尼古丁对脐静脉内皮细胞释放IL-6及PAI-1的影响

目的探讨尼古丁干预人脐静脉内皮细胞（HUVECs）后,白介素-6（IL-6）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）抗原的表达变化,并分析其相关性。方法将4~6代HUVECs接种于24孔培养板。随机分为对照组与不同浓度尼古丁组。尼古丁浓度分别为0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L与100μmol/L。12 h后收集各组细胞上清液。采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析法（ELISA）测定各组细胞上清液中IL-6、PAI-1抗原浓度。结果各浓度尼古丁组HUVECs释放IL-6抗原呈浓度依赖性增高,各尼古丁组IL-6含量与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。100μmol/L尼古丁组PAI-1含量与对照组比较升高（P〈0.05）。HUVECs释放PAI-1与IL-6呈正相关（P〈0.05）。结论在体外,尼古丁可诱导HUVECs释放IL-6、PAI-1增多,参与内皮损伤、炎症与纤溶活性紊乱。     

奇智方对人脐静脉内皮细胞ICAM-1和ICAM-1mRNA表达的影响

目的采用人脐静脉内皮细胞（HUVEC-304）进行细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及其转录水平（ICAM-1mRNA）表达的离体实验研究,观察奇智方对血管内皮功能的作用。方法应用ELISA方法检测ICAM-1;用原位杂交的方法检测ICAM-1 mRNA。结果中药治疗组和阳性对照组与生理盐水组比较,ICAM-1蛋白分子表达均有统计学意义（P〈0．01）;中药治疗组和阳性对照组均能明显使缺氧／复氧后细胞ICAM-1 mRNA下调,与缺氧组比较有统计学意义（P〈0．01）。结论奇智方抑制缺氧／复氧后血管内皮细胞表达ICAM-1和ICAM-1 mRNA,从而保护血管内皮细胞的屏障完整和功能正常,可能是其免疫抑制机理的分子基础之一。     

四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响

目的观察四妙勇安汤对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型的影响。方法实验分为3组,即正常组、模型组、四妙勇安汤组,后2组建立体外细胞缺氧模型,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察四妙勇安汤对缺氧内皮细胞存活率的影响,测定四妙勇安汤对缺氧内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响,并用免疫荧光法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成量的表达。结果四妙勇安汤能显著增加MTT实验中各孔吸光度值,降低LDH漏出量,增加VEGF的生成量。结论四妙勇安汤具有保护缺氧的HUVEC损伤的作用,其作用机制与增加细胞活性、降低缺氧造成的细胞毒性、增加VEGF的表达、促进血管新生的作用有关。     

波动性高糖对人脐静脉内皮细胞ICAM-1及TNF-α表达的影响

目的探讨波动性与持续性高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVECS）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的影响。方法以HUVECS为研究对象,实验分为3组：正常对照组（5.5mmol/L）、持续高糖组（25mmol/L）、波动高糖组（5.5/25mmol/L,白天3h高糖2h正常浓度葡萄糖波动3次,高糖过夜）。通过双抗体夹心酶联免疫吸附法（ABC-ELISA）检测细胞在各种糖浓度条件下24h、48h、72hICAM-1及TNF-α的表达。结果ICAM-1的浓度各个时间段波动组与高糖组和正常对照组相比均升高（P〈0.05）,呈时间-效应关系。TNF-α的浓度3个时间段波动组与高糖组、正常对照组相比显著升高（P〈0.05）,呈时间-效应关系。结论波动性高糖较持续性高糖更增强HUVECSICAM-1和TNF-α的表达。     

芪竹方对人脐静脉内皮细胞的PTK和P-STAT3异常表达的影响

目的:了解芪竹方对细胞的毒作用,了解芪竹方对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)刺激增殖后的细胞内蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性和P-STAT3表达的影响。方法:建立对比模型组,用CCK-8法检测芪竹方对HUVEC增殖的影响,用ELISA法定量测定细胞中PTK含量,用Western Blot法测定细胞P-STAT3表达。结果:芪竹方对HUVEC正常增殖无影响;HUVEC被酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)刺激后,空白组PTK和P-STAT3表达异常,芪竹方组对PTK表达有抑制作用,抑制率达65%,同时对P-STAT3表达有抑制,高浓度的芪竹方组作用与阳性药相当。结论:芪竹方对细胞无毒作用,对细胞的PTK和P-STAT3的异常表达有抑制作用。     

导痰汤对人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1和p53表达的影响

目的:通过研究导痰汤干预细胞间黏附分子1(ICAM-1)与p53的表达,分析导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制。方法:人脐静脉内皮细胞(HUVEC),传代培养1～3代用于实验。含药血清的制备为将导痰汤按照0.9 g.kg-1.d-1剂量给SD大鼠ig 10 d后,经腹主动脉采血,分离血清。实验共分7组:正常HUVEC为空白对照组,不含药血清处理HUVEC为空白血清对照组,肿瘤坏死因子α(TNF-α,200 U.mL-1)预处理HUVEC为TNF-α诱导组,先采用5%(0.015 g.mL-1),10%(0.03 g.mL-1),20%(0.06 g.mL-1)含药血清预处理HUVEC,再与TNF-α共培养为5%,10%,20%导痰汤组,使用p53特异性阻滞剂PFT-α(0.009 g.mL-1)处理HUVEC为PFT-α阻滞组。通过PCR和Western blot等方法,观察导痰汤对TNF-α刺激脐静脉内皮细胞培养内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达和p53表达的影响。结果:①TNF-α诱导组ICAM-1 mRNA和p53 mRNA的表达显著高于正常对照组和导痰汤对照组(P<0.01);使用导痰汤含药血清或PFT-α处理后,ICAM-1和p53 mRNA的表达显著下降(P<0.05);②TNF-α诱导组ICAM-与p53蛋白显著高于正常对照组和导痰汤对照组(P<0.01)。使用导痰汤含药血清或PFT-α处理后,ICAM-1与p53表达显著下降(P<0.05);③p53 mRNA与ICAM-1 mRNA表达水平呈显著正相关(r=0.981,P<0.01);p53活性与ICAM-1水平呈显著正相关(r=0.854,P<0.01)。结论:导痰汤可以通过调节p53表达而抑制TNF-α刺激所致的脐静脉内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达,故能起到治疗动脉粥样硬化的作用。     

人脐静脉内皮细胞与成骨细胞共培养对成骨细胞功能的影响

目的:建立人脐静脉内皮细胞与人成骨细胞共育系,观察人脐静脉内皮细胞在共育系中对人成骨细胞功能的影响,进一步探讨人脐静脉内皮细胞对成骨细胞骨形成能力的影响。方法:采用二维共培养模型建立人内皮细胞/成骨细胞(1∶1)共育系,运用噻唑蓝比色法(MTT),分别在1d、3d、5d、7d时观察人脐静脉内皮细胞与成骨细胞单体培养以及共育系中的增殖情况;同时,运用蛋白免疫印迹方法(In cell western blot)分别测定人成骨细胞单体培养和共育系中骨保护素/破骨细胞分化因子配体(OPG/RANKL)蛋白的表达情况。采用方差分析比较不同状态下细胞增殖能力和蛋白表达的差异性。结果:从第3天开始,共育系中人成骨细胞的增殖能力明显优于成骨细胞单体培养;两者比较差异有统计学意义(P<0.05);于细胞培养第8天时分别测定人成骨细胞单体培养组和共育系中OPG/RANKL蛋白的表达,观察到共育系中(10.82±1.08)OPG蛋白表达量明显优于人成骨细胞单体培养组(6.65±0.43),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);而共育系中(7.33±0.22)RANKL蛋白的表达含量与人成骨细胞单体培养(7.37±0.85)时表达无差异。结论:人脐静脉内皮细胞与人成骨细胞具有良好的相容性,两种细胞之间具有相互协同效应;人脐静脉内皮细胞可能通过促进OPG蛋白的表达来促进成骨细胞骨形成的作用。     

搜风祛痰中药对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞Lox-1mRNA及iNOSmRNA表达的影响

目的:探讨AngII对人脐静脉内皮细胞Lox-1mRNA及iNOSmRNA表达的影响,阐明搜风祛痰法的中药调控Lox-1与iNOS在AS过程中可能性的作用机理。方法:家兔中药血清的制备,采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定脐内皮细胞LOX-1mRNA及iNOSmRNA,随机分为5组:正常对照组,AngII组,低浓度中药血清+AngII组,中浓度中药血清+AngII组,高浓度中药血清+AngII组。结果:AngII使血管内皮Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达明显上调。中药血清使Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达下降,其中低中剂量组之间有统计学意义,中高剂量组之间没有统计学差异。结论:AngII使血管内皮Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达上调;搜风祛痰中药使血管内皮Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达下降,中剂量的中药在表达上效果显著,起到良好的抗AS作用。     

茶多酚对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的实验研究

目的观察茶多酚(TP)对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响。方法采用倒置相差显微镜、RT-PCR法进行HUVEC的观察及鉴别。应用MTT法和流式细胞仪测定不同浓度TP对HUVEC增殖、细胞周期、增殖指数及凋亡率的影响。结果目的条带测序结果与GenBank人CD31基因序列完全一致。结论TP能抑制内皮细胞增殖并诱导其凋亡,是一种潜在的新生血管抑制剂。     

茶多酚对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的实验研究

目的 观察茶多酚(TP)对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响.方法 采用倒置相差显微镜、RT-PCR法进行HUVEC的观察及鉴别.应用MTT法和流式细胞仪测定不同浓度TP对HUVEC增殖、细胞周期、增殖指数及凋亡率的影响.结果 目的 条带测序结果 与GenBank人CD31基因序列完全一致.结论 TP能抑制内皮细胞增殖并诱导其凋亡,是一种潜在的新生血管抑制剂.     

密蒙花方对缺氧状态下脐静脉内皮细胞增殖及HIF-1α表达的影响

目的研究密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial,HUVEC）增殖及缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1,HIF-1α）表达的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测密蒙花方对缺氧状态下HUVEC增殖的影响,应用免疫细胞化学法检测密蒙花方对缺氧状态下细胞中HIF-1α表达的影响。结果在缺氧状态下,HUVEC增殖明显且细胞中HIF-1α表达增高（P〈0.01）,密蒙花方能有效的抑制细胞增殖及HIF-1α表达,并呈浓度依赖关系。结论密蒙花方可能通过抑制HIF-1α的表达而抑制血管内皮细胞的增殖,从而对新生血管的形成起到一定的抑制作用。     

氧化型低密度脂蛋白对培养人脐静脉内皮细胞生长的影响

动脉粥样硬化形成是一个多因素多途径协同作用的过程,发病机制复杂。在各独立危险因素中脂代谢异常是首要因素,尤其是低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)是AS的一个主要危险因子。研究发现,低密度脂蛋白经氧化修饰后其致AS作用大为加强[1]。本实验参考低温超速离心法提取LDL[2],用Cu2+氧化法制备ox-LDL,并以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为对象,观察ox-LDL对培养的HUVECs生长的影响,旨在为临床研究AS的发生、发展机制提供实验依据。     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞PCNA表达的影响

目的通过观察芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨芎芍胶囊促内皮细胞增殖的分子机制。方法利用血清药理学方法制备芎芍胶囊含药血清,在体外干预培养HUVEC。MTT法检测芎芍胶囊对HUVEC增殖的影响,采用RT-PCR法测定PCNA的mRNA表达,ELISA法检测培养液中PCNA的蛋白含量。结果芎芍胶囊低、中、高剂量含药血清均有促进HUVEC细胞增殖的作用(P0.01);RT-PCR和ELISA法检测结果显示芎芍胶囊各剂量含药血清均有显著地促进PCNA的mRNA表达和蛋白表达的作用(P0.05),并具有明显的剂量依赖性。结论芎芍胶囊促进HUVEC增殖的作用机制可能与上调PCNA的表达密切相关。     

虎杖晶Ⅳ对培养人脐静脉内皮细胞释放前列环素及形态学的影响

用放射免疫分析法测定培养液中6-Keto-PGF_(1α)浓度的方法研究了虎杖晶Ⅳ(Polydatin,PD)对原代培养的人脐静脉内皮细胞释放前列环素(PGI_2)的影响,结果表明PD有呈剂量依赖增加PGI_2释放的作用,PD 0.46、0.15mmol/L作用10min时6-keto-PGF_(1α)增加显著,且前者的作用至30min时仍非常显著,但低于0.15mmol/L剂量时则无增加作用。未见PD对细胞形态学产生影响。     

姜黄素对人脐静脉内皮细胞损伤模型MMP-9表达的抑制作用

目的探讨姜黄素对人脐静脉内皮细胞损伤模型基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的抑制作用。方法进行人脐静脉内皮细胞的体外培养和鉴定。加入相同浓度TNF-α诱导半个小时后加入不同浓度的姜黄素处理细胞24h。采用免疫细胞化学染色和ELISA的方法测定细胞MMP-9的表达。结果经TNF-α诱导过的人脐静脉内皮细胞加入不同浓度的姜黄素（6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml）作用24h后均能明显抑制细胞MMP-9的表达,并且随着浓度的升高这种抑制作用明显增强。结论姜黄素能明显降低TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞MMP-9的表达。     

黄芪失笑散对实验大鼠主动脉和OX—LDL诱导下人脐静脉内皮细胞ICAM-1 VCAM-1 mRNA基因表达的影响

目的:探讨黄芪失笑散对动脉硬化大鼠主动脉和氧化低密度脂蛋(OX-LOL)刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管黏附分子-1(VCAM-1)mRNA基因表达影响.方法:采用高脂饲料喂饲和腹腔注射维生素D1建立大鼠AS模型,取48只雄性SD大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、氟伐他汀组、黄芪失笑散小剂量组、黄芪失笑散中剂量组、黄芪失笑散大剂量组.治疗12周后,用RT-PCR法检测大鼠主动脉ICAM-1、VCAM-1的表达;进行HUVECs原代培养,取第4～6代进行实验,随机分为6组:对照组、模型组、氟伐他汀组、黄芪失笑散小剂量组、黄芪失笑散中剂量组、黄芪失笑散大剂量组.OX-LDL刺激HUVECs6h后.大鼠药物血清与HUVECs共培养48h,用RT-PCR法检测大鼠主动脉ICAM-1、VCAM-1的表达.结果:黄芪失笑散大剂量可显著降低动脉粥样硬化大鼠主动脉、OX-LDL诱导的HUVECs的ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达(P＜0.01),且黄芪失笑散对OX-LDL诱导的HUVECs的ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达的抑制作用呈剂量依赖性.结论:黄芪失笑散的抗动脉粥样硬化的作用源于抑制ICAM-1、VCAM-1 mRNA的表达.     

金氏痔疮膏对人脐静脉内皮细胞的抑制作用

目的观察金氏痔疮膏精提液对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)增殖的影响,探讨其可能的治痔作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度的金氏痔疮膏精提液和组方中单味中药对ECV-304细胞增殖的影响。结果不同浓度的金氏痔疮膏精提液对ECV-304细胞增殖均有抑制作用,且呈剂量依赖性;高、中、低浓度的大黄煎液和高浓度的姜黄对ECV-304细胞增殖有抑制作用。结论金氏痔疮膏具有抑制人脐静脉内皮细胞增殖的作用;大黄是金氏痔疮膏中发挥抑制血管内皮细胞作用的主药,姜黄亦起了一定作用。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的调控作用

目的探索白藜芦醇对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法用200μmol.L-1H2O2作用2 h复制HUVECs损伤模型,白藜芦醇分为3个浓度干预组(13.75,27.5,55μmol.L-1)于损伤前2 h加入;MTT法测定细胞活力,比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH)的含量,Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光染料JC-1标记法检测线粒体膜电位。结果 13.75μmol.L-1白藜芦醇能显著增强H2O2损伤HUVECs后的细胞活力(P<0.05,与H2O2组比较),提高SOD活性(P<0.05,与H2O2组比较)及GSH含量(P<0.05,与H2O2组比较),降低细胞凋亡率(P<0.01,与H2O2组比较),恢复线粒体膜电位;而55μmol.L-1白藜芦醇对H2O2诱导的HUVECs细胞活力降低、细胞内SOD的活性和GSH的含量以及线粒体膜电位的下降无明显影响,但却能进一步促进H2O2诱导的HUVECs凋亡率(P<0.05,与H2O2组比较)。结论白藜芦醇在低浓度时对H2O2诱导的HUVECs凋亡具有抑制作用,而在高浓度时却对凋亡有促进作用。     

马里苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的作用

目的观察两色金鸡菊黄酮类化合物马里苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的作用。方法取对数生长期的细胞,分为正常对照组(NG)、高糖模型组(HG)及马里苷不同浓度(50、100、200、400μmol/L)给药组。采用CCK-8法检测细胞活力;ELASA法检测MDA含量及SOD、CAT、GSH-PX活力; Western blot法检测炎性因子VEGF、ICAM-1、MCP-1在HUVEC细胞中的蛋白表达。结果与NG组比较,及HG组细胞活力明显降低(P0.05); MDA含量显著升高(P0.05),SOD、CAT、GSH-PX活性降低(P0.05);与HG组(50 mmol/L)比较,马里苷药物干预组(50、100、200、400μmol/L)细胞活性明显增加,差异有统计学意义(P0.05),且随浓度增加细胞活性明显增加。Western blot蛋白印迹结果显示,与NG组比较,HG组VEGF、ICAM-1、MCP-1蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05);与HG组比较,马里苷干预组VEGF、ICAM-1、MCP-1蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论马里苷对高糖损伤的HUVEC细胞具有一定保护作用。     

桃红四物汤含药血清对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞TNF-α、MCP-1和IL-1β表达的影响

目的:研究桃红四物汤含药血清对脂多糖(LPS)诱导刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:SD大鼠灌胃给予桃红四物汤提取液(生药1.75 g·m L-1),每天2次,按10 m L·kg-1连续给药3d后,制备桃红四物汤含药血清。MTT法检测桃红四物汤含药血清(终浓度为5%、10%和15%)预处理对LPS诱导细胞生存率减少的作用;real-time RT-PCR检测TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达情况;Western Blot方法检测MCP-1和NFκB蛋白表达;检测活性氧(ROS)含量,研究桃红四物汤含药血清对HUVEC抗氧化能力的影响。结果:与空白血清对照组比较,经LPS(1μg·m L-1)刺激后细胞ROS含量明显增高而生存率显著降低,同时细胞炎性因子TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达增高;含药血清组可显著提高HUVECs活力、降低ROS含量和TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达。结论:桃红四物汤含药血清对LPS诱导的HUVECs损伤有显著地保护作用。