人胚细胞的体外培养

目的：为医学研究长期提供培养的人胚细胞。方法：体外培养人胚细胞，观察其生长特性、染色体数目以及冻存和复苏的条件。结果：培养的人胚肺、皮肤、肾、脾及脑组织中，肺和皮肤细胞在冻存前后增长速度较快而稳定，染色体数目为２ｎ＝４６，占８７％￣９１％；肾、脾细胞扩增缓慢；脑组织几乎不能扩增。结论：人胚肺和皮肤细胞可长期培养，可为医学研究提供二倍体细胞实验对象。     

人胚血管平滑肌细胞的体外培养、冻存与复苏

目的：介绍人胚动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）体外培养和保存方法。方法：从人工流产的胎儿主动脉分离动脉中膜组织。应用组织块培养方法进行人胚VSMCs培养,并行形态学观察及免疫组化鉴定;将第4代的人胚VSMCs冻存,2周,1、2、6个月后将细胞复苏,观察复苏后人胚VSMCs的生长情况。结果：培养的人胚VSMCs经鉴定为平滑肌细胞,培养的人胚VSMCs经冻存,复苏率超过80％。结论：人胚VSMCs体外培养、冻存及复苏成功,使人胚VSMCs培养体系更加完善,为心血管疾病药物的研究及组织工程化血管提供丰富的细胞来源。     

HEK-293细胞复苏培养及冻存

目的通过对人胚肾293细胞的复苏培养及其冻存的研究,为进一步行干细胞标记实验奠定基础。方法复苏培养人胚肾293细胞,倒置显微镜观察人胚肾293细胞的生长状况,计算细胞贴壁率,绘制细胞生长曲线,冻存保留细胞。结果人胚肾293细胞在普通培养条件下生长良好,6h后大部分细胞已经贴壁,8h细胞已完全贴壁。结论人胚肾293细胞采用改进方法复苏培养及冻存是简便可行的,为进一步行干细胞标记实验奠定了坚实的前期基础。     

改良hela细胞冻存与复苏方法的实验研究

目的:建立一种改良的hela细胞冻存和复苏的方法.方法:取生长状态良好的HELA细胞分别进行传统和改良方法冻存,于冻存后1年分别行传统和改良的复苏方法.用MTT法测细胞生长曲线,应用两因素析因分析统计方法评定不同冻存方法、不同复苏方法单独和/或组合对细胞复苏率的影响.结果:HELA体外生长良好.电镜观察细胞超微结构没有明显改变.细胞的复苏率均受不同冻存方法和复苏方法单、双因素影响.冻存复苏后生长曲线良好.结论:改良后的HELA冻存和复苏方法可使细胞保持最佳生物学特性,细胞的复苏率高,适合用于体外实验研究.     

人脐静脉血管内皮细胞培养、冻存、复苏与鉴定

目的:探讨人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)体外分离、培养、冻存、复苏与鉴定的可靠方法.方法:采用改良的胶原酶灌注消化法对HUVEC体外分离、培养,按慢冻速融原则对第3代细胞进行液氮冻存、复苏.采用免疫组化Ⅷ因子相关抗原染色和活体细胞荧光DiI-Ac-LDL鉴定.结果:分离的原代HUVEC总数平均为1×106个细胞,最多达3×106个细胞;两种鉴定结果HUVEC均为95%以上阳性;冻存后分3批复苏细胞活性均超过90%.结论:成功建立了人脐静脉血管内皮细胞体外培养、冻存、复苏与鉴定方法,获得了足够数目和纯度的血管内皮细胞,保持了细胞的同源同代性.     

兔外周血间充质干细胞的分离培养及冻存

目的建立兔外周血间充质干细胞（MSCs）体外分离培养及冻存的方法。方法用密度梯度离心法及贴壁培养法分离纯化兔外周血MSCs，MSCs经液氮冻存半年复苏，观察细胞冻存前后的生长状况，并用台盼蓝法测定其存活率。结果MSCs于体外培养2h开始贴壁生长，细胞形态为梭形、多角形及纺锤状等。传代MSCs变为形态均一、排列有序的长梭形细胞，增殖活跃；MSCs经6mo冻存后复苏培养，台盼蓝法计数存活率达95％以上，细胞形态及生长状况与冻存前无明显差别，均呈长梭形，细胞生长增殖旺盛。结论采用密度梯度离心法和贴壁法可以有效获得应用G-CSF动员后的外周血MSCs，且细胞纯度高，生长增殖活性好，采用液氮冻存MSCs的方法十分有效可行。     

人脐静脉内皮细胞的分离培养和冻存

目的研究体外分离、培养、冻存人脐静脉内皮细胞的有效方法以获得大量人脐静脉内皮细胞，为构建含血管的组织工程皮肤提供种子细胞。方法新鲜脐带内灌注胶原酶消化，获得内皮细胞，用含20％胎牛血清的M199液进行培养。倒置显微镜观察细胞形态，结合Ⅷ因子免疫组化鉴定细胞来源。内皮细胞加入10％甘油的冻存液，分别置于渡氮保存1周和4周，复苏后血球计数板计数，绘制生长曲线。结果脐静脉内灌注胶原酶法可获取高纯度的内皮细胞，与未冻存细胞相比，复苏的细胞活力保持在80％以上，复苏后生长曲线与未冻存细胞相似。结论脐静脉灌注酶消化法可获取大量高纯度的内皮细胞。冻存的内皮细胞复苏后仍保持较高的体外增殖能力，可作为制备含血管的组织工程皮肤的种子细胞来源。     

人胎视网膜色素上皮细胞的冻存和复苏

目的：冻存和复苏人胎视网膜色素上皮细胞，为视网膜色素上皮移植治疗视网膜色素变性提供组织来源。 方法：取第3代胰酶消化法获取的人胎儿视网膜色素上皮细胞进行冻存，复苏后经台盼蓝染色测定细胞存活率，角蛋白抗体免疫细胞化学染色鉴定细胞。 结果：复苏后的视网膜色素上皮细胞在体外生长良好，抗角蛋白反应阳性，细胞具有较高的存活率［(84.9%±3.2)%］。 结论：冻存和培养RPE细胞为细胞移植提供了一个良好的来源。     

体外分离培养的人尿道黏膜上皮细胞的生物学特性

目的 探讨体外分离培养的人尿道黏膜上皮细胞的生物学特性,为构建组织工程尿道提供种子细胞.方法 取尿道下裂患者尿道黏膜,经消化离心后,接种于培养基中连续培养,观察细胞形态变化及生长、增殖过程,并绘制生长曲线;对细胞进行常规冻存和复苏;应用免疫细胞化学技术进行角蛋白染色的鉴定.结论 体外培养的细胞呈铺路石样外观,可传至8代;可进行常规冻存和复苏;角蛋白免疫细胞化学染色呈阳性.结论人尿道黏膜上皮细胞的体外连续培养及扩增技术被建立,本实验培养的细胞可用于构建组织工程尿道.     

兔关节软骨细胞的分离培养及生物学特征

目的 探讨兔关节软骨细胞分离培养的方法和生物学特性。方法 从4周龄新西兰白兔关节分离培养软骨细胞，倒置显微镜下观察原代及传代培养的细胞形态学变化，并计数绘制生长曲线。测定细胞冻存复苏后的存活率。用甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学法了解葡萄糖胺多糖（GAGs），Ⅱ型胶原的合成情况并鉴定细胞。结果 成功建立体外培养兔关节软骨细胞的实验方法。原代培养的软骨细胞呈多角形，传代3次后出现反分化。形态学、免疫化学染色显示细胞培养3代以内可以保持表型的稳定，冷冻复苏存活率为92％。结论 本文建立的体外培养关节软骨细胞的方法简单可行。体外培养的兔软骨细胞表型能保持3代稳定，具有良好的生物学活性，可用于实验研究，可经深低温冷冻保存。     

用免疫酶法检测人外周血T淋巴细胞亚群

对免疫酶法(EIA)检测人外周血T淋巴细胞亚群进行了改进,并对20例正常孕妇分别应用EIA,间接免疫荧光法(IFA)和直接SPA菌花环法的检测结果进行了比较。结果表明,3种方法敏感性相同;但EIA更具有方法简单、经济、染色标本可长期保存又不需要特殊实验仪器等优点。探讨了EIA应用中应注意的几个问题。     

食管贲门癌术后断端残存癌的临床意义

本文通过对我院１９８０～１９９２年间食管贲门癌术后６０例残存癌的分析，表明断端残存癌对术后早期恢复和远期生存时间都有明显影响．究其残存癌的病原，主要是病变食管的长度切除不够，某些癌变浸润广泛，或与主体癌距离甚远，或系多原发癌，为了避免断端残存癌，必须改良传统术式，尽量扩大食管切除范围，特别是上切缘.对病变广泛者，可于术前放射治疗.术中不能确定病变边缘者，应作快速病理切片检查，以确保断端无残存癌.     

心内膜标测评价心电图对预激综合征房室旁道的定位

选择行心内膜标测的显性预激综合征（ＷＰＷ）病人５３例，其中，左侧壁旁道（ＡＦ）１７例，左后壁ＡＰ８例，右游离壁ＡＰ１０例，右前间隔ＡＰ６例，右后间隔ＡＰ８例，左后间隔４例。回顾性地分析１２个导联心电图，肢体导联的△波方向，额面ＱＲＳ电轴及胸导ＱＲＳ主波方向。将体表心电图与心内膜标测的旁道位置对比，发现两者的定位基本上是一致的，证明体表心电图可做为预激综合征旁道的定位方法，为心脏介入性检查及治疗提供有价值的参考。     

GSTθ转染对HCT116细胞系的影响

目的观察转染了GSTθ后HCT116细胞系的生长、细胞周期的变化,以及HCT116细胞系生长对血清浓度的依赖性。方法通过脂质体Lipofectamine将质粒载体pcDNA3及pcDNA3-GSTθ分别转染HCT116细胞获得稳定转染株,通过RT-PCR检测GSTθ的表达,细胞计数绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期变化,MTT法检测细胞生长对血清浓度的依赖。结果GSTθ转染后抑制了HCT116细胞的生长,并且是通过G2/M和S期阻滞而导致的,GSTθ还增加了HCT116细胞对血清的依赖性。结论GSTθ可降低HCT116细胞的恶性程度,使其对血清及营养物质的需求增加。     

成都市十县（市）1961－1990年急性传染病谱分析

分析了成都市十县（市）三十年急性传染病病种变化及其在不同时期的顺位。六十至七十年代以虫媒及动物源性传染病为主，八十年代以肠道传染病为主（呼吸道传染病始终居第二位）。十五种主要传染病中，多数传染病的发病率呈下降趋势，痢疾、病毒性肝炎的发病率呈上升趋势。提示肠道传染病是今后的防制重点。     

T3N0M0期肾细胞癌患者预后相关因素分析：单中心182例患者回顾性研究

目的：研究影响T3N0M0期肾细胞癌患者肿瘤学预后的临床及实验室检查因素。方法：回顾性分析2007年至2012年于北京大学第一医院行手术治疗的T3N0M0肾细胞癌患者的临床资料、实验室检查结果及随访数据。应用Kaplan-Meier法计算生存率,Log-rank方法进行单因素分析,对单因素分析中显著相关的变量采用Cox模型进行多因素生存分析。结果：共182例T3N0M0肾细胞癌患者纳入研究,其中男性患者126例（69.23%）,女性患者56例（30.77%）。患者平均年龄为(56.75±12.45)岁,中位随访时间48个月（3~99个月）,末次随访时共有50例（27.47%）患者死亡,59例患者（32.42%）复发。患者的5年肿瘤特异性生存率为68.30% （95% CI: 60.16%~75.84%）,5年无复发生存率为60.70%（95% CI: 53.16%~68.84%）。多因素分析发现,糖尿病（HR=2.434, 95% CI：1.243~4.769, P=0.010）、术前低白蛋白血症（HR=2.188, 95% CI：1.074~1.074, P=0.031）及贫血（HR=3.320, 95% CI：1.839~5.991, P<0.001）是T3N0M0肾细胞癌患者术后肿瘤特异生存的独立危险因素,更高的Fuhrman分级（HR=2.552, 95% CI：1.433~4.545, P=0.001）、术前贫血（HR=2.535, 95% CI：1.497~4.293, P=0.001）是T3N0M0肾细胞癌患者术后复发的独立危险因素。结论：糖尿病、术前低白蛋白血症、贫血是T3N0M0肾细胞癌患者术后生存的独立危险因素;高Fuhrman分级、贫血是T3N0M0肾细胞癌患者术后复发的独立危险因素。     

硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸对乙型肝炎病毒细胞的影响

目的探讨硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸对乙型肝炎病毒细胞的影响。方法设计合成HBV5个硫代反义寡聚核苷酸(S-as ODN)靶序列。应用ELISA方法、MTT比色法、观察S-as ODN对HBsAg、HBeAg抗原表达及Hep G22215细胞毒性的影响。结果不同靶位点的S-as ODN对HBsAg、HBeAg表达都有显著的抑制作用,在浓度为20μmol／L时,对细胞无明显杀伤作用。结论S-as ODN对Hep G22215的HBsAg、HBeAg的抑制作用为抗HBV治疗提供了新的途径。     

白藜芦醇对人肾细胞癌786-0细胞周期、凋亡及PDCD5mRNA表达的影响

目的:探讨白藜芦醇(RES)对人肾细胞癌786-0细胞周期、凋亡及PDCD5mRNA表达的影响。方法:取对数生长期的786-0细胞,用含25μmol/LRES的培养基(实验组)培养24、48及72h后,应用流式细胞术检测786-0细胞周期和凋亡情况,采用原位杂交技术检测细胞中PDCD5mRNA的表达情况,均以不含RES的培养基作为空白对照。结果:25μmol/LRES作用24h后,实验组786-0细胞G1期及G2期比例显著下降,S期比例明显升高。经25μmol/LRES处理24、48及72h后,实验组786-0细胞凋亡细胞数(F组间=869.853,P<0.001)和PDCD5mR-NA的表达均高于空白对照组(F时间=10.067,P<0.001;F组间=649.629,P<0.001),差异有统计学意义。结论:RES可上调人肾细胞癌786-0细胞PDCD5mRNA的表达,使786-0细胞阻滞在S期而诱导细胞凋亡。     

穿心莲内酯对人肾细胞癌786-0细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的：研究穿心莲内酯（Andro）对肾细胞癌（RCC）786-0细胞的增殖、迁移和克隆形成能力的抑制作用及诱导其程序性凋亡的作用,并探讨其相关作用机制。方法：取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（5、10、20、40和80 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,MTS法检测各组细胞增殖率。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（0.50、1.25和2.50 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,采用克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（10、20和40 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,10、20、40和80 μmol·L^-1 Andro组细胞增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,0.50和1.25 μmol·L^-1 Andro组细胞克隆形成率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,10、20和40 μmol·L^-1 Andro组细胞划痕愈合率均明显降低（P<0.01）,20和40 μmol·L^-1 Andro组细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）。与空白对照组比较,40 μmol·L^-1 Andro组细胞中DNA损伤蛋白γ-H2AX表达水平明显升高（P<0.01）,Caspase-8表达水平明显降低（P<0.05）,Caspase-8剪切体表达水平明显升高（P<0.01）。结论：Andro能够有效地抑制RCC细胞的增殖、迁移和克隆形成能力,并诱导其凋亡,其诱导凋亡作用的机制与诱导DNA损伤及JNK/H2AX和Caspase-8介导的细胞程序性凋亡途径有关。     

胃肠道癌产生异位HCG的研究

本文对２５８例胃肠道癌进行了异位绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）测定，其中３１例ＨＣＧ阳性，１７例β─ＨＣＧ阳性；而在ＨＣＧ阳性病例中，２４例为分化较差的腺癌，表明分化差的癌有产生ＨＣＧ的潜能，可能是与肿瘤细胞核内ＤＮＡ有关的ＨＣＧ片断解脱抑制或肿瘤细胞逆行性分化所致，故认为检测非滋养细胞肿瘤产生异位ＨＣＧ，对其患者的治疗和预后的判断可能有益.