2006年北京市外来人口中HIV-1感染者流行毒株gag基因序列测定和亚型分析

目的了解北京市外来人口中HIV-1亚型的特点和流行规律。方法随机采集北京市2006年外来人口中新确证HIV-1感染者的抗凝全血标本80份，分离血浆，提取病毒RNA，用套式聚合酶链反应扩增病毒gag基因，并进行序列测定和亚型分析。结果系统进化分析确定北京市外来人口HIV-1毒株属于8个亚型，分别为B亚型4份，泰国B亚型15份，C亚型1份，CRF01-AE亚型5份，CRF02-AG亚型1份，CRF07-BC亚型29份，CRF08-BC亚型3份，CRFl5—01B亚型1份。结论北京市外来人口中己存在8种HIV-1亚型和流行重组型，应该加强对HIV-1亚型变异的监测。     

淮安市经异性性传播的HIV感染者中HIV-1病毒基因亚型特征分析

目的 了解淮安市经异性性传播HIV感染者中HIV-1病毒基因亚型分布及其流行特征.方法 从60名异性性传播HIV-1感染者血液中提取DNA或RNA,用巢式PCR或RT-PCR方法扩增gag、env基因区片段,测定序列并分析.结果 60份标本中,确定了48份标本的基因亚型,发现有4种HIV-1亚型和重组型.其中CRF01_AE亚型占62.5％,CRF07_BC亚型占22.9％,CRF08_BC亚型占6.3％,B亚型占6.3％.结论淮安市异性性传播感染HIV者中,流行着CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC、B亚型这4种亚型病毒株,CRF01_AE为主要流行亚型.     

福建省HIV-l流行毒株的基因序列测定和亚型分析

目的　通过DNA序列分析 ,确定福建省HIV 1流行毒株的亚型。方法　从福建省HIV 1抗体阳性者中选择 9例经性接触感染HIV 1者 ,采集其全血分离周围血淋巴细胞 (PBMCs)提取DNA作为PCR扩增的模板 ,设计合成 3对套式引物扩增HIV 1前病毒DNA的C2～V3区用于测序。所测序列与HIV 1中的 6个亚型的 10个国际标准或参考序列进行比较 ,确定被检标本的型别。结果使用PCR技术对 9份福建HIV 1阳性感染者PBMC样品进行扩增 ,获得HIV 1膜蛋白 (env)基因的核酸片段 ,并对其约 2 47bp核苷酸序列进行了分析、比较 ,证实 9份样品中 7份为E亚型 ,其余 2份分别为B和C亚型毒株。E亚型各株间序列存在一定差异 ,组内基因离散率为 6 2 8± 2 40。结论　福建省目前HIV 1的流行株主要为E亚型 ,流行株的来源较为复杂 ,株间序列差异不仅与感染时间有关 ,也和感染地点不同等因素有关 ,这些特点不同于我国其他一些省份发现的经血传播的HIV 1B或C亚型 ,其流行时间不长 ,株间序列差异不大     

河北省HIV-1流行株基因序列测定及亚型分析

目的 了解河北省HIV-1流行株的亚型分布和流行趋势.方法 从感染者的血浆样品中提取病毒RNA,逆转录后采用套式PCR扩增HIV-1 gag和env基因的部分片段,对PCR产物直接进行核苷酸序列测定,所获序列与各亚型国际参考株序列比对,确定基因型并进行系统进化树分析.结果 对154份HIV-1感染者的样品进行扩增,得到了148份样品的HIV-1基因片段.发现6种HIV-1亚型和重组型,以及2例未定型.其中B'亚型61例(41.2%)、CRF01_AE 59例(39.9%)、CRF07_BC 16例(10.8%)、CRF08_BC 6例(4.1%)、C亚和B01亚型各2例(1.4%).在河北省首次发现了B01亚型.结论 2009年河北省存在多种HIV-1亚型和流行重组型,主要是B'亚型和CRF01_AE重组型,应加强对HIV-1毒株亚型变异的监测,及时调整防治策略.     

河北省HIV-1流行株的env基因序列测定和亚型分析

目的了解河北省HIV-1亚型的分布特点和传播方式,推测流行时间,预测流行趋势。方法采集HIV感染者的全血样品,分离外周血单核细胞(PBMC),提取前病毒DNA,使用套式聚合酶链反应(nested-PCR),扩增HIV-1的env基因的C2-V3区并进行序列测定和亚型分析。结果对22份HIV-1感染者的样品,扩增得到了18份HIV-1envC2-V3基因片段,经序列测定和基因分析鉴定出3种HIV-1M亚群基因亚型,即:B′、CRF-BC和C亚型。B′亚型的组内基因离散率为7.84%±3.14%(n=14),基因序列与云南瑞丽株rl42(泰国B亚型)相近;2株CRF-BC亚型与广西毒株的基因离散率为4.60%。与血液途径感染有关的人员均为B′(泰国B)亚型。结论目前,在河北省发现了3种HIV-1亚型。输供血途径中B′亚型仍是主要的流行亚型,可能来源于云南吸毒人群。HIV-1B′亚型在河北省的流行时间大约为7~9年。     

湖北省HIV-1流行株gag基因序列测定及亚型分析

目的 了解湖北省HIV-1感染者流行毒株亚型分布和流行趋势.方法 随机采集湖北省HIV-1感染者的抗凝全血标本,分离血浆,提取病毒RNA,用套式聚合酶链反应扩增HIV-1病毒gag基因,并进行序列测定和亚型分析.结果 对80份HIV-1感染者的样品进行扩增,得到了62份样品的HIV-1基因片段.共发现7种HIV-1亚型和流行重组株.泰国B'亚型占11.3％ (7/62),欧美B亚型占4.8％ (3/62),G亚型占4.8％ (3/62),CRF07-BC占22.6％ (14/62),CRF08-BC占6.5％(4/62),CRF01-AE占48.4％(30/62),CRF15-01B占1.6％ (1/62).在湖北省发现了CRF15-01B和G亚型.结论 湖北省存在多种HIV-1亚型和流行重组型,CRF01-AE、CRF07-BC两种重组亚型毒株为目前湖北省HIV-1流行优势毒株,应加强对HIV-1毒株亚型变异的监测,及时调整防治策略.     

山东省部分HIV-1流行株的亚型分析和序列特征研究

目的　对山东省HIV 1流行毒株进行亚型分析 ,并研究其变异特征。方法　采集 2 6份HIV 1感染者的外周静脉抗凝血 ,提取前病毒DNA进行体外扩增 ,获得包膜蛋白 (env)基因的核酸片段 ,并对其C2 V3及邻区的核苷酸进行测定和分析。结果　基因和氨基酸序列分析表明 ,2 6份标本中存在 4种亚型和重组毒株 (B′、C、A、A/E) ,其中B′ 17株 ,其组内基因距离为 11.6 9± 4 .19。V3环顶端四肽有 6种形式 ,最多的是GPGQ(15株 )、GPGR(6株 )。V3环第 11、2 5位氨基酸出现变异 ,并有 1株呈电荷双阳性。结论　山东省HIV 1流行株亚型较多 ,有重组毒株出现的可能 ,基因发生较大变异 ,HIV 1传播在山东省有加快的趋势。     

我国HIV-1 B''亚型流行株vif基因序列特征及变异分析

目的 研究人免疫缺陷病毒-1（HIV-1）B’亚型vif基因的变异特征，探讨其与HIV传播和致病性之间的关系。方法 采集河南省部分HIV感染者的外周血，提取41例HIV感染者外周血淋巴细胞DNA，设计特异性引物扩增其前病毒基因组中的vif基因，对于扩增阳性的29例PCR产物进行vif区基因的测序及分析。结果 29条vif基因的平均离散率是0．0328，突变主要集中于90～120、270～302、372～405、450～470四个区域。Vif多肽链的90～93位和157～160位存在两个富含R和K带有强烈正电荷的亲水区，带正电荷的R或K交替出现，几乎没有其他的氨基酸残基。29个Vif多肽链有21条在90～93位存在R^90RKR^93基序；有26条在157～160位存在K^157RRK^160基序，29条序列在114位和133位存在两个在HIV-1和HIV-2以及SIV内保守的半胱氨酸（A）。结论 vif在HIV-1基因组内具有相对保守性，其特征性区域和氨基酸基序对于保持Vif蛋白的功能是十分重要的。     

HIV-1 黑龙江省分离株CHNHLJ03009包膜克隆及分析

目的 分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒（human irnmunodeficiency virus type 1，HIV-1）原代分离株包膜糖蛋白的变异性及表型特征。方法从一名HIV阳性但未发病的感染者外周血单个核细胞提取DNA，采用保守引物进行HIV包膜直接克隆，进行序列分析及系统树分析。构建了一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行了感染实验，观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征。结果共获得2个有功能全长env克隆，分别命名为CHNHIJ03009c34（GenBank序列号为AY905493）和CHNHIA03009c33。用全长env氨基酸序列与国内外分离株进行同源性比较分析发现，与分离株CHNHLJ03009c34的包膜同源性最高的病毒为云南的HIV-1 B’亚型分离株RIA2，同源性为91．52％。系统发育分析结果表明，该株为泰国B’亚型，与云南分离株RIA2的遗传距离最近。对包膜蛋白结构分析结果显示，分离株CHNHLJ03009c34包膜在抗原性和亲水性上与RIA2没有明显差别。感染性检测结果显示该病毒只能感染U87．CD4．CCR5细胞，不能感染U87．CD4．CX-CR4细胞。结论本研究从黑龙江省一名HIV-1阳性者克隆到HIV-1CHNHLJ03009病毒的包膜基因，该病毒属于B’亚型（泰国亚型），为R5亲嗜性毒株。该包膜基因克隆为首次报道的黑龙江分离株。     

Cloning and analysis of the envelope protein clone of HIV-1, CHNHLJ03009c34 from an infected individual in Heilongjiang province

Envelopeglycoprotein(Env)ofHIV1isacom plexoftwononcovalentlyassociatedsubunits,Gp120andGp41.Gp120isanexternalsubunit thatbindsthecellularreceptorCD4andachemo kinereceptor,suchasCXCR4orCCR5.Gp41isatransmembranesubunit,responsibleforthere ceptor mediatedmembranefusion[1,2].Because ofthehighvariabilityofHIV1,theaminoacid sequenceaswellasthestructureofviralenvelope canvaryandresultinthechangeofviraltropism withtimeextensionanddiseaseprogressionafter infection.DuringtheearlyphaseofHIVinfec…     

人Ⅱ型免疫缺陷病毒gag基因在大肠杆菌中的表达

目的：表达ＨＩＶ－２基因工程ｇａｇ抗原。方法：将编码ＨＩＶ－２型ｇａｇ的部分和全部ｐ５５ｇａｇ１／２基因,克隆到载体ｐＥＴ－１７ｂ后,分别在Ｅ．Ｃｏｌｉ ＢＩ２１中表达。结果;表达产物为５１和６１ｋＤ融合蛋白,并可与ＨＩＶ－２病人血清发生特异性反应。     

我国HIV-1主要流行株外膜蛋白(env)基因V3～V4区变异及其与生物学特性的关系

目的　研究我国HIV 1主要流行毒株亚型的envV3～V4区变异与生物学特性的关系。方法　应用nested PCR对 1 57份获自我国 1 2个省份的HIV 1毒株env区序列进行扩增 ,并使用ABI 377型测序仪测序 ,然后应用BLAST、GCG和MEGA等生物学软件或程序对env基因V3～V4区序列进行分析。结果　B′亚型毒株V3顶端四肽存在着 4种类型 :GPGR ( 54% )、GPGQ ( 2 8% )、GPGK( 1 6 % )和GPGA( 2 % ) ,B′/C重组毒株全部为GPGQ( 1 0 0 % ) ,CRF0 1 AE重组毒株呈现GPGQ( 95% )和GPGR( 5% )两种类型 ;B′/C和CRF0 1 AE重组毒株V3～V4区及其临近区域N 糖基化位点比B′亚型毒株N 糖基化位点保守。而B′亚型毒株V3环的净电荷分别显著高于B′/C和CRF0 1 AE毒株 (P <0 .0 1 ) ;根据V3环关键氨基酸推测辅助受体使用情况的结果显示 :B′亚型毒株有 9.2 6 %可能使用CCR5,7.4 1 %可能使用CXCR4 ,其余 83.33%不能对辅助受体的使用作出预测。所有B′/C重组毒株被预测可能使用CCR5。CRF0 1 AE重组毒株有 90 .4 8%被预测可能使用CCR5,没有被预测为使用CXCR4的序列 ,9.52 %不能作出预测。结论　B′亚型毒株大部分可能为NSI型 ,少部分可能为SI型 ,而B′/C和CRF0 1 AE重组毒株绝大部分为NSI型。我国主要流行株的V3～V4区尤其是V3环的氨基酸     

我国云南省艾滋病病毒感染的长期不进展者人免疫缺陷 …

目的 人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）ｔａｔ基因是该病毒的调控基因之一。本研究是探讨ｔａｔ基因变异是否影响ＨＩＶ－１感染者的病程进展。方法 从云南ＨＩＶ流行区的２２例感染后临床进程不同的人抽取外周血,提取核酸,用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＨＩＶ－１的ｔａｔ基因,并进行了核酸序列测定和分析。