RNAi在肿瘤中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的基因沉默(genesilencing)。在此过程中,与双链RNA有同源序列的信使RNA(mRNA)被降解,从而抑制了该基因的表达。因RNAi所致的基因沉默发生在转录后水平,所以被称为转录后基因沉默(post transcrip     

RNA干扰在血液病研究中的应用

去除或降低某个或某些基因在细胞或机体中的表达,是研究正常基因的结构、功能以及疾病的发病机制的重要手段,基因敲除和反义技术是既往常用的实验技术,但存在操作复杂、不易控制、结果不稳定、无法预知实验效果等缺点.近年来RNA干扰(RNAi)技术的开发和利用,成为基因研究的新手段.RNA干扰是由双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)触发的转录后基因沉默机制,广泛存在于动物、植物等真核生物界.     

RNAi的研究进展

RNAi(RNA interference,即RNA干扰)是指通过反义RNA与正链RNA形成双链RNA特异性地抑制靶基因的现象,它通过人为地引入与内源靶基因具有相同序列的双链RNA(有义RNA和反义RNA),从而诱导内源靶基因的mRNA降解,达到阻止基因表达的目的[1-2].RNAi是最近几年发现和发展起来的新兴基因阻断技术.     

基因沉默的工具-RNA干扰技术的研究进展

<正>RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指与靶基因序列同源的双链RNA(dsRNA)所诱导的转录后基因沉默现象,是真核生物抵御病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制,也可替代基因敲除、核酶、反义核酸等进行基因沉默相关研究。众所周知,基因的表达具有选择性,我们发现生物体内存在一套RNA监视系统,能通过多种途径产生异常dsRNA,诱发RNAi,激活抑制基因,控制活跃基因,从而参与基因选择性表     

RNA干涉技术在临床医学中的研究进展

RNA干涉(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double strand RNA,dsRNA)引起的转录后基因沉默机制,具有序列特异性和高效性,RNAi作为一门新的基因阻断技术,在临床医学研究及基因治疗中具有广阔的应用前景。本文对RNAi作用机制以及在疾病发病机制及治疗方面的研究进展综述如下。     

核酸干扰技术的应用前景

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是正常生物体内抗病毒、抑制特定基因过表达的一种现象.     

HULC RNA在肝癌细胞中的表达及其对邻近基因SLC35B3表达的影响

目的 探讨长片段非编码RNA--肝癌高表达基因(HULC)RNA在不同的肿瘤细胞系中的表达情况以及对其邻近基因表达的影响.方法 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 在不同来源的肿瘤细胞系中检测HULC RNA的表达情况,并通过生物信息学的方法 寻找与其邻近的基因,再通过实时PCR技术检测HULC对邻近基因的表达情况的影响.结果 在检测的8株细胞系:人胚肾细胞系293T,食管癌细胞系EC9706、KYSE150,结肠癌细胞系HCT116,肝癌细胞系SMMC7721、HepG2以及肺癌细胞系H446、H1229中,非编码RNA HULC在HepG2细胞中的表达量特异性升高.HULC基因的附近(＜1000 bp)没有编码基因存在,与其距离最近的基因是SLC35B3,且间距在约200 000 bp.与HULC RNA表达量较低的SMMC-7721细胞相比,内源性高表达HULC RNA的HepG2细胞中SLC35B3的转录更高[(0.477±0.040)%比(0.129±0.004)%,P＜0.01].在SMMC7721细胞中转染pcDNA3.1-HULC质粒后,其邻近基因SLC35B3表达略微升高.而通过RNA干扰的方法 敲降HULC RNA后,SLC35B3基因的表达也随之下降.HepG2细胞转染2条小干扰RNA(siRNA)后,SLC35B3基因的表达分别为[(0.283±0.007)%和(0.387±0.015)%],并且第1条siRNA转染后与阴性对照[(0.477±0.042)%]比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 肝癌细胞HepG2中特异性高表达的非编码RNA HULC对其邻近基因SLC35B3的表达有一定影响作用.     

siRNA技术诱导基因沉默在骨科疾病中的研究进展

<正>自从1998年Fire等[1]证实Guo等[2]发现的正义RNA抑制同源基因表达的现象为RNA干扰(RNA interference,RNAi)以来,RNAi技术经历了一个迅速发展的过程。RNAi技术是利用双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)降解细胞内同源信使RNA(messenger RNA,m RNA),从而阻断特定基因表     

RNA干扰及其抗病毒作用

RNA干扰 (RNAi)是一种新发现的通过 ds RNA介导的特异同源靶基因沉默途径。 RNAi主要包括两个步骤 :RNase 样核酸酶切割 ds RNA而生成 2 1- 2 3nt的 si RNA和 si RNA引导 RNA诱导的沉默复合体 (RISC)降解同源性靶基因 m RNA。在某些生物体中 RNAi具有放大效应。通过将 - 2 1nt si RNA导入哺乳动物细胞的 RNAi技术不仅可避免非特异干扰素反应 ,更重要的是还可介导序列特异的基因沉默。最近将 RNAi应用于许多病毒性疾病的治疗研究均取得了显著的基因沉默效果 ,预示 RNAi有望成为一种预防、治疗病毒性疾病的新手段。     

RNA干扰EGFR基因对卵巢癌细胞放疗敏感性影响的实验研究

目的:构建针对表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)基因的小于扰RNA(Small interference RNA,siRNA)质粒,转染人卵巢癌SKOV3细胞株后,检测RNA干扰(RNA interference,RNAi)对EGFR基因表达及评估细胞对放疗敏感性的影响.方法:体外构建EGFR小发卡状RNA(Short hairpin RNA,shRNA)的表达质粒,脂质体法转染入SKOV3细胞及G418筛选阳性克隆.实验随机分为阳性RNA干扰组(A组)、阴性RNA干扰组(B组)、空白对照组(C组).采用RT-PCR、Western Blot技术检测EGFR mRNA及其蛋白质的表达情况.分别给予不同放射剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射,MTF法绘制细胞存活曲线.结果:靶向EGFR的序列特异性shRNA可明显抑制EGFR基因的表达,EGFR mRNA和蛋白的抑制率分别为77.5%和76.1%;序列特异性shRNA-EGFR可明显提高SKOV3细胞对放疗的敏感性,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:体外研究表明RNAi沉默EGFR基因可以提高卵巢癌SKOV3细胞对放疗的敏感性.     

大鼠自发性高血压致病相关基因的初步筛选

目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压大鼠(WKY)肠系膜动脉和肾脏组织中基因表达的差异.方法:提取成年SHR和WKY的二级肠系膜动脉和肾脏总RNA,利用高通量RNA阵列技术(RNA array)检测SHR和WKY二级肠系膜动脉和肾脏组织基因表达水平不同的基因,再用RT-PCR证实部分基因表达的改变.结果:芯片筛选出38条基因,其中上调基因19条,下调基因19条.经RT-PCR验证胰岛素样生长因子结合蛋白5和原肌凝蛋白6基因上调,锌指蛋白10和硬脂酰辅酶去饱和酶1基因下调.结论:筛选出的差异基因可能是高血压的相关基因,深入研究筛选出的相关基因及其功能,将为进一步探讨高血压病相关的致病基因打下良好的基础.     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究现状

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是利用双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),高效、特异性降解细胞内同源信使RNA(messenger RNA,mRNA),从而阻断特定基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型.1998年Fire等[1]首次应用RNAi技术将dsRNA正义链与反义链的混合物注入线虫体内,结果发现注入dsRNA比单独注入单链RNA引起的基因沉默要强得多,并可导致子一代同源基因的沉默.     

大鼠ATPase a3基因siRNA筛选及慢病毒载体构建

[目的]设计、筛选大鼠破骨细胞(osteoclast,OC)骨吸收关键基因ATPase a3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)并构建其慢病毒表达载体,为研究以OC亢进的骨代谢疾病莫定基础.[方法]设计ATPase a3基因shRNA序列并合成小发卡RNA(short hairpin ...     

治疗性基因沉默在神经系统疾病中的研究

近期,RNA的内源性细胞基因沉默机制——RNA干扰(RNA interference,RNAi)——在蠕虫、果蝇、鼠和人类中被发现。这个发现开辟了RNA治疗的领域并且使应用RNA为基础的基因沉默技术治疗人类疾病的发展前景更为乐观。神经系统疾病是一类适用于RNA疗法的疾病。此类疾病是发达国家人口死亡的主要原因,并呈上升趋势,目前缺乏有效的治疗方法,因此急需一种崭新的针对此类疾病分子病理的治疗方法。发展基因疗法特别适用于神经系统有以下原因[1](:1)与其他组织相比,脑组织表达更多的特异基因序列,因而许多遗传疾病表现为神经学表型。(2)因为血…     

siRNAs介导的基因沉默技术和相关应用的研究进展

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导的、序列特异的转录后基因沉默机制,是一古老的细胞反应通路,其在抵抗病毒感染、抑制转座子活动、调控内源性基因表达等方面发挥重要作用.近年来,短链RNA干扰(siRNAs)已成功地应用于哺乳动物中,该文就其介导的基因沉默技术和相关应用的研究进展进行综述.     

RNA干扰及其在药用植物代谢工程中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是把双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)导入某些生物和细胞而引起同源mRNA降解的现象,是一种转录后基因沉默机制。dsRNA在体内被Dicer二聚体切割成21～25bp的小干涉RNA(smallinterfering RNA,siRNA),然后在siRNA引导下,由RNA诱导沉默复合体(RN Ainduced silencing complex,RISC)降解靶mRNA。RNA干扰作为一种新型反义技术可以有效的抑制特异基因的表达,因此可用于对药用植物次生代谢产物的生物合成途径进行调控,达到调控天然产物生物合成的目的。现将RNAi机制研究的最新进展及RNAi在药用植物代谢工程方面的应用进行综述。     

微小RNA(miRNA)与胰腺癌的基因诊断和治疗

miRNA(micro RNA,微小RNA)为一类近年新发现的,由21～25个核苷酸构成的非编码短序列单链RNA分子,其研究始于1993年首个发现的可时序调控线虫胚胎后期发育的基因lin-4.自2001年《science》杂志连续报道三个实验室从线虫、果蝇和人体克隆的几十个lin-4的小RNA基因,随后许多实验室在包括人类、果蝇、植物等多种生物物种中鉴别出数百个miRNA.