基于TGF-β1/AKT信号通路的西格列汀对人肾小管上皮细胞转化的干预及机制

目的:观察西格列汀(sitagliptin,SIT)对高糖诱导的肾小管上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的干预效应及对AKT信号通路的影响,探讨西格列汀防治早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的作用机制。方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分为正常组(NG,5.56 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,60 mmol/L葡萄糖)、西格列汀组(SIT组,60 mmol/L葡萄糖+1,5,10μmol/L西格列汀)、TGF-β1抑制剂组(60 mmol/L葡萄糖+5μmol/L SB-431542)。MTT法检测细胞活力;ELISA法检测细胞中TGF-β1蛋白分泌;蛋白质印迹法检测细胞中Akt蛋白磷酸化水平及EMT指标蛋白质变化。结果:高糖提高了肾小管上皮细胞的活力,促进TGF-β1蛋白分泌,激活AKT蛋白磷酸化,降低细胞中上皮表型蛋白质E-cadherin的表达,并增加间质表型蛋白质α-SMA的表达。西格列汀显著降低HK-2细胞的活力,降低高糖环境下TGF-β1蛋白分泌,降低AKT蛋白磷酸化水平,改善E-cadherin表达的减少及α-SMA表达的增加。结论:西格列汀可以改善高糖诱导的HK-2细胞上皮-间充质转分化,此效应可能与抑制TGF-β1/AKT信号通路有关。     

川芎嗪对椎间盘退变髓核细胞的作用机制

目的探讨川芎嗪对椎间盘退变髓核细胞的作用机制。方法选择成年雄性SD大鼠10只,提取并培养椎间盘髓核细胞,随机分为对照组、诱导组、川芎嗪低浓度组、川芎嗪中浓度组、川芎嗪高浓度组,分别加入0. 9%氯化钠注射液、10μg/L的白细胞介素(interleukin,IL)-1β、10μg/L的IL-1β+10μmol/L的川芎嗪、10μg/L的IL-1β+20μmol/L的川芎嗪、10μg/L的IL-1β+50μmol/L的川芎嗪。采用CCK-8检测髓核细胞增殖倍数,流式细胞学检测髓核细胞凋亡率,免疫印迹检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3)、髓核细胞外基质蛋白(AGG、COLⅡ和SOX-9)和p65蛋白相对表达水平。结果与对照组比较,诱导组细胞增殖倍数、Bax、AGG、COLⅡ和SOX-9蛋白表达水平减少,细胞凋亡率、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平及磷酸化p65(p-p65)、p-p65/p65水平明显升高,差异有统计学意义(P 0. 05);与诱导组比较,川芎嗪低、中、高浓度组细胞增殖倍数、Bax、AGG、COLⅡ和SOX-9蛋白水平逐渐增高,细胞凋亡率、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平及p-p65、p-p65/p65水平逐渐降低,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论川芎嗪可通过抑制IL-1β诱导的髓核细胞凋亡和p-p65缓解椎间盘退变。     

槲皮素减轻高糖条件下人肾小球内皮细胞损伤的实验研究

目的研究槲皮素减轻高糖条件下人肾小球内皮细胞(HRGEC)损伤的作用及其机制。方法培养HRGEC并分为对照组、高糖组、10μmol/L槲皮素组、100μmol/L槲皮素组,后3组进行高糖处理,10μmol/L及100μmol/L槲皮素组分别给予10μmol/L及100μmol/L槲皮素处理。检测细胞活力、细胞凋亡、凋亡基因mRNA表达量、氧化应激指标含量、PI3K/AKT通路分子蛋白表达量。结果与对照组比较,高糖组的细胞活力、Bcl-2的mRNA表达量、SOD及GPx的含量、p-PI3K及p-AKT的蛋白表达量降低,细胞凋亡率、Bax及Caspase-3的mRNA表达量、MDA的含量增加(P<0.05);与高糖组比较,10μmol/L及100μmol/L槲皮素组的细胞活力、Bcl-2的mRNA表达量、SOD及GPx的含量、p-PI3K及p-AKT的蛋白表达量增加,细胞凋亡率、Bax及Caspase-3的mRNA表达量、MDA的含量降低(P<0.05)且100μmol/L槲皮素组的上述变化较10μmol/L槲皮素组更为显著(P<0.05)。结论槲皮素能够减轻高糖条件下HRGEC的损伤,且这一作用与激活PI3K/AKT通路有关。     

人参皂苷Rg3通过活性氧/c-Jun氨基末端激酶对骨肉瘤细胞凋亡与自噬影响

目的探讨人参皂苷Rg3(G-Rg3)通过活性氧(ROS)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)对骨肉瘤细胞凋亡和自噬的影响及可能机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞(MG63),用不同剂量G-Rg3(0、40、80、160μmol/L)进行干预。为分析G-Rg3的作用机制,将细胞分为对照(Con)组、G-Rg3组(160μmol/L G-Rg3干预)、G-Rg3+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(160μmol/L G-Rg3和ROS清除剂NAC进行干预)、G-Rg3+SP600125组(160μmol/L G-Rg3和JNK特异性抑制剂SP600125进行干预)。采用流式细胞术检测细胞凋亡和ROS水平;激光共聚焦显微镜观察细胞自噬;蛋白免疫印迹法检测凋亡蛋白(BAX、Bcl-2)、自噬蛋白(Beclin1和P62)和磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平。结果不同浓度G-Rg3均可诱导MG63细胞发生凋亡,使BAX蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降,且存在剂量依赖性(P<0.05)。激光共聚焦显微镜观察到不同浓度G-Rg3均可诱导MG63细胞发生自噬,LC3 puncta数目形成增...     

银杏叶提取物通过激活PI3K/AKT通路抑制IL-1β诱导血管内皮细胞的凋亡

目的研究银杏叶提取物对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的血管内皮细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法对人脐静脉血管内皮细胞进行培养,用IL-1β诱导血管内皮细胞建立细胞凋亡模型:分为对照组、IL-1β组、不同剂量的银杏叶提取物处理组(20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml),对照组为空白对照,IL-1β刺激组给予10 ng/ml IL-1β处理细胞,银杏叶提取物处理组给予相应剂量银杏叶提取物处理细胞。通过CCK-8法检测不同剂量的银杏叶提取物对IL-1β诱导的血管内皮的增殖影响,流式细胞术检测银杏叶提取物对细胞凋亡的影响,Western blot检测通路蛋白PI3K、AKT、p-AKT和凋亡蛋白caspase 3、Bax和Bcl-2的表达情况,RT-PCR检测凋亡相关基因caspase 3、Bax和Bcl-2的表达变化。结果不同剂量的银杏叶提取物能显著提高IL-1β诱导血管内皮细胞的增殖能力,尤其是200μg/ml的银杏叶提取物组对IL-1β诱导血管内皮细胞的增殖能力作用非常显著。与对照组比较,IL-1β组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白caspase 3和Bax的表达明显上升,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降。与IL-1β组比较,银杏叶提取物预处理组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白caspase 3和Bax的表达明显下降,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显上升(P 0. 05)。同时与对照组比较,IL-1β组细胞通路蛋白PI3K和p-AKT蛋白的表达明显下降,而给予银杏叶提取物预处理后,其PI3K和p-AKT蛋白的表达明显上升(P 0. 05)。结论银杏叶提取物对IL-1β诱导的血管内皮细胞的凋亡具有一定的抑制作用,且其具体的抑制机制与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

利多卡因调控Wnt/β-连环蛋白轴对胃癌细胞化疗敏感性的影响

目的 探讨利多卡因调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)轴对胃癌细胞化疗敏感性的影响。方法 将对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901接种于96孔板中,用不同浓度利多卡因(0、10、50、100、150、200μmol/L)处理24 h,比较不同浓度下的细胞活力。将对数生长期SGC-7901细胞分为对照组(Control组)、顺铂组(Cisplatin组)、利多卡因低浓度组(Lido-L组)、利多卡因中浓度组(Lido-M组)、利多卡因高浓度组(Lido-H组)、利多卡因高浓度+Wnt/β-catenin信号通路激活剂SKL2001组(Lido-H+SKL2001组),通过5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖检测、Transwell法和划痕愈合实验分别比较各组细胞增殖、侵袭和迁移能力,使用TUNEL试剂盒检测各组细胞凋亡情况,并检测各组细胞凋亡、上皮-间质转化、Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达情况。结果 与0μmol/L利多卡因相比,50、100、150、200μmol/L利多卡因处理的SGC-7901细胞活力均降低,差异有统计学意义(P<0.05)...     

β-淀粉样蛋白诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化过程中Tau蛋白的过度磷酸化

背景：大多数学者认为β-淀粉样蛋白是阿尔茨海默病发病的始动因素,而Tau蛋白过度磷酸化可能是阿尔茨海默病最重要的分子病理变化之一。目的：观察β-淀粉样蛋白25~35对大鼠骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞Tau蛋白磷酸化的影响。方法：体外分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,将第4代骨髓间充质干细胞分为两组：实验组中加入预诱导培养基和20μmol/Lβ-淀粉样蛋白25~35,24h后用含2%二甲基亚砜和200μmol/L丁羟茴醚的DMEM诱导其向神经细胞分化,5h后收取细胞。对照组诱导方法同实验组,但在诱导过程中未加入β-淀粉样蛋白25~35。结果与结论：光镜下可见纺锤状的骨髓间充质干细胞诱导后出现长突起,呈现神经细胞样形态,但实验组突起数量和长度均少于对照组;免疫细胞化学法检测两组诱导后的神经元样细胞为神经元特异性烯醇化酶阳性;免疫蛋白印记法证明实验组的GSK-3β、Tau[pSer262]和Tau[pSer396]表达均显著高于对照组。结果提示β-淀粉样蛋白25~35能够通过GSK-3β途径诱导骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞Tau蛋白过度磷酸化。     

硫化氢对去甲肾上腺素诱导的心肌细胞肥大SD乳鼠的心肌保护作用机制研究

目的观察硫化氢对去甲肾上腺素(NE)诱导的心肌细胞肥大SD乳鼠的心肌保护作用,并探讨其机制。方法利用胶原酶消化分离培养SD大鼠乳鼠的心肌细胞,设置硫化氢组(100μmol/L NE+10μmol/L硫氢化钠)、模型组(100μmol/L NE+等量生理盐水)、对照组(等量生理盐水+等量生理盐水)、硫化氢对照组(等量生理盐水+10μmol/L硫氢化钠)。观察乳鼠原代心肌细胞光镜下变化;培养3 d后观察各组心肌细胞形态学变化,检测心肌细胞表面积、增殖和凋亡率,检测并对比丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量,对比鞘氨醇激酶1(Sph K1)、1-磷酸鞘氨醇受体1(S1P1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT) mRNA和Sph K1、S1P1蛋白的相对表达量、磷酸化PI3K (p-PI3K)/PI3K、磷酸化AKT (p-AKT)/AKT蛋白表达相对值。结果培养期间细胞逐渐趋于心肌细胞的特性;对照组心肌细胞均正常生长,硫化氢对照组与对照组相近,模型组严重异常;心肌细胞表面积、凋亡率、MDA含量、Sph K1、S1P1 mRNA的相对表达量、Sph K1、S1P1蛋白的相对表达量比较,模型组最高,硫化氢组次之,对照组和硫化氢对照组均最低; OD值、SOD含量、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达相对值比较,对照组最高,硫化氢组次之,模型组最低,除对照组和硫化氢对照组差异无统计学意义(P 0. 05),上述指标其余两组间对比差异均有统计学意义(P 0. 05);各组PI3K、AKT mRNA的相对表达量差异均无统计学意义(P 0. 05)。结论硫化氢能够控制NE诱导的心肌细胞肥大病变,促进增殖、抑制凋亡,减轻心肌细胞氧化应激损伤,推测与通过S1P/S1P1信号通路降低Sph K1、S1P1表达,上调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达相对值有关。     

锌指基因1对脑胶质瘤细胞增殖及凋亡能力的影响

目的:研究过锌指基因1(JAZF1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡能的影响及其信号通路。方法:体外培养脑胶质瘤细胞株,分为对照组、空载组和过表达组;分别于无血清的RPMI 1640培养基中,加入AdvJAZF1-GFP或空载体Adv-GFP,对照组不予转染腺病毒。MTT法检测细胞活力,使用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、腺瘤性结肠息肉病相关基因(APC)、Bax和Bcl-2蛋白表达量。结果:对照组和空载组细胞活力和凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),过表达组细胞活力低于其他2组、细胞的凋亡率高于其他2组(均P<0.05);对照组和空载组β-actenin、GSK-3β、APC、Bax和Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),过表达组β-actenin、GSK-3β、APC和Bax蛋白表达低于其他2组,Bcl-2蛋白表达高于其他2组(P<0.05)。结论:过表达JAZF1可能可通过作用于Wnt/β-catenin信号通路,调控β-catenin、GSK-3β、B...     

丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的探讨丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制。方法 CCK8实验检测5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理人食管癌细胞EC9706 48 h及80μmol/L的丙泊酚处理细胞12h、24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况;80μmol/L的丙泊酚处理细胞72 h后,Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞的侵袭及凋亡情况;Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-13、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase 3)、β-catenin、细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达。结果 40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理组细胞存活率显著低于0μmol/L组(P0.05),在24 h、48 h、72 h的细胞存活率显著低于对照组0 h(P0.05);丙泊酚组细胞侵袭数及MMP-2、MMP-13、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率和Cleaved caspase 3蛋白显著高于对照组(P0.05)。结论丙泊酚可通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制食管癌细胞增殖及侵袭能力,诱导细胞的凋亡。     

冬凌草甲素诱导多发性骨髓瘤U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡实验研究

目的 探究冬凌草甲素对多发性骨髓瘤(MM)U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞培养和处理方法,采用0、10、20、30、40、50μmol/L的冬凌草甲素处理MM相关U266细胞、RPMI8226细胞48 h。采用MTT法测定U266细胞、RPMI8226细胞的增殖情况,采用Annexin V-FITC/PI染色试剂盒检测U266细胞、RPMI8226细胞凋亡情况,并采用蛋白质印迹法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的增加,U266细胞、RPMI8226细胞的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的升高,促凋亡蛋白Bax表达量逐渐升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 冬凌草甲素具有抑制MM细胞增殖和诱导细胞凋亡的潜力,其作用机制可能与促进Bax表达,抑制Bcl-2表达,改变细胞Bcl-2/Bax比例,调节细胞凋亡有关。     

DC-CIK联合化疗治疗初发多发性骨髓瘤的疗效及对其Treg细胞功能的影响

目的:探讨树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)为效应细胞的过继免疫联合化疗治疗初发多发性骨髓瘤(MM)的临床疗效及对患者外周血CD4~+CD25~+调节性T(Treg)细胞影响。方法:42例MM患者随机分为两组:化疗组20例,给予合适的化疗方案;联合组22例,除接受合适的化疗外,还给予DC/CIK免疫治疗,比较两组患者的临床疗效及CD4~+CD25~+调节性T(Treg)细胞比例的差异。结果:治疗3个周期后,联合组患者的生活质量和临床疗效:YS评分2.09,瘤细胞15.56%,β2微球蛋白11.36 mg/L,血清M蛋白26.58 g/L;24 h尿液轻链9.86 mg和肌酐120.33μmol/L,而化疗组上述指标检测分别为:2.66.28.22%、17.52 mg/L,36.26 g/L、14.76mg和200.19μmol/L(P值均0.05)。联合组CD4~+CD25~+/CD4~+细胞数为3.54%,CD4~+CD25~+FoxP3~+/CD4~+CD25~+比值为15.20%,均明显低于化疗组4.68%和27.55%(P0.05)。结论:DC/CIK免疫治疗可使CD4~+CD25~+Treg细胞活化增强,配合化疗可进一步清除残存的肿瘤细胞,两者具有协同作用。     

体外神经干细胞培养过程中蛋白激酶磷脂酰肌醇-3激酶/AKT信号途径的作用

目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3kinase,PI3K)/AKT信号途径在体外培养神经干细胞存活、分化中的作用。方法:实验于2001-11/2004-04在重庆医科大学神经病学研究所完成。分为对照组、PI3K特异性抑制剂wortmannin组和LY294002组;采用间接免疫荧光法检测nestin,NF-200和GFAP的表达;TUNEL评价细胞凋亡率;WesternBlot法检测磷酸化的AKT,caspase-9和bad的表达。结果:随着wortmannin和LY294002浓度增大,神经干细胞的形态变化逐渐明显,而且细胞凋亡率也逐渐增加。低浓度时(wortmannin浓度为5nmol/L,LY294002浓度为2μmol/L),神经干细胞凋亡率与对照组无显著性意义(P>0.05);高浓度时(wortmannin浓度为50,100nmol/L,LY294002浓度为50,100μmol/L),神经干细胞凋亡率与对照组、低浓度组有非常显著性意义(P<0.01)。WesternBlot结果提示,随着PI3K特异性抑制剂浓度增大,磷酸化AKT的表达逐渐减弱。当高浓度wort-mannin(20nmol/L)和LY294002(10μmol/L)抑制了AKT磷酸化后,磷酸化的caspase-9,Bad表达减弱。此外,将wortmannin组和LY294002组存活的细胞接种后,分化后细胞的NF-200,GFAP表达无显著性意义。结论:神经干细胞存活依赖于PI3K/AKT途径的活化,其机制可能是PI3K/AKT活化后,促进了Bad和caspase-9等蛋     

体外神经干细胞培养过程中蛋白激酶磷脂酰肌醇-3激酶／AKT信号途径的作用

目的：探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase，P13K)／AKT信号途径在体外培养神经干细胞存活、分化中的作用。方法：实验于2001-11／2004-04在重庆医科大学神经病学研究所完成。分为对照组、P13K特异性抑制剂wortmannin组和LY294002组；采用间接免疫荧光法检测nestin，NF-200和GFAP的表达；TUNEL评价细胞凋亡率；Western Blot法检测磷酸化的AKT，caspase-9和bad的表达。结果：随着wortmannin和LY294002浓度增大，神经干细胞的形态变化逐渐明显，而且细胞凋亡率也逐渐增加。低浓度时(wortmannin浓度为5nmol／L，LY294002浓度为2μmol／L)，神经干细胞凋亡率与对照组无显著性意义(P&;gt;0．05)；高浓度时(wonmannin浓度为50，100nmol／L，LY294002浓度为50，100μmol／L)，神经干细胞凋亡率与对照组、低浓度组有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。Western Blot结果提示，随着PI3K特异性抑制剂浓度增大，磷酸化AKT的表达逐渐减弱。当高浓度woftmannin(20nmol／L)和LY294002(10μmol／L)抑制了AKT磷酸化后，磷酸化的caspase-9，Bad表达减弱。此外，将wortmannin组和LY294002组存活的细胞接种后，分化后细胞的NF-200，GFAP表达无显著性意义。结论：神经干细胞存活依赖于PI3K／AKT途径的活化，其机制可能是PI3K／AKT活化后，促进了Bad和caspase-9等蛋白的磷酸化，抑制了细胞凋亡事件的发生。但是PI3K／AKT途径可能在神经干细胞的分化中的作用甚微。     

线粒体分裂蛋白抑制剂对β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞凋亡的作用及机制

目的:研究线粒体分裂蛋白抑制剂对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导小胶质细胞凋亡的作用及其机制。方法:随机将BV-2小胶质细胞分为con组、Aβ组、mdi组和Aβ+mdi组,con组不做特殊处理,mdi组培养基中加入10μmol/L mdivi-1,Aβ组培养基中加入20μmol/L Aβ,Aβ+mdi组培养基分别加入2、5、10、20μmol/L mdivi-1和20μmol/L Aβ。采用MTT法检测细胞存活率,TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blot法检测Drp1、CytC和Caspase-3蛋白水平变化,RT-PCR法检测CA11b mRNA表达变化。结果:与con组相比,Aβ组的细胞存活率明显下降,凋亡显著增加,CA11b mRNA上升,线粒体Drp1、细胞浆CytC和激活的Caspase-3增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ组相比,Aβ+mdi组的细胞存活率明显上升,凋亡显著减少,CA11b mRNA下降,线粒体Drp1、细胞浆CytC和激活的Caspase-3减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:线粒体分裂蛋白抑制剂对Aβ诱导小胶质细胞凋亡有保护作用,其机制可能为抑制线粒体/CytC/Caspase-3凋亡途径。     

中药当归主要活性成分阿魏酸钠抑制淀粉样β蛋白激活炎症因子的量剂反应

目的:观察中药当归提取的主要活性成分阿魏酸钠对淀粉样β蛋白激活的小鼠腹腔巨噬细胞α肿瘤坏死因子、诱导型一氧化氮合酶和一氧化氮水平的影响。方法:实验于2004-03/10在锦州医学院药理实验室和解剖实验室完成。选择8～10周龄的小鼠36只,随机分为6组,每组6只。正常对照组:巨噬细胞接种24h后用培养基继续培养。淀粉样β蛋白组:巨噬细胞接种24h后在培养基中加入经老化处理的终浓度为10μmol/L的淀粉样β蛋白。淀粉样β蛋白+10,100,500μmol/L,1mmol/L阿魏酸钠组:在加入淀粉样β蛋白的同时加入10,100,500μmol/L,1mmol/L的阿魏酸钠共同孵育。培养48h后采用酶联免疫吸附法、免疫组织化学方法和Griess反应分别检测肿瘤坏死因子α分泌量、诱导型一氧化氮合酶表达和一氧化氮的生成量。结果:36只小鼠均进入结果分析。①巨噬细胞的肿瘤坏死因子α分泌量:淀粉样β蛋白组明显高于正常对照组[(281.54±14.85),(17.55±4.84)ng/L,(P<0.01)]。淀粉样β蛋白+10,100,500μmol/L,1mmol/L阿魏酸钠组可以不同程度地减少由淀粉样β蛋白诱导产生的肿瘤坏死因子α的分泌量[(238.05±6.21),(186.90±7.44),(117.55±8.08),(71.77±10.50)ng/L,P<0.01],且有明显剂量依赖关系(P<0.05)。②巨噬细胞的一氧化氮生成量:淀粉样β蛋白组明显高于正常对照组[(85.04±6.16),(26.10±3.25)μmol/L,(P<0.01)],淀粉样β蛋白+10,100,500μmol/L,1mmol/L阿魏酸钠组可以不同程度地减少由淀粉样β蛋白诱导产生的一氧化氮的量[(69.80±4.96),(54.52±3.45),(43.88±4.04),(33.83±3.13)μmol/L,P<0.01],且有明显剂量依赖关系(P<0.05)。③诱导型一氧化氮合酶的表达:正常对照组只有零星细胞染色阳性;而淀粉样β蛋白组多数细胞胞浆被染成黄褐色。各剂量组的阿魏酸钠可以不同程度地抑制由淀粉样β蛋白激活巨噬细胞造成的诱导型一氧化氮合酶的表达,该抑制作用呈明显剂量依赖性。结论:①淀粉样β蛋白能激活巨噬细胞,使其分泌大量的肿瘤细胞坏死因子α和一氧化氮,诱导型一氧化氮合酶表达也相应增加。②阿魏酸钠通过其抗炎作用呈明显剂量依赖性抑制淀粉样β蛋白对巨噬细胞的激活作用,从而使巨噬细胞生成肿瘤细胞坏死因子α、诱导型一氧化氮合酶、一氧化氮水平降低。     

HOXA1基因反义寡核苷酸对结直肠癌细胞转移潜能的影响研究

目的探讨HOXA1基因反义寡核苷酸(ASODN)对结直肠癌HCT116细胞侵袭和迁移的影响及机制。方法将HCT116细胞分为:15μmol/L的HOXA1 ASODN处理组(ASODN组)、15μmol/L N-ODN处理的无关对照组(N-ODN组)、15μmol/L的HOXA1 SODN处理的正义对照组(SODN组)及正常对照组。Western blotting检测HOXA1、上皮型钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙黏附素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)蛋白表达。MTT法检测细胞活力。Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。对比四组上述各指标。结果与其他三组相比较,HOXA1 ASODN组可明显下调HOXA1、N-cadherin、Vimentin、PI3K和pAKT蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达,抑制细胞活力、侵袭和迁移能力。结论 HOXA1基因反义寡核苷酸可明显降低结直肠癌细胞转移潜能,机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路,从而逆转上皮间质转化有关。     

松萝酸通过调节SphK1/S1P信号通路减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨松萝酸（UA）对缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法 构建H9c2细胞H/R模型,使用0.5～64μmol/L UA分别预处理H9c2细胞,MTT法筛选UA浓度;H9c2细胞随机分为对照组、模型组、UA低剂量组（1μmol/L）、UA中剂量组（4μmol/L）、UA高剂量组（16μmol/L）和UA高剂量+Benzyl butyl phthalate(BBP)组（16μmol/L UA+100 nmol/L BBP）,检测各组细胞增殖活力、细胞凋亡情况,白介素（IL）-1β、IL-6、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）、鞘氨醇激酶1(SphK1)、鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1PR1)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达水平。结果 1μmol/L以上浓度UA可以显著提高H/R H9c2细胞增殖活力。与对照组相比,模型组细胞增殖能力和ATP、SOD含量下降,细胞凋亡率和IL-1β、IL-6、MDA、SphK1、S1PR1、ERK1/2表达增加（P<0.05）;与模型组相比,UA低、中、高剂量组细胞增...     

EP4受体激动剂可通过激活Wnt/β-catenin信号途径促进人CD34~+细胞体外增殖

目的:探讨前列腺素E2特异性受体激动剂4(EP4A)促进人CD34~+细胞体外增殖的可能信号途径。方法:收集中山一院血液科20例健康供者经G-CSF动员后的外周血造血干细胞采集物。应用免疫磁珠法分选出人CD34~+细胞,应用CCK8法明确EP4A促进人CD34~+细胞体外增殖的最佳条件(最佳浓度和最佳作用时间);在此条件下EP4A作用于人CD34~+细胞后,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测β-catenin mRNA水平的变化、Western blot检测β-catenin和P-GSK-3β蛋白表达情况。结果:EP4A 10μmol/L、在培养72 h能明显促进人CD34~+细胞体外增殖,增殖率为对照组的1.36倍(P=0.002)。最佳条件EP4A作用于人CD34~+细胞后,β-catenin mRNA及其蛋白的表达增高,GSK-3β蛋白的磷酸化增加,而这些作用均可被相应的抑制剂(EP4AA)所拮抗。结论:EP4A可通过激活Wnt/β-catenin信号途径促进人CD34~+细胞体外增殖。     

前列腺癌组织Glypican-3、β-catenin和GSK-3β的表达及意义

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3基因(GSK-3)、β黏连蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白在前列腺癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学法检测GSK-3、β-catenin、GSK-3β蛋白在40例前列腺腺癌石蜡包埋组织块(高危组17例,低危组23例)和30例前列腺增生组织(石蜡包埋组织块)中的表达情况并进行比较。结果 GSK-3、β-catenin、GSK-3β在前列腺癌组织中表达阳性率分别为82.5%(33/40)、90.0%(36/40)、17.5%(7/40),在前列腺增生组织中表达阳性率分别为13.3%(4/30),23.3%(7/30)、43.3%(13/30),两组比较差异均有统计学意义(P0.05)。低危组和高危组GSK-3及β-catenin表达组间比较差异均无统计学意义(P0.05),GSK-3β表达在低危组和高危组组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 GSK-3、β-catenin在前列腺癌组织中呈高表达,GSK-3β呈较低表达,3种蛋白对前列腺癌的发生、发展可能具有一定促进作用。