脑缺血再灌注后神经元和内皮细胞凋亡的差异与Bcl—2和P53表达的意义

目的：探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞和血管内皮细胞凋亡的差异及其与Bcl-2和p53蛋白表达的关系。方法：应用原位末端标记技术和免疫组化方法,检测神经细胞和血管内细胞凋亡及Bcl-2和p53蛋白表达,结果：在缺血周围区,缺血再灌注2h神经细胞和内皮细胞凋亡开始增多,12－24h达高峰,之后逐渐减少,7－14d降至假手术组水平;血管内皮细胞凋亡迟于神经元凋亡12－24h,Bcl-2蛋白表达于缺血再灌注2h开始增强,12－24h达高峰,之后逐渐下降,至7－14d接近假手术组水平,p53蛋白表达于缺血再灌注6h开始增高,24－48h达高峰,之后逐渐下降,至14d与假手术组已无显著性差异。结论：脑缺血再灌注损伤后血管内皮细胞凋亡迟于神经元凋亡,Bcl-2和p53蛋白参与细胞凋亡的调节。     

脑缺血再灌注后神经元和内皮细胞凋亡的差异与Bcl-2和P53达的意义

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞和血管内皮细胞凋亡的差异及其与Bcl-2和p53蛋白表达的关系.方法应用原位末端标记技术和免疫组化方法,检测神经细胞和血管内细胞凋亡及Bcl-2和p53蛋白表达.结果在缺血周围区,缺血再灌注2 h神经细胞和内皮细胞凋亡开始增多,12～24 h达高峰,之后逐渐减少,7～14 d降至假手术组水平;血管内皮细胞凋亡迟于神经元凋亡12～24 h.Bcl-2蛋白表达于缺血再灌注2 h开始增强,12～24 h达高峰,之后逐渐下降,至7～14 d接近假手术组水平.p53蛋白表达于缺血再灌注6 h开始增高,24～48 h达高峰,之后逐渐下降,至14 d与假手术组已无显著性差异.结论脑缺血再灌注损伤后血管内皮细胞凋亡迟于神经元凋亡,Bcl-2和p53蛋白参与细胞凋亡的调节.     

缺氧复氧致神经细胞凋亡中Bcl—2、Bax基因蛋白的表达

目的 探讨缺氧复氧致原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞凋亡中Bcl-2、Bax基因蛋白的表达及其与凋亡的关系。方法 用胎龄17－18d Wistar大鼠的大脑皮层神经细胞进行原代分离培养。采用TUNEL染色方法、流式细胞术确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型,并用免疫组织化学方法显示缺氧复氧不同时间Bcl-2、Bax基因的动态表达。结果 1.缺氧复氧可以使大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡,在分别缺氧2、4、6、8h,复氧0h和18h组中,缺氧4h开始出现凋亡细胞,随缺氧时间的延长,凋亡细胞数逐渐升高,两者呈显著负相关,而凋亡的发生也与Bax基因、Bcl-2基因表达呈显著正、负相关性。在缺氧复氧组中,未发现相关性。结论 缺氧复氧可致胎鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡;缺氧复氧所引起Bcl-2基因表达增高,Bax基因表达降低,可能是胎鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡的机制之一。     

脑缺血再灌注损伤的海马神经元对Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达

目的：凋亡调控基因在脑缺血再灌后海马神经元的表达。方法：采用免疫组织化学的方法，观察 昆明小鼠双侧颈总动脉结扎7min后不同再灌时间组(24h组、48h组、72h组、7d组、14d组)海马CAl区神经元Bax、Bcl-2和Caspase-3的活性形式CM1的免疫反应活性。结果：Bax和CM1阳性神经元数在48h组最多，与其他各组相比差异有显著性(P＜0．01)，72h组明显下降，14d组完全消失；而Bcl-2阳性神经元数在48h组增多(与24h组相比，P＜0．01)，72h组下降，7d组再次上升(与72h组相比，P＜0．01)，14d组最多(与48h组相比，P＜0．01)。在24h、48h、72h、7d组，Bax阳性神经元多于Bcl-2阳性神经元(P＜0．05)，14d组则相反。结论：Bax和caspase-3在脑缺血再灌早期表达增强，然后下降以至消失，Bcl-2于再灌后期表达增强。Bax表达上调可能与Caspase-3激活相关。     

犬小肠缺血再灌注血管内皮细胞Bcl—2、Bax和VEGF的表达及意义

目的;研究犬小肠缺血再灌注后血管内皮细胞中的凋亡基因（Bcl-2,Bax)的血管内皮生长因子（VEGF）表达改变和意义。方法：阻断分布于小肠较小范围的小肠动脉,建立小肠缺血再灌注模型。以免疫组织化学方法对小肠组织中的Bcl-2,Bax和VEGF的表达进行观察研究。结果：小肠缺血再灌注后,Bcl-2,Bax和VEGF的表达有明显的改变。小肠再灌注0min,Bcl-2,Bax和VEGF的阳性细胞率分别为85％、55％和10％,再灌注30min ,分别为66％、54％和65％,而至再灌注60min,则分别为44％、75％和5％,在对照组仅有少量阳性细胞。结论：小肠缺血再灌注可引起抗凋亡基因Bcl表达夺加,但随着血流恢复而逐渐减少,而凋亡基因Bax的表达则逐渐增加。VEGF表达虽有一定增加,但最终减少。小肠缺血再灌注能增强调亡基因表达和诱导凋亡。     

瑞舒伐他汀预处理对局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠Bc1-2和Bax表达的影响

目的:探讨瑞舒伐他汀预处理对大鼠脑缺血/再灌注损伤脑组织Bc1-2和Bax表达的影响.方法:48只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脑缺血/再灌注组(I/R组)、溶剂对照组(Vehicle组)和瑞舒伐他汀预处理组(Ros组).Ros组在模型制备前用瑞舒伐他汀5 mg/kg/d连续灌胃10 d,1次/d;Vehicle组用相同体积的生理盐水连续灌胃10 d.线栓法制作大鼠大脑中动脉脑缺血/再灌注模型,于缺血2h后再灌注24h后行神经功能评分,断头取脑,免疫组织化学法和RT-PCR法观察脑组织Bc1-2和Bax表达水平的变化.结果:大鼠脑缺血/再灌注损伤后,Bc1-2和Bax显著增多;与I/R组和Vehic1e组相比,Ros组神经功能改善,Bc1-2的表达显著上调,Bax的表达显著下调,Bc1-2/Bax比值显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:瑞舒伐他汀预处理对大鼠脑缺血/再灌注损伤有神经保护作用,其机制可能与上调脑组织中Bc1-2的表达,下调Bax的表达,Bc1-2/Bax比值增加,从而抑制胞凋亡有关.     

桥本甲状腺炎甲状腺组织细胞凋亡与凋亡基因Bcl—2、Bax表达

为了探讨桥本甲状腺炎 (HT)甲状腺组织细胞凋亡的变化、凋亡基因Bc1- 2、Bax的表达及其与HT发病机制的关系 ,采用TUNEL法检测 4 1例HT、10例正常甲状腺组织细胞凋亡状况 ,同时采用免疫组化S -P法检测Bc1- 2、Bax表达及分布 ,应用Mias99图像分析系统对免疫组化结果进行定量分析。结果表明 :HT组甲状腺细胞凋亡率及甲状腺组织Bc1- 2、Bax阳性颗粒面积、平均光密度和积分光密度均显著高于正常组 (P <0 .0 5 - 0 .0 0 1) ;HT甲状腺滤泡区Bc1- 2阳性颗粒面积和积分光密度与Bax的比值明显低于正常甲状腺的比值 ,其组织结构破坏较重区域中小滤泡及失去正常滤泡结构的腺上皮Bax表达高于其它腺上皮 ,滤泡结构较完整的区域Bc1- 2表达较高 ,提示甲状腺细胞凋亡增高是HT甲状腺滤泡结构破坏和功能异常的重要机制之一 ;凋亡基因Bc1- 2、Bax表达的失衡与HT时甲状腺细胞凋亡增高密切相关     

老龄大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡、Bcl-2、Bax表达与caspase-3活性变化

目的：研究老年与青年急性局灶性脑缺血及再灌注(I/R)后细胞凋亡、Bcl-2、Bax表达与caspase-3活性变化的异同。方法： 采用线栓法建立急性局灶性脑I/R模型，检测青年与老龄大鼠脑缺血3 h及I/R 3 h、6 h、12 h、24 h、 72 h后脑梗死面积、神经细胞凋亡、Bcl-2、Bax表达及caspase-3活性。结果： 老龄大鼠脑缺血3 h和I/R 12 h脑梗死面积较青年大鼠增大。随着I/R时间延长，细胞凋亡明显增加，老龄大鼠出现的早、持续时间长。青年大鼠随着I/R时间的延长Bcl-2表达明显增强，老龄大鼠不明显。老龄大鼠I/R Bax表达早于青年大鼠，其表达增强及持续时间较长。老龄大鼠I/R caspase-3的激活早于青年大鼠。结论： 老龄大鼠I/R脑组织损伤严重，神经细胞凋亡显著，其机制与Bax表达增加、casspase-3活性增高及其持续时间长有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后bc1—2、bax表达和细胞凋亡

目的 观察大鼠大脑中动脉重度栓塞后再灌注动物的脑细胞凋亡及其相关调控基因bcl-2和bax阳性蛋白质表达的变化；方法 采用插线法制作大鼠大脑中动脉栓塞后再灌注模型，并观察脑缺血／再注不同时点大鼠脑细胞凋亡(TUMEL法)、凋亡相关调控基因bcl—2、bax(S-P免疫组化法)的阳性表达和脑组织含水量(Hallenbeck法)、脑梗塞体积(Nedergaard法)的变化。结果 大鼠大脑中动脉栓塞3h、栓塞3h／再灌注24、48h时，细胞凋亡逐步加重，损伤加重，bcl-2、bax表达增强。     

辛伐他汀预处理对脑缺血再灌注损伤Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨辛伐他汀预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:随机将48只雄性SD大鼠分为4组:空白对照组、假手术组、缺血再灌注组和辛伐他汀预处理组。辛伐他汀预处理组在模型制备前用辛伐他汀20mg/kg连续灌胃10d,1次/d;假手术组及缺血再灌注组用相同体积的等渗盐水连续灌胃10d。以线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于缺血2h再灌注24h后行5分制神经功能评分,并断头取脑分别测定脑梗死体积、凋亡细胞数及Bcl-2、Bax表达。结果:与空白对照组和假手术组比较,缺血再灌注组和辛伐他汀预处理组神经功能缺损较为严重,脑梗死体积增大,凋亡细胞数目增多,Bcl-2、Bax表达增加(均P0.01)。与缺血再灌注组相比,辛伐他汀预处理组神经功能有不同程度改善,脑梗死体积明显减小,凋亡细胞数及Bax表达降低,Bcl-2表达增高,比较差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:辛伐他汀预处理对大鼠脑缺血再灌注有神经保护作用,其作用机制可能与辛伐他汀上调脑组织中Bcl-2、下调Bax表达,抑制细胞凋亡有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注中nNOS源性NO对Bcl-2、Bax表达的影响

为研究大鼠局灶性脑缺血再灌注早期神经元型一氧化氮合酶(nNOS)来源的一氧化氮(NO)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,本实验闭塞大鼠左侧大脑中动脉造成局灶性脑缺血模型,给予选择性nNOS抑制剂-7硝基吲唑,应用免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果表明:50mg/kg、25mg/kg剂量的7-硝基吲唑可使Bcl-2蛋白表达升高,Bax表达降低。提示:局灶性脑缺血再灌注早期,nNOS来源的NO可能通过下调Bcl-2、上调Bax促进细胞凋亡的发生。     

降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑cAMP反应元件结合蛋白mRNA表达的影响

目的 探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质cAMP反应元件结合蛋白(CREB)mRNA表达的影响.方法 用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位杂交和图像分析技术检测大鼠缺血侧海马CA1区和顶叶皮质CREB mRNA表达.结果 假手术组右侧海马CAl区和顶叶皮质CREB mRNA有明显表达,缺血再灌注组右侧海马CAl区和顶叶皮质CREB mRNA阳性产物吸光度值减少,CGRP组缺血侧海马CAl区和顶叶皮质CREB mRNA表达的吸光度值比缺血再灌注组增高(P＜0.05).结论 CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质CREB mRNA的表达,CGRP对缺血神经元的保护作用可能通过激活CREB的转录与翻译,从而启动一系列信号通路来实现.     

CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织Erk mRNA表达的调节作用

目的　检测大鼠脑缺血再灌注后细胞外信号调节蛋白激酶信使RNA(ErkmRNA)的表达,探讨降钙素 基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对脑组织的保护作用。　方法　采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺 血再灌注模型,采用原位杂交及显微图像分析方法检测海马及皮质内Erk的表达。　结果　大鼠缺血再灌注海马 及皮质内ErkmRNA较正常组增多(P<0.05),而注射CGRP或NGF后ErkmRNA明显高于缺血再灌注组(P< 0.01),两者联合应用效果更加显著(P<0.05)。　结论　CGRP及NGF可能参与缺血神经元ErkmRNA的调节,两 者对缺血神经元有协同修复作用。     

骨髓基质细胞促进永久性局灶性脑缺血大鼠脑室下区的神经发生

目的 探讨移植骨髓基质细胞(BMSCs)对永久性局灶性脑缺血大鼠脑室下区(SVZ)细胞增殖的影响及其增殖细胞类型分析. 方法制作永久性局灶性脑缺血大鼠模型,分为空白对照组(MCAO)、PBS对照组(MCAO PBS)和治疗组(MCAO BMSCs),每组动物再分为脑缺血后7d和14d亚组.空白对照组不予处理,PBS对照组在脑缺血后1d移植PBS,治疗组在脑缺血后1d移植BMSCs.用Zausinger六分法检测神经功能恢复情况;注射5-溴脱氧鸟嘧啶核苷(BrdU)标记SVZ的新增殖细胞,免疫荧光双重标记检测新增殖细胞的类型. 结果在脑缺血后7d和14d,与两个对照组相比,治疗组的神经功能评分较高,有显著性差异(P<0.05);脑缺血后14d,治疗组的大鼠患侧SVZ的BrdU阳性细胞较其余两组高,存在显著差异(P<0.05);免疫荧光双重标记显示,新增殖细胞表达神经元和星形胶质细胞的标志物,提示新增殖细胞为神经元和神经胶质细胞的混合体. 结论 BMSCs可以改善永久性局灶性脑缺血大鼠的神经功能,其机制可能与促进SVZ的神经细胞增殖有关.     

NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马CHOP mRNA及蛋白表达的影响

探讨NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马神经元CHOPmRNA及蛋白表达的影响。用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO),应用原位杂交方法检测CHOPmRNA的表达;应用免疫组织化学SABC法检测CHOP蛋白表达;应用显微图像分析系统进行分析。结果显示:假手术组大鼠海马CHOPmRNA及蛋白表达极少;缺血组较假手术组CHOP表达mRNA和蛋白均显著增加(P<0.01),缺血再灌注3h后CHOPmRNA表达明显增加,24h达高峰,48h开始显著下降,72h接近对照组水平,CHOP蛋白在缺血再灌注12h时明显表达增高,24h达到高峰,72h显著下降,但仍高于对照组水平(P<0.01);在缺血再灌注12、24、48h,NGF组CHOPmRNA及蛋白表达明显低于缺血组(P<0.01)。本研究表明,外源性NGF能显著抑制局灶性脑缺血再灌注后CHOPmRNA及蛋白表达,提示NGF可能对脑缺血再灌注损伤后的海马神经元有保护作用。     

人参皂甙Rb1阻止大鼠局灶性脑缺血细胞凋亡和诱导NAIP表达

人参皂甙Rb1(GRb1)是人参中一个最重要的有效成分(人参属五加科中一属),能减少大鼠暂时性脑缺血梗塞面积和改善神经功能缺失症状,这种神经保护作用的机制不完全清楚。本实验研究GRb1的神经保护作用是否与防止神经元凋亡和调控神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)的表达有关。通过阻塞大鼠大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型,再灌注开始后立即给予腹腔注射GRb1(40mg/kg)。具有神经功能缺失的大鼠被随机分成2组:缺血组和GRb1组,每个组根据再灌注时间(3h,12h,1d,2d,3d,5d,10d,n=4/每时间点)分为亚组。正常大鼠和假手术组做为对照组。TUNEL标记分析凋亡细胞,用免疫组织化学的方法检测NAIP的表达。结果显示再灌注3h凋亡细胞数量开始升高,24h达高峰,后下降,但再灌注10d的凋亡细胞数量显著高于对照组(P<0.01)。与缺血组相比,GRb1各亚组的凋亡细胞数减少,但再灌注12h至3d,其差异具有统计学意义。在对照组,NAIP弱或阴性的免疫反应广泛出现在脑实质神经元。再灌注3h,NAIP阳性细胞增加,12h时达高峰,后下降。再灌注5d,NAIP阳性细胞数量比对照组少(P<0.05)。NAIP阳性神经元出现缺血性改变如扇形或三角形,纹状体星形胶质细胞强表达NAIP。在GRb1组,NAIP阳性细胞数量从再灌注12h到10d,显著高于缺血组。本实验结果提示大鼠局灶性脑缺血时,GRb1能减少细胞凋亡,其机制可能与增加NAIP的表达有关。     

大鼠局灶性脑缺血损伤神经元BCL-2、BAX及FOS蛋白的表达

为了了解ＢＣＬ ２,ＢＡＸ 及ＦＯＳ蛋白表达量的变化与局灶性脑缺血、再灌流损伤和功能恢复之间的关系,以大鼠单侧血管内栓线法建立局灶性脑缺血再灌流实验动物模型,采用免疫组织化学方法显示不同脑区在不同时相与病理分区中三种基因的表达变化,并以假手术动物脑区作对照。用Ｈ Ｅ 染色观察神经元的病理变化。结果表明：各脑区在缺血１．５ ｈ、再灌２４ ｈ 后三种基因的表达变化最明显。中心梗塞区神经元消失,无任何基因表达;梗塞边缘区神经元缺血变性较重,ＢＡＸ 表达较ＢＣＬ ２ 明显;缺血反应区神经元缺血变性较轻,ＢＣＬ ２ 表达较ＢＡＸ 明显。ＦＯＳ蛋白在缺血反应区内的表达较显著。ＢＡＸ 表达神经元的变性程度比ＢＣＬ ２ 者严重,ＦＯＳ蛋白表达的神经元核着色均匀,未显固缩和碎裂现象。以上结果提示,ＢＣＬ ２ 和ＢＡＸ 所代表的两类分子的比例可能最终决定细胞的死亡或存活的结局。损伤神经元ＦＯＳ蛋白的表达是对损伤刺激的早期反应。