卵子玻璃化冷冻保存生育力的研究进展

随着人类辅助生殖技术的发展,卵子冷冻技术已经成为人们关注的课题,在拓宽目前辅助生殖技术服务的范围和保存女性生育能力方面有重要的价值.近年来玻璃化冷冻被认为是深低温保藏卵母细胞很有前途的选择.玻璃化冷冻卵母细胞冻融后存活率、受精率、卵裂率及移植妊娠活婴率较前有所提高,但迄今为止,人们仍缺少标准的玻璃化冷冻方案,对保护剂和载体的选择及冷冻程序等仍未达成共识.该文就玻璃化冷冻人类卵母细胞意义、卵子玻璃化冷冻的应用现状及冷冻保护剂、低温冷冻复苏对卵子的潜在危害及应用前景等研究作以综述.     

卵母细胞玻璃化冷冻损伤相关因素及进展

卵母细胞玻璃化冷冻损伤的机制及影响因素的研究是近年来关于生殖能力贮存的研究热点。近年来随着细胞生物学及分子生物学的迅速发展,对卵母细胞冷冻损伤的影响因素研究取得了巨大进展。综述冷冻保护剂、卵母细胞特点及发育阶段、降温速率、卵母细胞的外围结构、冷冻方法等因素对卵母细胞冷冻损伤的影响机制及降低卵母细胞冷冻损伤的最近进展。     

卵母细胞玻璃化冷冻损伤相关因素及进展

卵母细胞玻璃化冷冻损伤的机制及影响因素的研究是近年来关于生殖能力贮存的研究热点.近年来随着细胞生物学及分子生物学的迅速发展,对卵母细胞冷冻损伤的影响因素研究取得了巨大进展.综述冷冻保护剂、卵母细胞特点及发育阶段、降温速率、卵母细胞的外围结构、冷冻方法等因素对卵母细胞冷冻损伤的影响机制及降低卵母细胞冷冻损伤的最近进展.     

冷冻保存对卵母细胞影响的研究进展

随着辅助生殖技术的发展,人卵母细胞的冷冻技术受到了广泛关注并被广泛应用。但与早期胚胎的冷冻保存相比,卵母细胞的冷冻保存具有复苏后成活率低、受精率低、胚胎发育潜力差、妊娠率低、流产率高等特点。冷冻和解冻过程以及冷冻保护剂等均会对卵母细胞造成一系列形态学、细胞学以及生理、生化方面的影响。如:冷冻保护剂、冻融过程等可对卵母细胞的纺锤体、细胞骨架、细胞内钙离子、蛋白质组、细胞代谢以及卵母细胞的活性和发育潜力造成不同程度的影响。研究卵母细胞特殊的生物学特性以及冷冻对其造成的影响,有助于改进卵母细胞的冷冻方法,提高成功率。     

冷冻保存对卵母细胞影响的研究进展

随着辅助生殖技术的发展,人卵母细胞的冷冻技术受到了广泛关注并被广泛应用.但与早期胚胎的冷冻保存相比,卵母细胞的冷冻保存具有复苏后成活率低、受精率低、胚胎发育潜力差、妊娠率低、流产率高等特点.冷冻和解冻过程以及冷冻保护剂等均会对卵母细胞造成一系列形态学、细胞学以及生理、生化方面的影响.如:冷冻保护剂、冻融过程等可对卵母细胞的纺锤体、细胞骨架、细胞内钙离子、蛋白质组、细胞代谢以及卵母细胞的活性和发育潜力造成不同程度的影响.研究卵母细胞特殊的生物学特性以及冷冻对其造成的影响,有助于改进卵母细胞的冷冻方法,提高成功率.     

冷冻卵巢组织应用的研究进展

癌症治疗过程中放、化疗所造成的医源性月经不规律、卵巢早衰及相关不孕等日益影响到年轻但治愈率高的女性癌症患者的生活质量。卵巢组织的冷冻和移植作为一种新的恢复女性生殖和内分泌功能的手段．越来越受到重视。目前卵巢组织的冷冻方法主要有慢速冷冻法、快速冷冻法和玻璃化冷冻；冻融后卵巢组织的应用途径主要为自体移植、异体移植及未成熟人卵母细胞的体外培养。就卵巢组织的各种冷冻方法和应用途径进行综述，对其目前的研究进展和优缺点进行分析，提出存在的问题。     

采用简化电镜铜网玻璃化冷冻鼠成熟卵母细胞是方便有效的方法

卵母细胞冷冻是辅助生殖技术中非常重要的一部分。由于鼠卵细胞冷冻可以为人类卵母细胞冷冻提供原始数据，故对其研究十分重要。在卵母细胞移入之前传统的电镜铜网玻璃化冷冻的冷冻液需要从电镜网转移到无菌的过滤板上，而此研究的简化电镜铜网玻璃化冷冻则省略了这一步，这样既节省时间同时也方便有效。此研究比较了简化电镜铜网玻璃化冷冻与传统电镜铜网玻璃化冷冻及慢速冷冻、超快速冷冻在对老鼠成熟卵母细胞的复苏率、存活率、受精率和孵化率之间的差异性。     

冷冻卵巢组织应用的研究进展

癌症治疗过程中放、化疗所造成的医源性月经不规律、卵巢早衰及相关不孕等日益影响到年轻但治愈率高的女性癌症患者的生活质量.卵巢组织的冷冻和移植作为一种新的恢复女性生殖和内分泌功能的手段,越来越受到重视.目前卵巢组织的冷冻方法主要有慢速冷冻法、快速冷冻法和玻璃化冷冻;冻融后卵巢组织的应用途径主要为自体移植、异体移植及未成熟人卵母细胞的体外培养.就卵巢组织的各种冷冻方法和应用途径进行综述,对其目前的研究进展和优缺点进行分析,提出存在的问题.     

玻璃化冷冻技术的研究进展

玻璃化冷冻技术是一种快速冷冻细胞或组织的方法,随着辅助生殖技术的发展而受到广泛关注。该项技术具有冷冻速度快、冻融损伤小,操作简单等优点,能够提高冷冻复苏后的存活率和妊娠成功率。玻璃化冷冻技术在临床应用中主要受到冷冻保护剂的类型和浓度、冷冻温度、冷冻速度及冷冻承载工具等一系列因素的影响。由于冷冻对象的不同,所实施的具体方法也不尽相同。该技术目前尚未成熟,如何优化人卵母细胞、胚胎及卵巢组织的玻璃化冷冻方案仍需要进行深入的研究。     

脯氨酸作为细胞冷冻保护剂的研究进展

细胞冷冻保存应用广泛, 但冷冻会损伤细胞导致代谢紊乱, 而冷冻保护剂可缓解该过程。脯氨酸是一种渗透性冷冻保护剂, 可快速透过细胞膜进入细胞内, 与细胞内水氢键结合抑制低温下冰晶形成, 同时可与细胞内水结合减少细胞内水流失, 保护细胞内蛋白质的结构和功能, 保护细胞膜。脯氨酸可提高植物、动物及人类体细胞冷冻复苏后存活率。在生殖细胞冷冻中, 研究表明脯氨酸可用于卵母细胞冷冻, 可提高小鼠卵母细胞冷冻后存活率及保护线粒体功能, 但其对于精子的冷冻效果报道尚不一致。脯氨酸冷冻保护剂涉及多种细胞类型且冷冻效果较强, 其未来可能更广泛应用于低温生物学领域。本文总结了脯氨酸作为天然小分子冷冻保护剂的应用研究进展, 希望能够帮助人们更好地了解生殖细胞冻存的低温生物学机制, 为改良生育力冷冻保存技术提供参考。     

玻璃化冷冻技术的研究进展

玻璃化冷冻技术是一种快速冷冻细胞或组织的方法,随着辅助生殖技术的发展而受到广泛关注.该项技术具有冷冻速度快、冻融损伤小,操作简单等优点,能够提高冷冻复苏后的存活率和妊娠成功率.玻璃化冷冻技术在临床应用中主要受到冷冻保护剂的类型和浓度、冷冻温度、冷冻速度及冷冻承载工具等一系列因素的影响.由于冷冻对象的不同,所实施的具体方法也不尽相同.该技术目前尚未成熟,如何优化人卵母细胞、胚胎及卵巢组织的玻璃化冷冻方案仍需要进行深入的研究.     

卵巢组织玻璃化冷冻的研究进展

冷冻保存胚胎、卵母细胞或者卵巢组织是目前保存女性生殖内分泌功能的可选途径。相比之下，卵巢冷冻的优越性是卵母细胞或胚胎冷冻无可比拟的。传统的冷冻技术已经在临床推广应用，但由于操作过程复杂、医疗仪器昂贵、耗费时间长等，使其在一般的实验室无法推广应用。玻璃化冷冻操作简单、省时省力、且能减小传统慢冻所造成的冰晶组织损伤，注定其必将为人所关注并将渐渐被推广。但迄今为止，玻璃化冷冻尚未形成一个完整的标准体系。综合近几年玻璃化冷冻研究进展，展望其研究前景和目前存在的问题，努力思考如何建立卵巢组织的玻璃化冷冻。     

冷冻对小鼠2-4细胞胚胎细胞骨架结构的影响

目的探讨胚胎冷冻技术对小鼠2-4细胞胚胎细胞骨架结构的影响。方法用抗骨架蛋白actin的单克隆抗体进行免疫染色,激光共聚焦显微镜观察经过慢速冷冻小鼠2-细胞、4-细胞胚胎的细胞骨架结构的状况。结果以丙二醇为冷冻保护剂,采用慢速冷冻-快速解冻的方式冷冻小鼠2-细胞、4-细胞胚胎对胚胎细胞骨架结构的分布特点没有明显影响,荧光强度定量分析表明冷冻胚胎荧光强度与未冷冻胚胎的荧光强度相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论冷冻对小鼠2-细胞和4-细胞胚胎的细胞骨架结构没有明显影响。     

海藻糖用于玻璃化冷冻卵母细胞的研究

海藻糖的发现为低温保存卵母细胞提供可利用的价值,其作为冷冻保护剂对卵母细胞进行玻璃化冷冻成为新的冷冻技术方法。海藻糖的作用原理包括:"水替代"假说、"玻璃态"假说、"优先排阻"假说。在高温、高寒、高渗透压及干燥、脱水、冷冻时等恶劣环境条件下,海藻糖在细胞表面能形成独特的保护膜,有效地保护蛋白质分子不变性失活,从而维持生命体的生命过程和生物特征。目前海藻糖已用于多种生物细胞研究,如:红细胞、血小板及生殖细胞等的离体长期保存,且均表现出独特的功能。     

海藻糖用于玻璃化冷冻卵母细胞的研究

海藻糖的发现为低温保存卵母细胞提供可利用的价值,其作为冷冻保护剂对卵母细胞进行玻璃化冷冻成为新的冷冻技术方法.海藻糖的作用原理包括:"水替代"假说、"玻璃态"假说、"优先排阻"假说.在高温、高寒、高渗透压及干燥、脱水、冷冻时等恶劣环境条件下,海藻糖在细胞表面能形成独特的保护膜,有效地保护蛋白质分子不变性失活,从而维持生命体的生命过程和生物特征.目前海藻糖已用于多种生物细胞研究,如:红细胞、血小板及生殖细胞等的离体长期保存,且均表现出独特的功能.     

左归丸和右归丸对冷冻大鼠卵巢组织存活效果的影响

目的评价左归丸和右归丸对大鼠卵巢组织冷冻效果的影响。方法在大鼠卵巢组织冷冻保存过程中,在冷冻保护剂中分别加入5%、10%、15%左归丸和右归丸含药血清和空白血清,比较各组解冻复苏后卵巢组织结构特点、卵泡正常形态率、卵母细胞凋亡率。结果新鲜卵巢组的卵泡正常形态率高于各冷冻卵巢组,卵母细胞凋亡率显著低于所有冷冻组(P0.05);10%、15%左归丸和右归丸含药血清组的卵泡正常形态率高于5%左归丸和右归丸含药血清组和空白对照组,卵母细胞凋亡率低于5%左归丸和右归丸含药血清组和空白对照组(P0.05)。结论左归丸和右归丸能提高冷冻卵巢组织的卵泡成活率,降低冷冻卵巢组织卵母细胞的凋亡率,为补肾中药成功应用于卵巢组织冷冻保存中提供了实验依据。     

雄性生殖细胞冷冻保存研究进展

随着单精子及精子细胞卵胞浆内显微受精技术的发展,雄性生殖细胞冷冻保存技术已成为辅助生殖技术的重要内容,为男性因素不育患者的临床助孕提供了物质保障基础。目前,雄性生殖细胞冷冻方法包括程序化冷冻和玻璃化冷冻;冷冻保护剂可有效降低细胞的冷冻损伤,根据其特性分为渗透性保护剂和非渗透性保护剂两大类;冷冻载体中冷冻环、冷冻叶片等应用较广泛。雄性生殖细胞冷冻的效果与冷冻方法、冷冻保护剂和冷冻载体等密切相关。     

人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究

目的:研究人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液,探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值.方法:运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射一胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞受精及发育能力.根据冷冻方法分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,比较各组存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果:程序化冷冻组和玻璃化冷冻组间存活率、卵裂率、囊胚形成率均无显著性差异(P＞0.05),但是受精率存在显著性差异(P＜0.05);程序化组与自配液组、成品液组间存活率、卵裂率均无显著性差异(P＞0.05),但受精率存在显著性差异(P＜0.05).成品液组与自配液组、程序化组间囊胚形成率存在显著性差异(P＜0.05).程序化组移植4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植7例.获得1例生化妊娠.结论:程序化冷冻与玻璃化冷冻法均可应用于人类成熟卵母细胞,冻融后卵母细胞具备正常受精能力及卵裂能力.玻璃化冻存人类卵母细胞具有更大发展趋势.     

玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织安全性研究进展

近年来玻璃化冷冻技术逐渐应用于生殖医学,多数学者认为,玻璃化冷冻胚胎的存活率、发育率、种植率和妊娠率高于程序化冷冻,且经济、便捷、快速,有取代传统慢速冷冻技术的趋势。但玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织历史短,其安全性一直受到关注,并认为其造成的细胞膜、透明带、遗传物质和代谢功能损伤是不可避免的。但选择不同的冷冻保护剂和冷冻载体对不同时期的胚胎、配子、卵巢组织进行玻璃化冷冻所造成的冷冻损伤不同。因此,寻求一种安全可靠的冷冻方法是生殖医学工作者追求的目标。     

卵子玻璃化冷冻对表观遗传及基因表达的影响

<正>1978年,Louise Brown的出生表示辅助生殖技术(assisted reproductive technologies,ART)的范围已大大拓宽^[1]。虽然胚胎和精子冷冻保存都已经是较为成熟的技术,但因为技术问题和较低的成功率,卵母细胞冷冻领域在很长时间内缺乏进展^[2],1980年代后期,首次使用慢速冷冻和快速解冻冷冻保存技术,冷冻卵母细胞才首次成功受孕^[3-4]。因为卵母细胞的表面积与体积之比较低,并且对细胞内冰晶形成的敏感性很高,卵母细胞被普遍认为是一种难以冷冻保存的细胞^[5]。1994年,