肺癌患者三种微转移标志物临床意义的比较研究

目的评价肺癌患者外周血LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA诊断微转移的特异性、敏感性,探索肺癌患者微转移的早期诊断.方法以肺部良性疾病30例、健康人10例的外周血为对照,以LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA的表达为指标,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测48例肺癌患者外周血、手术切除区域44个淋巴结的微转移,并根据淋巴结病理切片、临床分期、随访过程中复发转移率评价微转移的临床意义.结果①LUNX mRNA、CK19 mRNA、CEA mRNA在肺癌组织的表达率均为100%(35/35).②48例肺癌患者外周血中LUNX mRNA阳性30例(62.5%),CK19 mRNA阳性24例(50.0%),CEA mRNA阳性32例(66.7%);44枚肺癌患者手术切除的区域淋巴结,LUNX mRNA阳性16枚(36.4%),CK19 mRNA阳性12枚(27.3%),CEA mRNA阳性18枚(40.9%).③30例肺部良性疾病患者外周血中,CK19 mRNA表达阳性2例(6.7%),LUNX mRNA或CEA mRNA表达均阴性;10例健康人外周血和11枚取自肺良性疾病患者的淋巴结,3个指标检测结果均为阴性.④44枚肺癌区域淋巴结中,普通病理组织学检出6枚(13.6%)有癌转移,阳性率明显低于RT-PCR检测结果(P<0.05).⑤3种微转移指标的阳性率均随TNM分期的增加而升高(P=0.01).⑥随访发现外周血微转移阳性患者的复发率高于阴性患者.结论 LUNX mRNA、CK19 mRNA 、CEA mRNA有可能成为监测肺癌微转移的分子标志.     

NSCLC外周血、区域淋巴结微转移检测对术前分期的临床价值

目的:探讨检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者术前区域淋巴结及外周血Lunx mRNA表达对肺癌术前分期的临床价值.方法:采用荧光定量RT-PCR技术,检测43例初治NSCLC患者、20例肺部良性病变患者的外周血和术前经TBNA所获得的区域淋巴结,及10例健康人外周血的Lunx mRNA表达.结果:NSCLC患者外周血Lunx mRNA表达阳性率为51.16%(22/43);术前获得的64枚区域淋巴结Lunx mRNA阳性率为93.75% (60/64),与病理阳性率70.31%(45/64)比较有显著差异;区域淋巴结Lunx的检出率要比常规病理和外周血Lunx的检出率高(P＜0.01).肺癌患者外周血微转移与细胞分化程度、术前临床分期均存在密切关系(P＜0.05).而对照组的所有标本只有1枚淋巴结检出Lunx mRNA.结论:检测外周血和术前区域淋巴结Lunx mRNA表达可作为诊断早期NSCLC患者微转移的参考指标,有助于完善病理C-TNM分期并指导临床综合治疗.     

肺癌患者外周血和骨髓中MUC1 mRNA表达的临床意义

目的:检测非小细胞肺癌(non smal celllungcancer,NSCLC)外周血和骨髓中粘蛋 白1(mucin1,MUC1)mRNA的表达。方法:应用 RT PCR技术,对31例肺癌患者、10例肺良性病 变患者和8名健康人外周血及骨髓中MUC1基 因mRNA表达进行检测。结果:31例肺癌患者 中10例检测到外周血,7例检测到骨髓中有 MUC1mRNA表达,10例肺良性病变患者和8名 健康人中未检测到MUC1mRNA表达。肺癌患 者外周血及骨髓中MUC1mRNA表达分别为 32.3%(10/31)和22.6%(7/31),两者之间存在 正相关关系,P<0.05;外周血和骨髓中MUC1 mRNA的表达与肺癌组织学类型、细胞分化程度 及pTNM分期均密切相关,P<0.05。结论:肺癌 患者外周血和骨髓中存在常规方法检测不出的 肿瘤细胞;应用巢式RT PCR法可检测到肺癌患 者外周血和骨髓中MUC1mRNA表达,可为制 定治疗方案和评估预后提供重要参考依据。     

NSCLC外周血、区域淋巴结微转移检测对术前分期的临床价值

目的：探讨检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者术前区域淋巴结及外周血LunxmRNA表达对肺癌术前分期的临床价值。方法：采用荧光定量RT—PCR技术,检测43例初治NSCLC患者、20例肺部良性病变患者的外周血和术前经TBNA所获得的区域淋巴结,及10例健康人外周血的LunxmRNA表达。结果：NSCLC患者外周血LunxmRNA表达阳性率为51．16％（22／43）;术前获得的64枚区域淋巴结LunxmRNA阳性率为93．75％（60／64）,与病理阳性率70．31％（45／64）比较有显著差异;区域淋巴结Lunx的检出率要比常规病理和外周血Lunx的检出率高（P〈0．01）。肺癌患者外周血微转移与细胞分化程度、术前临床分期均存在密切关系（P〈0．05）。而对照组的所有标本只有1枚淋巴结检出LunxmRNA。结论：检测外周血和术前区域淋巴结LunxmRNA表达可作为诊断早期NSCLC患者微转移的参考指标,有助于完善病理C-TNM分期并指导临床综合治疗。     

检测LUNX mRNA表达诊断非小细胞肺癌微转移的可行性及其临床意义

背景与目的 微转移的检测对非小细胞肺癌的个体化治疗和指示预后具有重要意义。LUNX为近年新发现的人类肺组织特异性基因。本研究的目的是检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者LUNX mRNA的表达情况，探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性。方法 选择初治的NSCLC患者62例，以肺部良性疾病10例与健康人10例作为对照组，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT—PCR）和普通RT—PCR技术，检测肺癌、良性病变肺组织、骨髓和外周血LUNX mRNA的表达。结果肺癌和良性病变肺组织中LUNX mRNA阳性表达率均为100％。肺良性病变组骨髓及外周血标本和健康对照组外周血标本中LUNX mRNA表达皆为阴性。62例NSCLC患者骨髓LUNX mRNA阳性表达率为38．7％（24／62），外周血LUNX mRNA阳性表达率为29．0％（18／62），至少一项阳性表达者占45．2％（28／62）；骨髓LUNX mRNA阳性表达率随分期升高且有统计学意义（P=0．02），与病理类型、肿瘤分化程度无明显关系；外周血LUNX mRNA表达与病理分期、病理类型、肿瘤分化程度均无明显关系。NSCLC患者骨髓和外周血LUNX mRNA表达有相关性（P〈0．001）。结论 LUNX mRNA可作为检测NSCLC患者微转移的特异、敏感的分子标志物，可能有助于早期诊断肺癌转移，从而指导临床分期和治疗。     

RT-PCR法检测非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA的临床意义

目的:检测非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA的表达情况,探讨其表达的临床意义.方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)方法,分别检测非小细胞肺癌患者和对照组患者外周血中CK19 mRNA的表达.结果:43例非小细胞肺癌患者外周血中CK19 mRNA表达阳性率为56%,对照组阳性率为5%,两组外周血CK19 mRNA阳性率比较有显著性差异(P＜0.01);外周血CK19 mRNA阳性率与病理类型无相关性;淋巴结转移阳性和阴性患者的外周血中CK19 mRNA阳性率分别为66%(21/32)和18%(2/11),二者差异显著(x2=6.65,P＜0.05).随TNM分期上升,CK19mRNA阳性率增加(x2=18.03,P＜0.01).结论:CK19 mRNA可作为RT-PCR法检测非小细胞肺癌患者外周血微转移的分子标志物,该方法敏感性高,有助于早期诊断肺癌血行转移,指导临床分期和治疗.     

CK19mRNA,MUC1mRNA,LUNX mRNA在非小细胞肺癌微转移中的表达及临床意义

目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)和非肿瘤患者骨髓和外周血中肿瘤特异性标志物细胞角蛋白19(CK19)、黏蛋白1(MUC1)和肺特异性蛋白X(LUMX) mRNA表达情况,探讨微转移与肿瘤的病理类型、分期的关系.方法:选取肺癌患者30例,健康对照组15例,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测CK19、MUC1和LUNX三项标志物.结果:患者骨髓和外周血中CK19 mRNA阳性率分别为36.7%和30%,其表达状况与患者的肿瘤病理类型、吸烟史无明显关系,而与肿瘤的病理分期关系密切;MUC1 mRNA 阳性率分别为6.7% 、6.7%,其表达与肿瘤的分期、病理类型、患者的吸烟史均无显著关系,与骨髓及外周血中微转移的关系尚待确定;LUNX mRNA阳性率分别为16.7%和13.3%,可以作为指示NSCLC微转移的敏感特异的指标.结论:三种检测标志物中CK19 mRNA对微转移的诊断敏感性较高,但存在假阳性的可能;LUNX mRNA作为一个新的检测指标对微转移的诊断有一定的作用,但特异性和敏感性不高;MUC1 mRNA与骨髓及外周血中微转移的关系尚待确定.     

非小细胞肺癌患者外周血CEA mRNA表达及临床意义

 目的：检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血CEA表达情况,探讨其作为分子标志物检测 NSCLC微转移的可行性。方法：应用RT-PCR技术检测48例NSCLC患者,15例肺良性疾病(BLD)患者 和10例健康人外周血CEA mRNA的表达。结果：NSCLC患者CEA mRNA的阳性表达率明显高于BLD患 者和健康对照组(P<0.01)。Ⅰ~Ⅳ期NSCLC患者外周血中CEA mRNA阳性表达率分别为27.8%、 83.3%、61.5%和100%。NSCLC患者外周血CEA阳性表达与临床分期及淋巴结转移密切相关 (P<0.05),而与病理类型及分化程度无关(P>0.05)。结论：检测外周血CEA mRNA表达可作为诊 断NSCLC患者微转移的一个有价值的参考指标。     

非小细胞肺癌患者外周血CD44V6 mRNA表达与微转移的相关性研究

目的 探讨CD44V6 mRNA表达与非小细胞肺癌(NSCLC)外周血微转移的关系及临床意义,及其与CK19 mRNA在外周血中联合检测的临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测56例NSCLC癌组织中CD44V6 mRNA的表达情况,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测外周血中CD44V6 mRNA与CK19 mRNA的表达情况.采集20例肺部良性病变患者正常肺组织和外周血作对照.结果 CD44V6 mRNA在NSCLC癌组织中表达明显高于良性病变正常肺组织(P<0.001),其阳性表达率在各病理分期间、有无淋巴结转移组间的差异具有统计学意义(P<0.05),而在各病理类型间差异无统计学意义(P>0.05).NSCLC患者外周血中CD44V6 mRNA阳性表达率高于对照组(P<0.05),其阳性表达率在各病理分期间、有无淋巴结转移间的差异具有统计学意义(P<0.05).CD44V6 mRNA在NSCLC组织中表达与外周血中表达呈正相关,NSCLC外周血中CD44V6 mRNA与CK19 mRNA表达呈正相关;CD44V6 mRNA与CK19 mRNA联合检测灵敏度为75.0%,优于单基因检测(P<0.05).结论 NSCLC外周血中CD44V6 mRNA的高表达与其侵袭转移有关,CD44V6 mRNA可作为检测NSCLC外周血微转移的分子肿瘤标志物,并有望成为判定NSCLC预后的分子标志物;CD44V6 mRNA与CK19 mRNA联合检测可提高NSCLC血行微转移诊断的敏感度.     

非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA检测临床意义的探讨

目的:应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测肺癌外周血中的表达情况,并探讨其表达的临床意义。方法:用RT-PCR法检测98例肺癌患者外周血CK19 mRNA表达。结果:NSCLC组患者外周血CK19 mRNA的阳性率为77.55%(76/98),显著高于良性病变组的3.57%(1/28)和健康对照组的0,χ2=73.68,P<0.05;Ⅱ期〔87.50%(35/40)〕和Ⅲ期〔88.89%(24/27)〕NSCLC患者的阳性率显著高于Ⅰ期〔54.84%(17/31)〕患者的阳性率,χ2=13.453,P<0.05;淋巴结转移阳性和阴性患者的外周血中CK19 mRNA阳性率分别为89.55%(60/67)和51.61%(16/31),差异有统计学意义,χ2=17.523,P<0.05;而不同病理类型NSCLC患者外周血CK19mRNA阳性率之间差异无统计学意义,χ2=0.414,P>0.05。结论:肺癌患者外周血中CK19 mRNA表达较高可能与肺癌转移有关,检测CK19 mRNA对于早期判断患者转移和复发有一定的临床意义。     

检测CK19 mRNA、CEA mRNA诊断非小细胞肺癌外周血微转移

目的 探讨检测细胞角蛋白(cytokeratin 19，CK19)mRNA、癌胚抗原(cancer embryonic antigen，CEA)mRNA诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者外周血微转移的临床意义。方法 应用RT-PCR法检测35例NSCLC患者外周血中的CK19mRNA、CEAmRNA，并以20例良性病变、20例健康人作对照。结果 35例NSCLC患者外周血CK19mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为40％和57％，两者均阳性者40％，两者均阴性者43％；肺良性疾病患者20例，CK19mRNA阳性2例(10％)，无CEAmRNA阳性者；20例健康对照2个指标检测结果均为阴性。随访发现CK-19mRNA阳性、CEAmRNA阳性和二者均阴性患者的远处转移率分别为50％、56％和27％。结论CEAmRNA和CK19mRNA是检测肺癌患者外周血微转移的良好标志物，检测外周血微转移有助于预测肺癌患者预后。     

Real-time RT-PCR detection of CK19, CK7 and MUC1 mRNA for diagnosis of lymph node micrometastases in non small cell lung carcinoma

Metastatic lymph nodes (LNs) are the major prognostic factor in resected non small cell lung carcinoma (NSCLC). However, almost 50% of pN0 patients relapse, suggesting metastatic cells undetected by current staging procedures. A combination of markers [cytokeratins 19 and 7 (CK19, CK7) and mucin type 1 (MUC1) mRNAs] was therefore evaluated by real-time RT-PCR in order to detect occult cancer cells. Forty-three NSCLC tumor samples, 4 micrometastatic, 6 metastatic and 84 histologically negative mediastinal LNs from 19 patients with NSCLC were evaluated as well as blood mononuclear cells from 29 healthy volunteers and 17 benign LNs. When tested on cell lines, RT-PCR was particularly efficient for evaluation of CK19, CK7 and MUC1 mRNA expression. All tumor samples were positive for at least 1 marker and 74% of samples were positive for all 3 markers. CK7 and CK19 mRNA were not detected in benign LN and blood cells from healthy donors in contrast with MUC1 mRNA. Only CK7 and CK19 mRNA were therefore used for evaluation of mediastinal LNs: the 6 histologically metastatic and the 4 micrometastatic LNs were positive for at least one marker. Among the 84 histologically negative LNs, 6 (7%) were positive for at least one marker, potentially changing the stage of 2 out of 19 patients. In conclusion, in our feasibility study, parallel molecular detection of CK19 and CK7 mRNA can be considered a specific diagnostic tool for the assessment of microscopic lymphatic spread. Its prognostic impact remains to be evaluated in a prospective study.     

纳米免疫磁珠富集和检测非小细胞肺癌患者循环肿瘤细胞的临床意义

目的探讨利用自主研发的肺癌细胞富集检测试剂盒检测非小细胞肺癌(NSCLc)患者循环肿瘤细胞(CTCs)的可行性及临床价值。方法采用肺癌细胞富集检测试剂盒检测4组标本(A组:Ⅰ期NSCLC组,18例;B组:Ⅱ～Ⅳ期NSCLC组,33例;C组:肺部良性病变组,20例;D组:健康志愿者组,20例)外周血中的肿瘤细胞;同时,采用单纯免疫细胞化学(ICC)法及巢式荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞角蛋白19(CK19 mRNA)、肺特异性X蛋白(LUNX mRNA)的表达作对照。结果采用肺癌细胞富集检测试剂盒检测,A、B、C、D组患者的CK阳性细胞检出率分别为33.3%、60.6%、0%和0%。采用巢式RT-PCR方法检测,A、B、C、D组患者CK19 mRNA表达的阳性率分别为38.9%、63.6%、20.0%和0%,A、B、C、D组患者LUNX mRNA表达的阳性率分别为44.4%、69.7%、10.0%和0%。采用单纯ICC法检测,4组患者的CTCs检出率均为0%。肺癌细胞富集检测试剂盒与单纯ICC法检测比较,差异有统计学意义(P<0.05);肺癌细胞富集检测试剂盒与巢式RT-PCR方法检测比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组与B、C、D组患者CK阳性细胞的检出率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);阳性率与病理类型、细胞分化程度和临床分期有密切关系(P<0.05)。结论开发的肺癌细胞富集检测试剂盒是检测早期NSCLC患者CTCs的敏感方法,有助于发现隐形微转移、重新确定临床分期及指导患者术后的个体化治疗。     

CK19 mRNA,MUC1 mRNA,LUNX mRNA在非小细胞肺癌微转移中的表达及临床意义

目的：检测非小细胞肺癌（NSCLC）和非肿瘤患者骨髓和外周血中肿瘤特异性标志物细胞角蛋白19（CK19）、黏蛋白1（MUC1）和肺特异性蛋白X（LUMX）mRNA表达情况,探讨微转移与肿瘤的病理类型、分期的关系。方法：选取肺癌患者30例,健康对照组15例,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测CK19、MUC1和LUNX三项标志物。结果：患者骨髓和外周血中CK19 mRNA阳性率分别为36.7%和30%,其表达状况与患者的肿瘤病理类型、吸烟史无明显关系,而与肿瘤的病理分期关系密切;MUC1 mRNA阳性率分别为6.7%、6.7%,其表达与肿瘤的分期、病理类型、患者的吸烟史均无显著关系,与骨髓及外周血中微转移的关系尚待确定;LUNX mRNA阳性率分别为16.7%和13.3%,可以作为指示NSCLC微转移的敏感特异的指标。结论：三种检测标志物中CK19 mRNA对微转移的诊断敏感性较高,但存在假阳性的可能;LUNX mRNA作为一个新的检测指标对微转移的诊断有一定的作用,但特异性和敏感性不高;MUC1 mRNA与骨髓及外周血中微转移的关系尚待确定。     

VEGF-C及其受体Flt-4在原发性非小细胞肺癌中的表达及意义

背景与目的:探讨血管内皮生长因子C(VascularendothelialgrowthfactorC,VEGF-C)及其受体Flt-4(Fms-liketyrosinekinase4)在人非小细胞肺癌(Non-smallcelllungcancer,NSCLC)组织中的表达及与临床意义。材料与方法:采用半定量的RT-PCR及免疫组化法检测40例NSCLC、12例癌旁组织及免疫组化法(S-P法)检测60例NSCLC原发灶组织、10例癌旁组织、32例伴转移的淋巴结组织中VEGF-C、Flt-4的表达。结果:RT-PCR法:NSCLC中VEGF-CmRNA及Flt-4mRNA的相对含量均明显高于癌旁组织;与淋巴结转移正相关;与肺癌的组织类型、病理分级无关。VEGF-CmRNA与肺癌的TNM分期正相关。S-P法:VEGF-C和Flt-4在转移的淋巴结癌细胞中、NSCLC和癌旁组织中的表达各组间差异有显著意义;VEGF-C表达与肺癌TNM分期正相关;VEGF-C和Flt-4表达与淋巴结转移正相关,与肿瘤组织类型、病理分级无关;NSCLC中Flt-4阳性微脉管数在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组,差异有显著意义。结论:在NSCLC组织中VEGF-C基因水平上调,是由肺癌细胞分泌,并通过自分泌方式作用于细胞膜上的Flt-4受体,与非小细胞肺癌的发生有一定关系;VEGF-C与肿瘤恶性进展有关;VEGF-C与NSCLC中淋巴管的生成及淋巴结转移密切相关;VEGF-C表达可做为肺癌患者判断淋巴转移的估计指标之一。