胃癌中硒结合蛋白-1的表达及其临床病理学意义

目的 检测硒结合蛋白1(SBP1)在胃癌细胞系SGC7901、BGC823、正常胃黏膜上皮细胞系GES-1、胃癌组织以及正常胃黏膜组织中的表达水平,分析其表达变化与胃癌临床病理因素之间的联系,探讨其作为胃癌标记物的可能性.方法 回顾性分析2006年至2007年武汉大学中南医院收治的135例胃癌患者的临床资料,利用免疫组织化学染色法对胃癌组织及16例正常胃黏膜组织中SBP1蛋白表达部位及水平进行测定,并进行半定量评分.Western blot和RT-PCR检测细胞系SGC7901、BGC823、GES-1中SBP1蛋白和mRNA的表达水平.组间比较采用单因素方差分析,SBP1表达强度与临床病理因素的关系采用x2检验.结果 SBP1 mRNA在胃癌细胞系BGC823、SGC7901中的表达分别为0.120±0.020、0.133±0.015,显著低于其在正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中的表达(0.907±0.015)(F=2106.462,P＜0.05).胃癌细胞系BGC823、SGC7901中的SBP1蛋白表达分别为0.253±0.015、0.273±0.015,显著低于其在正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中的表达水平(0.877±0.025)(F=1026.758,P＜0.05).3例胃癌组织中SBP1呈强免疫反应,而16例正常胃黏膜中SBP1呈强免疫反应.SBP1蛋白表达减少与胃癌患者临床分期相关(x2=12.629,P＜0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤组织学分型、分化程度、浸润深度以及淋巴结转移无关(x2=2.142,0.860,1.838,5.001,4.858,1.994,P＞0.05).结论 SBP1表达减少可以作为一种胃癌诊断的新指标.SBP1下调在胃癌发生及进展中可能发挥着重要作用.     

SIRT1蛋白在胃癌中的表达及其与P-gp、Top-Ⅱα关系的研究

目的:探讨SIRT1蛋白在胃癌组织和细胞中的表达,分析SIRT1蛋白表达与耐药相关蛋白P-gp和Top-IIα的相关性。方法:免疫组化SP法检测SIRT1、P-gp及Top-IIα蛋白在15例胃癌组织和15例正常胃黏膜组织中的表达。Western blot检测正常人胃黏膜上皮细胞株GES-1和人胃癌细胞株SGC7901、MKN45、MKN28、HGC27、AGS、MGC803中SIRT1蛋白的表达;检测GES-1、SGC7901及MKN45中的SIRT1、P-gp和Top-IIα的蛋白表达;siRNA-SIRT1/脂质体转染胃癌细胞SGC7901后,Western blot检测SIRT1、P-gp和Top-IIα的蛋白表达变化;MTT检测SGC7901细胞的体外增殖能力变化及对化疗药物5-Fu的敏感性变化。结果:15例胃癌组织中SIRT1蛋白表达阳性15例,P-gp蛋白表达阳性13例,Top-IIα蛋白表达阳性3例;15例正常胃黏膜中SIRT1蛋白表达阳性6例,P-gp蛋白表达阳性5例,Top-IIα蛋白表达阳性0例。GES-1、SGC7901、MKN45、MKN28、HGC27、AGS、MGC803中SIRT1相对蛋白表达量平均值分别为0.385、0.827、0.009、0.232、0.275、0.159、0.117;GES-1、SGC7901、MKN45中的P-gp相对蛋白表达量平均值分别为0.339、0.526、1.03;Top-IIα的蛋白相对表达量分别为0.093、0.889、0.158。siRNA-SIRT1转染SGC7901 8 h,培养72 h后检测control、BC-V、negative、siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3的SIRT1相对蛋白表达量平均值分别为0.965、0.937、0.958、0.567、0.253、0.083;P-gp相对蛋白表达量平均值分别为1.893、1.905、1.932、0.465、0.006、0.005;Top-IIα的蛋白相对表达量分别为0.09、0.07、0.073、0.085、0.168、0.195。MTT结果显示抑制SIRT1蛋白表达后,SGC7901体外增殖能力无明显变化,对化疗药物5-Fu的敏感性显著增加。结论:SIRT1在胃癌组织中过表达,且过表达的胃癌组织、细胞中SIRT1扮演促癌因子角色;SIRT1蛋白过表达能促进P-gp蛋白表达,降低Top-IIα蛋白表达,导致胃癌细胞化疗多重耐药性的增加。     

lncRNA HAGLR通过靶向miR-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HAGLR通过靶基因微小RNA(miR)-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞株(HS-746T、BGC823、SGC7901、MGC803)和正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)中HAGLR的表达水平。选择HA...     

沉默信息调节因子1对胃癌侵袭的影响及其机理研究

目的 研究沉默信息调节因子1 （SIRT1）蛋白在胃癌组织中的表达及其对胃癌侵袭的影响和可能机理。方法 采用免疫组化SP法检测46例胃癌组织中SIRT1和血管内皮生长因子A （VEGF-A）蛋白的表达;采用Kaplan-Meier法分析SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白表达对胃癌患者预后的影响;采用Western blot法检测GES-1人胃黏膜细胞株及SGC7901人胃癌细胞株中SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白的表达;采用siRNA小干扰技术特异性干扰SGC7901细胞株中SIRT1基因的表达后,检测SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白的表达;通过细胞侵袭实验检测不同处理后SGC7901细胞侵袭能力的变化。结果 与正常胃黏膜组织比较,胃癌组织中SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白均呈高表达（P＜0.050）。SIRT1蛋白阳性表达患者的生存情况较差（P=0.001）,SIRT1及VEGF-A蛋白均呈阳性表达者的生存情况较差（P=0.006）,但VEGF-A蛋白表达与胃癌患者的预后无关（P=0.091）。SGC7901细胞中SIRT1蛋白（P=0.010） 和VEGF-A蛋白（P=0.020） 的表达较GES-1细胞上调。构建SIRT1-siRNA特异性抑制SIRT1基因的表达后（siRNA阳性组）,SIRT1蛋白和VGEF-A蛋白的表达均下调（P=0.010）,且SGC7901细胞的侵袭能力下降（P=0.000）。结论 SIRT1基因可能通过促进VEGF-A蛋白的表达而促进胃癌的侵袭,其可能是抑制胃癌侵袭的一个治疗靶点。     

MsrA在胃癌组织中的表达及意义

目的：探讨MsrA在胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织中的表达及意义。 方法：采用免疫组织化学法和实时荧光定量RT-PCR法检测57例胃癌组织与癌旁正常胃黏膜组织中MsrA的表达。 结果：胃癌组织中MsrA的表达率及表达强度均低于癌旁正常胃黏膜组织（P<0.001）;胃癌组织MsrA mRNA相对量的中位数为3.757,癌旁正常胃黏膜组织中MsrA mRNA相对量的中位数为5.240,胃癌组织中MsrA mRNA的表达水平低于癌旁正常胃黏膜组织（P=0.016）。 结论：胃癌组织中MsrA的表达水平较正常组织下调。

     

矢车菊素-3-葡萄糖苷对胃癌细胞侵袭转移的影响

目的 观察矢车菊素-3-葡萄糖苷(C3G)对人胃癌细胞株MGC803和SGC7901增殖、迁移和侵袭运动能力的影响,并初步探讨其可能的机制.方法 用C3G处理人胃癌MGC803和SGC7901细胞株,用MTF比色法检测C3G对该细胞系增殖的抑制作用,Transwe1l小室进行迁移实验和人工重组基底膜侵袭实验.用RT-PCR及Western blot方法检测用药前后肿瘤细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因和蛋白的表达水平.结果 C3G在体外明显抑制人胃癌MGC803和SGC7901细胞的增殖,且呈浓度、时间依赖性(P＜0.01),MGC803 24 hIC50=6.27μg/ml,SCC7901 24 h IC50=5.42 μg/ml.经C3G处理后,MGC803和SGC7901细胞迁移、侵袭能力明显降低(P＜0.01),MGC803和SGC7901阴性对照组24 h侵袭细胞数分别为(207±9)个和(115±9)个,C3G 10 μg/ml组侵袭细胞数则分别减少至(24±5)个和(14±6)个.MMP-2基因和蛋白表达水平显著下降(P＜0.01),且呈现浓度依赖性.结论 C3G具有体外抗胃癌细胞增殖的作用,且可能通过抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭运动能力来发挥预防肿瘤侵袭的作用,其机制可能与抑制MMP-2的生成有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of cyanidin-3-glucoside extracted from Chinese bayberry on the proliferation. migration and invasion ability of the gastric cancer cell lines MGC803 and SGC7901 in vitro, and explore the possible mechanism of the preventive effects of C3G on tumor metastasis.Methods After treatment by C3G, the growth inhibiting of C3G on MGC803 and SGC7901 was determined by MTF assay, cell migration and invasion ability was evaluated with transwell chamber. Expression of Matrix metalloproteinase 2( MMP-2 )mRNA and protion on cells were analyzed by RT-PCR and Western blot.Results C3G significantly inhibited the proliferation of MGC803 and SGC7901 cells in a concentration and time-dependent manner as measured by MTT method ( P ＜0. 01 ), and the IC50 were: MGC803:24 h IC50 =6. 27 μg/ml;SGC7901:24 h IC50 = 5.42 μg/ml. After the cells were treated with C3G, the migration and invasion ability of MGC803 and SGC7901 cells decreased significantly ( P ＜ 0. 01 ) the number of invasive cells in 24 hours of the negative control MGC803, SGC7901 group was ( 207 ± 9 ) and ( 115 ± 9 ),respectively, while in C3G 10 μg/ml group the number of invasive cells decreased to( 24 ± 5 ) , ( 14 ± 6). In addition, the expression of MMP-2 mRNA and protion decreased abviously ( P ＜ 0. 01 ), all that was in a concentration-dependent manner. Conclusions In vitro, C3G has a concentration- and time-dependent growth inhibiting effect on MGC803 and SGC7901 cells, and may prevent metastasis by affecting migration and invasion ability of tumor cells. This action may be mediated by down-regulation of MMP-2mRNA and protein.     

E2F-1蛋白在胃癌中的表达及意义

目的探讨E2F-1蛋白在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达与意义。方法采用免疫组化技术对80例原发性胃癌癌组织与癌旁黏膜中E2F-1的表达进行检测，同时对40例正常胃黏膜组织进行对照性研究，并进行统计学分析。结果E2F-1在癌组织与癌旁黏膜中的阳性表达率为72．5％（58／80）和30．0％（24／80），在正常胃黏膜组织中的阳性表达率为22．5％（9／40），差异有非常显著性（P〈0．001）。癌组织、癌旁黏膜中E2F-1的表达在不同的临床病理特征之间差异无显著性（P〉0．05）。结论E2F-1蛋白在胃癌组织中超表达，E2F-1的反常表达与胃癌的发生有关。     

黏着斑激酶的高表达与人胃癌侵袭和转移的关系

目的 探讨胃癌侵袭和转移过程中黏着斑激酶（FAK）的表达与其生物学行为的关系。方法 用免疫组化SABC法检测10例行胃癌根治术所收集的癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织和胃区域淋巴结标本中FAK的表达情况。结果FAK表达强阳性率在胃癌组织中（78．0％）明显高于正常胃黏膜组织（10．0％）及癌旁组织（20．0％），P〈0．01，正常胃黏膜组织与癌旁组织中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。FAK表达强阳性率在淋巴结有转移和无转移患者中分别是68．8％（22／32）和33．3％（6／18），前者明显高于后者（P〈0．05）；在有转移的淋巴结中和无转移的淋巴结中分别是87．2％（136／156）和40．9％（18／44），前者明显高于后者（P〈0．01）；FAK表达强阳性率与胃癌浸润深度和分化程度有关，浸润深度越深，细胞分化越低，表达强阳性率越高（P〈0．05）；与Borrmann分型、肿瘤部位及大小无关（P〉0．05）。结论 FAK表达与胃癌发生、发展有关，FAK表达增高是胃癌细胞浸润和转移的重要原因之一，检测癌组织中FAK表达水平，有助于进一步了解胃癌的生物学行为，有利于治疗与预后判断。     

microRNA-124对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系

背景与目的:研究显示,microRNA-124(miR-124)在多种肿瘤中发挥抑癌基因的功能,并且在胃癌细胞及组织中表达下调,在胃癌的发生发展中发挥重要调控作用。本研究探讨miR-124对人胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系。方法:用qRT-PCR检测人胃癌细胞系MGC803、AGS、MNK-45、SGC-7901和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-124的表达。用miR-124模拟物(miR-124模拟物组)及miR-124阴性对照序列(阴性对照组)分别转染至MGC803细胞后,用CCK-8法及细胞克隆实验检测MGC803细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K、Akt、p-PI3K和p-Akt蛋白水平,qRT-PCR检测PI3K和Akt mRNA 表达。结果:与人正常胃黏膜上皮细胞GES-1比较,miR-124在各胃癌细胞中的表达均明显降低(均P0.05)。与阴性对照组比较,miR-124模拟物组转染后的OD450值与细胞克隆形成数均明显降低(P0.05);细胞凋亡率明显增加(P0.05);PI3K/Akt信号通路中关键分子PI3K、Akt、p-PI3K和p-Akt蛋白水平明显降低(均P0.05),PI3K和Akt基因表达水平也明显降低(均P0.01)。结论:miR-124表达的下调可促进胃癌细胞的增殖、抑制其凋亡,该作用机制可能与PI3K/Akt信号通路活化有关。     

真核起始因子4A1在胃癌中的表达及其在胃癌细胞增殖、侵袭及迁移中的作用

目的:探讨真核起始因子4A1(eIF4A1)在胃癌中的表达及其在胃癌细胞增殖、侵袭及迁移中的作用。方法:收集116对胃癌组织及相应的癌旁正常组织,用免疫组化、RT-PCR及Western blot检测eIF4A1的表达;用MTT法检测不同浓度的eIF4A1抑制剂hippuristanol(0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L)对胃癌细胞株AGS、MGC-803及正常胃黏膜细胞GES-1增殖的影响;Transwell及划痕实验检测hippuristanol对胃癌细胞株的侵袭和迁移能力的影响。结果:免疫组化结果显示,eIF4A1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P0.05),RT-PCR及Western blot验证结果与免疫组化结果一致。MTT结果显示,hippuristanol呈浓度与时间依赖性抑制胃癌细胞株AGS、MGC-803的增殖,而达0.5μmol/L以上时才对正常胃黏膜细胞GES-1的增殖有抑制作用(均P0.05);用0.125μmol/L的hippuristanol处理的AGS、MGC-803细胞24 h后,两种细胞的侵袭能力及迁移能力均明显下降(均P0.05)。结论:eIF4A1在胃癌中呈高表达,且与胃癌细胞的恶性特征密切相关,eIF4A1抑制剂有望成为治疗胃癌的候选药物。     

肿瘤抗原相关基因 MPS- 1在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨肿瘤抗原相关基因 MPS- 1在胃癌组织和细胞中的表达及其临床意义.方法采用逆转录聚合酶链反应( RT- PCR)和 Western印迹,检测 42例胃癌组织及其相应正常黏膜组织以及 AGS、 MKN- 45、 SGC 7901、 KATOⅢ、 N- 87和 SNU- 1 6株胃癌细胞中 MPS- 1的表达情况.结果 MPS- 1 mRNA在胃癌组织和细胞株中均有表达. MPS- 1 mRNA在胃癌组织中的表达水平为 1.37± 0.87,明显高于其在相应正常黏膜组织中的表达( 0.99± 0.67, P< 0.01). MPS- 1的表达与肿瘤的临床分期相关, TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期标本中的表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期的标本( P< 0.05);但与肿瘤患者的性别、年龄、肿瘤大小和分化程度无关.同时, MPS- 1在 6株胃癌细胞中的表达高于胃正常黏膜上皮细胞 GES- 1, RT- PCR与 Western印迹结果一致.结论胃癌抗原相关基因 MPS- 1可能在胃癌的恶性转变中发挥一定的作用,为今后胃癌免疫治疗提供了又一新的靶点.     

Beclin-1在胃癌血管生成拟态形成中的表达及意义

目的 探讨胃癌细胞SGC7901在体外血管生成拟态（VM）的形成过程中,自噬特异性基因Beclin-1的表达情况及其对VM形成的影响.方法 分别将ShRNA整合质粒载体和空白质粒载体转染到胃癌细胞SGC7901中,采用RT-PCR及Western blot法检测SGC7901细胞中Beclin-1表达情况;并在体外构建VM模型,观察不同转染细胞中VM形成能力的差异,同时检测VM形成前后细胞中VM形成基因Notch-1的表达情况.结果 胃癌SGC7901形成VM过程中,Beclin-1及Notch-1 mRNA和蛋白表达均明显升高（均P＜0.05）.与转染空白质粒的SGC7901细胞相比,转染ShRNA整合质粒抑制Beclin-1后,VM形成的细胞管状结构的数目[（15.4±1.1）个比（37.8±1.9）个,P＜0.05]、长度[（316.8±24.6） mm比（385.1±14.2） mm,P＜0.05]和交点数[（11.6±1.1）个比（27.2±1.1）个,P＜0.05]明显减少,同时Notch-1表达亦明显下降（P＜0.05）.结论 Beclin-1通过维持胃癌细胞VM调节基因的稳定表达促使VM形成,抑制Beclin-1为胃癌的基因治疗提供了一个可能的新靶点.     

Notchl和NUMB在胃癌组织中的表达水平及其意义

目的研究Notchl和NUMB在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌临床病理特征的关系。方法采用Real—time PCR和Western blotting检测胃癌肿瘤组织和相应正常组织内Notchl和NUMB的表达。结果Notchl mRNA在胃癌中的平均表达水平是正常胃组织的1．67倍（P〈0．05）,且与肿瘤的分化程度和淋巴转移有关。NUMB mRNA在胃癌中的平均表达水平仅是正常胃组织的0．597倍（P〈0．05）,与肿瘤分化程度有关。Notchl和NUMB在胃癌组织中的表达呈负相关关系（r=-0．459,P〈0．05）。胃癌肿瘤组织中Notchl蛋白的相对含量为（0．348±0．133）,明显高于正常组织中Notchl蛋白的相对含量（0．208±0．140）（P〈0．05）,胃癌肿瘤组织中NUMB蛋白的相对含量为（0．490±0．440）,明显低于正常组织中NUMB蛋白的相对含量（0．746±0．390）（P〈0．05）。结论在胃癌中存在Notch信号转导通路的过度活化,Notchl的上调和NUMB的下调在胃癌发生、发展中可能发挥重要的作用。     

CD133通过上皮间质转化促进胃癌侵袭和转移的研究

目的观察胃癌细胞CDl33表达与胃癌侵袭的关系,进而探讨其是否通过上皮间质转化（EMT）促进胃癌侵袭和转移。方法通过免疫磁珠分选技术,将KATO-Ⅲ细胞分为CDl33阳性细胞和CDl33阴性细胞,利用Transwell小室法检测其侵袭能力,并通过Western blot和RT-PCR方法检测siRNA干扰CDl33基因沉默前后其EMT相关因子的表达差异。Western blot法检测50例胃癌组织及癌旁组织CDl33和EMT相关因子的表达．并分析其相关性。结果CDl33阳性组穿膜细胞数（67．7±10．5）显著高于CDl33阴性组（13．3±6．8,P=0．001）。CDl33阳性细胞中Snail和N-cadherinmRNA及蛋白表达显著高于CDl33阴性细胞．而E-cadherin表达则明显低于CDl33阴性细胞（均P〈0．05）。siRNA干扰后,Snail和N-cadherinmRNA及蛋白表达明显下调,而E-cadherin表达则显著上升（均P〈0．05）。胃癌组织中CDl33、Snail及N-cadherin蛋白相对表达为0．635±0．119、0．599±0．114及0．754±0．154,明显高于癌旁组织的0．485±0．116（P=0．029）、0．259±0．108（P=0．020）和0．329±0．134（P=0．001）,而E-cadherin蛋白表达相对表达为0．378±0．123,明显低于癌旁组织的0．752±0．156（P=O．003）。相关分析显示,Snail及N-cadherin的表达与CDl33表达呈正相关（P〈0．05）,而E-cadherin的表达则与CDl33表达呈负相关（P〈O．05）。结论CDl33阳性胃癌细胞具有更强的侵袭能力,并可能通过EMT促进胃癌的侵袭和转移。     

抑制HO-1基因表达对人胃癌细胞系SGC-7901的影响

目的：通过构建shRNA沉默HO-1基因,研究抑制HO-1基因表达对胃癌细胞系SGC-7901的影响。方法：构建靶向HO-1基因的shRNA干扰质粒转染人胃癌细胞系SGC-7901,荧光共聚焦显微镜下观察转染效率;应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、细胞免疫化学法分别在基因、蛋白质水平检测HO-1基因的抑制效果;应用MTT法检测HO-1基因沉默后胃癌细胞的生长情况。结果：与对照组比较,shRNA在基因、蛋白质水平特异地抑制了胃癌细胞SGC-7901中HO-1的表达,抑制率分别为62.4%、67.6%;HO-1的表达被抑制后,胃癌细胞SGC-7901生长受抑制（P〈0.05）。结论：shRNA-HO-1可有效抑制胃癌细胞中HO-1的表达;HO-1的沉默表达可抑制肿瘤细胞生长。     

载脂蛋白M在结直肠癌组织中的表达及其临床病理相关性

目的探讨载脂蛋白M（apoM）在结直肠癌组织中表达水平的变化及其临床相关性。方法采用荧光定量PCR检测20例结直肠癌组织及其癌旁组织中apoM的mRNA表达：采用免疫组织化学方法检测7例正常肠黏膜、6例肠炎组织、10例肠息肉、20例结直肠癌及其癌旁组织中apoM的蛋白表达水平。结果apoMmRNA在结直肠癌组织和癌旁组织中均有表达．前者相对表达量显著低于后者（0．05±0．01比0．19±0．05,P〈0．05）。无淋巴结转移者apoMmRNA表达水平显著低于有淋巴结转移者（P〈0．01）。结直肠癌组织中apoM蛋白表达中位分值为5．50．显著低于癌旁组织（10．5,P〈0．05）、肠炎组织（9．75,P〈0．05）、肠息肉组织（11．0,P〈0．01）及正常黏膜组织（10．5,P〈0．05）。未见结肠癌组织中apoM蛋白水平与患者临床病理特征有关（P〉0．05）。结论载脂蛋白apoM在肠癌组织中的mRNA及蛋白水平较正常组织及良性病变组织显著降低。结直肠癌组织中apoMmRNA表达水平与淋巴结转移有关。     

S100A6对胃癌细胞侵袭转移的调控机制研究

目的探讨S100A6过表达对胃癌细胞侵袭转移的调控机制。方法收集1995年1月至2001年12月间经病理确诊的166例胃癌标本及其对应的癌旁组织、肝转移组织和淋巴结转移组织标本,采用免疫组织化学染色法检测标本中S100A6蛋白的表达情况及其与临床病理因素的关系：通过ChIP—Chip方法检测胃癌细胞株KAT03中S100A6可能调控的下游因子;将S100A6基因转染入胃癌细胞株AGS,通过细胞侵袭实验、RTQ—PCR方法分别检测转染组、阴性对照组和空白对照组中细胞的侵袭能力和侵袭转移相关因子CDK5和FLJ12438的mRNA表达。结果S100A6蛋白在癌旁组织细胞质中偶有低表达;而在胃癌、肝及淋巴结转移灶组织的肿瘤细胞质和（或）细胞核中均有高表达,且在侵袭边缘的肿瘤细胞的细胞核中表达较高,其高表达率为分别为67．5％（112／166）、92．9％（26／28）和100％（30／30）。S100A6表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、脉管癌栓、远处转移及TNM分期有关（均P〈0．05）。S100A6可能作用于26个细胞侵袭转移有关基因的启动子部位。SIOOA6转染组的过膜细胞数为31．3±5．5,多于阴性对照组的7．7±1．5和空白对照组的9.3±2．1,差异有统计学意义（均P〈0．05）。CDK5mRNA在转染组中的表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组（均P〈0．05）,而FLJ1243mRNA在转染组中的表达水平与另外两组的差异则无统计学意义（均P〉0．05）。结论S100A6可能通过调控下游侵袭相关因子如CDK5的表达,进而影响胃癌细胞的侵袭转移等恶性生物学行为。     

胃癌CD133阳性细胞亚群肿瘤起始细胞样特性的检测

目的 探讨人胃癌细胞CD133＋亚群的分选及其特性的鉴定.方法 对50例胃癌原发灶和癌旁胃黏膜组织标本行免疫组织化学染色及Western blot检测CD133蛋白的表达.采用流式细胞仪检测不同分化胃癌细胞系CD133所占百分比,免疫磁珠法分选CD133＋细胞亚群,悬浮培养并观察其生长特性,并检测CD133阳性细胞裸鼠皮下接种致瘤能力.单细胞克隆观察单个CD133＋细胞生长特性,半定量反转录聚合酶链反应法鉴定相关干细胞标记的表达.结果 CD133蛋白多定位于胃癌原发灶黏膜及黏膜下层的肿瘤细胞膜表面,其相对表达量高于癌旁胃黏膜组织（P＜0.05）.不同分化程度的人胃癌细胞系KATO-Ⅲ、SGC-7901、AGS及MKN-45中CD 133＋亚群所占相对百分比为（28±2）％、（17±2）％、（6±2）％及（4±2）％.人胃癌细胞系KATO-Ⅲ分选后阳性组中CD133＋亚群比例分别为（91±3）％;培养1周后,达到（95±2）％,并不断增殖形成细胞球.而且其增殖能力强于阴性细胞[群体倍增时间分别为（21±3）h和（40±8）h,P＜0.05].CD133阳性组和未分选组细胞裸鼠皮下接种时成瘤率分别为100％和80％;而CD133阴性组不成瘤,CD133阳性组移植瘤平均体积及重量均大于未分选组（P＜0.05,P＜0.05）.单克隆形成实验示单个CD133＋细胞可形成新的细胞克隆.半定量RT-PCR检测示其表达干细胞标记物Oct-4、Nanog、Sox-2、Musashi-1及EGFR.结论 体外可成功分离、纯化和扩增人胃癌细胞CD133＋亚群,其具有自我更新、增殖能力及较强的致瘤能力,并表达部分干细胞相关基因.