蛋白激酶C同工酶PKC-α及PKC-βⅠ在胃癌及其耐药细胞中的表达和功能

目的：探讨蛋白激酶C（PKC）不同的同工酶亚型在胃癌细胞多药耐药中的作用。方法应用免疫组织化学、激光共聚焦显微镜及Western blot,观察传统型PKC（cPKCs)的PKC-α与PKC－βⅠ在胃癌细胞SGC7901及其不同剂长春新碱（VCR0．3,0．7,1．0mg/L)诱导的耐药细胞SGC7901／VCR中的表达与分布;以阿霉素（AMD）为指示剂,通过流式细胞仪检测PKC-αP与PKC－βⅠ的相应抗体对SGC7901／VCR细胞内药物蓄积浓度的影响。结果（1）KC-α在SGC7901呈阳性表达;在SGC7901／VCR呈强阳性,其表达强度随耐药剂量的增加而呈增加趋势。（2）PKC－βⅠ在SGC7901及其不同耐药剂量的耐药细胞SGC7901／VCR中均呈弱阳性有表达,相互之间差异无显著性。（3）以ADM为荧光指示剂,通过流式细胞仪检测显示,SGC7901／VCR细胞内药物浓度比SGC7901明显降低,并且随耐药剂量的增加而呈逐渐减少趋势;SGC7901／VCR细胞内药物浓度比SGC7901明显降低,并且随耐药剂量的增加而呈逐渐减少趋势,SGC7901／VCR与抗PKC-α抗体共同孵育后,其细胞内ADM蓄积增加,而与抗PKC－βⅠ抗体共同孵育后,其细胞内ADM浓度无明显变化。结论胃癌细胞SGC701／VCR的耐药机制可能与PKC-α有关,而与PKC－βⅠ无明显相关性。     

As_2O_3对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素耐药性逆转作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素(ADM)耐药性的逆转作用和对Pgp、GSTπ表达的影响。方法以胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADR为靶细胞,用MTT法检测SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内药物浓度及免疫组织化学法检测细胞Pgp、GSTπ表达。结果0.4～0.8μmol/LAs2O3对耐药细胞SGC7901/ADR无明显毒性(P>0.05)。As2O3可下调Pgp、GSTπ表达,提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓度,增加SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性。结论As2O3能够抑制SGC7901/ADR细胞Pgp、GSTπ表达,增加细胞内ADM药物浓度而部分逆转其对ADM的耐药性。     

环氧合酶-2选择性抑制剂塞莱昔布调节胃癌细胞多药耐药性的实验研究

 目的 观测环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞莱昔布（Celecoxib）对多药耐药细胞株SGC7901／VCR多药耐药（MDR）的逆转及P-糖蛋白（P-gp）的调变作用，探讨COX-2对胃癌细胞MDR调节作用。方法 以长春新碱（VCR）诱导的人胃癌多药耐药细胞SGC7901／VCR为研究对象，应用流式细胞术、MTT法及免疫细胞化学方法研究COX-2抑制剂塞莱昔布对耐药性的逆转作用及对P-gp的调变作用。结果 MTT显示塞莱昔布明显抑制SGC7901、SGC7901／VCR细胞的生长，并呈时间、剂量依赖性。经非细胞毒剂量（2.5 μmol／L）的塞莱昔布作用后，SGC7901／VCR细胞的多药耐药性得到部分逆转，表现为靶细胞对多种化疗药物的敏感性显著增加，逆转倍数为1.09 ~ 6.28；流式细胞仪分析发现，塞莱昔布介导的SGC7901／VCR细胞耐药性的逆转伴有胞内多柔比星浓度的升高；免疫细胞化学研究显示，经塞莱昔布作用后耐药株SGC7901／VCR表达P-gp强度下降。结论 塞莱昔布能有效地抑制肿瘤细胞的生长，且部分逆转SGC7901／VCR细胞的多药耐药性，其可能主要通过影响P-gp的药物泵功能实现。     

二十二碳六烯酸增加人胃癌细胞SGC-7901对多柔比星的敏感性

目的:本研究旨在探讨二十二碳六烯酸[docosahexaenoic acid (DHA),22:6 ω-3]逆转由多柔比星( adriamycin,ADR)引起的胃癌SGC-7901细胞的耐药性.方法:体外常规培养人低分化胃腺癌细胞SGC-7901,分别以DHA、ADR单药和DHA+ADR联合作用于细胞24 h后,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况;倒置光学显微镜下观察细胞的形态;FCM法检测细胞的凋亡率;激光共聚焦显微镜以及高效液相色谱法检测细胞中ADR的蓄积情况;RT-PCR及蛋白质印迹法检测细胞中多药耐药蛋白(multidrug resistanceprotein,MDR) P-糖蛋白p-170的表达情况.结果:DHA与ADR联合作用于胃癌SGC-7901细胞后,DHA能够增加ADR对细胞的生长抑制作用;细胞形态观察发现死细胞明显增多;细胞凋亡率显著增加;细胞中的ADR蓄积量约增加2.1倍;细胞中p-170 mRNA以及蛋白表达降低(P均＜0.05).结论:DHA能够增加胃癌细胞SGC-7901对ADR的敏感性,放大ADR的肿瘤杀伤作用.     

CD20抗原及治疗性抗CD20抗体

目的: 研制阿霉素脂质体(AL)、阿霉素长循环脂质体(ALCL)和阿霉素长循环热敏脂质体(ALTSL).研究不同类型脂质体对H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用.方法: 建立荷瘤小鼠模型,观察各实验组的抑瘤效果,计算抑瘤率和生命延长率; HPLC法研究静脉给药后各实验组阿霉素的药代动力学规律及组织学分布特征;制作病理切片,观察各实验组肿瘤和心脏等组织的病理变化.结果: ALCL和ALTSL对H22荷瘤小鼠肿瘤有显著的抑制作用,抑瘤率分别为57.8%和67.0% (P<0.01);尾静脉注射给药24 h后,ALCL和ALTSL组荷瘤小鼠肿瘤组织和血液中的阿霉素含量明显上升,而在心、肺中的含量显著降低;ALTSL使肿瘤细胞大量坏死,而对心肌细胞无明显损伤.结论: ALCL和ALTSL均能提高化疗药阿霉素的抗肿瘤效果,降低阿霉素的心肺毒性,延长荷瘤小鼠的存活时间.     

槲皮素对人乳腺癌裸鼠移植瘤细胞周期的影响

目的　研究槲皮素对人乳腺癌细胞株MCF 7裸鼠移植瘤细胞周期的影响。方法　 2 4只MCF 7细胞株移植成功的裸鼠分为对照组、槲皮素组、阿霉素组及联合用药组 ,每组 6只。用流式细胞仪分析细胞周期分布 ,用免疫组化测定cyclinD1表达水平。结果　G0 /G1期占细胞周期比例对照组明显低于槲皮素组 ,阿霉素组及联合用药组 (P <0 .0 1) ,S期占细胞周期比例对照组明显高于槲皮素组 ,阿霉素组及联合用药组 (P <0 .0 1) ,cyclinD1表达水平对照组明显高于槲皮素组、阿霉素组及联合用药组 (P <0 .0 1)。结论　槲皮素可作用于MCF 7移植瘤的G1/S节点 ,可抑制移植瘤细胞增殖及cyclinD1表达 ,延缓肿瘤生长。     

低频超声对阿霉素杀伤人白血病多药耐药细胞K562/A02作用的影响

背景与目的:有研究表明,超声可增加化疗药物对肿瘤细胞的敏感性.从而抑制细胞增殖.本研究中我们观测不同剂量的低频超声波联合阿霉素(adriamycin,A02)对人白血病耐药细胞株K562/A02的生物学影响,并探讨可能的机制.方法:将对数生长期的K562/A02细胞分为空白对照组、单纯阿霉素组、单纯超声组、阿霉素加超声组.24孔培养板上进行超声照射,台盼蓝拒染法、MTT法检测细胞活性,应用瑞姬氏染色法和流式细胞仪榆测细胞凋亡和药物浓度,免疫细胞化学检测细胞膜P-糖蛋白的表达变化.结果:频率20 kHz、声强0.25 W/cm2、辐射时间60 s的超声辐射联合7.5 ug/mL阿霉素可诱导细胞凋亡,当超声频率20 kHz,声强0.5 W/cm2时,对细胞有急性杀伤作用.与单纯阿霉素组相比较.超声辐射增加了细胞内阿霉素的药物浓度,促进细胞凋亡的发生;但超声辐射没有影响细胞膜P-糖蛋白变化.结论:频率20 kHz、声强0.25 W/cm2、辐射时间60 s的超声可以增强阿霉素对耐约细胞K562/A02的杀伤作用.     

miR-103与胃癌多药耐药作用机制探讨

目的 既往研究肿瘤耐药均集中在DNA水平,而DNA又影响mRNA及蛋白质表达.但是mRNA与编码蛋白质的表达并不成比例,而非编码RNA恰好能解释两者之间的不平衡.非编码RNA即微小RNA(microRNA,miRNA),是一类内源性短链非编码小分子核糖核苷酸,长度约18~25个核糖核苷酸,是转录后基因表达调节的关键分子,参与胃癌的发生发展.本研究旨在探讨miR-103在胃癌多药耐药中作用及其分子机制.方法 miRNA芯片筛选SGC7901/ADR及SGC7901细胞差异表达miRNA,应用qRT-PCR验证miR-103表达;将miR-103的拟似物及抑制物分别转染SGC7901/ADR及SGC7901细胞,MTT法检测转染前后对多柔比星敏感性变化;蛋白质印迹法检测miR-103对caveolin-1表达的影响.结果 miR-103在SGC7901/ADR细胞中表达(0.32±0.04)显著低于SGC7901细胞.miR-103拟似物转染SGC7901/ADR细胞后对多柔比星的敏感性较对照组显著提高,IC50由(18.83±0.32) μg/mL下降到(4.54±0.29) μg/mL,t=1.04,P<0.05;而miR-103抑制物转染SGC7901细胞后对多柔比星的敏感性显著降低,IC50由(1.65±0.03) μg/mL上升到(15.27±0.26) μg/mL,t=1.25,P<0.05.miR-103靶向作用于caveolin-1的3'-UTR,并在转录后水平负向调控caveolin-1表达.结论 miR-103通过靶向负调控caveolin-1表达,增加SGC7901/ADR细胞对多柔比星敏感性,从而逆转胃癌多药耐药.     

胃癌多药耐药逆转短肽GMBP42的活性鉴定

目的：鉴定短肽GMBP42与胃癌多药耐药细胞（SGC7901/VCR和SGC7901/ADR）的结合特异性及其多药耐药逆转活性。方法：体外培养胃癌亲本细胞SGC7901及多药耐药细胞（SGC7901/VCR和SGC7901/ADR）。免疫细胞化学染色技术鉴定短肽GMBP42与多药耐药细胞的结合特异性。体外药物敏感实验测定短肽GMBP42对多药耐药细胞化疗药物敏感性的影响。结果：免疫细胞化学染色结果显示：短肽GMBP42能够与胃癌多药耐药细胞（SGC7901/VCR和SGC7901/ADR）结合,亚细胞定位于核周胞浆及胞膜,而与亲本细胞无明显结合。体外药物敏感试验结果显示：与对照组相比,短肽GMBP42处理组胃癌多药耐药细胞（SGC7901/VCR和SGC7901/ADR）对化疗药物的IC50值及细胞存活率均降低（P〈0.05）。结论：短肽GMBP42能特异结合于多种胃癌多药耐药细胞,短肽GMBP42可提高胃癌多药耐药细胞对阿霉素的敏感性,部分逆转多药耐药细胞对阿霉素的耐药表型。     

胃癌耐药细胞EXOs的提取鉴定及可能存在的耐药信息传递作用的初步探讨

目的:探讨胃癌耐药细胞（SGC7901/Adr）分泌的外泌体（exosomes,EXOs）在细胞间可能存在的耐药信息传递作用。方法:选用胃癌亲本细胞SGC7901及其阿霉素耐药细胞SGC7901/Adr为模型,用PEG方法提取EXOs;透射电子显微镜观察鉴定细胞EXOs形态;Western Blot检测CD9、CD63、TSG101、Calreticulin以及P-糖蛋白（P-gp）的表达;运用激光共聚焦显微镜观察胃癌SGC7901和SGC7901/Adr细胞及加入阿霉素耐药细胞SGC7901/Adr外泌体处理后的敏感细胞内阿霉素药物浓度变化。结果:透射电子显微镜下观察到,胃癌SGC7901和SGC7901/Adr细胞来源的EXOs为直径在30~100 nm之间的囊性小泡,呈圆形或椭圆形,大小均匀一致。Western Blot检测胃癌SGC7901和SGC7901/Adr细胞来源的EXOs,携带有外泌体生物标记分子CD9（四次跨膜分子）、CD63（四次跨膜分子）以及TSG101表达,Calreticulin为阴性表达。进一步检测发现在SGC7901/Adr细胞来源的EXOs中存在P-gp蛋白表达。经过阿霉素耐药细胞SGC7901/Adr外泌体处理后的敏感细胞,胞内可见阿霉素聚集减少,核区分布减少,荧光强度减弱。结论:胃癌耐药细胞分泌的EXOs可能通过传递P-gp蛋白的形式,具有传递耐药信息的作用。     

生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的　观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC 790 1中的表达及转染不同浓度的生存素反义寡核苷酸(ASODN )对胃癌细胞SGC- 790 1生长的影响。方法　采用细胞免疫组织化学染色观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1中的表达。将胃癌细胞株SGC 790 1分为8个组:空白对照组,脂质体转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L无义链转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L反义链转染组,转染48h后,采用四氮唑盐(MTT )比色法,测定各组的细胞生长抑制率,并采用流式细胞仪检测60 0nmol/L无义链转染组、60 0nmol/L反义链转染组细胞的凋亡率以及生存素蛋白表达。结果　显示生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1的胞核和胞质中均有表达,但以胞核为主;各组生存素ASODN对胃癌细胞株SGC- 790 1有明显的抑制作用(P <0 .0 1) ,抑制作用呈浓度依赖性,60 0nmol/L反义链转染组抑制率为最高,达40 .0 % ,流式细胞仪检测表明生存素ASODN有明显的诱导细胞凋亡的作用,定量检测结果显示生存素ASODN可以下调生存素蛋白至8.8% (P <0 .0 1)。结论　不同浓度的生存素ASODN均能通过下调生存素蛋白表达来抑制胃癌细胞株SGC- 790 1的生长。     

抑制核转录因子活化逆转胃癌细胞株耐药性研究

目的　探讨核转录因子（ＮＦ-κＢ）的活化在胃癌细胞株耐药性机制中的作用。方法　用阿霉素（ＡＤＭ）诱导培养胃癌细胞耐药亚株ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ,ＭＴＴ法检测ＡＤＭ对胃癌细胞株的细胞毒作用,流式细胞仪检测胃癌细胞株凋亡率的变化,免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞株ＮＦ κＢ的活化情况。吡咯烷二硫代氨基甲酸脂（ＰＴＤＣ）抑制ＮＦ-κＢ活化,并检测ＡＤＭ对胃癌细胞株的细胞毒作用。结果　ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ的ＩＣ_５０为２.６３μｇ／ｍｌ,ＳＧＣ７９０１的ＩＣ_５０为０.２９μｇ／ｍｌ,ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ相对耐药度较亲本细胞提高了８.９倍。４８ｈ内ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞株发生的凋亡率随ＡＤＭ浓度增加而升高,随着作用时间延长而升高;１０μｇ／ｍｌＡＤＭ分别作用４８ｈ时ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞株发生的凋亡率为（４８.５３±１.０２）％和（１７.５３±１.０２）％。免疫细胞化学染色显示ＡＤＭ作用ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞９ｈ后可检测到ＮＦ-κＢ核移位,最高达到６５％;ＡＤＭ作用ＳＧＣ７９０１胃癌细胞株１８ｈ后可检测到少量ＮＦ-κＢ核移位;所有的细胞株ＮＦ-κＢ核移位均于２４ｈ后减弱;ＰＴＤＣ抑制核转录因子活化后ＡＤＭ细胞毒效应增强（Ｐ＜０.０５）。结论　ＮＦ-κＢ活化所导致的胃癌细胞株凋亡率下降在胃癌细胞株耐药性机制中发挥一定作用,抑制ＮＦ-κＢ活化后可以逆转胃癌细胞株对ＡＤＭ耐药性。     

锌带基因ZNRD1在胃癌耐药细胞中的表达和功能

目的 探讨锌带基因ZNRD1在多药耐药胃癌细胞中的表达和作用。方法 应用Northern blot和半定量RT—PCR,观察锌带基因ZNRD1在胃癌细胞SGC7901及其长春新碱(VCR)诱导的耐药细胞SGC7901／VCR中的表达;将反义核酸转染SGC7901／VCR细胞,通过免疫组化检测转导细胞与非转导细胞ZNRD1蛋白的表达;以流式细胞仪检测细胞周期的变化,以MTT实验检测细胞生长曲线和对VCR、阿霉素(ADM)的药敏性。结果 胃癌耐药细胞SGC7901／VCR与非耐药细胞相比,ZNBDl基因的表达明显增高。转导株antiZNRDl—SGC7901／VCR细胞的ZNRD1蛋白水平明显低于非转导株,C1期细胞比例增加而S期比例减少,生长受到抑制,且对VCR、ADM的敏感性明显增高。结论 胃癌耐药细胞与非耐药细胞相比,ZNRDl基因处于高表达状态。反义核酸转染可有效阻断ZNRDl蛋白的表达,在一定程度上逆转人胃癌耐药细胞SGC7901／VCR的多药耐药性。     

Overexpression of ZNRD1 promotes multidrug-resistant phenotype of gastric cancer cells through upregulation of P-glycoprotein

ZNRD1, a new zinc ribbon gene, has been previously identified as an upregulated gene in a multidrug-resistant gastric cancer cell line SGC7901/VCR comparing to its parental cell SGC7901 by subtractive hybridization and RT-PCR. The antisense nucleic acid for ZNRD1 could enhance adriamycin accumulation in SGC7901/VCR cells and sensitize SGC7901/VCR cells to vincristine. The present study aims to explore the role of ZNRD1 in multidrug resistance in gastric cancer cells. Upregulation of ZNRD1 protein in SGC7901/VCR cells was confirmed by Western blot and immunocytochmical staining. ZNRD1 was genetically overexpressed in SGC7901 cells by gene transfection. It was found that overexpression of ZNRD1 could sensitize SGC7901 cells to P-glycoprotein (P-gp)-related anticancer drugs (vincristine, adriamycin, etoposide) but not to P-gp-nonrelated drugs (5-fluorouracil and cisplatin), which was accompanied with significantly decreased adriamycin accumulation and retention and increased adriamycin releasing in SGC7901 cells. Verapamil, an inhibitor for P-gp, could reverse the effects of ZNRD1 on drug sensitivity and drug accumulation in SGC7901 cells to a great extent. Western blot and Northern blot revealed that overexpression of ZNRD1 could upregulate P-gp at both protein and mRNA levels. Together, these results suggest that overexpression of ZNRD1 could promote multidrug-resistant phenotype of gastric cancer cells through upregulation of P-gp.     

Chinese herbs of Shenghe Powder reverse multidrug resistance of gastric carcinoma SGC-7901

The objective of this study was to investigate the reversal effect of Chinese herbs of Shenghe Powder on the multidrug resistance of the human SGC-7901 gastric carcinoma cell line and vincristine-resistant cell line (SGC-7901/vincristine) and the possible mechanism. SGC-7901 and SGC-7901/ vincristine were cultured in liquid medium RMPI 1640, with the addition of vincristine to the vincristine-resistant line. The reversal effect of Shenghe Powder (using verapamil as control) on the multidrug resistance of SGC-7901/vincristine cells was observed using the 3-4,5-dimethylthiazol-2yl) -2,5-diphenylterazolium bromide method. The expression rate of P-glycoprotein (P-gp), lymphoma/leukemia-2 (Bcl-2), and apoptosis ratio of SGC-7901 and SGC-7901/vincristine with added Shenghe Powder, verapamil, or verapamil plus Shenghe Powder was observed by flow cytometry. Shenghe Powder and verapamil decreased the multidrug resistance of SGC-7901/vincristine. The effect of Shenghe Powder (10 mg/L) was significantly higher than verapamil (P< .05). The intracellular concentration of vincristine was increased by Shenghe Powder and verapamil. The vincristine concentration of SGC-7901/vincristine treated with Shenghe Powder was significantly higher (P< .05). Shenghe Powder reduced the expression level of P-gp and Bcl-2 in SGC-7901/ vincristine and increased the apoptotic percentage of tumor cells; Shenghe Powder had the more significant effect on apoptosis (P< .05). In conclusion, Shenghe Powder increases the intracellular concentration of vincristine, consistent with the down-regulation of the expression of P-gp and Bcl-2. The reversal effect of Shenghe Powder was stronger than that of verapamil.     

赫赛汀对鼻咽癌荷瘤裸鼠肿瘤生长影响的实验研究

目的：探讨赫赛汀（Herceptin）对HER-2/neu基因蛋白高表达的鼻咽癌荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响.方法：用鼻咽癌CNE-2Z细胞株接种于裸小鼠右腋下建立HER-2/neu基因蛋白高表达的裸鼠移植瘤模型.将已构建模型的裸鼠24只随机分为4组,每组6只,分别设阴性和阳性对照两组,Herceptin 10mg/kg和20mg/kg两实验组,以观察Herceptin对移植瘤体内生长的影响.结果：用Herceptin处理后的裸鼠移植瘤肿瘤体积均低于阴性对照组,其中10mg/kg剂量组与阴性对照组相比有统计学差异（P〈0.05）,但无量效关系;瘤重抑制率Herceptin 10mg/kg和20mg/kg分别为33.7%和23.3%,均未达到阳性标准;对裸小鼠生长无明显影响.结论：Herceptin对HER-2/neu基因过表达的鼻咽癌细胞株移植的荷瘤裸鼠肿瘤体内的生长具有一定的抑制作用,但效果并不满意.     

胃癌耐药细胞特异性结合小肽对多药耐药的影响

目的 研究环九肽（SY1）与胃癌耐药细胞（SGC7901／VCR）的结合特性及其对胃癌耐药性的逆转作用。方法 将细胞分为SGC7901和SGC7901／VCR2组培养。以无关噬菌体、阴性噬菌体为对照组,用免疫荧光技术检测含有SY1的阳性噬菌体与SGC7901／VCR的结合特性;通过体外药敏试验（MTT）分析含有SY1的阳性噬菌体和化学合成的SY1对SGC7901／VCR耐药性的改变;应用流式细胞仪检测在SY1作用下SGC7901／VCR细胞内阿霉素（ADM）的蓄积和储留。结果 （1）免疫荧光分析的结果显示,含有SY1的阳性噬菌体能够结合于SGC7901／VCR的膜表面,而不与亲本细胞SGC7901结合,无关噬菌体和阴性噬菌体均不与SGC7901／VCR结合,表明SY1可与SGC7901／VCR特异性结合。（2）MTT试验结果显示,在含有SY1的阳性噬菌体及化学合成的SY1的作用下,SGC7901／VCR的存活率显著降低（P〈0．05）,其对长春新碱的耐药性降低。（3）在化学合成的SY1作用下,SGC7901／VCR细胞内ADM的储留蓄积高于对照组（P〈0．05）。结论 利用环七肽库差减筛选得到的环九肽SY1不仅能与SGC7901／VCR特异性结合,而且可部分逆转其对长春新碱的耐药性。这可能为胃癌多药耐药的逆转提供新思路。     

MGr1-Ag is associated with multidrug-resistant phenotype of gastric cancer cells

BACKGROUND: MGr1-antigen (Ag) was previously reported as an upregulated protein in multidrug-resistant (MDR) gastric cancer cells. The aim of this study was to characterize the role of MGr1-Ag in the multidrug resistance of gastric cancer cells. METHODS: Laser scanning confocal microscopy (LSCM), two-dimensional electrophoresis, and Western blot were used to detect MGr1-Ag in gastric cancer cells. The 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay was used to determine the sensitivity of the MDR gastric cancer cells, SGC7901/VCR, to chemotherapeutic drugs. Adriamycin accumulation and retention in SGC7901/VCR cells were analyzed using flow cytometry. RESULTS: LSCM showed that MGr1-Ag localized mainly on the membrane and partly in the cytoplasm of SGC7901/VCR cells. Western blot showed that the expression level of MGr1-Ag in SGC7901/VCR cells was higher than that in its parental cells, SGC7901, and that the apparent molecular weight and isoelectric point of MGr1-Ag were 42 kDa and pH 4.8, respectively. After incubation with MGr1 antibody, SGC7901/VCR cells showed significantly decreased IC(50) values for adriamycin (from 0.887 +/- 0.081 mg/l to 0.607 +/- 0.084 mg/l; P, 0.05), vincristine (from 0.707 +/- 0.055 mg/l to 0.557 +/- 0.042 mg/l; P, 0.05), and 5-fluorouracil (from 4.367 +/- 0.407 mg/l to 2.630 +/- 0.644 mg/l; P, 0.05), as well as slightly increased IC(50) values for mitomycin (from 0.183 +/- 0.045 mg/l to 0.198 +/- 0.048 mg/l; P. 0.05). In addition, incubation with MGr1 significantly enhanced adriamycin accumulation and retention in SGC7901/VCR cells. CONCLUSION: Overexpression of MGr1-Ag is associated with the MDR phenotype of gastric cancer cells.