长链非编码RNA-UBC1对膀胱癌细胞生物学功能的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)-尿路上皮癌相关基因1(UBC1)对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移的作用及其可能的机制.方法 采用siRNA干扰技术沉默膀胱癌细胞系T24细胞的lncRNA-UBC1,设置阴性对照组,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot印迹法检测与转移相关的基质金属蛋白2(MMP-2)与zeste基因增强子同源2(EZH2).结果 lncRNA-UBC1在T24细胞株中表达明显高于人胚胎膀胱组织来源细胞;与阴性对照组和空白对照组相比,沉默UBC1后,UBC1沉默组膀胱癌细胞增殖速率慢于对照组,UBC1沉默组膀胱癌细胞凋亡细胞比例高于阴性对照组[(18.72±7.79)％vs.(13.09±5.66)％,P＜o.05],UBC1沉默组细胞侵袭能力受到抑制,T24细胞MMP-2与EZH2表达降低.结论 沉默lncRNA-UBC1可抑制T24细胞增殖、凋亡及侵袭能力,其机制可能是通过MMP-2与EZH2途径.     

heparanase通过调控EMT促进人膀胱移行细胞癌细胞T24迁移及侵袭的作用研究

目的 探讨乙酰肝素酶（heparanase）是否通过上皮-间充质转化（EMT）影响膀胱移行细胞癌细胞的侵袭及迁移能力.方法 利用荧光定量PCR来检测人膀胱移行细胞癌细胞T24、EJ、MGH-U1以及BIU-87中heparanase的表达水平;设计并合成靶向heparanase的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染heparanase表达最高的膀胱移行细胞癌细胞T24以构建稳定低表达heparanase细胞株,通过Western blot法检测和定量PCR来验证shRNA的干扰效率;通过transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail和WNT-5a的变化.结果 heparanase-shRNA转染后,能够有效抑制T24细胞中heparanase的表达;Transwell法结果显示,heparanase干扰组细胞侵袭及迁移能力显著低于阴性对照组（P ＜0.001）.Western blot法检测结果发现,heparanase干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,heparanase干扰组细胞的Snail以及WNT-5a表达较对照组显著下降.结论 运用RNA干扰技术能够有效沉默T24细胞的heparanase基因,并诱导其迁移侵袭能力的下降,其可能的机制是通过调节EMT的上游信号分子Snail、WNT-5a的表达来调控EMT,从而影响膀胱移行细胞癌细胞的迁移及侵袭.提示heparanases可能在膀胱移行癌T24细胞的发生发展中起重要作用,抑制heparanase的表达可能成为一种治疗膀胱移行细胞癌的新方法.     

CXCR4基因158沉默对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡及迁移能力的影响

目的 探讨CXCR4基因沉默后对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。 方法 将T24细胞分为3组,即干扰组、阴性对照组和空白对照组。采用阳离子脂质体转染试剂Lipofectamine 2000将靶向沉默CXCR4基因的小干扰RNA(siRNA)序列转染至膀胱癌T24细胞株中,Western-blot检测转染后T24细胞中CXCR4蛋白的表达水平,MTT比色法检测细胞凋亡,Transwell迁移试验观察T24细胞迁移能力。 结果 转染siRNA后,CXCR4蛋白表达量明显下调(P<0.05),与空白对照组及阴性对照组的T24细胞比较,沉默CXCR4基因后,显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖活性(均为P<0.05),促进T24细胞凋亡(均为P<0.05); Transwell实验结果提示,RNAi干扰CXCR4表达后能显著抑制膀胱癌T24细胞的迁移能力(P<0.05)。 结论 RNAi干扰CXCR4表达水平能够抑制T24细胞增殖、促进细胞凋亡及降低细胞的迁移能力,推测CXCR4基因可能是膀胱肿瘤细胞增殖及迁移的重要调控因子之一。     

靶向沉默Notch1基因对膀胱癌细胞系T24增殖的影响

目的探讨Notch1基因沉默对人膀胱癌细胞增殖的影响。方法用pGenesil质粒构建靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA1,并将其转染到膀胱癌细胞系T24中,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)检测Notch1沉默后膀胱癌细胞生长变化、细胞周期和凋亡情况。逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记法（Western Blot）检测Notch1基因的mRNA和蛋白在转染前后表达变化。结果转染psiRNA1质粒后T24细胞的生长受到显著抑制,呈一定的时间依赖性（60?h内）,凋亡率增加,G0/G1期细胞明显增多（未转染组、空载体组、阴性对照组）,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且Notch1基因在mRNA和蛋白水平表达相对于对照组明显下调（P＜0.05）。结论沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖,Notch1在膀胱癌中可能具有癌基因的作用。     

RNAi抑制卵巢癌SKOV3细胞MMP-24基因表达及对细胞侵袭的影响

目的 探讨应用RNA干扰技术沉默MMP-24基因表达,研究其对人卵巢上皮癌SKOV3细胞侵袭力的影响.方法 设计合成2条特异性针对MMP-24基因的siRNA,转染至SKOV3中,采用RT-PCR和Western blotting检测MMP-24mRNA和蛋白表达情况,细胞侵袭实验观察转染后细胞侵袭能力的变化.结果 转染siRNA后,卵巢癌细胞MMP-24mRNA表达受抑制,蛋白表达降低,细胞侵袭力减弱.结论 RNAi沉默MMP-24基因可影响卵巢癌细胞的侵袭,有可能成为治疗卵巢癌的新途径.     

BIRC5基因沉默对人膀胱癌细胞系T24增殖抑制的研究

目的 探讨靶向抑制膀胱癌细胞系T24中BIRC5基因的表达后,该基因编码产物Survivin蛋白对膀胱癌增殖的影响.方法 将设计合成的靶向BIRC5序列的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染膀胱癌细胞系T24,应用RT-PCR技术和Western blot方法检测目的基因转录及表达水平.通过生长曲线来检测survivin基因沉默后细胞增殖的改变.结果 特异性siRNA转染后,survivin mRNA及蛋白水平均明显下降.与空白对照组相比较,转染组细胞增殖情况明显受到抑制,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 特异靶向survivin的siRNA能有效抑制survivin的表达,显著抑制细胞的增殖,为膀胱癌的临床治疗提供新方向.     

survivin 靶向siRNA 对膀胱癌细胞增殖和凋亡作用的体外研究

目的 观察靶向survivin的siRNA对膀胱癌细胞T-24增殖和凋亡的影响.方法 使用lipofectamineTM2000将靶向survivin的siRNA真核表达载体转染至膀胱癌细胞T-24,半定量RT-PCR检测T-24细胞survivin基因表达的变化;MTT法检测对T-24细胞增殖的影响;膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术检测诱导凋亡的影响.结果 靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效率抑制T-24细胞survivin基因在基因水平的表达,mRNA抑制率为61.73%;细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为32.42%和37.48%;转染24h后可以诱导细胞凋亡16.76%.结论 利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制T-24细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在膀胱癌的基因治疗中具有一定价值.     

RNA干扰沉默乙酰肝素酶基因对卵巢癌微血管内皮细胞的影响

目的 探讨RNA干扰沉默乙酰肝素酶基因对卵巢癌微血管内皮细胞的影响.方法 实验组为乙酰肝素酶 siRNA转染组(转染组),实验对照为正常组和siRNA空白转染对照组(空白转染组),观察时间为转染后2、4、6、8d .观察血管内皮细胞乙酰肝素酶 siRNA转染效率,用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期变化,免疫荧光、RT-PCR法及WB法检测内皮细胞乙酰肝素酶表达.结果 转染组细胞生长受抑制,增殖指数显著下降,乙酰肝素酶mRNA水平和蛋白水平显著下降,细胞凋亡率显著增加.结论 RNAi可有效沉默卵巢癌微血管内皮细胞乙酰肝素酶表达,提示RNAi可为卵巢癌治疗提供新的途径.     

RNAi抑制食管癌EC109细胞株叶酸受体αmRNA表达的实验研究*

目的 利用RNAi技术特异性抑制食管癌EC109细胞株叶酸受体（folate receptorα,FRα）mRNA表达,研究其对EC109细胞株体外增殖能力的影响。方法 化学合成针对FRα基因三个不同靶点的三条FRαsiRNA（FRαsiRNA1,FRαsiRNA2和FRαsiRNA3）,分别转染EC109细胞株,以未转染细胞为正常对照,转染阴性siRNA的细胞为阴性对照。免疫印迹法检测FRα蛋白表达,CCK8法检测RNA干扰后24 ,48 ,72 ,96h细胞增殖,流式细胞仪检测RNA干扰后24 ,48 ,72 ,96h细胞凋亡。 结果 免疫印迹法提示FRαsiRNA1组FRα表达为正常对照组的14.7%;FRαsiRNA2组FRα表达为正常对照组的55.1%;FRαsiRNA3组FRα表达为正常对照组的62.9%;干扰后细胞增殖情况：干扰后24 ,48 ,72 ,96h细胞存活率均降低,分别为（81.15±1.97）%、（68.18±3.45）%、（49.82±7.64）%、（32.92±2.61）%。干扰后96h细胞存活率最低,与阴性对照组比较差异有统计学意义（P<0.001）;干扰后细胞凋亡情况 24 ,48 ,72 ,96h后干扰组凋亡分别为（3.95±0.45）%、（6.23±1.11）%、（10.00±0.30）%、（3.07±0.40）%,干扰后72h凋亡率最高,与正常对照组和阴性对照组比较差异有统计学意义（P<0.001）。 结论 成功转染并抑制了FRα在食管癌细胞株EC109中的表达,干扰后细胞增殖受抑制,凋亡增加。     

染色质重构复合体蛋白PBRM1对膀胱癌细胞生物学功能的影响

目的探讨染色质重构复合体蛋白PBRM1对膀胱癌细胞株EJ、T24细胞生物学功能的影响。方法针对PBRM1 mRNA序列设计合成siRNA,转染膀胱癌细胞,沉默PBRM1基因后进行如下检测：RT-PCR法检测PBRM1 mRNA表达变化及凋亡、迁移相关指标;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western印迹法检测凋亡蛋白Caspase3表达水平;划痕实验及Matrigel实验检测细胞迁移及侵袭能力变化。结果 PBRM1siRNA能有效抑制膀胱癌细胞中PBRM1的表达。PBRM1基因沉默后,与空白对照组相比,细胞增殖能力显著增强,同时细胞凋亡减少,细胞迁移及侵袭能力明显减弱。凋亡及迁移相关基因mRNA水平及蛋白水平也出现相应变化。结论 PBRM1对膀胱癌细胞株EJ、T24生物学功能有重要影响,可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡、迁移及侵袭。     

Expression of transcription factor Oct4 in bladder cancer cell line T24 and its effects on the biological characteristics of the cells

The expression of octamer binding factor 4 （Oct4） gene in bladder cancer cell line T24 and its effects on the biological characteristics of the cells were investigated. RT-PCR and Western blot were employed to detect the expression of Oct4 in T24 cells. The changes of biological characteristics in T24 cells were analyzed before and after gene-silencing by Boyden chamber and MTT. The results showed that the expression of Oct4 gene was detectable in T24 cells by RT-PCR and Western blot. The expression of Oct4 gene and protein was down-regulated by siRNA, and average number of transwell cells in interference group, negative control group and blank control group was 101.40±54.56, 104.20± 10.03 and 111.00±11.90, respectively. There was significant difference in the proliferation abilit,） of the cells from 48 h, 72 h to 96 h after the interference by siRNA between interference group and negative group or blank control group （P〈0.05）. It was suggested that Oct4 gene was related with proliferation ability of T24 cells, but not with invasive capability.     

siRNA沉默膀胱癌T24细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的研究

目的 研究siRNA对膀胱癌细胞T24 DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的沉默作用.方法 将筛选出的siRNA转染入膀胱癌T24细胞分为空白组、脂质体组、阴性对照组和siRNA组,分别运用RT-PCR、Western blot检测转染后不同时段DNMT1 mRNA水平、蛋白水平变化.结果 筛选出的siRNA转染膀胱癌T24细胞DNMT1 24 h开始出现mRNA减少,24 h、48 h、72 h分别降至(66.05±4.87)％、(39.36±4.53)％和(40.86±4.81)％(P＜0.05).转染后24 h、48 h、72 h蛋白水平分别降至(90.21±3.68)％、(71.45±3.44)％和(67.74±3.38)％(P＜0.05).结论 siRNA能有效地沉默膀胱癌细胞T24 DNMT1的表达.     

靶向sKDR对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察靶向可溶性血管内皮生长因子受体（sKDR）对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨KDR基因作为膀胱癌基因治疗靶点的可行性和有效性。方法：将人膀胱癌细胞T24分为sKDR转染组、未转染组和对照组,构建靶向sKDR真核分泌型表达质粒PCI-KDR,经Lipofctamine^TM2000转染T24细胞,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测能否与VEGF结合,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测稳定表达sKDR的T24细胞KDR基因表达水平,噻唑蓝比色法（MTT）检测sKDR对T24细胞增殖的作用,转移酶末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率,裸鼠皮下移植稳定表达sKDR的T24细胞,观察其成瘤性的改变。结果：与未转染组比较,转染组稳定表达sKDR的T24细胞其KDR mRNA表达水平升高了4.16倍,细胞增殖抑制率增加了55.1%（P<0.01）,细胞增殖速度明显缓慢并出现显著的凋亡峰。在裸鼠体内转染组与未转染组上述各项指标比较差异有显著性（P<0.01）,转染组肿瘤生长明显缓慢,成瘤能力受抑。结论：靶向sKDR能够在很大程度上抑制膀胱癌T24细胞增殖并促进其凋亡。     

高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞增殖及β-catenin表达的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 用含10% FBS的DMEM培养液体外培养膀胱癌T24细胞,将细胞分为5组:空白组(5.5 mmol/L葡萄糖)、对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖组(10、20、30 mmol/L葡萄糖).采用MTT法及克隆形成实验检测高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞增殖的影响;通过实时定量PCR检测膀胱癌T24细胞β-catenin mRNA的表达水平;通过Western blot法检测高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞β-catenin蛋白表达的影响.结果 MTT法及克隆形成实验结果显示,高浓度葡萄糖显著促进膀胱癌T24细胞的增殖(P<0.01);Western blot检测结果显示,高浓度葡萄糖促进T24细胞β-catenin蛋白的表达.实时定量PCR检测结果显示,高浓度葡萄糖促进T24细胞β-catenin mRNA的表达.结论 高浓度葡萄糖明显促进膀胱癌T24细胞的增殖,并促进T24细胞β-catenin蛋白和其mRNA的表达,该作用机制可能与β-catenin表达上调有关.