环状RNA hsa＿circ＿0008591对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨环状RNA(circRNA)hsa＿circ＿0008591在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法 运用高通量芯片数据分析筛选在乳腺癌组织中差异表达的circRNAs,确定hsa＿circ＿0008591为研究对象,并通过Sanger测序、核糖核酸酶R(RNaseR)处理等对其进行表征。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa＿circ＿0008591在乳腺癌组织和细胞中的表达;进一步将质粒或小干扰RNA(siRNA)转染至乳腺癌细胞,采用实时无标记细胞分析技术(RTCA)、CCK-8增殖实验、EdU增殖实验和平板克隆形成实验检测hsa＿circ＿0008591对细胞增殖能力的影响。运用TargetScan等数据库预测互相作用的微小RNA(miRNA)和蛋白,同时进行功能富集分析;并运用Cytoscape软件绘制竞争性内源RNA(ceRNA)调控网络。结果 与癌旁组织比较,hsa＿circ＿0008591在乳腺癌组织中呈低表达(P=0.007 6);与人正常乳腺上皮细胞比较,hsa＿circ＿0008591在6种乳腺癌细胞株中的表达水平明显下调(P&...     

基于高通量测序技术的胰腺癌环状RNA差异表达谱分析

目的 筛查胰腺癌组织环状RNA(circRNA)差异表达谱并初步分析其潜在功能。方法 随机选取4对胰腺癌组织和对应癌旁胰腺组织标本进行高通量测序,按表达量差异倍数>2且P<0.05为筛选标准,筛选差异表达的circRNA。qRT-PCR检测随机选取的5个差异表达的circRNA在20对胰腺癌组织标本中的表达,对测序结果进行验证。对差异表达的circRNA进行GO和KEGG富集分析,并构建top50 circRNA-microRNA互作网络图。进一步分析hsa＿circ＿0046523与胰腺癌临床病理特征的关系,并通过敲减试验观察其对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 高通量测序共预测出17 182个circRNA,在胰腺癌组织中差异表达的circRNA有302个,其中137个表达上调,165个表达下调。qRT-PCR结果显示,与癌旁组织相比,胰腺癌组织中has＿circ＿0046523、hsa＿circ＿0004220和hsa＿circ＿0000690表达水平上调(P<0.05),hsa＿circ＿0008676和hsa＿circ＿0004416表达水平下调(...     

hsa＿circ＿0000073对骨肉瘤脂质代谢的影响

目的 探讨hsa＿circ＿0000073在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞脂质代谢的影响。方法 收集2020年1月至2022年1月贵州省人民医院就诊且经病理证实的10例骨肉瘤患者的肿瘤组织及癌旁组织,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa＿circ＿0000073的表达水平。骨肉瘤细胞转染sh-NC和sh-hsa＿circ＿0000073,通过G418构建稳转细胞株,荧光显微镜和qRT-PCR验证干扰效率。使用GeneChip基因芯片筛选出差异表达基因并进行GO分析,R语言(3.6.3版本)的“clusterProfiler”包用于数据分析,“ggplot2”包用于数据可视化。骨肉瘤细胞和裸鼠异种移植双重模型上进行油红实验、尼罗红实验评估hsa＿circ＿0000073对骨肉瘤细胞脂质代谢的影响。结果 与癌旁组织比较,骨肉瘤组织hsa＿circ＿0000073表达水平升高(P<0.05)。转染sh-RNAs后,circ＿0000073干扰组hsa＿circ＿0000073表达水平低于对照组(P<0.05)。干扰hsa＿circ＿0000073后,GeneCh...     

甲状腺微小乳头状癌hsa＿circRNA＿001059表达及其临床价值研究

目的 分析hsa＿circRNA＿001059在甲状腺微小乳头状癌（PTMC）中的表达情况,探讨其与PTMC患者颈部淋巴结转移的关系,并分析其对PTMC的诊断价值。方法 收集2018年1月至2021年5月儋州市人民医院收治的102例PTMC患者（PTMC组）及同期在本院体检正常者50名（对照组）血液标本,以及PTMC组患者的PTMC组织与配对的癌旁正常组织,采用RT-PCR法检测血浆及组织hsa＿circRNA＿001059表达水平;比较PTMC颈部淋巴结转移患者与无颈部淋巴结转移患者癌组织、血浆hsa＿circRNA＿001059表达水平;分析hsa＿circRNA＿001059表达水平对PTMC的诊断价值及对PTMC患者颈部淋巴结转移的诊断价值。结果 PTMC组血浆hsa＿circRNA＿001059表达水平高于对照组[（2.40±1.02）比（0.74±0.16）,P<0.05]。PTMC组织hsa＿circRNA＿001059表达水平高于癌旁正常组织[（2.87±1.15）比（0.81±0.20）,P<0.05]。PTMC颈部淋巴结转移患者血浆、组织hsa＿circ...     

CircRNA＿0629在胆囊癌患者中的临床意义及其与预后的关系

目的 ：明确环状RNA 0629(circRNA＿0629)在胆囊癌（gaubladder carcinoma,GBC）患者中的临床意义及其与预后的关系。方法 ：采用生物信息学分析GSE100363与GSE121714芯片结果,筛选出可能与GBC转移相关的circRNAs。收集110例GBC患者的癌组织与癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证circRNAs的表达水平。采用卡方检验分析circRNAs表达与临床病理特征的关系。采用卡普兰-迈耶（K-M）法和时序检验分析circRNAs表达与总体生存期（OS）的关系。采用Cox比例风险回归模型分析GBC预后的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线评估circRNAs诊断GBC肝转移和TNM分期的曲线下面积（AUC）值。结果 ：共筛选出3种circRNAs,分别为circRNA＿049637、circRNA＿402458、circRNA＿0629。癌组织中circRNA＿0629表达较癌旁组织升高。癌组织中circRNA＿049637和circRNA＿402458表达与癌旁组织比较,差异无统计学意义。circRNA＿06...     

环状RNA hsa＿circ＿0001479在胃癌中的表达及功能研究

目的：探讨hsa＿circ＿0001479在胃癌（gastric cancer,GC）组织中的表达情况及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法：建立实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测hsa＿circ＿0001479表达量的方法并进行方法学性能评价;通过RT-qPCR检测76对胃癌组织和配对癌旁组织中hsa＿circ＿0001479的表达水平并分析其表达量与临床病理参数的关系;构建针对hsa＿circ＿0001479的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和过表达载体,转染至胃癌细胞株,通过CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期分布,划痕实验检测细胞横向迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果：RT-qPCR检测hsa＿circ＿0001479表达量的方法具有良好的精密度、正确度和线性;hsa＿circ＿0001479在胃癌组织中表达增高且表达水平与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和CA19-9水平有关;细胞功能实验显示,在胃癌细胞株中干扰hsa＿circ＿0001479的表达可抑制胃癌细胞的增...     

hsa＿circ＿0044556通过miR145/PD-L1介导NK细胞对肝癌细胞的杀伤作用

目的:探究hsa＿circ＿0044556在肝癌细胞免疫逃逸中的作用及其相关机制。方法:收集肝癌患者肿瘤组织及其癌旁组织,通过qRT-PCR检测hsa＿circ＿0044556和PD-L1表达水平并进行相关性分析。采用qRT-PCR检测正常肝上皮HL-02细胞和肝癌SMMC-7721、HCCLM3细胞hsa＿circ＿0044556及PD-L1表达水平。通过信息学预测和荧光素酶报告实验检测hsa＿circ＿0044556和miR145以及miR145和PD-L1的靶向关系。通过脂质体转染法将si-hsa＿circ＿0044556、si-miR145、si-NC转染至HCCLM3细胞,分组为:si-NC组、si-hsa＿circ＿0044556组、si-miR145组和si-hsa＿circ＿0044556+simiR145组。比较各组细胞PD-L1表达水平、细胞增殖能力;通过NK细胞毒性试验检测对NK细胞杀伤的敏感性。结果:与癌旁组织相比,肿瘤组织hsa＿circ＿0044556和PD-L1表达水平升高(P <0.05),hsa＿circ＿0044556与PD-L1表达成正相关(...     

环状RNA hsa＿circ＿0009043在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨hsa＿circ＿0009043在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达及其临床意义。方法 采用实时定量PCR测定hsa＿circ＿0009043在OSCC细胞系及组织中的表达水平,并分析其与临床病理特征的相关性。用受试者操作特征（ROC）曲线评估hsa＿circ＿0009043在OSCC诊断中的价值。基于生物信息学分析预测hsa＿circ＿0009043的潜在功能。结果 hsa＿circ＿0009043在OSCC细胞系及OSCC组织中的表达水平低于癌旁组织及正常口腔角质细胞（均P <0.05）,其表达水平与肿瘤大小及淋巴结转移有显著相关性（P=0.01,P=0.037）。ROC曲线下面积为0.676 9。基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析及hsa＿circ＿0009043/miRNA/mRNA调控网络显示,hsa＿circ＿0009043与OSCC进展存在一定相关性。结论 hsa＿circ＿0009043可能成为一种OSCC的生物标志物,并参与OSCC的发生、发展。     

肺腺癌患者组织中circ＿0000620的表达和患者化疗耐药的相关性

目的 检测circ＿0000620在肺腺癌患者组织中的表达并且分析其与患者化疗耐药的相关性。方法 选取2018年1月至2020年1月在郑州大学第一附属医院确诊的120例肺腺癌患者的癌组织及癌旁组织,其中男73例,女47例,年龄≥55岁者71例,<55岁者49例,化疗耐药者28例,化疗敏感者92例。采用环状RNA(circRNA)高通量测序技术筛选出差异性表达的circRNA;使用divergent primer和测序技术证明circ＿0000620在肺腺癌组织中是否存在且为环状;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人肺腺癌组织、癌旁组织、肺腺癌细胞株(A549、PC-9、SPC-A-1、NCI-H1299、NCI-H1395)和正常人支气管上皮细胞(NHBE)中circ＿0000620的表达情况。结果 circ＿0000620在肺腺癌组织中存在且为环状;肺腺癌组织中circ＿0000620的表达水平高于其配对癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);与化疗敏感组相比,化疗耐药组circ＿0000620的表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05...     

环状RNA hsacirc0032664抑制肝癌细胞的增殖、侵袭与迁移

目的 大多数环状RNA(circular RNA,circRNA)在肝癌中的潜在机制和特定功能仍不清楚。本研究通过生物信息学分析和临床肝癌组织与细胞系研究hsa＿circ＿0032664在肝癌中的差异表达,并探讨hsa＿circ＿0032664在肝癌中的生物学功能。方法 从基因表达数据库(GEO)中下载与肝癌相关的circRNA数据集(GSE164803和GSE97332),然后利用Rstudio软件进行差异表达分析。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa＿circ＿0032664在肝癌组织和肝癌细胞系的表达水平,设计干扰片段siRNA干扰hsa＿circ＿0032664在肝癌细胞系(HepG2、MHCC97H)的表达,通过CCK8实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验验证hsa＿circ＿0032664在肝癌中的生物学功能。结果 生物信息学分析发现hsa＿circ＿0032664在肝癌中低表达,qRT-PCR结果显示hsa＿circ＿0032664在肝癌组织和肝癌细胞系中低表达。干扰hsa＿circ＿0032664在HepG2、MHCC97H细胞中的表达后可促进肝癌细...     

1型糖尿病患者外周血环状RNA差异表达分析

目的：分析1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus,T1DM）患者外周血环状RNA (circular RNA,circRNA)差异表达情况,鉴定潜在分子标记物。方法：选取2021年7—12月于汕头大学医学院第一附属医院内分泌科住院治疗的1型糖尿病患者3例（T1DM组）和同期健康对照者3名（对照组）。采用circRNA表达谱芯片进行外周血样本检测。筛选两组差异谱,进行实时荧光定量PCR验证确定差异,并预测与circRNA结合的靶微RNA。结果：circRNA上调5 134个,下调5 426个,69个circ RNA有显著改变（P<0.05,|log FC|>1.5）。选取|log FC|改变更为明显的5个circ RNA,通过实时荧光定量PCR验证发现hsa＿circ＿101079、hsa＿circ＿100332、hsa＿circ＿085129及hsa＿circ＿103845表达与对照组相比差异均有统计学意义（P值均<0.05）。结论：hsa＿circ＿101079、hsa＿circ＿100332、hsa＿circ＿085129及hsa＿circ＿...     

环状RNA hsa_circ_0002185对乳腺癌细胞瘤细胞活力和侵袭能力的影响及其作用机制

目的 ：探讨环状RNA hsa＿circ＿0002185对乳腺癌细胞瘤细胞活力和侵袭能力的影响及其作用机制。方法 ：收集2018年1月至2020年1月在宁夏医科大学总医院接受根治性手术治疗的20对乳腺癌组织及癌旁,通过qRT-PCR检测hsa＿circ＿0002185和hsa-miR-1248在人乳腺上皮细胞MCF10A和人乳腺癌细胞（MCF-7、T47D、BT-474和SK-BR-3）中m RNA的表达水平。构建T47D-siCirc(hsa＿circ＿0002185沉默)和T47D-NC（空载体对照）细胞株系,并以T47D作为空白对照,qRT-PCR检测hsa＿circ＿0002185 m RNA的表达水平;分别采用CCK-8细胞活性实验、划痕实验和Transwell实验检测hsa＿circ＿0002185对T47D细胞的增殖、迁移和侵袭能力;免疫荧光实验检测E-cadherin和Vimentin表达;使用生物信息学网站Circular RNA Interactome预测hsa＿circ＿0002185可互补结合的miRNA,再根据Targetscan网站预测相应miRNA可靶向结...     

Hsa＿circ＿0000741对乳腺癌癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制

目的 探讨环状RNA(hsa＿circ＿0000741)对乳腺癌癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 通过R语言limma包分析GSE182471和GSE165884数据集;通过常规培养乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和正常细胞系MCF-10A,提取细胞总RNA,逆转录后进行qRT-PCR测定目的基因表达量;通过lipo2000转染si-hsa＿circ＿0000741对目的基因进行敲减,将其编为si-hsa＿circ＿000074组,转染si-nc后将其编为si-nc组,并用qRT-PCR实验检验转染效率,之后进行集落和CCK-8实验对于si-hsa＿circ＿000074组和si-nc组之间的细胞增殖速率进行检验;开展划痕和侵袭实验对于si-hsa＿circ＿000074组和si-nc组之间的细胞迁移和侵袭能力进行进行检验。结果 GSE182471和GSE165884数据集取交集得出has＿circ＿0000741在两个数据集中癌组织组均显著上调;qRT-PCR实验发现hsa＿circ＿0000741在正常细胞系中表达量低于癌细胞系,在三阴性细胞系MDA-MB-...     

circRNA＿0031269调控miR-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移

目的 探讨circRNA＿0031269调控mi R-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移。方法 选取深圳市南山区前海蛇口自贸区医院2020年3月—2021年4月妇科肿瘤专科收治的40例宫颈癌患者,经手术治疗切除的癌组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶联反应（quantitativereal-time PCR,q RT-PCR）检测不同组织中circ RNA＿0031269和mi R-127-3p的相对表达;双荧光素酶报告基因检测观察circRNA＿0031269和miR-127-3p的靶向关系。采用MTT、Transwell细胞实验检测宫颈癌细胞增殖、迁移能力。结果 癌组织中circ RNA＿0031269表达高于癌旁组织,mi R-127-3p表达低于癌旁组织（P<0.05）;miR-127-3p过表达可降低WT-circ RNA0031269的荧光酶活性,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;anti-miR-127-3p过表达可抑制He La细胞增殖、迁移,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;抑...     

外周血hsa＿circ＿0105035表达水平与急性缺血性脑卒中的相关性

目的 探讨外周血hsa＿circ＿0105035表达水平与急性缺血性脑卒中(AIS)发生的关系,以及与脑梗死体积和临床检测指标的关联。方法 纳入AIS患者310例为病例组,另选择同期年龄与病例组相匹配的无脑卒中、冠心病等心脑血管疾病史的社区人群310例为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定所有研究对象外周血hsa＿circ＿0105035的表达水平,以Sanger测序和线性消化酶(RNase R)实验验证其环状结构,以核质分离实验明确其亚细胞定位。通过Image J软件计算得到AIS患者的脑梗死体积。结果 hsa＿circ＿0105035主要分布于细胞质。病例组患者的外周血hsa＿circ＿0105035表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。AIS患者外周血hsa＿circ＿0105035的表达水平与脑梗死体积呈负相关(r_s=-0.127,P=0.045)。hsa＿circ＿0105035低表达组AIS患者的血小板体积分布宽度、乳酸脱氢酶含量高于hsa＿circ＿0105035高表达组,差异均有统计学意义(均P<0.05...     

环状RNA hsa＿circ＿0009735对胃癌细胞上皮间质转化、细胞周期和自噬的影响

目的：探讨环状RNA hsa＿circ＿0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)、迁移、细胞周期和自噬的影响。方法：取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、 MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa＿circ＿0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞,将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa＿circ＿0009735组和阴性对照组;将对照质粒和hsa＿circ＿0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞,将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa＿circ＿0009735组和对照质粒组;MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度(0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L^-1)雷帕霉素组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测胃癌组织和细胞中hsa＿circ＿0009735表达水平,激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,W...     

hsacirc0006135通过调控miR-1236-3p/MTA2轴促进胃癌发展

目的 探究环状RNA hsa＿circ＿0006135在胃癌增殖、侵袭以及细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)中的作用,及其影响胃癌进展的具体机制。方法 收集江苏大学附属人民医院普外科收治的45名胃癌患者的癌组织及癌旁正常组织标本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa＿circ＿0006135在胃癌组织及胃癌细胞株(HGC-27和MGC-803)中的表达情况。体外培养胃癌细胞株HGC-27和MGC-803,分别敲减和(或)过表达hsa＿circ＿0006135、miR-1236-3p,克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,并以Western blot检测各组细胞E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、MTA2(metastasis-associated tumor gene family 2)蛋白表达情况。建立小鼠异种移植皮下瘤模型,观察敲减hsa＿circ＿0006135对胃癌细胞HGC-27体内成瘤的影响。结果 hsa＿circ＿0006135在胃癌组织和胃...     

环状RNA_0015278与甲状腺乳头状癌及预后的相关性

目的 探讨甲状腺乳头状癌(PTC)患者环状RNA＿0015278(circ＿0015278)表达与甲状腺癌及预后的相关性。方法回顾性分析2016年6月至2021年12月承德医学院附属医院收治的甲状腺切除术后PTC患者206例,通过逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PTC及癌旁组织中circ＿0015278的表达,以病理结果为金标准,使用受试者工作特征(ROC)曲线评价circ＿0015278在PTC及癌旁组织中的诊断价值;circ＿0015278表达按照分位数划分四等级,使用Spearman相关分析,分析不同等级分位数circ＿0015278表达与PTC 5年复发率、死亡率的相关性。使用KM曲线对数秩检验对不同等级分位数circ＿0015278表达患者随访5年的无病生存率(DFS)和总生存率(OS)进行比较。通过单变量和多变量Cox比例风险回归模型分析影响PTC患者预后的因素。结果 PTC组织中circ＿0015278表达与癌旁组织相比明显降低,差异有统计学意义(Z=-14.146,P<0.001);以病理结果为金标准建立PTC及癌旁组织circ＿001527表达的RO...     

circ＿0000515/miR-1296-5p/CDK2轴在乳腺癌中的作用

目的:探究circ＿0000515在乳腺癌进展中的可能作用机制。方法:通过GEO数据库下载乳腺癌circRNA芯片数据集(GSE101123)并采用R语言进行表达差异分析,筛选出目标circRNA分子作为研究对象并检测其在乳腺癌细胞株和组织中的表达;生物信息学分析与选择该circRNA的目的miRNA,及后者对应的靶向mRNA,并采用双荧光素酶实验和蛋白质印迹进行验证;将目标circRNA的siRNA转染人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,CCK-8实验和划痕实验观察细胞的增殖和迁移,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测RNA表达,蛋白质印迹实验检测mRNA编码蛋白的表达。结果:选择和下载GSE101123数据集后用R语言筛选出5个高表达的circRNA分子,选定其中的circ＿0000515作为研究对象,生物信息学分析得出circ＿0000515、miR-1296-5p和细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)三者之间可能存在靶向关系。qRT-PCR结果显示,circ＿0000515中乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-23...     

circRNA＿0005075在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、侵袭能力的调控机制

目的 环状RNA(circRNA)与胃癌发生发展有关,本研究旨在探讨circRNA＿0005075对胃癌细胞增殖、侵袭的影响及其对miR-767-5p/TRIM27轴的调控作用。方法 采用RT-qPCR和RNA FISH法检测circRNA＿0005075在胃癌组织和配对癌旁组织中的表达水平。用慢病毒感染技术过表达胃癌细胞的circRNA＿0005075,并通过体内RNA免疫共沉淀技术、Western blotting、荧光素酶活性实验和挽救实验对其分子作用机制进行探讨。结果 癌组织circRNA＿0005075相对表达量为0.51±0.13,低于癌旁组织的3.51±0.69(P<0.05)。癌旁组织中circRNA＿0005075的荧光强度OD值为1.35±0.24,高于癌组织的0.67±0.16(P<0.05)。circRNA＿0005075低表达的胃癌患者总体生存时间显著短于高表达患者(P<0.05)。circRNA＿0005075过表达可抑制胃癌细胞的增殖和侵袭。RT-qPCR及荧光素酶活性实验证实circRNA＿0005075可与miR-767-5p结合。利...