云南重楼中三萜皂苷类化合物抑制鼻咽癌细胞活性的三维定量构效关系研究

目的 研究云南重楼中的三萜皂苷类化合物的结构与生物活性之间的关系.方法 采用比较分子场分析(CoMFA)和比较分子相似性指数分析(CoMSIA)方法,进行偏最小二乘法(PLS)分析,建立云南重楼中15个具有抗鼻咽癌活性的三萜皂苷类化合物的三维定量构效关系(3D-QSAR)模型,通过三维等势图分析说明该系列化合物在分子立体场、静电场、疏水场和氢键场的分布与生物活性之间的相关性.结果 CoMFA场和CoMSIA场的交叉验证系数(rcv3)分别为0.598和0.699,非交叉验证系数(r2)分别为0.999和1.000,所得模型具有良好的预测能力和拟合能力.结论 明确了云南重楼三萜皂苷类化合物中对抑制鼻咽癌活性影响较大的基团或原子.     

云南重楼提取物及化学成分的抗肿瘤活性研究

云南重楼Paris polyphylla Smith var.yun-na-nensis(Franch.)Hand.-Mazz.为百合科重楼属植物,分布于云南、四川、贵州等地[1],其干燥根茎具有止血、免疫调节、心血管作用[2]等药理活性,尤其在抗肿瘤方面,已经作为云南白药、楼莲胶囊、博尔宁、金复康等多种成药的组成成分之一,     

重楼醇提物对非小细胞肺癌细胞活性影响的实验研究

目的:观察中药重楼醇提物对非小细胞肺癌细胞活性的影响。方法:将人大细胞肺癌NCIH460细胞株、人肺腺癌A549细胞株悬液分别接种于96孔细胞培养板中,24 h细胞贴壁后依次加入不同浓度的含重楼醇提物培养液进行干预,并设RPMI-1640培养液为空白对照组。药物干预48 h后,采用MTT法测定不同浓度药物对NCI-H460、A549细胞增殖的影响,使用Hoechst荧光染色法检测对细胞凋亡的影响。结果:与空白对照组比较,重楼醇提物在不同浓度下对NCI-H460和A549两株肺癌细胞的生长均有抑制作用(P0.05~0.001),且呈浓度依赖性;对两种细胞的半数抑制浓度(IC_(50))分别为30μg/ml和15μg/ml。不同浓度的重楼醇提物作用于NCI-H460、A549细胞后,随着药物浓度的增加,凋亡细胞数亦明显增加,并伴随出现细胞的坏死、轮廓不清,甚至细胞解体等。结论:重楼醇提物可明显降低NCI-H460和A549细胞的活性并促进其凋亡,且呈剂量依赖性。     

滇重楼内生细菌分离及抑制人体病原菌活性菌株筛选

目的分离滇重楼内生细菌,研究其抑制人体病原菌的能力.方法从表面消毒的滇重楼新鲜植株中分离内生细菌.在体外,用提取物抑制金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌及白色念珠菌生长.结果来自温室的植株分离到更多的内生细菌,植株地下部位中内生细菌比地上部位更多;约60%内生细菌对指示菌有一定抑制作用,其中LRB11抑菌效果较明显.结论由于内生细菌与宿主相互作用,故具抑菌作用的内生细菌可用于新药的开发或中药植物的生防.     

Survivin表达抑制影响鼻咽癌细胞的增殖与凋亡

目的研究Survivin表达抑制对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨Survivin在鼻咽癌中的生物学功能。方法采用脂质体将Survivin特异性SiRNA(small interfering RNA)转入鼻咽癌细胞株5-8F,培养48h后,收集细胞。逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分别检测Survivin mRNA和蛋白在细胞中表达。流式细胞仪检测细胞凋亡与周期,显微镜下计数检测细胞增殖抑制。结果SiRNA抑制5-8F细胞Survivin表达后,细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.01);S/G1比值显著高于对照组(P<0.01);细胞增殖抑制率也显著高于对照组(P<0.01);脂质体对照组与阴性SiRNA对照组比较,细胞凋亡、周期和增殖差异无显著性(P>0.05)。结论Survivin表达抑制,诱导鼻咽癌细胞凋亡并抑制其增殖。     

滇重楼内生真菌的分离及其抑菌活性

目的 从滇重楼新鲜植株中分离内生真菌并研究其代谢产物抑制人体病原细菌的能力.方法 滇重楼新鲜植株表面消毒后, 采用YPD平板分离培养内生真菌.各菌株的液体发酵物经乙酸乙酯萃取并浓缩.然后, 以金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、屎肠球菌3种可感染人体的细菌为指示菌, 采用滤纸片琼脂扩散法测定抑菌活性.结果 分离到54株内生真菌.其中20株内生真菌有抑菌活性, 活性菌株占总菌株数量的37%.其中, J09对上述3种细菌的抑菌圈直径分别为 (49.67±1.25) mm、 (50.33±0.52) mm、 (37.00±1.63) mm, 经形态学观察及分子生物学鉴定, J09为灰黄青霉.同时, 经高效液相色谱检测确定, 该抑菌成分并非青霉素或灰黄霉素.结论 内生真菌 (J09) 的代谢产物抑菌活性较强, 具有开发抗菌药物的潜在价值.     

陕西重楼抗肿瘤活性成分研究

目的探讨讨论陕西重楼不同提取部位对S180、H22肿瘤细胞增殖的影响。方法通过离体抗肿瘤活性实验,采用MTr法检测重楼不同提取部位对S180、H22肿瘤细胞株增殖作用的影响。结果离体实验发现重楼不同提取部位在一定剂量中对小鼠S180、H22肿瘤细胞有明显抑制作用。结论陕西重楼乙酸乙酯提取部位和乙醇提取部位对S180有一定的抑制作用;陕西重楼石油醚提取部位,乙酸乙酯提取部位和80％乙醇提取部位对H22有一定的抑制作用。     

1株滇重楼内生真菌的研究——抑真菌活性及分离鉴定

目的 分离滇重楼内生真菌,研究其抑制病原性真菌的作用并进行分类鉴定.方法 从滇重楼植株中分离培养内生真菌.在体外,用指示菌株金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、大肠埃希菌及白色念株菌进行抑菌活性筛选.对具有抑制白色念珠菌的内生真菌菌株进行培养,观察显微形态特征,确定其分类地位.结果 从滇重楼的根中分离到一株内生真蒲菌株,对白色念株菌有较强抑制作用,鉴定为尤孢菌群.结论 滇重楼内生真菌无孢菌群菌株LRF4具有抑制白色念珠菌的作用.     

重楼抗肿瘤活性成分的体外实验研究

目的:从中药重楼中提取分离皂苷单体,通过体外实验,初步确定其抗肿瘤活性部位. 方法:以体外培养的人癌细胞株A-549,MCF-7,HEP-Ⅱ, Lovo, SMMC-7721及正常Zhang氏肝为筛选瘤株,应用MTT比色法,观察单体成分对肿瘤细胞的抑制作用和对正常细胞的毒性. 结果:5种单体对肿瘤细胞的生长均有抑制作用,其中单体B-9对MCF-7,HEP-Ⅱ、A-549的IC50分别为21.09μg/ml、29.65μg/ml. 结论:单体B-9表现出良好的抗肿瘤活性且对正常细胞的毒性较小,具有进一步开发研究的价值.     

中药重楼的显微鉴定研究

本文报道了百合科重楼属植物七叶一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis Hara、滇重楼P.polypylla Smith var.yunnanensis Hand.-Mazz.、狄叶重楼P.polyphylla Smith var.stenophylla Franch.、多叶重楼P.polyphylla Smith、长药隔重楼P.polyphylla Smith var.pseudothibetica H.Li、海南重楼P.dunniana Levl、凌云重楼P.cronquistii H.Li、南重楼P.vietnamensis H.Li、金线重楼P.delavayi Franch等9个种和变种根茎的显微鉴定。各种和变种间有一定的区别,主要比较最外层细胞、中柱维管束、粘液细胞、草酸钙针晶束、皮层等。     

滇重楼的化学成分研究

目的研究滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis根茎中的化学成分。方法利用正相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、反相制备色谱等手段进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱技术进行结构鉴定。结果从醋酸乙酯层中分离得到了7个化合物,分别鉴定为豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、1-O-(β-D-葡萄糖基)-(2S,3S,4E,8E)-2-[(2′R)-2′-羟基十六酰氨基]-4(E),8(E)-十八二烯-1,3-二醇(Ⅱ)、β-蜕皮激素(Ⅲ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅳ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅶ)。结论化合物Ⅱ为首次从该属植物中分离得到。     

滇重楼内生真菌转化万古霉素的研究

目的 利用滇重楼内生真菌生物转化万古霉素.方法 分离滇重楼内生真菌并筛查它们的生物转化能力.鉴定具有转化能力的内生真菌.结果 有2株内生真菌可以转化万古霉素.经鉴定为产黄青霉和Fusarium nematophilum.菌株G01和G03在添加万古霉素的液体培养基中培养6d后,HPLC （High Performance LiquidChromatography）分析发现,万古霉素的峰面积下降并有新吸收峰出现.结论 内生真菌发酵产生了某些新成分。     

滇重楼和南重楼的显微结构研究

目的:对重楼属植物滇重楼和南重楼两个种进行显微结构鉴别研究.方法:采用石蜡切片方法.结果:滇重楼和南重楼这两个种的根、根茎、茎、叶显微结构相似.结论:重楼属内相近种间显微特征相似不易用于种间鉴别,重楼属内相近种间植物需要借助于植物性状和其他手段相结合鉴别.     

云南重楼种苗分级栽培生长情况分析

目的：研究云南重楼种苗分级栽培对云南重楼生长的影响。方法：对云南重楼不同分级种苗种植3年后的根状茎大小、存活率、根状茎增重、小区产量等指标进行比较研究。结果：优选出最佳的种苗分级。结论：最适宜的云南重楼种苗根状茎为10g左右,种植3年增重倍数可达3倍以上。     

影响滇重楼种子萌发及胚根生长因素的研究

目的：为滇重楼种子育苗提供理论指导。方法：采用去除种皮、不同温湿度处理、赤霉素处理、不同种子来源实验,观察滇重楼种子萌发及胚根生长情况。结果：种皮及低温对滇重楼种子萌发及胚根生长的抑制作用明显;外源赤霉素在常温下对滇重楼种子的萌发没有影响,但可以打破低温对滇重楼种子萌发及胚根生长的抑制作用;滇重楼种子萌发和胚根生长的适合湿度范围较宽;不同来源的种子,主要由于成熟度的差异,种子萌发及胚根生长情况差异明显。结论：在滇重楼种子育苗过程中,要选择成熟果实的种子,去除种皮和赤霉素处理均可提高滇重楼种子发根率和发根速度。     

红外光谱数据融合对栽培滇重楼产地鉴别*

目的 多样的环境因素使得不同产地栽培滇重楼的化学成分也丰富多样,不同居群栽培滇重楼的甾体皂苷类成分具有很大的差异,多源数据融合分析能更全面的表征药材化学信息,建立一个高效而准确的产地鉴别模型,为其资源合理开发利用提供依据。方法 以来自云南和四川的8个产地（保山、楚雄、大理、红河、丽江、成都、文山、玉溪）共366份栽培滇重楼根茎为实验材料,采集其傅里叶变换近红外光谱（FT-NIR）和衰减全反射-傅里叶变换中红外光谱（ATR-FTMIR）数据。采用Kennard-Stone算法将不同产地的样品分为2/3的训练集和1/3的预测集,基于4种特征变量提取方法（CARS、VIP、SPA、SO-Covsel）结合2种数据融合策略（低级数据融合和中级数据融合）,建立偏最小二乘产地判别分析模型。根据模型参数交叉验证均方根误差（RMSECV）和预测均方根误差（RMSEP）评估模型的稳定性,模型训练集和预测集准确率（ACC）评估模型分类性能。结果 近红外光谱和中红外光谱均能反应不同产地栽培滇重楼的化学成分差异,在中级数据融合中,基于VIP和SPA提取的特征变量建立的模型正确率均大于94%。相较于中级数据融合,低级数据融合模型得到了最为满意的结果,其预测集分类正确率达到100%。结论 根据近红外和中红外数据建立的低级数据融合PLS-DA模型,能够用于栽培滇重楼的产地鉴别分析。     

变温层积对解除滇重楼种子休眠及其内源激素变化的研究

目的 研究滇重楼种子破休眠的方法及其内源激素水平变化规律。方法 以变温层积处理的滇重楼种子为材料,利用高效液相色谱法（HPLC）测定种胚发育过程中植物激素赤霉素（GA）、吲哚乙酸（IAA）、脱落酸（ABA）量的变化与种子胚率的关系。结果 变温层积处理可在3个月内打破滇重楼种子休眠,其GA量显著升高,ABA量显著下降。结论 内源激素ABA和GA在滇重楼种子休眠与萌发过程中起着重要的作用。     

化香树果序乙醇提取物诱导CNE1、CNE2细胞发生methuosis死亡的机制

目的 探讨化香树果序乙醇提取物(PSZ)诱导鼻咽癌细胞CNE1、CNE2发生methuosis死亡的机制.方法 用1.0 mg/mL PSZ处理CNE1、CNE2细胞,观察细胞形态学变化,RT-qPCR、Western blotting检测PSZ干预后Rac1基因和蛋白表达水平.EHT 1864抑制两组细胞Rac1表达,观察化香树果序醇提物对CNE1、CNE2细胞的作用.结果 CNE1、CNE2细胞经PSZ处理后,细胞质出现大量空泡,空泡相互融合,不断增大,最后细胞膜破裂,细胞核没有发生明显的变化,这种形态学改变符合methuosis细胞死亡方式,Rac1在基因和蛋白水平表达均增加.EHT 1864抑制细胞Rac1表达后,PSZ引起的methuosis死亡现象消失.结论 Rac1是PSZ诱导人鼻咽癌细胞CNE1、CNE2发生methuosis死亡的关键靶点.