同型半胱氨酸对血管内皮细胞的氧化应激损伤和白细胞介素-8分泌的影响

同型半胱氨酸(Hcy)是近年来确认动脉粥样硬化的一项独立的新的危险因素.本实验模拟在高浓度Hcy的环境下,观察血管内皮细胞氧化应激毒性损伤相关指标,并了解白细胞介素-8的分泌情况,进一步探讨Hcy致动脉粥样硬化的可能机制.     

同型半胱氨酸对人THP-1巨噬细胞白细胞介素-8蛋白表达的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人THP-1巨噬细胞白细胞介素(IL)-8蛋白表达及分泌的影响。方法:在由0.1μmol/L佛波脂(PMA)诱导分化的人THP-1巨噬细胞中加入不同浓度的Hcy,并孵育不同时间。用酶联免疫吸附法检测培养上清液中IL-8蛋白的含量。结果:经PMA诱导后,THP-1细胞贴壁生长,分化成巨噬细胞。在一定浓度范围之内,Hcy呈剂量依赖性刺激THP-1巨噬细胞分泌IL-8蛋白,0.05mmol/L即可促进其分泌,增加为阴性对照组的1.28倍(P<0.01);0.2mmol/LHcy使IL-8的产量增加到阴性对照组的1.55倍(P<0.01)。0.1mmol/LHcy干预后,IL-8蛋白在3h即高于阴性对照组,到48h仍明显高于阴性对照组。Hcy刺激IL-8分泌呈剂量和时间依赖关系。结论:Hcy能促进人THP-1巨噬细胞IL-8的表达和分泌,可能为其诱导动脉粥样硬化的重要机制之一。     

冠心病患者同型半胱氨酸与白细胞介素-8水平研究

目的 测定不同类型冠心病患者同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY)以及白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)水平,探讨HCY致冠心病作用的机制.方法 冠心病患者96例(不稳定型心绞痛56例,稳定型心绞痛40例),20例冠脉造影正常者作为对照组.根据造影结果分为单支病变组、双支病变组以及三支病变组,并根据狭窄程度计分.采用ELISA法分别测定血浆HCY、IL-8水平.结果 不稳定型心绞痛组HCY、IL-8水平均显著高于稳定型心绞痛组,分别为[(20.42±5.89)μmol/L vs (14.22±4.50)μmol/L](P＜0.01)、[(101.93±21.23)μmol/L vs (69.91±20.15)μmol/L](P＜0.01),两组均明显高于对照组[(9.98±2.95)μmol/L](P＜0.01)、[(43.98±15.02)μmol/L](P＜0.01);三支病变组HCY水平为[(21.75±6.23)μmol/L],高于双支病变组[(18.24±6.17)μmol/L],但无显著性差异;显著高于单支病变组[(14.82±4.01)μmol/L](P＜0.01),双支病变组HCY水平高于单支病变组,但无显著性差异,单支病变组、双支病变组、三支病变组均显著高于对照组.单支、双支、三支病变组IL-8水平分别为[(108.89±22.29μmol/L)]、[(90.59±12.59)μmol/L]、[(73.04±24.03)μmol/L]均显著高于对照组(P＜0.01).Logistic分析及多元逐步回归分析发现HCY为不稳定型心绞痛和冠心病患者病变狭窄程度的独立危险因素.相关分析表明HCY与IL-8呈正相关,相关系数r=0.718(P＜0.01).结论 HCY通过激发炎性反应,导致IL-8水平增高,引起冠心病患者冠状动脉病变不稳定和狭窄程度加重.     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡的研究进展

近年的研究发现，血浆同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)水平升高是心肌梗死、脑梗死等心脑血管疾病以及外周阻塞性血管疾病的一个独立危险因素。动物实验发现，HCY可以通过损伤血管内皮细胞，启动粥样斑块和血栓形成。在粥样斑块内存在明显的内皮细胞凋亡。体外内皮细胞培养也显示HCY能诱导其凋亡，提示HCY可能通过内皮细胞凋亡而促进动脉粥样硬化。目前关于HCY引起内皮细胞凋亡的机制尚不明确，作者就HCY的代谢、HCY与内皮细胞凋亡的关系以及细胞凋亡的产生机制综述如下。     

同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞表达RANTES蛋白

为探讨同型半胱氨酸是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达RANTES蛋白 ,使人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸孵育 8h后 ,用免疫细胞化学和Westernblot方法检测RANTES蛋白的表达。免疫细胞化学检测结果发现 ,培养的人脐静脉内皮细胞能表达RANTES蛋白。培养的内皮细胞与 0 .1、0 .5及 1mmol L同型半胱氨酸共同孵育 8h后 ,其RANTES蛋白表达的平均吸光度值分别为 0 .0 4 34± 0 .0 0 6 3、0 .0 788± 0 .0 0 5 3和 0 .10 6 1± 0 .0 2 15 ,均显著高于对照组 (0 .0 2 0 0± 0 .0 0 32 ) ,方差分析发现 ,组间均存在显著性差异 (P <0 .0 1)。Westernblot检测结果发现 ,当内皮细胞与 0 .1、0 .5和 1mmol L同型半胱氨酸共同孵育 8h后 ,其免疫染色条带的积分吸光度值分别为 8873、10 2 0 0和 10 80 0 ,分别是对照组 (3881)的 2 .2 9倍、2 .6 3倍和 2 .78倍。此结果提示 ,培养的人脐静脉内皮细胞表达低水平的RANTES蛋白 ,同型半胱氨酸能提高其RANTES蛋白的表达     

同型半胱氨酸对单个人脐静脉内皮细胞胞内游离钙的影响

目的 :观察同型半胱氨酸 (HCY)对单个血管内皮细胞 (EC)胞内游离钙〔Ca2 + 〕i的影响。方法 :进行人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)原代培养 ,用激光扫描共聚焦显微镜观察。结果 :不同浓度HCY均可引起HU VECs单个EC〔Ca2 + 〕i升高。尼莫地平抑制这种〔Ca2 + 〕i浓度升高。结论 :HCY引起血管EC〔Ca2 + 〕i升高可能是HCY致血管病变的机制之一。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞的氧化应激损伤及对IL-8分泌的影响

;目的:通过观察病理浓度下的同型半胱氨酸HCY对培养的内皮细胞（EC）损伤及其氧化应激的影响。同时检测IL-8的表达,探讨HCY在动脉粥样硬化（AS）中的作用。方法:体外培养人脐静脉血管EC ECV-304。测定氧化应激损伤指标,分正常对照组和HCY组（浓度分别为50、100μmol/L、1.0、2.5、5.0 mmol/L组）。测细胞因子IL-8的分泌表达,分正常对照组和HCY组（浓度分别为50、200μmol/L组）,孵育0.5、8、24 h后,测IL-8表达。结果:高浓度HCY对EC损伤明显,IDH值升高,活性氧和MDA水平增高,而SOD,CAT活性下降,NO的生成减少。IL-8的表达量增加,且分泌高峰提前出现。结论:病理水平HCY可以增强氧化应激损伤反应,刺激EC分泌IL-8。     

瘦素对人脐静脉内皮细胞表达白细胞介素-8的影响

目的:探讨瘦素对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)表达白细胞介素-8(IL-8)的影响。方法:用不同浓度的瘦素刺激ECV-304,检测ECV-304表达IL-8的情况。结果:在相同作用时间下,随着瘦素浓度的升高,IL-8蛋白及IL-8的mRNA的表达也随之升高;在相同瘦素浓度下,随着作用时间的延长,IL-8蛋白及IL-8的mRNA的表达也随之升高。结论:瘦素可以刺激ECV-304表达IL-8,而且呈时间和剂量相关性。     

叶酸对高同型半胱氨酸血症大鼠单核细胞趋化蛋白-1和白细胞介素-8释放的影响

目的:探讨叶酸(FA)对高同型半胱氨酸(Hhcy)血症大鼠释放单核细胞趋化蛋白1(MCP1)和白细胞介素8(IL8)的影响。方法:SD大鼠30只随机分3组:Hhcy组、FA组、正常对照组,每组10只,分别给予普通饲料加1.7%蛋氨酸、普通饲料加1.7%蛋氨酸和0.006%的FA、普通饲料,饲养45d,采用高效液相色谱法测定血浆总同型半胱氨酸(thcy)水平,双抗体夹心ELISA法测定大鼠血浆和oxLDL诱导的外周血单核细胞(PBMCs)释放MCP1和IL8的含量。结果:①大鼠喂高蛋氨酸饲料45d可诱导Hhcy,同时补充FA可显著降低血浆thcy水平(P<0.01);②与正常对照组相比,Hhcy组大鼠血浆thcy升高的同时,血浆和oxLDL诱导PBMCs释放的MCP1水平均明显升高(P<0.05;P<0.01),PBMCs释放的IL8水平亦明显升高(P<0.05),而血浆IL8的水平无明显变化(P>0.05);③FA组大鼠较Hhcy组大鼠血浆thcy水平降低,同时血浆和oxLDL诱导PBMCs释放MCP1的水平均显著降低(P<0.05;P<0.01),PBMCs释放的IL8水平亦明显降低(P<0.05),而血浆IL8的水平无明显变化(P>0.05)。结论:FA治疗显著降低血浆thcy和Hhcy血症大鼠体内MCP1和IL8的释放,FA可能通过下调趋化因子介导的炎症反应来阻止Hhcy诱导的早期动脉粥样硬化的发生。     

冠心病患者高同型半胱氨酸血症与白细胞介素-8相关性研究

本研究通过测定不同类型冠心病患同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）以及炎性因子白细胞介素-8（IL-8）水平，分析HCY对冠心病患IL-8水平的影响及意义，探讨HCY致冠心病作用机制。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达及氧化型低密度脂蛋白摄取的影响

为了研究同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达及对氧化型低密度脂蛋白摄取的影响，分别在培养的人脐静脉内皮细胞中加入不同浓度的同型半胱氨酸孵育48h后，利用逆转录-聚合酶链反应检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达的改变；采用放射配基法检测细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取。结果发现，随着同型半胱氨酸浓度的增加。提示同型半胱氨酸能促进脐静脉血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达和对氧化型低密度脂蛋白的摄取，此效应可能与同型半胱氨酸致动脉粥样硬化作用有关。     

瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸损伤的人脐静脉内皮细胞

目的　探讨瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸（Hcy）损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的影响。方法　原代培养HUVEC,2～3代进行实验,用一定浓度Hcy损伤HUVEC建立细胞损伤模型,然后瑞舒伐他汀干预研究,采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD的活性,硝酸还原酶法检测细胞上清的一氧化氮（NO）含量,硫代巴比妥酸法检测MDA的水平;Real-time　PCR检测SOD1　mRNA表达的变化。结果　Hcy刺激24　h　SOD1　mRNA表达量、NO、SOD浓度较空白对照组显著降低,MDA含量较空白对照组显著升高（P<0.05）;瑞舒伐他汀预处理2　h后再加入等浓度Hcy,刺激24　h后SOD1　mRNA表达量、NO、SOD浓度显著升高,MDA含量显著下降（P<0.05）。结论　瑞舒伐他汀可通过改善SOD活性和减低MDA水平发挥抗氧化作用,且这种作用独立于它的降脂作用。     

同型半胱氨酸诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α

探讨同型半胱氨酸是否可诱导人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,使培养的人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸 ,采用逆转录聚合酶链反应和免疫细胞化学方法观察其巨噬细胞炎性蛋白 1α的表达。结果发现 ,培养的人脐静脉内皮细胞可表达巨噬细胞炎性蛋白 1α。暴露于同一浓度 (0 .1mmol L)同型半胱氨酸 ,分别孵育 4、8和 16h ,其巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达水平分别是对照组的 2 .0 8倍、3.2 6倍和 3.35倍 ;免疫细胞化学发现 ,上述各组巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达的平均吸光度值分别是 0 .0 71± 0 .0 0 6、0 .0 81± 0 .0 0 6和 0 .12 8± 0 .0 0 9,均显著高于对照组 (0 .0 4 9± 0 .0 0 5 ,P <0 .0 1)。暴露于不同浓度 (0 .1mmol L、0 .5mmol L和 1mmol L)的同型半胱氨酸 ,孵育 8h后 ,各组巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达水平分别是对照组的 2 .0 8倍、4 .35倍和 4 .5 7倍 ,巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达的平均吸光度值分别是 0 .0 81± 0 .0 0 6、0 .110± 0 .0 0 9和 0 .118± 0 .0 0 8,均显著高于对照组 (0 .0 4 9± 0 .0 0 5 ,P <0 .0 1)。结果提示 ,同型半胱氨酸可诱导人脐静脉内皮细胞表达高水平的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA和蛋白。     

同型半胱氨酸对内皮细胞及脂质过氧化的影响

为观察同型半胱氨酸对内皮细胞,内皮细胞一氧化氮系统及脂质过氧化的影响,在培养兔主动脉内皮细胞中加入兔天然低密度脂蛋白后分为七组;对照组不加任何药物,叶酸组;四氢喋呤ＢＨ４）组,一氧化氮供体药ＳＩＮ－１组,同型半胱氨酸组;同型半胱氨酸加叶酸组和同型半胱氨酸加四氢喋呤组。     

脂质过氧化损伤诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达细胞间粘附分子1

为探讨脂质过氧化损伤能否诱导血管内皮细胞表达细胞间粘附分子 1,用胰酶消化法分离人脐静脉内皮细胞进行原代培养 ,内皮细胞用不同浓度联胺作用相同时间或同一浓度联胺作用不同时间 ,使之发生脂质过氧化损伤 ,逆转录聚合酶链反应检测内皮细胞细胞间粘附分子 1mRNA表达 ,细胞酶链免疫吸附实验测定内皮细胞细胞间粘附分子 1蛋白表达。逆转录聚合酶链反应结果发现 ,不同浓度联胺 (1μmol L、5 μmol L和 10 μmol L)作用 8h ,内皮细胞细胞间粘附分子 1对 β actin吸光度比值依次为 0 .5 35、0 .90 8和 1.186 ,分别是对照组 (0 .185 )的 2 .89倍、4 .91倍和 6 .4 1倍 ;而同一浓度联胺 (5 μmol L)作用 4h和 2 4h ,吸光度比值依次为 0 .5 98和 1.2 92 ,分别是对照组 (0 .185 )的 3.2 3倍和 6 .98倍。细胞酶链免疫吸附实验结果发现 ,经 1μmol L、5 μmol L和 10 μmol L联胺作用 4h后 ,内皮细胞细胞间粘附分子 1蛋白表达的吸光度值依次为 0 .1387、0 .1775和 0 .2 32 6 ,分别是对照组 (0 .10 35 )的 1.34倍、1.71倍和 2 .2 5倍 (P <0 .0 1)。结果表明 ,联胺诱导的内皮细胞细胞间粘附分子 1的表达在一定作用时间和浓度范围内呈时间和剂量依赖性。提示联胺诱导的脂质过氧化损伤可能上调细胞间粘附分子 1mRNA和     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响

为探讨同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响，采用400umol／L同型半胱氨酸作用于培养的人脐静脉内皮细胞，以^35S-Na2SO4为示踪物标记细胞合成的蛋白聚糖，通过离子交换层析，凝胶过滤层析分离蛋白聚糖。结果发现，实验组培养液中总蛋白聚糖降低，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖及硫酸软骨素-硫酸皮肤素蛋白聚糖含量也降低，但其百分含量未见改变。细胞层中蛋白聚糖未见明显变化。     

罗格列酮抑制高糖诱导的内皮细胞黏附作用

目的 研究罗格列酮对高糖诱导的内皮细胞黏附作用的影响.方法 应用不同浓度葡萄糖处理内皮细胞后,加入不同浓度罗格列酮,用免疫细胞化学法和逆转录聚合酶链反应分别检测血管细胞黏附分子1蛋白及mRNA的表达.同时各处理组行内皮细胞-单核细胞黏附试验.结果 葡萄糖可诱导血管细胞黏附分子蛋白和mRNA的表达明显增加(P<0.05),在16.7 mmol/L时作用最显著;应用罗格列酮后,血管细胞黏附分子1蛋白和mRNA的表达明显降低(P<0.05).葡萄糖可诱导内皮细胞-单核细胞黏附增加,且与葡萄糖浓度呈正相关;罗格列酮可抑制内皮细胞-单核细胞黏附(P<0.05).结论 在一定葡萄糖浓度范围内,罗格列酮可能通过抑制葡萄糖诱导的内皮细胞血管细胞黏附分子1的表达来抑制内皮细胞-单核细胞的黏附作用,这可能是罗格列酮抗糖尿病相关的动脉粥样硬化作用之一.     

牛主动脉蛋白聚糖对培养的人脐静脉内皮细胞生长的影响

为观察牛主动脉中蛋白聚糖对培养的人脐静脉内皮细胞生长的影响及其在动脉粥样硬化形成中的作用,用解聚提取,离子交换及凝胶过滤柱层析法从牛主动脉内,中膜分离出硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、硫酸软骨素蛋白聚糖和硫酸皮肤素－硫酸软骨素蛋白聚糖。     

氧化型低密度脂蛋白下调Rab4表达诱导人脐静脉内皮细胞自噬

目的 探讨Rab4对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞自噬的影响及其作用机制.方法 不同浓度氧化型低密度脂蛋白孵育人脐静脉内皮细胞24h,Western blot检测Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达,逆转录-聚合酶链反应及Western blot检测Rab4 mRNA及蛋白表达.75 mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育Rab4基因转染人脐静脉内皮细胞(siRNA或Rab4质粒转染)24 h,Western blot检测Rab4、Beclin-1、LC3蛋白的表达.结果 氧化型低密度脂蛋白孵育人脐静脉内皮细胞24h后,Beclin-1蛋白表达以及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值明显增加,而Rab4 mRNA以及蛋白的表达明显降低(P＜0.05),并呈浓度依赖性.Rab4 siRNA进一步增加氧化型低密度脂蛋白诱导的Beclin-1蛋白表达量以及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值(P＜0.05),而Rab4质粒转染则下调氧化型低密度脂蛋白诱导的Beclin-1蛋白表达以及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值增加(P＜0.05).结论 氧化型低密度脂蛋白通过下调Rab4表达诱导血管内皮细胞自噬.