6A8α-甘露糖甘酶的基因克隆、表达与功能研究

糖蛋白中的糖链在细胞-细胞、细胞-基质及细胞-分子间信息交通起重要作用。糖链可以N-连接方式(连接于蛋白质中由天冬酰氨酸、除脯氨酸外的任意氨基酸、丝氨酸/苏氨酸组成的序列子中的天冬酰胺)或O-连接方式(连接于蛋白质中的丝氨酸或苏氨酸)与蛋白质相连。N-连接与O-连接均需要一系列酶的催化。这些酶的识别与特性研究有助     

粘蛋白MRC1及MUC2与胃肠道肿瘤的相关性研究进展

粘蛋白(MUC)是由体内多种上皮细胞分泌的大分子量的糖蛋白,迄今已发现有13种(MUC1-MCR13)。其分子由肽核心和糖链组成,其中糖链约占其重量的50％～90％,肽核心富含苏氨酸、丝氨酸和脯氨酸残基,糖链多以O型糖苷键与肽核心的苏氨酸、丝氨酸残基连接,其最显著的共同特点是它们均有数目不等的串联重复序列。但各种粘蛋白又有其独特结构,重要区别在于内部核心蛋白区域的特异性及外周糖链的变异。粘蛋白在正常人体内主要存在于胃肠道、呼吸道、卵巢及乳腺等多种上皮组织中,其通常在上皮细胞表面分泌,并存在于上皮细胞的极性面,对正常的     

糖蛋白糖链结构的研究及临床应用

糖蛋白糖链结构的研究及临床应用兰医一院李晓玲，李定国糖蛋白是机体重要的组成成份，具有复杂的生理功能。凡糖蛋白中糖链的Ｎ一乙酰氨基半乳糖（ＧａｌＮＡｃ）与肽链中丝氨酸或苏氨酸残基的羟基形成α一糖苷键而连接者称为０—连接型糖链。而糖链的Ｎ一乙酰氨基葡萄糖...     

hPMSCs对白血病细胞Jurkat T表面CD分子表达的影响及机制研究

目的探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta derived mesenchymal stromal cells, hPMSCs)对人急性淋巴白血病细胞(Jurkat T)表面CD4、CD28及CD175表达的影响及机制。方法将hPMSCs与Jurkat T细胞共培养,采用FCM检测共培养前后Jurkat T细胞表面CD4、CD28、CD175的表达水平;Western blot检测Cosmc蛋白表达水平,荧光法检测T-合酶(T-synthase)活性,细胞O-糖组扩增技术(Cellular O-glycome Reporter/Amplifition, CORA)检测O-糖组变化。结果 hPMSCs O-糖组结构较复杂,表达核心1来源的O-糖链结构(m/z:955.4、1129.5、1316.6)及核心2来源的O-糖链结构(m/z:1217.6、1648.7、1782.8、1939.9、2058.0、2563.2);Jurkat T细胞不表达核心1及核心2来源的O-糖链。与hPMSCs共培养后,Jurkat T细胞表面CD4表达增高,CD28、CD175表达降低;Cos...     

糖链加工酶抑制剂地衣霉素和Swainsonine对运铁蛋白受体再循环的影响

作者应用两种糖链加工酶抑制剂,即抑制糖蛋白N-糖链合成的地衣霉素及使糖蛋白N-糖链变为高甘露糖型和杂合型的Swainsonine,来研究SMMC-7721人肝癌细胞表面运铁蛋白受体(TR)N-糖链结构的改变对受体再循环过程的影响。实验结果表明,1μg/ml的地衣霉素处理细胞后,细胞生长、蛋白质合成、DNA合成及细胞膜糖蛋白N-糖链的合成均受到不同程度的抑制,但对TR的再循环并无明显影响。2μg/ml的Swainsonine处理细胞后,对细胞生长、蛋白质合成、DNA合成均无明显影响,它使细胞膜糖蛋白N-糖链中甘露糖的掺入增加,并可加快TR再循环过程。     

磷酸化蛋白质检测技术研究进展

蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一,其磷酸化和去磷酸化这一可逆过程,受蛋白激酶和磷酸酶的协同作用控制.酶蛋白的磷酸化是在蛋白激酶的催化下,由ATP提供磷酸基及能量完成的,而去磷酸化则是由磷蛋白磷酸酶催化的水解反应.在哺乳动物细胞生命周期中,大约有1/3的蛋白质发生过磷酸化修饰;在脊椎动物基因组中,有5%的基因编码的蛋白质是参与磷酸化和去磷酸化过程的蛋白激酶和磷酸(酯)酶[1].真核细胞的蛋白质磷酸化位点主要发生在丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)残基侧链的羟基上,不同的蛋白激酶可识别和修饰不同蛋白质的不同位点,生物体内能被磷酸化修饰的蛋白质组成磷酸化蛋白质组(phos-phoproteome),磷酸化蛋白质组将是蛋白质翻译后修饰的研究热点.     

O连接N-乙酰葡萄糖胺糖基化在正常肝脏及肝脏疾病中的作用的研究进展

O连接N-乙酰葡萄糖胺（O-GlcNAc）糖基化是将O-GlcNAc连接到靶蛋白的丝氨酸或苏氨酸位点上的一种蛋白质翻译后修饰,参与酶活性、蛋白稳定性、转录因子活性、蛋白质的亚细胞定位、分子之间相互作用等的调控。O-GlcNAc糖基化的异常与多种疾病相关,可能是一种全新的疾病治疗靶点。肝脏的生理稳态及各类疾病的发生、发展均与O-GlcNAc糖基化的失调密切相关。基于此,本文对O-GlcNAc糖基化在正常肝脏功能及非酒精性脂肪性肝病、肝细胞癌、肝损伤与再生中的作用的研究进展进行综述,旨在为肝脏疾病的治疗提供新思路。     

IMP3与IGF-Ⅱ在妇科肿瘤中的研究进展

胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白族3(IMP3)与胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)前导序列-3 mRNA的5'-非翻译区(5'-UTR)结合,调节IGF-Ⅱ的表达引发磷脂酰肌醇3-羟基激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶或丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/促分裂素原活化蛋白激酶信号系统的瀑布式级联反应,促进肿瘤细胞的增殖,抑制细胞程序性死亡。两者与肿瘤的发生及转移有关,可能还与血管内皮细胞生长因子、基质金属蛋白酶、CD44、CD24等有关。该文就IMP3与IGF-Ⅱ的主要结构特征与功能、两者与肿瘤的关系、在妇科肿瘤中的表达等问题予以综述。     

胃癌组织N-糖苷键型糖蛋白的纯化及其在血清诊断中的意义

N-糖苷键连接的糖链是通过GlcNACβ_1-4GlcNAC和肽链上大冬酰胺残基的酰胺氮连接成糖苷链。在人体内很多属于糖蛋白的激素、酶和肿瘤标志物属这类N-糖苷型糖蛋白。近年来发现许多肿瘤的异常改变与其糖蛋白糖链的变异有关,肿瘤组织中糖链的检测可用于临床诊断,因而肿瘤细胞糖蛋白的研究已引起人们的重视。作者应用可     

脯氨酰顺反异构酶Pin1和免疫炎症

Pin1是体内唯一一种特异性识别丝氨酸/苏氨酸-脯氨酸(pSer/Thr-Pro)基序的顺反异构酶,通过异构化作用,可影响多种蛋白质的生物学活性,调节体内多种细胞活动,最终导致疾病的发生、发展.已有研究报道,Pin1除在癌症、糖尿病、自身免疫性疾病、神经退行性疾病等发挥重要作用外,还可介导免疫信号参与炎症疾病的发生.因...     

整合素连接激酶与糖尿病肾病

整合素是既与细胞内细胞骨架结合,又与细胞外基质(ECM)连接的跨膜基质受体,在ECM和细胞骨架之间提供生理连接.整合素连接激酶(ILK)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,通过与整合素的结合,介导细胞与ECM的连接,在细胞内、外双向信号转导中发挥重要作用,调节细胞增殖、分化、迁移、凋亡等.近期研究发现,糖尿病肾病患者肾小球上ILK表达明显增强,ILK与糖尿病肾病的足细胞损伤、肾小管间质纤维化密切相关.探索ILK在糖尿病肾病发生发展中的作用,对研究防治糖尿病肾病的新途径有重要意义.     

糖基化终产物对糖尿病并发症的影响

糖基化终产物(AGEs)是在非酶催化条件下由蛋白、脂蛋白或核酸中蛋白质的氨基与糖的醛基或酮基反应生成的一类物质.在1912年糖基化反应(Maillard反应)最初被化学家Maillard发现[1],它产生一种改变食物味道和营养价值的稳定性棕色物质[2].开链的葡萄糖分子游离醛基或酮基和蛋白质氨基酸残基通过亲核结合,生成不稳定的Schiff碱,随后发生分子结构重排,经糖-蛋白质酮胺结合物生成Ainadori产物.     

二氢杨梅素通过抑制骨骼肌TCPTP改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗

目的观察二氢杨梅素(DMY)对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗的影响。方法将SD雄性大鼠随机分成正常对照组、2型糖尿病组、2型糖尿病DMY组、DMY对照组。高糖高脂饮食联合链脲佐菌素造模。16周末,大鼠称重后测定空腹血糖(FBG)和血胰岛素(FINS),计算胰岛素敏感指数(ISI),Western blot检测大鼠骨骼肌T细胞蛋白酪氨酸磷酸酶(TCPTP)、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)及磷酸化蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(p-Akt)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)及磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达。结果成功建立2型糖尿病大鼠模型。与正常对照组比较,2型糖尿病组大鼠体质量、ISI及p-Akt、p-PI3K、GLUT4的表达水平显著降低,FBG、FINS及TCPTP表达水平显著升高(P＜0.05);与2型糖尿病组比较,2型糖尿病DMY组大鼠体质量、ISI及p-Akt、p-PI3K、GLUT4的表达水平显著升高,FBG、FINS及TCPTP表达水平显著降低(P＜0.05),DMY对正常大鼠上述指标无显著影响。结论二氢杨梅素可能通过抑制骨骼肌TCPTP的表达从而改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗。     

丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在健康人和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的差异表达

目的分析丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中的表达水平,探讨该蛋白检测在系统性红斑狼疮病情判断中的可能应用。方法实验分为3组:SLE稳定组、SLE活动组和健康对照组,每组6例,分别收集其外周血单个核细胞,用相对和绝对定量的等量异位标签串联质谱技术对丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白进行鉴定和相对定量分析,用Western blot技术对该蛋白的表达水平进行较大样本的独立验证。结果基于质谱分析的蛋白组学结果表明,丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在系统性红斑狼疮活动期患者外周血单个核细胞中表达显著下调(与正常人的相对比值为0.2906),且该蛋白的低表达为Western blot实验进一步证实。临床资料分析表明,该蛋白的表达水平与系统性红斑狼疮疾病活动指数呈负相关(r=-0.607,P<0.05)。结论丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白可能参与SLE的发病,该蛋白有望作为系统性红斑狼疮的活动阶段特异性标志物。     

Pin1在阿尔茨海默病中的作用机制

Pin1是人类肽基脯氨酰顺反异构酶,能特异性地识别、结合磷酸化的丝氨酸/苏氨酸-脯氨酸基序,催化肽的顺反异构,改变蛋白质的构象,影响其活性和稳定性。阿尔茨海默病中发生病理性改变的蛋白质(如过度磷酸化的微管相关蛋白tau和磷酸化的淀粉样前体蛋白等)都含有丝/苏氨酸模体。它们的活性和功能均受Pin1的变构调节。Pin1与神经元的凋亡也有关系,对神经元具有保护效应。     

蛋白质O-GlcNAc修饰与肿瘤糖代谢关系的研究进展

蛋白质O-GlcNAc糖基化是指单个N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine,GlcNAc)分子连接在蛋白质丝氨酸或苏氨酸的羟基氧原子上的一种翻译后修饰。O-GlcNAc糖基化广泛存在于转录因子、代谢通路上的激酶以及细胞质的部分酶中,影响细胞的转录、信号的传导和细胞的代谢等生命进程。肿瘤的异常糖代谢是近年来肿瘤发病机制和治疗靶点研究领域的热点。O-GlcNAc糖基化通过影响代谢通路上激酶的活性进而调控肿瘤细胞的糖代谢,与肿瘤的糖代谢密切相关,被认为是肿瘤产生发展的潜在原因之一。本文就O-GlcNAc修饰在肿瘤葡萄糖摄取、糖酵解、戊糖磷酸途径及三羧酸循环等研究中的进展进行综述,为研发靶向O-GlcNAc修饰的抗肿瘤靶点及药物提供理论参考。     

纤连蛋白受体分子中N-糖链对其与纤连蛋白结合的影响

研究纤连蛋白受体（FnR）分子中N-糖链对其与纤连蛋白（Fn）结合的影响。利用纤连蛋白片断亲和层析柱和麦胚凝集素亲和层析柱，从人胎盘组织中纯化得到了FnR，经SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳证实为α和β两个亚基所组成。制备嵌合FnR的脂质体后，用糖甘酶处理以获得合不同糖链结构FnR脂质体，研究FnR分子中糖链在受体与配体结合中的作用。结果：用唾液酸酶处理嵌合FnR的脂质体，与Fn的粘附能力保持不变。嵌合FnR的脂质体单用p-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶处理，或用唾液酶，β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，β-半乳糖苷酶三者联合处理，其与Fn的粘附能力均下降50％。结论：FnR上糖链改变确实能影响FnR与Fn的结合，但FnR糖链上末端的唾液酸可能不影响两者的结合，而FnR糖链上末端或平分型N-乙酸氨基葡萄糖（GlcNAc）在两者结合时可能起重要作用。     

衣霉素逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU耐药性的实验研究

目的:探讨衣霉素对结肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞株(SW620/5-FU)耐药性的逆转作用及机制。方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU;MTT法检测细胞药物敏感性变化;流式细胞术和Lection blot检测N-糖链结构差异;Western blot检测糖蛋白CD147 N-糖基化水平。进一步采用衣霉素作用于SW620/5-FU,观察细胞耐药性状的改变。结果:成功建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU,其细胞表面N-糖链合成增加,高糖基化CD147表达上升;衣霉素可阻断SW620/5-FU细胞中CD147 N-糖链合成,实现其5-FU耐药性的逆转。结论:衣霉素通过抑制N-糖链合成从而逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU的耐药性。     

O-乙酰氨基半乳糖基化氨基酸的化学合成

目的 为获得精确定位糖基化糖肽，合成Ｏ－乙酰氨基半乳糖基化氨基酸，作为糖肽固相合成的原料。方法 利用环状糖结构的半缩醛羟基可与含侧链羟基氨基酸的羟基形成糖苷键，用化学方法，使过乙酰化ＣａＩＮＡｃ与氨基被９－Ｆｌｕｏｒｅｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ（Ｎ－α－Ｆｍｏｃ）保护的丝氨酸或苏氨酸连接。结果 反应产物通过反相制备ＨＰＬＣ纯化后，可作为Ｏ－连接糖肽合成构建单位（Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋ     

肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1的分子结构与调节机制

Pin1是人类肽基脯氨酰顺反异构酶,能特异性地识别结合磷酸化的丝氨酸/苏氨酸-脯氨酸(pSer/Thr-Pro)基序,改变蛋白质的构象,影响其活性和稳定性.目前已发现多种Pin1的底物,包括RNA聚合酶Ⅱ、转录因子、免疫调节物等.Pin1与底物相互作用,在细胞周期调控、神经病理及免疫调节过程中发挥重要的作用.Pin1受转录水平以及翻译后磷酸化和氧化修饰调节,其水平变化或调控紊乱会导致肿瘤、阿尔茨海默病及其他疾病的发生.