产生霍乱毒素B亚单位的重组卡介苗诱导的免疫应答[英]

经粘膜途径接种的抗原的免疫原性通常弱于全身途径接种，因此粘膜抗原接种后需要粘膜佐剂以获得有效水平的免疫应答。已知五聚体形式的霍乱毒素B亚单位(CTB)是有效的粘膜佐剂，当经粘膜途径与抗原一起给予时能增强抗原特异性分泌性IgA     

霍乱毒素B亚单位与p277融合基因在大肠杆菌中表达及免疫分析

为了增强多肽表位的免疫原性,构建了霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)和p277的融合基因CTB-p277,将该融合基因克隆到pET28a( )中,获得原核表达载体pET28a-CTB-p277;并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经2%的乳糖诱导5 h后的表达产物用12%的SDS-PAGE分析表明可以表达融合蛋白,融合蛋白占全菌蛋白约40%,且主要以包含体的形式存在。包含体经洗涤、裂解,用DEAE纤维素离子交换纯化,可以获得99.1%的重组蛋白。重组蛋白的包含体经复性后,在体外可以自组装成五聚体。重组蛋白免疫KK-Ay小鼠后,ELISA的分析表明可以产生抗p277的抗体。血糖和体重的测定结果显示,给药组小鼠的血糖有明显的降低,体重也有相应的减轻。同时GM1-ELISA的检测表明,CTB-p277在体外可以和神经节苷脂GM1(Monosialoganglioside)特异结合,具有生物活性。     

霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链结构类似多肽融合蛋白的制备

为了在大肠杆菌中表达霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素B链(9-23)肽段结构类似多肽(Ins B(9-23))的融合蛋白,使用基因工程方法构建了CTB与Ins B(9-23)的融合基因CTB-Ins B-X若干,并将融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌株经乳糖诱导后,其表达产物经过12%SDS-PAGE分析表明该菌株可以包含体形式表达融合蛋白,并制备得到纯度较高的重组蛋白。该重组蛋白的包含体经过变性、复性后,可以在体外自组装成五聚体结构。GM1-ELISA分析结果表明,重组蛋白在体外可以与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合,表明该融合蛋白保持了CTB形成五聚体的生物活性。     

重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位鼻腔免疫凝胶剂的研制

目的研制重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位疫苗凝胶剂,考察其特性及免疫效果。方法以卡泊波为基质,脱氧胆酸钠为黏膜吸收促进剂,制备凝胶剂,以落球法测定凝胶的黏度,SDS-PAGE电泳分析脱氧胆酸钠对蛋白纯度的影响,以免疫印记检测疫苗蛋白的完整性,以留样观察法及离心法考察凝胶的稳定性,以含抗原凝胶剂鼻腔免疫BALB/c小鼠,并与溶液剂相比较,考察凝胶剂的免疫效果。结果制备的凝胶剂稳定性好,凝胶的黏度为8050mPa.s,脱氧胆酸钠不影响蛋白的纯度,抗原蛋白的完整性良好。小鼠鼻腔免疫凝胶剂后产生了较强的特异性血清IgG及胃肠sIgA反应,优于液体免疫。结论重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位凝胶剂性质稳定,具有生物黏附性,可提高免疫效果,是较好的鼻腔免疫剂型。     

2型志贺毒素B亚单位鼻腔疫苗能交叉预防1和2型志贺毒素

肠出血性大肠杆菌（EHEC）引起出血性肠炎，在某些情况下可导致出血性尿毒症综合征。EHEC产生2种主要的志贺毒素（Stx）-St1和Stx2，Stx2与最严重的疾病相关，而Stx1则导致疾病恶化。Stx含有一个A亚单位（StxA）和5个B亚单位（StxB）。目前人们致力于开发鼻腔接种的StxB疫苗，以期诱导能中和Stx1和Stx2的抗StxB抗体。