组织化学方法观察神经细胞死亡情况,再灌注6h、12h、24h后缺血皮层Caspase-9蛋白表达。结果与假手术组比较Caspase-9蛋白表达在各手术组明显升高,并随着缺血再灌注时间的延长Caspase-9表达逐渐升高,于再灌注24h到达最高（P〈0.01）。结论Caspase-9蛋白参与了脑缺血再灌注损伤过程。     

电针对脑缺血再灌注大鼠内质网应激关键因子GRP-78、Caspase-12表达的影响

目的观察电针对脑缺血再灌注大鼠不同时间点脑缺血区脑神经细胞凋亡及内质网应激凋亡通路信号分子葡萄糖调节蛋白(GPR78)和Caspase-12影响。方法 126只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,其中假手术组6只,模型组和电针组各60只。模型组和电针组再随机分为再灌注6、12、24、48、72h组,每组12只,采用改良线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型。电针组电针百会和大椎,每次30min,每12h治疗1次,假手术组和模型组大鼠捆绑固定30min,不做任何治疗。假手术组于手术后24h、各组大鼠于相应时间进行神经学分级评定后处死大鼠并提取脑组织,观察海马CA1区形态学改变。TUNEL法检测各组神经细胞凋亡指数,免疫组化法和Western blot检测脑组织GRP78、Caspase-12蛋白表达的变化。结果模型组和电针组海马CA1出现不同程度细胞凋亡变形。与本组前一时间点比较,模型组及电针组再灌注12、24、48、72h神经功能评分降低(P0.05,P0.01),再灌注12、24h神经细胞凋亡指数、Caspase-12阳性细胞数、Caspase-12蛋白表达升高(P0.05,P0.01),再灌注48、72h神经细胞凋亡指数、Caspase-12阳性细胞数及蛋白表达降低(P0.05,P0.01),再灌注12hGRP78阳性细胞数、GRP78蛋白表达升高(P0.05,P0.01),再灌注24、48、72hGRP78阳性细胞数及蛋白表达降低(P0.05,P0.01)。与模型组同期比较,电针组再灌注12、24、48、72h神经学评分、Caspase-12阳性细胞数降低(P0.05,P0.01);电针组各时间点神经细胞凋亡指数、GRP78阳性细胞数及蛋白表达、Caspase-12蛋白表达降低(P0.05,P0.01)。结论缺血再灌注24h为神经元凋亡高峰,Caspase-12的免疫活性出现的时间晚于GRP78。电针可能通过抑制GRP78、Caspase-12的释放和激活减轻脑缺血再灌注后不同时间所致缺血脑神经细胞凋亡。     

腺苷对大鼠缺血再灌注心肌IGF-1蛋白的影响

目的观察腺苷对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡与胰岛素样生长因子-1（IGF-1）蛋白的关系。方法取Wistar大鼠24只,随机分成3组,随机分为假手术组（iv组）、缺血再灌注模型组（I/R组）、缺血再灌注后腺苷处理组（AD组）,每组8只。通过结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）30min和灌注2h造成心肌缺血再灌注损伤。采用TUNEL法观察心肌细胞凋亡;利用免疫组化法检测IGF-1蛋白的表达。结果 I/R组心肌细胞凋亡指数和IGF-1蛋白表达较iv组升高（P〈0.05）;与I/R组相比,AD组心肌细胞凋亡指数明显降低,而IGF-1蛋白表达明显升高（P〈0.05）。结论腺苷可抑制心肌细胞凋亡,明显提高IGF-1蛋白表达水平,对缺血再灌注损伤心肌有保护作用。提示腺苷可减轻心肌缺血再灌注损伤,作用机制与提高IGF-1蛋白表达水平和抗心肌细胞凋亡作用有关。     

高血压大鼠脑缺血再灌注后TGF-β1、Caspase-3的表达与细胞凋亡

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及转化生长因子β1（TGF—β1）、Caspase-3表达的动态变化。方法制备高血压大鼠脑缺血再灌注模型,用免疫组织化学染色法及流式细胞术分别观察脑组织中TGF-β1、Caspase-3的表达及细胞凋亡。结果随再灌注时间增加,脑缺血再灌注产生的细胞凋亡也相应增加,在48h达到高峰,72h开始下降。TGF-β1与Caspase-3主要在缺血周围区表达,TGF-β1表达增高较快,在再灌注24h达高峰;Caspase-3表达增高较慢,在48h达高峰。结论细胞凋亡在局灶性脑缺血再灌流损伤中呈动态过程,是神经细胞死亡的重要形式。脑缺血诱导了TGF—β1与Caspase-3的表达,TGF—β1表达高峰早于Caspase-3出现。恰当时间窗内对TGF-β1、Caspase-3的干预将是有效治疗措施。     

米诺环素抑制大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡及Caspase-12的表达

目的探讨米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡及半胱天冬酶-12（Caspase-12）表达的影响。方法用大脑中动脉栓塞（线栓）法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。18只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组和米诺环素干预组。应用DNA原位末端缺口标记（TUNEL）法检测神经元凋亡,免疫组化法检测组织Caspase-12蛋白的表达。结果与假手术组相比,缺血再灌注组海马CA1区凋亡神经元数增加（P〈0．05）,Caspase-12表达增加（P〈0．05）;米诺环素处理后显著缓解凋亡神经元数的增加,抑制Caspase-12的表达（P〈0．05）,但仍高于假手术组（P〈0．05）。结论抑制Caspase—12介导的Caspase介导的级联反应凋亡途径的激活是米诺环素减少缺血再灌注损伤神经元凋亡的机制之一。     

益气化瘀方对缺血-再灌注大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察益气化瘀方对缺血-再灌注(I/R)大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Fas及P53表达的影响。方法采用结扎左冠状动脉前降支,心肌缺血30 min,再灌注2、4 h制作缺血-再灌注模型。将大鼠随机分为7组,即假手术组、模型2 h组(缺血-再灌注2 h)、模型4 h组(缺血-再灌注4 h组)、通心络2 h组(缺血-再灌注2 h)、通心络4 h组(缺血-再灌注4 h)、益气化瘀方2 h组(缺血-再灌注2 h)、益气化瘀方4 h组(缺血-再灌注4 h)。造模前连续灌胃相应药物1周。免疫组化法测定Bcl-2、Bax、Caspase-3、Fas、P53蛋白表达。结果益气化瘀方可提高缺血-再灌注大鼠心肌Bcl-2蛋白表达量(P0.05)、降低缺血-再灌注大鼠心肌Bax、Caspase-3、Fas、P53蛋白表达量(P0.05)。结论益气化瘀方可减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡,其机理可能与上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax、Caspase-3、fas、P53蛋白表达有关。     

电针对大鼠肾缺血再灌注损伤的疗效及对肾组织中caspase-3表达的影响

目的:探讨电针治疗对肾缺血再灌注大鼠肾功能及组织中Caspase-3表达的影响。方法:将30只清洁级健康SD雄性大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(IRI组)和电针组,每组10只。采用右肾摘除,左肾肾蒂夹闭缺血45min后再灌注的方法制备动物模型。电针组于造模成功后给予电针肾俞和涌泉穴治疗。各组均于术后24h采用全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Scr),观察肾组织病理形态学改变,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡率和免疫组化检测肾组织细胞中Caspase-3的表达。结果:肾缺血再灌注后大鼠血清BUN和Scr明显升高,肾组织切片显示有明显的病理改变,肾组织细胞凋亡率及Caspase-3阳性细胞表达显著升高。与缺血再灌注组比较,电针组大鼠BUN和Scr显著下降,肾组织细胞凋亡率显著降低,Caspase-3阳性细胞的IOD值显著降低。结论:电针对IRI所致肾功能损害具有显著的保护作用,能够抑制Caspase-3蛋白表达,具有抑制细胞凋亡的作用,该作用可能是电针对IRI后肾脏保护作用的重要机制之一。     

电针对缺血再灌注大鼠脑内小胶质细胞活化的影响

目的：探讨电针对缺血再灌注损伤模型大鼠脑内小胶质细胞活化的抑制作用。方法：将54只SD大鼠随机分为假手术组（6只）、模型组（24只）、电针组（24只）,再将模型组、电针组分成再灌注3、12、24、48h 4个亚组,每亚组6只。模型组、电针组予制备缺血再灌注模型,其中模型组造模后不予电针治疗,电针组造模后即行电针治疗,取穴百会和大椎。各组大鼠到达预定时间点,将脑组织固定在4%多聚甲醛固定液中保存,行免疫组化染色,检测OX-42阳性小胶质细胞的活化情况。结果：各组缺血再灌注模型大鼠缺血侧顶叶皮层OX-42阳性细胞数较假手术组增多,差异具有统计学意义（P〈0.01）;模型组OX-42阳性细胞在R3h明显增多,R24h达高峰,然后呈下降趋势;R24h与R3h相比,差异具有统计学意义（P〈0.01）;电针组OX-42阳性细胞数较模型组均有所减少,除R3h外,其余各组差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：电针百会穴、大椎穴能抑制缺血再灌注损伤模型大鼠脑内小胶质细胞的活化,从而起到神经保护的作用。     

丙酮酸乙酯对癫痫持续状态大鼠神经元凋亡及XIAP、Caspase-3表达的影响

目的探讨丙酮酸乙酯干预对大鼠癫痫持续状态（SE）后导致神经元损伤的影响及其可能机制。方法雄性Wistar大鼠54只随机分为对照组（N组）、模型组（M组）和丙酮酸乙酯组（EP组）,后两组再分为6h、12h、24h、48h亚组,每亚组6只。应用氯化锂-匹罗卡品制备SE动物模型,TUNEL法检测大鼠海马神经元凋亡,免疫组化法检测XIAP和Caspase-3蛋白的表达。结果 M组在SE后6h脑内可见TUNEL、XIAP和Caspase-3阳性细胞,TUNEL和Caspase-3表达高峰在24h;XIAP表达高峰在12h。EP组各时间点TUNEL和Caspase-3阳性细胞数较M组明显减少（除6h外,均P〈0.05）,而XIAP阳性细胞数则明显增加（除6h外,均P〈0.05）。结论丙酮酸乙酯能够提高XIAP蛋白的表达,抑制Caspase-3蛋白的表达,对大鼠癫痫持续状态后神经元损伤具有保护作用。     

热敏灸对脑缺血再灌注损伤模型大鼠大脑皮质细胞凋亡的影响

目的观察热敏灸对脑缺血再灌注损伤模型大鼠大脑皮质细胞凋亡和Caspase-3表达的影响,阐明热敏灸治疗脑缺血再灌注损伤作用机理。方法将75只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、艾灸组和热敏灸组,采用血管内线栓法阻塞大脑中动脉2h后进行再灌注,制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型。采用TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色检查脑组织梗死情况,TUNEL法检测大脑皮质中的凋亡细胞,免疫组化法检测大脑皮质中Caspase-3蛋白的表达。结果与假手术组大鼠相比,模型组大鼠脑梗死面积增加,大脑皮质中凋亡细胞和Caspase-3蛋白的表达明显增多(P0.05);与模型组相比,艾灸组、热敏灸组大鼠脑梗死面积减少,大脑皮质中凋亡细胞和Caspase-3蛋白的表达减少(P0.05),且热敏灸组优于艾灸组。结论热敏灸减轻大鼠脑组织缺血再灌注损伤的效果,可能与降低Caspase-3的表达、减少脑细胞凋亡有关。     

天花粉对脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡的影响

目的研究天花粉对脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡的影响及其分子机制。方法雄性SD大鼠54只随机分为假手术组、模型组和天花粉组,采用Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血3 h后再灌注。术后分12 h、24 h、48 h 3个时间点以TUNEL法观察凋亡的情况,免疫组化观察缺血周围区Cyclin D1表达强度。结果与模型组比较,天花粉组凋亡阳性细胞数和Cyclin D1免疫阳性细胞数显著均显著减少(P均<0.01)。结论天花粉可减轻大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,减少Cyclin D1的表达。     

天花粉对脑缺血再灌注大鼠高同型半胱氨酸血症的影响

目的研究天花粉对脑缺血再灌注大鼠高同型半胱氨酸血症（Hhcy）的影响,并通过对缺血周围区细胞周期蛋白A的检测,进一步探讨天花粉对缺血再灌注影响的分子机制。方法采用大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组、模型组、天花粉组、补阳还五汤组。术后分12、24、48h 3个时间点行神经功能评分;检测血浆中Hcy含量;免疫组化观察缺血周围区细胞周期蛋白A表达强度。结果神经功能评分显示与模型组比较,天花粉组、补阳还五汤组神经功能有显著改善;血浆Hcy含量与模型组比较,各治疗组均显著减少;细胞周期蛋白A阳性细胞表达水平缺血再灌注12h,与模型组比较,天花粉组、补阳还五汤组阳性细胞数显著减少。缺血再灌注24h和缺血再灌注48h,治疗组与模型组比较,阳性细胞数均显著减少,天花粉组与补阳还五汤组比较也显著减少。结论天花粉能减轻缺血再灌注后大鼠Hhcy的程度,和补阳还五汤相比其改善脑缺血再灌注的机制可能和细胞周期蛋白相关。