整合素αvβ3对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖影响的实验研究

目的 研究整合素αvβ3对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的影响,为以整合素αvβ3为靶点治疗脑胶质瘤提供实验依据.方法 采用MTT比色法和SABC免疫组化检测法,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用和对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 整合素αvβ3抗体对体外培养的大鼠C6脑胶质瘤细胞的增殖和PCNA表达有明显的抑制作用,其作用表现出明显的量效关系(P＜0.05).结论 整合素αvβ3对脑胶质瘤细胞的恶性增殖具有促进作用,而整合素αvβ3抗体对其有明显抑制作用,为抗整合素αvβ3治疗脑胶质瘤提供了实验依据和理论依据.     

没药挥发油对大鼠神经胶质瘤细胞体外增殖的抑制作用

目的 探讨没药挥发油 (没药油) 对大鼠神经胶质瘤细胞 C6增殖抑制作用。方法 应用 MTT 法检测不同质量浓度没药油对 C6 细胞活性的作用;BrdU 掺入试验检测细胞增殖的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 没药油对 C6 细胞活性有明显的抑制作用,其抑制率与质量浓度有关;没药油作用 24 h 后,C6 细胞 BrdU 标记指数明显降低;而不同质量浓度没药油作用24 h 后,C6 细胞凋亡率与对照组相比无显著改变。结论 没药油对大鼠神经胶质瘤细胞株 C6 的增殖具有明显的抑制作用,但诱导细胞凋亡的作用不明显。     

酪氨酸激酶抑制剂对C6胶质瘤细胞的抑制作用的实验研究

目的 观察酪氨酸激酶抑制剂AG490对大鼠C6胶质瘤细胞增殖、凋亡的抑制作用.方法 构建不同浓度酪氨酸激酶抑制剂AG490作用于不同时段的C6模型.并用MTT法对各组细胞模型进行细胞增殖检测;用凯基Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡检测.结果 酪氨酸激酶抑制剂可明显抑制胶质瘤细胞C6的细胞增殖,并使肿瘤细胞的存活率降低,对胶质瘤细胞增殖和存活率的抑制作用具有浓度效应(P<0.05);流式细胞仪检测结果提示其能够诱导胶质瘤细胞株发生凋亡.结论 酪氨酸激酶抑制剂对C6胶质瘤细胞株的增殖、凋亡有密切联系.     

垂体瘤转化基因反义寡核苷酸抑制胶质瘤增殖的实验研究

目的 观察垂体瘤转化基因(pituitary tumortr ansforming gene,PTTG)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对恶性胶质瘤增殖的抑制作用.方法 将C6胶质瘤细胞接种于大鼠右侧尾状核.按照不同的PTTG反义寡核苷酸浓度在选定的时间点立体定向原位注射于肿瘤区域.3周后处死大鼠,取标本做GFAP、PTTG、PCNA免疫组化染色.结果 不同浓度的PTTG-ASODN对C6胶质瘤模型的增殖抑制呈时间、浓度依赖性,而且高浓度,早期应用,反复应用PTTG-ASODN抑制胶质瘤模型肿瘤增殖的效果明显.结论 PTTG-ASODN可以抑制胶质瘤的增殖,有望成为胶质瘤基因治疗的一种新策略.     

丙戊酸钠增强大鼠胶质瘤C6细胞放射敏感性的体外实验

目的 观察丙戊酸钠(VPA)对C6胶质瘤细胞系的体外放射增敏性,为治疗胶质瘤提供实验依据.方法 体外常规培养C6胶质瘤细胞,采用不同浓度(0、0.25、0.5、1、2、4 mmol/L)的VPA,作用于C6胶质瘤细胞不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测C6胶质瘤细胞增殖抑制率,选择合适的作用浓度和作用时间;0.5 mmol/L VPA作用C6胶质瘤细胞后,分别给予不同剂量(0、2、4、6、8Gy)的X射线,克隆形成实验观察其对C6胶质瘤细胞的放射增敏作用;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测不同浓度VPA对C6胶质瘤细胞凋亡率的影响;实验分为对照组、药物组、照射组及联合组,实时定量PCR法检测各组凋亡基因Bcl-2及Bax mRNA的表达.结果 VPA对大鼠胶质瘤C6胶质瘤细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度、时间依赖性,不同浓度、时间之间比较,差异有统计学意义(P＜0.05);VPA在0.5 mmol/L浓度时,对C6胶质瘤细胞毒性较低,且可增加X射线对C6胶质瘤细胞的杀伤作用,放射增敏比为1.30;VPA能够诱导C6胶质瘤细胞凋亡,并且凋亡率随浓度的增高而升高,各浓度之间比较差异有统计学意义(P＜0.05);VPA对C6胶质瘤细胞的凋亡作用,在转录水平可下调Bcl-2表达,同时上调Bax的表达.结论 VPA对大鼠胶质瘤C6胶质瘤细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度、时间依赖性.低浓度的VPA对C6胶质瘤细胞毒性较低,但可增加X射线对C6胶质瘤细胞的杀伤作用,其放射增敏机制与直接抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、调节凋亡相关基因的表达有关.     

温阳通窍中药复方对大鼠脑胶质瘤作用机制的体内实验研究

[目的]研究温阳通窍中药复方对大鼠C6脑胶质瘤的抑制作用机制。[方法]C6胶质瘤细胞大鼠颅内接种,建立脑胶质瘤模型。磁共振成像(MRI)条件下将模型动物随机分为对照组、温阳通窍复方低剂量组和高剂量组。除对照组外,其余各组给予对应剂量的药物,3周后取脑胶质瘤组织,进行病理组织学检测并进行相关分析,检测基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、结缔组织生长因子(CTGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)指标。[结果]MRI检测表明体内实验成功构建大鼠脑胶质瘤模型。组织病理学观察结果显示,与对照组动物相比,给药组动物肿瘤微血管减少,可见变性坏死瘤细胞,瘤组织坏死较对照组明显,高剂量治疗组略强。温阳通窍给药组SDF-1、CTGF、b FGF较对照组呈降低趋势。[结论]温阳通窍中药复方对C6脑胶质瘤细胞的增殖确有抑制作用,该作用或许与肿瘤组织中SDF-1、CTGF、b FGF的表达相关。     

吗啡对培养大鼠胶质细胞瘤C6细胞增殖的抑制作用

目的:探讨吗啡对神经系统细胞的影响及作用机理.方法:应用基因克隆技术克隆大鼠增殖细胞核抗原(PCNA)的cDNA基因片段,并应用逆转录PCR技术研究了吗啡对大鼠胶质细胞瘤C6细胞PCNA基因表达的影响.结果:0.1、1.0 mg.L-1 吗啡作用于大鼠C6细胞24 h后,PCNA mRNA相对含量明显下降,且剂量越高PCNA mRNA相对含量越低.结论:吗啡对正常生长的大鼠C6细胞的增殖具有一定的抑制作用,其机理可能是通过抑制大鼠C6细胞PCNA的转录过程,使PCNA转录水平降低,从而抑制细胞核酸合成代谢.     

旁分泌形式作用的人AngiostatinK(1-3)抑制大鼠C6脑胶质瘤的研究

目的：研究人AK(1-3)[Angiostatin Kringle(1-3)]对大鼠C6脑胶质瘤的抑瘤效应．方法：利用基因转染的方法获得重组人AK(1-3)基因的C6胶质瘤细胞；以细胞增殖试验及免疫组化等方法检测转染细胞株是否表达了具有生物活性的人AK(1-3)．正常大鼠C6脑胶质瘤模型作对照，研究转染细胞株在大鼠脑内的致瘤性．脑组织切片进行Ⅷ因子染色．结果：大鼠C6胶质瘤细胞稳定表达的人AK(1-3)，在体外明显抑制牛主动脉内皮细胞的增殖；在体内明显抑制了大鼠C6脑胶质瘤的生长．试验组脑切片内仅见显微瘤灶，Ⅷ因子染色少见新生毛细血管．结论：旁分泌形式作用于大鼠C6脑胶质瘤内血管内皮细胞的人AK(1-3)可明显抑制肿瘤的血管生成，进而抑制肿瘤的生长和转移。     

125IUdR治疗C6脑胶质瘤的实验研究

目的探讨125IUdR对脑胶质瘤的治疗作用. 方法体外采用细胞生长曲线测定、MTT法和集落形成试验观察125IUdR对C6脑胶质瘤细胞的作用;体内运用Wistar大鼠C6脑胶质瘤动物模型进行生存分析(肿瘤增殖高峰期局部缓慢三次注射药物,每天每次7.4×103 kBq.结果 125IUdR可显著抑制C6细胞体外增殖,具有时间和浓度依赖性.其中MTT法显示150 kBq/ml 125IUdR作用5 d后抑制率高达93.06%.而对照组Na125I和127IUdR对C6细胞体外增殖无明显抑制作用.125IUdR治疗胶质瘤C6大鼠5 d后,肿瘤重量低于空白组和对照组(P<0.01);生存分析显示空白组、127IUdR对照组和实验组的中位生存时间分别为9 d、12 d和27 d(P<0.01).结论根据肿瘤细胞增殖特征给药,125IUdR可显著抑制脑胶质瘤细胞增殖,延长脑胶质瘤C6大鼠生存期.     

脑胶质细胞瘤体外化疗敏感性实验研究

目的:应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)比较替尼泊甙(VM-26)、卡氮芥(BCNU)、顺铂(CDDP)、长春新碱(VCR)、甲氨蝶呤(MTX)对脑胶质瘤细胞的体外增殖抑制作用,并探讨肿瘤病理类型、性别、年龄、术前机能状态KPS评分对化疗药物敏感性的影响,为临床化疗筛选药物、制定化疗方案提供指导。方法:对50例胶质瘤细胞进行体外原代培养,采用MTT法测定体外化疗药物对脑胶质瘤细胞的增殖抑制作用,比较脑胶质瘤细胞对替尼泊甙(VM-26)、卡氮芥(BCNU)、顺铂(CDDP)、长春新碱(VCR)、甲氨蝶呤(MTX)5种化疗药物单一或联合化疗的体外药物敏感性。结果:42例获得药敏结果,成功率达84%(8例因取材、污染等原因未取得预期结果)。42例胶质瘤细胞对单一化疗药物的敏感性从高到低依次为VM-26>BCNU>CDDP>VCR>MTX。两种联合化疗方案(BCNU+VM-26+CDDP)和(BCNU+VCR+MTX)对胶质瘤细胞的敏感性明显优于单用,且对绝大多数胶质瘤细胞表现出较高的细胞毒性。性别差异、年龄分布对化疗药物敏感性无明显影响;除VM-26外,术前机能状态与化疗药物敏感性无明显相关性;胶质瘤病理类型是影响化疗药物敏感性的重要因素之一。结论:MTT比色法是一种快速、准确检测体外药物敏感性的实验方法;替尼泊甙、卡氮介、顺铂联用对胶质瘤细胞的增殖抑制率明显优于单用,且用药剂量小;胶质瘤病理类型是影响化疗药物敏感性的重要因素之一。     

Suicide effect on rat gliomas mediated by recombinant adenovirus thymidine kinase/acyclovir system

OBJECTIVE: To establish the replicated-deficient recombinant adenovirus-mediated thymidine kinase/acyclovir (Adtk/ACV) system and to evaluate its suicide effect on rat C6 brain gliomas in vitro and in vivo. METHODS: The plasmid pAdtk and pJM17 were co-infected into 293 cells (adenovector packaging cells) and the results were identified by polymerase chain reaction (PCR) assay. After the glioma C6 cells were transduced by Adtk at different multiplicity of infection (MOI) and exposed to different concentrations of ACV or gancyclovir (GCV), the cell survival curves were studied, and the cell surface was observed with scanning electronic microscopy (SEM). C6 gliomas in vivo at different inoculation days were injected with Adtk intratumorally and ACV intraperitoneally daily, and the survival duration and histologic changes of the rats were observed. RESULTS: The infectious Adtk virions had a suicide effect which was enhanced with the increase in MOIs of Adtk and ACV doses along with bystander effect. Under scanning electronic microscope, special pathologic changes were observed. ACV had a similar effect as GCV but a higher dose was used. The survival duration in day 3, day 6 and day 8 groups exceeded 90 days, and the rats in day 10 group survived 28.5 +/- 4.6 days, but the survival duration in untreated C6 group and AdLacZ/ACV (adenovirus-mediated LacZ/ACV) treated group were 16.8 +/- 3.1 and 14.0 +/- 2.2 days respectively. CONCLUSION: Adtk/ACV system can effectively kill the rat brain gliomas in vitro and in vivo.     

苯醋酸抗脑胶质瘤颅内移植实验研究

目的：通过苯醋酸对脑胶质瘤小鼠模型的诱导治疗,观察治疗后肿瘤细胞的变化,以评估其在体内治疗恶性脑肿瘤的效果。方法：将Ｇ４２２鼠脑胶质瘤细胞移植到昆明鼠（ｎ＝８０）脑内,并将其平均分为５组。其中３组为苯醋酸钠用药组,分别用１２００、８００、４００ｍｇ·ｋｇ１·ｄ１,自移植后的当天开始用药,连续用药１４ｄ;对照组用同样的方法注射等量的盐水;另一组为卡氮芥（ＢＣＮＵ）组,２０ｍｇ·ｋｇ１仅１次注射。治疗结束后处死小鼠,行病理、电镜和毒性观察以及流式细胞仪检查,以确定肿瘤细胞的增殖状态。结果：用苯醋酸治疗的小鼠生存期均有延长（Ｐ＜０．０５）,而没有反应。ＢＣＮＵ组的生命延长期和用苯醋酸治疗的中剂量组相同。病理和电镜观察显示：用苯醋酸处理的小鼠肿瘤细胞有明显的细胞肥大和粗面内质网的机化,表示有细胞的分化。流式细胞仪检测显示,苯醋酸可以使Ｇ４２２细胞的分化阻滞在Ｇ１期。结论：醋酸钠通过抑制蛋白的戊乙烯化或其它机制,而达到抑制肿瘤细胞增殖和诱导分化的作用,可以作为治疗恶性胶质瘤或其它恶性肿瘤的安全有效的新药。     

脑胶质瘤MRI某些特征参数与病理对照的实验研究

目的：探讨大鼠C6脑胶质瘤磁共振成像（MRI）所测某些参数之间的相关性并与细胞密度和血管生成等病理组织学变化进行对照研究.方法：采用立体定向方法在30只雌性Wistar大鼠右侧尾状核接种C6细胞,于接种7,14,21 d行磁共振（MR）平扫及增强扫描.大鼠处死后取脑组织HE染色.在各序列图像上测算肿瘤体积、肿瘤强化程度以及水肿指数（EI）,与其病理表现进行对照分析.结果：24只大鼠荷瘤成功,其MR表现与文献报道相似.肿瘤生长（肿瘤体积增大）伴随着细胞密度增加、血管生成增多和瘤周围组织水肿程度加重,肿瘤体积、强化程度和EI之间呈正相关.结论：MRI能够显示大鼠脑胶质瘤的生长状态,所测肿瘤体积、强化程度和EI之间的相关性是肿瘤病理的集中体现.     

MR imaging in rat glioma model and gene therapy using EGFR antisence RNA

Ｓｏｍｅｐｒｏｇｒｅｓｉｎｏｐｅｒａｔｉｏｎ,ｒａｄｉａｔｉｏｎ,ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙａｎｄｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ,ｅｔｃ．,ｈａｓｂｅｅｎｍａｄｅｉｎｔｈｅｌａｓｔｔｗｏｄｅｃａｄｅｓ,ｂｕｔｔｈｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｔｈｅｐａｔｉｅｎ...     

抗癌膏穴位贴敷抗肺癌作用机制的研究

目的：观察抗癌膏穴位贴敷抗肺癌的作用机制。方法：用C57BL／6近交系小鼠，瘤细胞悬液皮下接种法建摸。建模次日开始穴位贴敷治疗，隔日治疗1次，共治疗5次。末次治疗24h后，处死小鼠，测定癌细胞周期、脾淋巴细胞转化率和NK细胞活性。结果：抗癌膏穴位贴敷能使癌细胞G0／G1期细胞比例增多，S期细胞比例减少，细胞增殖指数下降；抗癌膏穴位贴敷对荷瘤鼠脾淋巴细胞转化率和NK细胞活性无显著影响。结论：抗癌膏穴位贴敷的抗癌作用是通过抑制癌细胞的增殖来实现的。     

异种血管内皮细胞疫苗治疗Lewis大鼠子宫内膜异位症的动物模型

目的： 探索一种以抑制异位病灶新生血管为靶点的治疗子宫内膜异位症（内异症）的新方法。方法 ：将处于对数生长期的人脐静脉内皮细胞固定后溶于PBS中,作为疫苗,并培养人成纤维细胞、大鼠主动脉内皮细胞作为对照细胞。手术移植法建立Lewis大鼠内异症（EMT）的动物模型,然后随机将EMT模型分为6组,分别注入不同浓度的疫苗和对照组细胞。A组（治疗组）注射人脐静脉内皮细胞（1×105）,B组（治疗组）注射人脐静脉内皮细胞（5×105）,C组（治疗组）注射人脐静脉内皮细胞（1×106）,D组(对照组)注射PBS 0.5 ml,E组(对照组)：注射人成纤维细胞（5×105）,F组(对照组)注射大鼠主动脉内皮细胞（5×105）,四周后观察异位病灶微血管密度（MVD）、间质细胞增殖指数、病灶面积的变化;同时用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测人脐静脉内皮细胞、人成纤维细胞和大鼠主动脉内皮细胞诱导的免疫血清在体外对鼠内皮细胞增殖的影响。结果 ：治疗组（B,C组）异位病灶的面积较治疗前显著缩小（P﹤0.05）,与其它组比较,治疗组（B,C组）MVD在治疗后降低(P﹤0.05),但间质细胞的增殖指数差异无显著性（P>0.05）。人脐静脉内皮细胞诱导的免疫血清在体外能抑制内皮细胞的增殖(P<0.05)。结论：异种血管内皮细胞（人脐静脉内皮细胞）作为疫苗能抑制异位病灶血管形成而使异位病灶面积减小,有望能作为一种内异位症治疗的新方法。     

反义寡核苷酸对脑胶质瘤细胞生长抑制作用的动态研究

OBJECTIVE: To examine the therapeutic effect of oncogene c-myb antisense oligodeoxynucleotide (AON) on rat C6 glioma in vivo. METHODS: C6 glioma cells were implanted into the subcutis of nude mice, the animals were randomly divided into three groups (12 mice respectively) when the tumor grew about 10 mm in size, and the mice with subcutaneous tumor foci were treated with sense oligodeoxynucleotide (SON), AON and normal saline. Three animals of each group were killed after treatment at 4, 8, 12 and 16 days respectively. The dynamic growth manifestations, features, histopathological changes and apoptosis of the glioma in each group were observed. RESULTS: AON suppressed the growth of C6 glioma cells, the suppression rates being 66.7%, 71.4%, 72% and 73% at 4, 8, 12, 16 days respectively (P < 0.05). The changes in weight were concurrent with the variations of tumor volume, the tumor weight of AON groups was significantly decreased (P < 0.05). The immunohistochemical assay showed the expression of c-myb proto-oncogenes was significantly decreased in AON groups (P < 0.05). The flow cytometry analysis found the apoptosis cell percentage of AON groups to be 13.4%, 27.1%, 46.1% and 48.4% at 4, 8, 12 and 16 days respectively, and this percentage of AON groups was about 3.5 times the apoptosis cell percentage of SON and control groups at the corresponding time. In addition, noticeable inflammatory infiltration and calcification were observed after the treatment with AON. CONCLUSION: The above findings indicate that c-myb gene might be associated with the suppression of carcinogenesis in brain glioma, and oncogene c-myb might be chosen as a target for antisense gene therapy of gliomas.     

黄芪多糖对2型糖尿病早期大鼠视网膜Muller细胞Kir2.1表达的影响

目的:探讨黄芪多糖对链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病大鼠早期视网膜Muller细胞Kir2.1表达的影响。方法:雄性SPF级SD大鼠随机分为:正常对照组(C组,n=10),黄芪多糖对照组(CA组,n=10),饲以正常饲料;通过高脂饮食加小剂量STZ诱导复制2型糖尿病大鼠模型,将血糖>13.9 mmol/L者随机分为糖尿病组(DM组,n=8)及黄芪多糖治疗组(DA组,n=8)。治疗前后观察血糖、口服葡萄糖耐量变化。从4组大鼠视网膜提取总mRNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Kir2.1 mRNA的表达。结果:DM组血糖显著高于C组,同时伴有明显的糖耐量下降(P<0.01),经黄芪多糖治疗8周后,DA组血糖降低,与DM组比较糖耐量改善(P<0.01)。RT-PCR扩增的Kir2.1 cDNA产物在DM组表达比在C组下降,而在CA组表达较DM上升(P<0.05),但在C组与CA组中未出现这种显著性的改变(P>0.05)。结论:黄芪多糖能够降低血糖,糖尿病大鼠早期视网膜Muller细胞Kir2.1蛋白表达下降,而黄芪多糖对于逆转这一早期的改变可能起到一定作用,从而起到减少糖尿病视网膜病变发病率的作用。     

神经干细胞对胶质瘤细胞抑制作用的实验研究

目的:探讨神经干细胞在体外对胶质瘤细胞有无抑制作用。方法:取胎鼠大脑皮层组织,于无血清培养基中进行细胞培养成神经干细胞并进行Nestin免疫荧光染色鉴定;将神经干细胞和鼠胶质瘤细胞(C6细胞)在体外混合培养,观察肿瘤细胞的生长、增殖情况及形态学变化,并对C6细胞进行FCM细胞周期分析及MTT试验。结果:培养所得的细胞特异性抗原Nestin染色呈现阳性,具有较强的分裂增殖能力和自我更新能力,表明培养所获得的细胞是神经干细胞;神经干细胞与C6细胞混合培养后,C6细胞不易贴壁,增殖慢。FCM分析显示实验组处于G0/G1期的C6细胞明显多于对照组(χ2=14.77,P<0.01)。MTT试验显示实验组光吸收值低于对照组(t=-11.66,P<0.01)。结论:胚鼠大脑皮层组织可培养出神经干细胞;在体外对胶质瘤细胞的生长有抑制作用。