波动和恒定的葡萄糖浓度对大鼠肾小球系膜细胞TRPC6和TRPC1表达的影响

目的 研究波动和恒定的葡萄糖浓度对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)瞬时受体势TRPC6和TRPC1表达的影响,探讨糖尿病肾病的发病机制.方法 将体外培养的各组系膜细胞分别在波动和恒定葡萄糖浓度中分别培养24、48、72 h后,进行细胞学形态结构观察,MTT法测定细胞存活率,RT-PCR检测细胞TRPC6和TRPC1特异性条带灰度的表达情况.结果 波动血糖组在TRPC6基因的表达较恒定高糖组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 波动葡萄糖浓度对GMC的损伤以及促进细胞凋亡方面较恒定葡糖糖浓度更严重,是导致糖尿病肾病发生和发展的原因之一.     

PDGF对大鼠肾小球系膜细胞表达PAI-1的影响

目的:探讨血小板源性生长因子(PDGF-BB)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的影响.方法:以0、5、10 ng/ml终质量浓度的PDGF-BB刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分别作用0、12、24、48 h, 以发色底物显色法检测细胞上清液中PAI-1的活性;以0、5、10 ng/ml质量浓度的PDGF-BB刺激系膜细胞24 h和10 ng/ml质量浓度的PDGF-BB刺激细胞0、12、24、48 h, 半定量RT-PCR观察系膜细胞PAI-1 mRNA表达情况.结果:0、5、10 ng/ml的PDGF-BB 作用于系膜细胞24 h,其PAI-1 mRNA/GAPDH mRNA分别为0.296、 0.428、0.542.10 ng/ml的PDGF-BB作用系膜细胞0、12、24、48 h, PAI-1 mRNA/GAPDH mRNA分别为0.156、0.345、0.493、0.597,表现为浓度和时间依赖效应.PDGF-BB也可浓度依赖性地增加PAI-1的活性,24 h内活性逐渐增高,48 h时下降.结论:PDGF-BB可上调体外培养的大鼠肾小球系膜细胞PAI-1的活性及其mRNA的表达,提示PDGF可能通过抑制细胞外基质的降解导致细胞外基质的积聚,从而参与肾小球硬化的过程.     

不同葡萄糖浓度刺激对大鼠系膜细胞MCP-1表达及合成的影响

目的 观察不同浓度葡萄糖对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞表达和合成单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,探讨MCP-1在糖尿病肾病发生发展中的意义.方法 根据含糖浓度将大鼠肾小球系膜细胞分为3组:① A组(5.6 mmol/L);② B组(17.5 mmol/L)组;③ C组(30 mmol/L).RT-PCR检测系膜细胞MCP-1mRNA表达,ELISA测定细胞上清MCP-1浓度.结果 ① 系膜细胞MCP-1mRNA表达:A组呈弱表达;B组24 h后表达增强,48 h达高峰,与A组比较P<0.01;C组12 h时表达已升高,24 h持续高水平,与A、B组同时间点比较P<0.01,但48 h时表达降低.② 上清液MCP-1蛋白浓度:A组MCP-1浓度随时间变化升高不明显;B组MCP-1浓度随时间变化明显升高,与A组比较P<0.01(除12 h段外);C组随时间变化进一步升高,48 h时仍持续高水平,与A、B组比较P<0.01.结论 葡萄糖刺激系膜细胞MCP-1表达和合成在一定范围内增加,并具有时间和浓度依赖性.增高的表达和合成的MCP-1水平可能参与了糖尿病肾病发生发展.     

TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞PAI-1表达的影响

目的：观察不同浓度重组人转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠肾系膜细胞增殖情况和纤溶酶原激活物(PAI-1)抑制物表达水平的影响。方法：采用MTT和流式细胞仪检测细胞增殖,Western blotting和RT-PCR法检测PAI-1的表达水平。结果：与对照组相比,0.1和0.5 μg·L^-1 TGF-β1诱导肾小球系膜细胞增殖,增殖率分别为(146.6±10.2)%和(134.6±14.5)%,PAI-1 mRNA和蛋白表达增强;而5和25 μg·L^-1 TGF-β1诱导的细胞增殖率为(75.2±13.2)%和(67.5±11.1)%,PAI-1 mRNA和蛋白表达无明显变化。结论：低剂量TGF-β1促进大鼠系膜细胞增殖、诱导PAI-1表达;高剂量TGF-β1则抑制系膜细胞增殖。     

PDGF对大鼠肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋白和PAI-1的影响

目的：探讨血小板源性生长因子fPDGF）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋白（VN）和纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的影响。方法：分别以0、5、10ng／rnl的PDGF—BB刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞12、24、48h．以ELISA法检测培养上清中FN水平，发色底物显色法检测PAI-1的活性；以0、5、10ng／ml的PDGF—BB刺激大鼠系膜细胞24h和10ng／ml PDGF-BB分别作用0、12、24、48h。RT-PCR方法检测系膜细胞PAI-1 mRNA的表达。结果：PDGF-BB在10ng／ml以内随浓度增加可促进大鼠肾小球系膜细胞PAI-1 mRNA和FN表达．在48h内其表达呈时间依赖性。而PAI-1活性在24h时表达最高，以后逐渐下降、结论：PDGF-BB可上调FN和PAI-1及其mRNA表达．提示PDGF可能通过促进细胞外基质合成并抑制其降解而导致肾小球细胞外基质的积聚。     

葡萄糖浓度波动对单核细胞表达白介素6的影响

目的通过检测不同浓度葡萄糖及葡萄糖浓度波动对单核细胞产生白介素6（IL 6）的影响,探讨血糖波动在糖尿病大血管病变发生机制中的作用。方法实验所采用的细胞为THP 1细胞株,根据葡萄糖浓度及其变化分为对照组、高葡萄糖组、葡萄糖浓度波动组和渗透压控制组。将细胞接种于六孔培养板,每12?h换液1次,留取上清液。72?h后将每次留取的上清液等量混匀后采用酶联免疫法测定IL 6浓度,比较各组差异有无统计学意义。结果高葡萄糖组IL 6浓度明显高于对照组(P=0.000),葡萄糖浓度波动组高于高葡萄糖组(P=0.000),渗透压控制组介于高葡萄糖组和葡萄糖浓度波动组之间。结论葡萄糖浓度波动较单纯高糖更能促进单核细胞分泌IL 6,提示葡萄糖浓度波动有更强的细胞毒性。     

醛固酮对大鼠肾小球系膜细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的:探讨醛固酮(ALD)对大鼠肾小球系膜细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响,及转化生长因子β1(TGF-β1)是否参与其信号通路。方法:大鼠肾小球系膜细胞加入不同浓度的ALD共同培养0、12、24、36、48h,RT-PCR方法评价CTGF mRNA的表达;用ELISA方法检测TGF-β1蛋白的表达;并用TGF-β1/Smads信号通路的特异性丝、苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine(STA)加以对比。结果:ALD刺激后肾小球系膜细胞CTGF mRNA表达水平增加,且呈剂量依赖性,TGF-β1蛋白表达也明显增加;用STA预处理1h后再用ALD刺激24h,则CTGFmR-NA的表达无明显变化。结论:ALD通过TGF-β1/Smads途径上调肾小球系膜细胞表达CTGF。     

LOX-1在D-葡萄糖培育人肾小球系膜细胞的表达

目的 研究血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在D-葡萄糖培养人肾小球系膜细胞(HGMC)的表达,探讨糖尿病肾脏损伤的机制.方法 体外培养HGMC,用RT-PCR法检测LOX-1 mRNA的表达,用Western blot法检测p38MAPK蛋白质的相对含量.结果 D-葡萄糖以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1 mRNA的表达,该作用可被LOX-1特异性阻滞剂JTX92部分抑制;D-葡萄糖以时间和浓度依赖的方式上调p38MAPK蛋白的表达,该作用也可被LOX-1特异性阻滞剂JTX92部分抑制.结论 D-葡萄糖能以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1的表达.高浓度D-葡萄糖可能通过上调LOX-1 mRNA表达,激活细胞内的p38MAPK信号传递途径,参与糖尿病肾病的发生发展.     

TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞ⅩⅧ型胶原表达的影响

目的　探讨转化生长因子 β1(TGF β1)对ⅩⅧ型胶原在大鼠肾小球系膜细胞中表达的影响 ,以及两者在大鼠抗Thy 1肾小球肾炎中的相互关系。方法　采用RT PCR、Westernblot法观察外源性TGF β1对大鼠肾小球系膜细胞中ⅩⅧ型胶原表达的影响 ;制备大鼠抗Thy 1肾小球肾炎模型 ,应用免疫组织化学ABC方法分别观察TGF β1和ⅩⅧ型胶原在大鼠肾组织中的表达 ,并对其染色强度作图像定量分析。结果　外源性TGF β1作用后 ,大鼠肾小球系膜细胞中ⅩⅧ型胶原的表达升高 ,并显示出一定的时间与浓度依赖性。大鼠抗Thy 1肾小球肾炎中TGF β1的表达在 1、3和 5d仅有微量表达 ,第 7天开始其表达明显且随时间增强 ;ⅩⅧ型胶原和Ⅳ型胶原的表达趋势都与TGF β1吻合 ,ⅩⅧ型胶原的表达与TGF β1的表达间具有显著的相关性。结论　ⅩⅧ型胶原的表达与TGF β1的作用相关 ,可能参与了肾小球肾炎的发生发展过程 ,并且可能在肾小球纤维化中起一定的作用     

缬沙坦对Thy-1肾炎大鼠肾小球系膜细胞P27表达的影响

目的　观察Thy 1肾炎大鼠系膜细胞增生及P2 7表达 ,以及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对其干预作用。方法　设正常组、Thy 1肾炎组及Thy 1肾炎 +缬沙坦治疗组。分别于各组疾病诱导后第 1、3、5、7d取肾脏行病理检查 ,免疫组化检测肾小球内PCNA、P2 7蛋白的表达 ,Westernblot分析肾小球内P2 7的表达。结果　在正常大鼠系膜细胞P2 7存在高表达 ,而在肾炎大鼠随系膜细胞增生 ,其P2 7表达减少。缬沙坦治疗组第 3～ 7d肾小球系膜细胞增生、系膜区扩张程度以及肾小球内PCNA表达低于肾炎组 (P <0 .0 5 ) ,而肾小球内P2 7表达高于肾炎组相应时间点 (P <0 .0 5 )。结论　肾小球系膜细胞非增殖状态的维系与其P2 7的高表达相关 ,缬沙坦可维持系膜细胞P2 7的高表达 ,抑制系膜细胞增殖及系膜扩张。提示缬沙坦对Thy 1肾炎大鼠有一定治疗作用     

肾小球内皮细胞对系膜细胞表达细胞粘附分子的影响

肾小球内皮细胞对系膜细胞表达细胞粘附分子的影响傅博程庆砾陈香美李文歌肾小球内皮细胞与肾小球基底膜、系膜细胞相毗邻，肾小球内皮细胞的损伤往往可以导致系膜细胞的病变［１］。为了探讨内皮细胞与系膜细胞相互关系在肾小球损伤演变过程中的作用，我们观察了肾小球内...     

胰岛素和卡托普利对糖尿病大鼠肾小球系膜细胞的影响

目的　观察胰岛素和卡托普利对体外培养的肾小球系膜细胞生长的影响和白细胞介素６（ＩＬ－６）及肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）产生情况。方法以糖尿病大鼠模型对此进行研究。结果糖尿病大鼠（ＤＭ大鼠）系膜细胞其氚-胸腺嘧啶核苷（~３Ｈ－ＴｄＲ）掺入的每分钟记数值明显高于正常大鼠。加不同浓度胰岛素时ＤＭ大鼠和正常大鼠系膜细胞~３Ｈ－ＴｄＲ掺入的记数和上清液中ＩＬ－６的含量均分别较不加胰岛素时明显升高。加不同浓度卡托普利时，ＤＭ大鼠系膜细胞~３Ｈ－ＴｄＲ掺入的记数值和上清液中ＴＮＦ含量较不加组明显减低。结论对正常大鼠系膜细胞抑制作用只有在卡托普利１０~(－３)ｍｏｌ／Ｌ时才表现出来。胰岛素促进~３Ｈ－ＴｄＲ掺入和ＩＬ－６的产生，卡托普利抑制~３Ｈ－ＴｄＲ掺入和ＴＮＦ的产生。     

螺内酯对醛固酮诱导的大鼠肾小球系膜细胞MCP-1表达的影响

目的 观察螺内酯(Spi)对醛固酮(Ald)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(RMCs)表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,探讨其肾脏保护机制.方法 体外培养RMCs,分组如下:NG组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L),Ald组(Ald 10-7 mol/L),A组(Spi 10-7 mol/L + Ald 10-7...     

细胞因子对肾小球系膜细胞表面表达细胞间粘附分子1的影响

细胞因子对肾小球系膜细胞表面表达细胞间粘附分子１的影响郭志勇梁嘉靖△崔若兰近年来免疫病理学研究已经证实细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ－１）作为细胞粘附分子中免疫球蛋白超家族成员之一，通过与炎性细胞表面同族型配体之间相互作用形成粘附，在免疫监测、炎症反应、...     

Resveratrol对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1表达的影响

目的:探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1表达的影响及Resveratrol的干预作用.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞.①分为正常对照组(NC组,匍萄糖浓度5.6 mmol/L)、高糖组(HG组,葡萄糖浓度30 mmol/L),分别观察24、48、72 h;②分为NC组、HC组、Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+Resvemtrol 20 μmol/L)和高糖+Rcsvcratrol组(HG+Res 组,葡萄糖浓度30 mmol/L+Resveratrol浓度分别为5、10、15、20 μmol/L),各组细胞分別培养48 h.用半定量RT-PCR和Western blotting法检测细胞内TGF-β1 mRNA和蛋白表达变化.结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达明显增加,差异均有显著性,P值均<0.01;②与HC组相比,HG+Resveratrol干预后,大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性减少,差异均有显著性(P值分别为<0.05,<0.01).Res组和NC组之间TGF-β1 mRNA和蛋白表达的差异无显著性(P>0.05).结论:高糖能上调大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达,Resveratrol可能通过抑制高糖引起的系膜细胞TGF-β1高表达而在糖尿病肾病中起治疗作用.     

亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞表达p38MAPK和MCP-1的影响

目的:观察亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1表达p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)的影响,从而研究硒在防治糖尿病肾病(DN)中的作用机制. 方法:分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终末产物(AGEs)刺激HBZY-1细胞;先给予100 nmol/L亚硒酸钠预处理后,再分别以上述4种刺激因素孵育HBZY-1细胞,分别检测HBZY-1细胞p38MAPK和MCP-1的表达并比较. 结果:4种刺激因素均可作为独立因素,导致HBZY-1细胞p38MAPK和MCP-1表达量增加;亚硒酸钠能抑制上述4种因素所致的p38MAPK和MCP-1的表达. 结论:亚硒酸钠通过抑制p38MAPK和MCP-1在HBZY-1细胞的表达, 从而有效防治DN的发生发展,表明硒在DN的防治过程中发挥积极作用.     

TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞XⅧ型胶原表达的影响

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对XⅧ型胶原在大鼠肾小球系膜细胞中表达的影响，以及两者在大鼠抗Thy-1肾小球肾炎中的相互关系。方法 采用RT-PCR、Western blot法观察外源性TGF-β1阻对大鼠肾小球系膜细胞中中XⅧ型胶原表达的影响；制备大鼠抗Tny-1肾小球肾炎模型，应用免疫组织化学．ABC分别观察TGF-β1和XⅧ型胶原在大鼠肾组织中的表达，并对其染色强度作图像定量分析。结果外源性TGF-β1阻作用后，大鼠肾小球系膜细胞中胞中XⅧ型胶原的表达升高，并显示出一定的时间与浓度依赖性。大鼠抗Thy-1肾小球肾炎中TGF-β1阻的表达在1、3和5d仅有微量表达，第7天开始其表达明显且随时间增强；XⅧ型胶原和Ⅳ型胶原的表达趋势都与TGF-β1阻吻合，XⅧ型胶原的表达与TGF-β1阻的表达间具有显著的相关性。结论 XⅧ型胶原的表达与TGF-β1的作用相关，可能参与了肾小球肾炎的发生发展过程．并且可能在肾小球纤维化中纤维化中起一定的作用。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠系膜细胞葡萄糖转运蛋白1表达的影响

目的　研究血管紧张素Ⅱ (ANGⅡ )、高糖及血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂 (AT1RA)对于大鼠系膜细胞 (MCs)上葡萄糖转运蛋白 1(GLUT1)表达及MCs所合成的系膜区细胞外基质 (ECM )的影响。方法　采用免疫组化法检测大鼠系膜细胞上GLUT1蛋白的合成 ,半定量聚合酶链式反应 (RT PCR)测定系膜细胞GLUTmR NA水平 ,ELISA法测定细胞培养上清液中纤连蛋白 (FN)的表达。结果　ANGⅡ作用后能显著增加大鼠MCs GLUT1的转录及蛋白合成 (P <0 .0 5 ) ,这种作用具有浓度及时间依赖性且能被AT1RA伊贝沙坦 (Irbesartan)所阻断。高糖 (2 7.8mm1/L)作用 4h后未能增加MCsGLUT1的转录及表达。ANGⅡ能使培养的MCs上清液中FN含量显著增加 (P <0 .0 0 1) ,Irbesartan能使增加的FN降低 5 0 .5 4%。结论　ANGⅡ能从转录水平刺激MCs上GLUT1的表达 ,增加ECM的合成 ,ANGⅡ的这种作用通过AT1受体介导并能被AT1RA阻断。ANGⅡ可通过上调GLUT1的表达参与糖尿病肾病 (DN)的发生及发展。     

葡萄糖浓度波动对INS-1细胞胰岛素分泌的影响

目的初探葡萄糖浓度波动对大鼠胰岛素瘤INS-1细胞胰岛素分泌功能影响机制。方法将INS-1细胞随机分为正常糖组（5.5 mmol/L葡萄糖培养液培养）、持续高糖组（16.7 mmol/L葡萄糖培养液培养）、波动组（用16.7 mmol/L葡萄糖培养液培养2 h,再换5.5 mmol/L培养3 h,每天重复3次,夜间9 h维持在5.5 mmol/L的培养液中）、N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）＋正常糖组、NAC＋持续高糖组、NAC＋波动组,后3组的培养基中均预先负载终浓度为1.0 mmol/L的NAC,余干预措施相同,均干预72 h。荧光素酶方法检测细胞内三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate,ATP）含量,放射免疫分析法测定胰岛素分泌水平。结果 INS-1细胞ATP含量及胰岛素分泌水平在持续高糖组及波动组均较正常糖组显著下降,且波动组下降更明显,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。NAC＋波动组及NAC＋持续高糖组细胞ATP含量及胰岛素分泌水平分别较波动组及持续高糖组显著增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论持续性高糖及波动性高糖损伤INS-1细胞的胰岛素分泌可能与减少细胞ATP含量有关,且波动性高糖较前者更严重,氧化应激可能是波动性高糖及持续性高糖导致INS-1细胞ATP减少的机制。     

p38MAPK对大鼠肾小球系膜细胞表达PPAR-γ的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38MAPK)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ (peroxisome proliferator-activated receptors-γ, PPAR-γ)的关系,从而研究p38MAPK和PPAR-γ在糖尿病肾病中的作用机制.方法 分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物孵育大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1;先分别以p38MAPK特异抑制剂SB203580预处理细胞系HBZY-1,再给予上述4种因素孵育细胞系HBZY-1,观察细胞系HBZY-1 p38MAPK和PPAR-γ的表达.结果 高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物均可独立激活p38MAPK,使其磷酸化表达量增加,PPAR-γ表达明显减少;SB203580预处理后,PPAR-γ表达显著增加.结论 在大鼠肾小球系膜细胞,p38 MAPK对PPAR-γ具有拮抗作用,表明PPAR-γ的激活可能具有直接的肾脏保护作用.