抑制核转录因子活化逆转胃癌细胞株耐药性研究

目的　探讨核转录因子（ＮＦ-κＢ）的活化在胃癌细胞株耐药性机制中的作用。方法　用阿霉素（ＡＤＭ）诱导培养胃癌细胞耐药亚株ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ,ＭＴＴ法检测ＡＤＭ对胃癌细胞株的细胞毒作用,流式细胞仪检测胃癌细胞株凋亡率的变化,免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞株ＮＦ κＢ的活化情况。吡咯烷二硫代氨基甲酸脂（ＰＴＤＣ）抑制ＮＦ-κＢ活化,并检测ＡＤＭ对胃癌细胞株的细胞毒作用。结果　ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ的ＩＣ_５０为２.６３μｇ／ｍｌ,ＳＧＣ７９０１的ＩＣ_５０为０.２９μｇ／ｍｌ,ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ相对耐药度较亲本细胞提高了８.９倍。４８ｈ内ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞株发生的凋亡率随ＡＤＭ浓度增加而升高,随着作用时间延长而升高;１０μｇ／ｍｌＡＤＭ分别作用４８ｈ时ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞株发生的凋亡率为（４８.５３±１.０２）％和（１７.５３±１.０２）％。免疫细胞化学染色显示ＡＤＭ作用ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞９ｈ后可检测到ＮＦ-κＢ核移位,最高达到６５％;ＡＤＭ作用ＳＧＣ７９０１胃癌细胞株１８ｈ后可检测到少量ＮＦ-κＢ核移位;所有的细胞株ＮＦ-κＢ核移位均于２４ｈ后减弱;ＰＴＤＣ抑制核转录因子活化后ＡＤＭ细胞毒效应增强（Ｐ＜０.０５）。结论　ＮＦ-κＢ活化所导致的胃癌细胞株凋亡率下降在胃癌细胞株耐药性机制中发挥一定作用,抑制ＮＦ-κＢ活化后可以逆转胃癌细胞株对ＡＤＭ耐药性。     

Ｘ线照射诱导人胃癌ＳＧＣ-７９０１细胞生物特性改变以及ＹＫＬ ４０基因表达变化

目的　观察Ｘ线照射后胃癌ＳＧＣ-７９０１细胞形态改变、细胞周期分布情况以及是否可以诱导ＹＫＬ-４０基因的表达。方法　将胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１分为空白对照组（不照射）和实验组（２Ｇｙ／１ｆ和４Ｇｙ／２ｆ）,实验组细胞经６ ＭＶＸ线照射后取两组细胞在倒置显微镜下观察细胞形态学的改变,流式细胞术检测ＳＧＣ-７９０１细胞周期的变化情况,半定量ＲＴ-ＰＣＲ检测基因ＹＫＬ-４０ｍＲＮＡ的表达。结果　实验组（２Ｇｙ／１ｆ）细胞经Ｘ线照射后出现明显的形态学改变;流式细胞检测发现,与空白对照组细胞比较,２Ｇｙ、４Ｇｙ实验组细胞Ｓ期上调,Ｇ₂／Ｍ期下调,组间比较差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。ＲＴ-ＰＣＲ检测胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１不表达ＹＫＬ-４０或检测不到ＹＫＬ-４０ｍＲＮＡ,经Ｘ线照射后ＹＫＬ-４０表达。结论　Ｘ线照射可使人胃癌细胞发生形态改变及细胞增殖周期再分布,并且可诱导人胃癌细胞表达ＹＫＬ-４０。     

胃癌细胞ｐ１６和ＣＤＫ４的表达及调控的分子机制

目的　通过腺病毒携带ｐ１６基因感染胃癌细胞,研究ｐ１６功能恢复对ＣＤＫ４表达的调节作用。方法　构建携带ｐ１６基因的重组腺病毒ＡｄＣＭＶ-ｐ１６感染胃癌细胞系。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ｐ１６和ＣＤＫ４的表达,ＭＴＴ法检测癌细胞的增殖活性,ＤＡＰＩ染色计数癌细胞的凋亡比例。结果　胃癌细胞感染腺病毒载体ＡｄＣＭＶ-ｐ１６后获得ｐ１６表达,对细胞整体ＣＤＫ４表达无影响,但可明显降低细胞核ＣＤＫ４的表达量;ＡｄＣＭＶ-ｐ１６感染后引起癌细胞增殖活性下降,当感染复数（ＭＯＩ）为１、１０、２０时,细胞存活率已经分别低于５０％、２０％和５％;ｐ１６表达可诱导癌细胞凋亡,细胞凋亡率达（１３.８６±４.６５）％。结论　ｐ１６功能恢复后核ＣＤＫ４含量减少,可能是诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡、抑制癌细胞生长的主要分子机制。     

紫杉醇对胃癌细胞株环氧化酶-２表达的影响及其信号转导通路的研究

目的　探讨紫杉醇对胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１环氧化酶-２（ＣＯＸ-２）ｍＲＮＡ表达及其信号传导通路的影响。方法　采用ＭＴＴ法检测紫杉醇不同剂量、不同时间点和Ｐ３８信号通路抑制剂ＳＢ２０３５８０不同剂量对胃腺癌细胞株ＳＧＣ-７９０１生长的影响;在此基础上采用ＲＴ-ＰＣＲ方法检测一定浓度范围内紫杉醇作用ＳＧＣ-７９０１胃癌细胞株２４ｈ以及联合ＳＢ２０３５８０对其ＣＯＸ-２ｍＲＮＡ表达的影响。结果　紫杉醇对胃腺癌细胞株ＳＧＣ-７９０１的生长具有细胞毒作用,呈时间和剂量依赖性;在一定剂量范围和时间点内,随着紫杉醇剂量逐渐升高,胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１的ＣＯＸ-２ｍＲＮＡ表达呈剂量依赖的上升趋势,而随着ＳＢ２０３５８０的剂量增高,则呈下降的趋势。结论　紫杉醇可诱导胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１的ＣＯＸ-２ｍＲＮＡ表达,Ｐ３８信号通路可能是紫杉醇诱导其ＣＯＸ-２表达的通路之一。     

IL—4基因转染人胃癌细胞的实验研究

目的：评价ＩＬ－４基因转染人胃癌细胞株分泌ＩＬ－４的可行性。方法：用脂质体转染法将ＩＬ－４基因转入ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞株，并检测细胞分泌的ＩＬ－４和对ＬＡＫ细胞杀伤肿瘤细胞作用的影响。结果：ＩＬ－４基因可以转染入人胃癌细胞，并表达有活性ＩＬ－４，基因转染可以明显增强ＩＬ－２激活的ＬＡＫ细胞的肿瘤杀伤作用，用大剂量的γ射线照射后，转染细胞仍可以持续分泌ＩＬ－４３～４周期。结论：ＩＬ－４基因转染不改变胃癌细胞的体外生长特性，但可以明显增强抗肿瘤免疫反应     

维生素E琥珀酸酯抑制人胃癌细胞生长作用的研究

目的与方法：本实验采用体外细胞培养的方法,研究了维生素Ｅ琥珀酸酯（ＶＥＳ）对人胃癌ＳＧＣ－７９０１细胞生长和ＤＮＡ合成的影响,并进行了细胞亡形态学观察。结果：ＶＥＳ对ＳＧＣ－７９０１细胞生长和ＤＮＡ合成有明显抑制作用,并呈现剂量－－效应关系。同时,ＶＥＳ也诱导ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡。结论：上述结果提示在离体条件下,ＶＥＳ通过抑制细胞ＤＮＡ合成及诱导细胞凋亡亡抑制ＳＧＣ－７９０１细胞生长。     

放射诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：建立放射诱导胃癌细胞凋亡模型,为进一步研究细胞凋亡分子机理打下基础。方法：用直线加速器１２Ｇy(9MeV)照射培养的人胃癌细胞株ＳＧＣ－７９０１,诱导凋亡发生,检测ＤＮＡ条带变化,电镜观察凋亡小体的出现,流式细胞义检测凋亡率及细胞周期和细胞内Ｃa^2 、cAMP浓度。结果：照射后２小时,即有凋亡细胞出现,在７２小时达高峰,胃癌细胞ＤＮＡ结构断裂,电泳呈梯状带形。胃癌细胞形态学改变出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征。ＦＣＭ检测出现典型的凋亡峰,以Ｇ２－Ｍ期凋亡率为最高,照射后２、２４、４８、７２小时凋亡率分别为１１.26%、38.39%、50.59%及59.47%,胞内Ｃa^2 和cAMP浓度变化也随调亡率增加而升高。结论：照射１２Ｇy(9MeV)诱导胃癌细胞株ＳＧＣ－７９０１发生凋亡,凋亡率在７２小时达高峰。胞内Ｃa^2 和cAMP浓度变化起了相当重要的作用。     

三氧化二砷对人胃癌细胞诱导分化的实验

目的：在三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导凋亡的基础上,探讨低浓度Ａｓ２Ｏ３对胃癌细胞诱导分化的作用。方法：以０．５μｍｏｌ的Ａｓ２Ｏ３处理人胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１和ＭＫＮ４５,观察癌细胞增殖情况;经流式细胞仪检测细胞周期;用免疫组化法检测部分基因表达变化。结果：Ａｓ２Ｏ３处理后：①癌细胞增殖减缓,传至１６代后停止增殖;②４８小时后开始,Ｇ１／Ｇ０期细胞比例增加,Ｓ期细胞比例减少;③ｐ５３和ｂｃｌ－Ｘ     

温热与羟基喜树碱（OPT）联合对胃腺癌（SGC—7901）细胞的作用

以体外长期培养胃低分化腺癌细胞系（ＳＧＣ－７９０１）细胞为模型，采用水浴加温法对细胞的生长抑制规律进行了观察。表明：１）温热、ＯＰＴ对ＳＧＣ－７９０１细胞均有一定的抑制增殖和直接杀伤作用；温热与药物联合应用具有协同抑制增殖和杀伤细胞的作用。２）温热和ＯＰＴ联合对ＳＧＣ－７９０１细胞的杀伤和生长抑制作用均较温热或药物单独作用强，但序贯方面以热药同时为佳。３）温热、ＯＰＴ都可使ＳＧＣ－７９０１细胞结构     

人细胞毒T淋巴细胞杀伤胃癌细胞及诱发凋亡的实验研究

目的　测定特异性细胞毒 T淋巴细胞 (CTL )对胃癌细胞的体外杀伤活性及观察形态学改变。方法　用分离胃腺癌患者的癌细胞经丝裂霉素 C处理后 ,作为抗原与抗CD3单克隆抗体、重组白细胞介素 - 2刺激患者自体外周血单个核细胞 ,体外诱导 CTL,用 MTT比色法测定 CTL 对自体癌细胞、人胃癌细胞株 (BGC- 82 3和 MGC- 80 3)的体外杀伤活性。将 CTL与 BGC- 82 3共同温育 ,通过透射和扫描电镜观察杀伤靶细胞的形态改变。结果　 CTL对自体胃癌细胞有特异性杀伤作用 ,可使靶细胞凋亡或溶解坏死。结论　体外混合细胞培养诱导出的 CTL,对靶细胞有明显的杀伤作用     

死亡受体Fas在TRAIL 联合三氧化二砷诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的： 探讨Fas在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)与三氧化二砷 (arsenic trioxide,As2O3)联合诱导人胃癌细胞凋亡过程中的作用。方法：采用体外培养人低分化胃腺癌细胞SGC-7901,分别以Fas正义、反义寡核苷酸转染SGC-7901细胞获得Sense、Antisense细胞。以0.5 μg/ml As2O3+0.2 μg/ml TRAIL分别处理未转染细胞、Sense组细胞以及Antisense组细胞,采用MTT法检测24、48、72 h后细胞增殖情况;倒置显微镜观察联合作用48 h后细胞集落形态;DAPI染色法、流式细胞仪技术检测48 h时细胞凋亡率;Western blot法检测48 h细胞中Fas、FADD以及Parp表达情况。结果：与未转染组和Sense组细胞比较,转染Fas反义寡核苷酸后,降低了TRAIL与As2O3联合抑制细胞增殖、促进凋亡的作用 (P<0.05),48 h时效果最为明显;荧光显微镜下可见死亡细胞明显减少;Western blot结果显示细胞中Fas、FADD表达降低,Parp活化程度降低 (均P<0.05)。结论：Fas在TRAIL与As2O3联合抑制人胃癌细胞增殖、促进细胞凋亡过程中起重要作用。     

体外扩增CIK细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901

目的：观察CIK细胞增殖情况,了解扩增后的最佳应用时机,并观察体外对SGC-7901的杀伤作用。方法：健康人外周血单核细胞（PBMC）在体外条件下经过多种细胞因子的共同刺激诱导成CIK细胞,计数培养不同时间的CIK细胞,用流式细胞术检测CIK细胞的表型特征。用MTT法检测杀伤活性,对比CIK细胞与5-FU对SGC-7901的杀伤作用,并观察了两者联合应用的效果。结果：CIK细胞随体外培养时间的延长,数量及杀伤活性均增加。体外培养20d增殖124倍,CD3^＋、CD56^＋双阳性细胞的比例达66．1％,其后两者数量增长缓慢;体外实验显示CIK细胞对胃癌SGC-7901细胞株有明显的杀伤作用,最高杀伤效率为73．13％,其杀伤作用优于5-FU,P〈0．05。二者联合应用杀伤作用降低。结论：CIK细胞具有较强的抗胃癌细胞活性;体外培养15～20d时应用较为合适;联合应用时5-FU可降低CIK细胞的杀伤效率。     

沉默ERK5对胃癌SGC-7901、BGC-823细胞生物学功能的影响

目的 探讨沉默细胞外信号调节激酶5（extracellular signal regulated kinase 5,ERK5）对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生物学功能的影响。方法 实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测人胃癌细胞株和人胃黏膜上皮细胞株ERK5 mRNA的表达水平。应用短发荚RNA（shRNA）干扰技术沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达。CCK-8法检测ERK5沉默后胃癌细胞的生长能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布。结果 与胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、AGS、HGC-27中ERK5 mRNA均呈高表达,相对表达量分别为2.696±0.501、1.865±0.185、1.793±0.137和1.530±0.093（P<0.05）。ERK5-shRNA有效沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达水平,沉默效率分别为（74.4±1.5）%和（69.1±3.9）%,差异有统计学意义（P<0.05）。沉默 ERK5的表达能有效抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力（P<0.05）,而促进胃癌细胞凋亡（P<0.05）,并诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 沉默ERK5可显著抑制胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的生长侵袭,促进细胞凋亡,ERK5可能是胃癌治疗的潜在靶点。     

雷帕霉素联合紫杉醇对SGC-7901增殖影响的研究

目的：研究雷帕霉素联合紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测经雷帕霉素、紫杉醇和雷帕霉素＋紫杉醇作用后人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测缺氧诱导因子-la（hypoxia-inducible{actor-1alpha,HIF-1α）及血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）蛋白表达,两因素析因设计方差分析法进行统计分析。结果：雷帕霉素、紫杉醇及雷帕霉素联合紫杉醇处理SGC-7901细胞后细胞增殖抑制率分别为（25．43±1．98）％、（27．28±3．34）％和（53．64±1．99）％,雷帕霉素或紫杉醇单独作用均可抑制细胞增殖,联合作用对细胞增殖抑制率影响极显著,F-57．471,P〈0．001;两药联合指数〉1．15,雷帕霉素和紫杉醇具有协同作用。雷帕霉素、紫杉醇及雷帕霉素联合紫杉醇处理SGC-7901细胞后细胞凋亡率分别为（16．25±1．86）％、（21．80±3．12）％和（38．60±3．78）％,雷帕霉素或紫杉醇单独作用均可诱导细胞凋亡,两药联用细胞凋亡率显著增加,P=O．0163;雷帕霉素和紫杉醇具有协同诱导SGC-7901细胞凋亡作用。紫杉醇处理细胞后,HIF-1α及VEGF蛋白相对表达量分别为0．598±0．089和0．4204±0．091,VEGF蛋白表达下降,P=0．001;而HIF_1a蛋白表达无明显变化,P=0．434。雷帕霉素处理细胞后,HIF-1d及VEGF蛋白相对表达量分别为0．416±0．034和0．376土0．022,表达均显著下降,P值分别为0．016和0．001;而两药联合处理细胞后,HIF-1α及VEGF蛋白相对表达分别为0．209±0．027和0．156±0．015,均显著降低,F值分别为18．322和25．525,P值均为0．001。2种药物对SGC-7901细胞HIF-1aTYcVEGF蛋白表达抑制起到了显著的协同作用。结论：雷帕霉素联合紫杉醇可显著抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导凋亡,2种药物具有协同抗肿瘤作用。     

hTERT启动子调控的CD：UPRT／5-FC自杀基因对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：研究人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的胞嘧啶脱氨酶：尿嘧啶磷酸核糖转移酶／5-氟胞嘧啶（CD：UPRT／5-FC）融合自杀基因系统在体内对人胃癌SGC7901细胞的杀伤作用。方法：构建胃癌皮下移植瘤模型,随机分成3组处理。观察30天,测量肿瘤体积,计算抑瘤率。肿瘤组织做常规病理检查,免疫组化检测CD蛋白的表达。结果：成功构建胃癌皮下移植瘤模型。治疗30天后,B组（瘤内注射hTERT—CD：UPRT＋腹腔注射PBS）和c组（单纯腹腔注射PBS）的肿瘤生长迅速,肿瘤体积分别为（2．72±0．35）cm’、（2．67-＇i-0．30）tin’,A组（瘤内注射hTERT—CD：UPRT＋腹腔注射5-Fc）的肿瘤生长受到明显抑制,第30天体积为（1．10±0．13）cm’,与前两组相比差异有统计学意义（P〈0．05）,其抑瘤率为59．6％。裸鼠移植瘤病理切片镜检,A组可见大量肿瘤细胞排列稀疏,部分肿瘤细胞核固缩、核碎裂;B组和C组则见大量肿瘤细胞排列紧密,细胞形态和细胞核呈多形性,核大深染,核分裂像多见。免疫组化显示,A组和B组可见CD的表达,C组cD表达呈阴性。结论：hTERT启动子调控的cD：UPRT／5-FC融合自杀基因系统对裸鼠胃癌皮下移植瘤有显著的杀伤作用,为胃癌的基因治疗提供了-种可能的方法。     

多烯磷脂酰胆碱与奥沙利铂协同抗胃癌细胞增殖的研究

目的 探讨多烯磷脂酰胆碱联合奥沙利铂对胃癌细胞增殖的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测多烯磷脂酰胆碱、奥沙利铂及两药联合对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术检测各组细胞周期分布及凋亡情况;Western blotting检测各组凋亡相关蛋白细胞色素c、Bcl-2、Bax、caspase-9、caspase-3和细胞周期调控蛋白细胞因子D1、细胞因子E的表达水平。结果 奥沙利铂显著抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;多烯磷脂酰胆碱促进胃癌SGC-7901细胞增殖,其作用呈剂量依赖性（P＜0.05）;两药联合表现为协同作用,与奥沙利铂单药组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。奥沙利铂使胃癌细胞增殖停滞在G0／G1期,并具有诱导胃癌细胞凋亡的作用;多烯磷脂酰胆碱可增强奥沙利铂诱导细胞凋亡及细胞周期停滞的作用,但这两种增强作用均与多烯磷脂酰胆碱的浓度无关（P＞0.05）。Western blotting检测结果显示,多烯磷脂酰胆碱联合奥沙利铂上调细胞色素c的水平并激活其下游蛋白Bcl-2、Bax、caspase-9、caspase-3,下调细胞因子D1、细胞因子E的表达水平。结论 多烯磷脂酰胆碱与奥沙利铂可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和诱导细胞凋亡,将细胞阻滞于G0／G1期,两药联合可能会产生协同抗肿瘤的作用。     

异隐丹参酮对胃癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 探讨异隐丹参酮（ICTS）对胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖、周期、凋亡的影响及可能机制。方法 体外培养胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901,采用0、5、10、20 μmol／L ICTS处理24、48、72 h后, CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;确定ICTS抑制BGC-823和SGC-7901细胞的最佳浓度和最佳作用时间后,流式细胞术检测其细胞周期和凋亡率。Western blotting检测ICTS处理后胃癌细胞中Cyclin D1、Bcl-2、p53、p21蛋白的表达。结果 0、5、10、20 μmol／L ICTS处理BGC-823细胞24 h的增殖抑制率分别为（0.789±0.048）％、（16.74±1.55）％、（33.58±2.26）％、（54.62±2.61）％,差异具有统计学意义（P＜0.05）;0、5、10、20 μmol／L ICTS 处理SGC-7901细胞24 h的增殖抑制率分别为（-0.184±0.023）％、（12.76±1.73）％、（32.95±2.47）％、（53.80±2.65）％,差异具有统计学意义（P＜0.05）。20 μmol／L ICTS 处理BGC-823细胞24、48、72 h的增殖抑制率分别为（54.62±2.61）％、（55.08±2.35）％、（59.72±2.53）％,差异无统计学意义（P＞0.05）;20 μmol／L ICTS 处理SGC-7901细胞24、48、72 h的增殖抑制率分别为（53.80±2.65）％、（55.76±2.47）％、（61.83±2.82）％,差异无统计学意义（P＞0.05）。20 μmol／L ICTS处理BGC-823、SGC-7901细胞24 h后G0／G1期细胞比例为（78.34±7.13）％和（79.57±7.34）％,均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。ICTS处理组BGC-823、SGC-7901凋亡率分别为（24.78±3.42）％和（28.76±4.21）％,均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。20 μmol／L ICTS处理BGC-823、SGC-7901细胞24 h后Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达量均显著低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;p53和p21蛋白表达量显著高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ICTS通过增加p53、p21表达,降低Cyclin D1和Bcl-2表达,进而抑制细胞增殖,增加细胞G0／G1阻滞和凋亡,发挥抗胃癌的作用。     

Puma基因转染对胃癌SGC-7901细胞的促凋亡作用及机制

[目的]探讨puma基因转染对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。[方法]应用脂质体介导重组真核表达载体pEGFP-C1-PUMA瞬时转染至SGC-7901细胞。分别用荧光显微镜和RT—PCR法检测外源基因的表达，MTF比色法测定细胞增殖的抑制，Hoechst33342染色法检测细胞凋亡，流式细胞仪检测细胞周期和线粒体膜电位的变化，Westernblot检测细胞色素C（CytC）和凋亡诱导因子（AIF）的转位。[结果]外源性puma基因在pEGFP—C1-PUMA转染的SGC-7901细胞中实现了表达。PUMA表达使SGC-7901细胞的增殖能力降低并诱导凋亡，转染24、48、72h的生长抑制率分别为19．3％、34．7％、42．2％，凋亡率分别为19．6％、35．4％、46．6％。PUMA表达的SGC-7901细胞DNA合成受到抑制，周期阻滞在GgG1期；线粒体膜电位明显下降，CytC、AIF从线粒体进入胞浆。[结论]puma基因转染可有效抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖，促进其凋亡。促凋亡机制主要是线粒体途径，与线粒体膜电位降低和CytC、AIF从线粒体释放有关。     

丹参酮Ⅰ对人胃腺癌细胞SGC-7901增殖、凋亡的影响

目的：研究丹参酮I（Tan I）对SGC-7901人胃腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法：体外培养SGC-7901细胞,实验分为对照组,5-FU250μg/ml,Tan I 0.5μg/ml,Tan I 1μg/ml,Tan I 2μg/ml,Tan I 4μg/ml。MTT法检测SCG-7901细胞增殖情况;Hoechst33258/PI双荧光活染法观察凋亡细胞核形态学改变;流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫细胞化学SABC法检测SGC-7901人胃腺癌细胞中Bcl-2的表达。结果：Tan I对胃腺癌细胞的生长有明显的抑制作用;Tan I作用后胃腺癌细胞表现为凋亡特征性的形态改变;Tan I可浓度依赖性引起G1期细胞数量增多,S期细胞减少;Tan I作用组胃腺癌细胞Bcl-2表达明显减少。结论：TanI对体外培养的SGC-7901人胃腺癌细胞的生长有明显的抑制作用,可通过促进其凋亡、影响细胞周期分布及抑制SGC-7901人胃腺癌细胞Bcl-2的表达发挥其抗肿瘤作用。     

缺氧对于人胃腺癌SGC-7901细胞MTA1表达及侵袭力的影响

目的：研究缺氧对胃腺癌细胞生物学行为的影响及可能机制。方法：对人胃腺癌SGC-7901细胞进行缺氧培养,对照组有氧培养,用Transwell实验检测两组细胞的侵袭能力,用Western blot法和RT-PCR检测两组细胞MTA1表达情况。结果：实验组细胞侵袭能力增加,穿过膜细胞数明显高于对照组[（28±5.6）/HPF vs（13±4.1）/HPF,P〈0.05];MTA1 mRNA表达水平明显高于对照组（P〈0.05）,实验组中MTA1蛋白相对含量也明显高于对照组（P〈0.05）。结论：缺氧导致SGC-7901细胞侵袭能力增加,这与其使细胞中MTA1表达增加有关。