体外受精周期颗粒细胞卵泡刺激素受体表达与卵巢反应

目的探讨促排卵周期颗粒细胞卵泡刺激素受体(FSHR)表达与卵巢反应性的关系及其对妊娠结局的影响。方法2006年3月至同年12月,实施体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕者43名,按获卵数量分为低反应组(<5枚)、正常反应组(5~15枚)和高反应组(>15枚)。采用免疫荧光技术检测各组卵巢颗粒细胞FSHR的表达,比较各组FSHR表达强度、胚胎实验室数据和临床结局。结果颗粒细胞FSHR表达量以高反应组最高,正常反应组次之,低反应组最低,三组组间比较均有显著差异(P<0.05);三组间注射人体绒毛膜促性腺激素(HCG)日血雌二醇(E2)水平、获卵数和冻胚数比较,均有显著性差异(P<0.05);而受精率、卵裂率、种植率及妊娠率比较无显著性差异(P>0.05);相关性分析显示,颗粒细胞FSHR的表达与获卵数(r=0.719)及外周血E2水平(r=0.516)呈显著正相关(均P<0.05),与受精率和卵裂率无明显相关性(P>0.05)。结论促排卵时颗粒细胞FSHR表达和卵巢反应性均较高;FSHR表达量与获卵数和血清E2水平呈正相关。研究提示颗粒细胞FSHR水平可能直接影响卵泡发育。     

体外受精周期颗粒细胞卵泡刺激素受体表达与卵巢反应

目的 探讨促排卵周期颗粒细胞卵泡刺激素受体(FSHR)表达与卵巢反应性的关系及其对妊娠结局的影响.方法 2006年3月至同年12月,实施体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕者43名,按获卵数量分为低反应组(＜5枚)、正常反应组(5～15枚)和高反应组(＞15枚).采用免疫荧光技术检测各组卵巢颗粒细胞FSHR的表达,比较各组FSHR表达强度、胚胎实验室数据和临床结局.结果 颗粒细胞FSHR表达量以高反应组最高,正常反应组次之,低反应组最低,三组组间比较均有显著差异(P＜0.05);三组间注射人体绒毛膜促性腺激素(HCG)日血雌二醇(E2)水平、获卵数和冻胚数比较,均有显著性差异(P＜0.05);而受精率、卵裂率、种植率及妊娠率比较无显著性差异(P＞0.05);相关性分析显示,颗粒细胞FSHR的表达与获卵数(r=0.719)及外周血E2水平(r=0.516)呈显著正相关(均P＜0.05),与受精率和卵裂率无明显相关性(P＞0.05).结论 促排卵时颗粒细胞FSHR表达和卵巢反应性均较高;FSHR表达量与获卵数和血清E2水平呈正相关.研究提示颗粒细胞FSHR水平可能直接影响卵泡发育.     

Correlation between anti-Mullerian hormone and follicle-stimulating hormone receptor mRNA expression in granulosa cells in vitro.

目的 体外培养小鼠原代颗粒细胞培养液中,加入不同浓度的抗苗勒管激素(AMH),比较各组间小鼠颗粒细胞上卵泡刺激素受体(FSHR)mRNA的表达情况,探讨体外培养颗粒细胞中AMH与FSHRmRNA表达的关系.方法 选取4～5周的昆明雌性小鼠,腹腔注射孕马血清促性腺激素,48～54h后颈椎脱臼法处死小鼠,取双侧卵巢,采用机械分离法释放颗粒细胞,胰蛋白酶消化细胞,低速离心分离细胞,用含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基置于37℃、5%CO2培养箱中培养.显微镜观察细胞形态,流式细胞术分离细胞,并用免疫荧光法对所培养的颗粒细胞进行鉴定.同时在体外培养的小鼠原代颗粒细胞培养液中加入不同浓度(5、10、20、30、40ng/mL)的AMH,测定每组培养基中AMH的终浓度,并用荧光定量PCR技术检测每组颗粒细胞中FSHR mRNA 的表达.结果 分离培养的颗粒细胞纯度大于80%;随AMH浓度加大,小鼠颗粒细胞中FSHR mRNA的表达逐渐降低,当AMH浓度为 5 和10ng/mL时,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),且5 ng/mL浓度组颗粒细胞上FSHR mRNA的表达量最高.结论 用机械分离加胰酶消化加低速离心能得到纯度较高活性很好的颗粒细胞,用FSHR鉴定颗粒细胞是一种简便易行的方法,AMH浓度与颗粒细胞上FSHRmRNA表达呈一定负相关,表明AMH有可能通过抑制FSHR表达降低FSH敏感性,从而参与卵巢早衰的病理生理过程.     

抗苗勒管激素卵泡刺激素雌二醇检测在诊断卵巢早衰中的应用价值研究

目的 探究抗苗勒管激素(AMH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)在卵巢早衰(POF)中的诊断价值.方法 选择2019年2月—2020年5月东莞市东部中心医院收治的POF患者80例为POF组,同期行健康体检的女性72例为对照组.比较2组AMH、FSH及E2水平,另分析AMH、FSH、E2单独及联合检测在POF中的诊...     

超排卵时卵巢对促性腺激素的反应与颗粒细胞促卵泡激素受体的表达

目的 :探讨促排卵周期卵巢对促性腺激素反应性与颗粒细胞促卵泡激素受体 (FSHR)表达的关系。方法 :根据取卵时卵泡发育数不同 ,将卵巢对促排卵药物的反应分为低反应型 (卵泡数≤ 3个 )、中反应型 (卵泡数 4～13个 )和高反应型 (卵泡数≥ 14个 ) ,分别为 11例、15例和 13例。采用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)测定 3种反应类型的卵泡颗粒细胞 FSHR m RNA的表达量。结果 :低反应型 FSHR m RNA表达量显著低于中、高反应型 (相对积分值分别为 0 .5 4± 0 .0 7、0 .90± 0 .17和 1.2 0± 0 .4 5 ,P<0 .0 5 )。结论 :卵巢对促性腺激素的反应与颗粒细胞FSHR m RNA的表达量高低有关。     

卵泡刺激素对体外培养大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的：探讨FSH对体外培养大鼠颗粒细胞凋亡的影响。方法：分别将新鲜卵巢和冻融卵巢卵泡颗粒细胞分离出来，体外培养4d，对比培养液中添加FSH与未添加FSH条件下的颗粒细胞凋亡率。结果：培养液中添加FSH后，冻融颗粒细胞凋亡率降低。结论：培养液中添加10ng／ml FSH，可减少从新鲜和冻融卵泡分离的颗粒细胞在体外培养过程中发生凋亡的几率。     

抗苗勒氏管激素结合性激素检查预测卵巢储备功能的临床分析

目的 探讨抗苗勒氏管激素结合性激素检查预测卵巢储备功能的临床应用价值.方法 选择36例卵巢早衰患者为研究组,28例健康妇女对照为对照组,检测其血清抗苗勒氏管激素(AMH)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平,进行统计分析.结果 卵巢早衰组AMH及E2值均低于对照组,而FSH、LH则均高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 抗苗勒氏管激素结合性激素检查可较准确预测卵巢储备功能.     

卵泡液中颗粒细胞 FSHR 的表达与体外受精-胚胎移植的相关研究

目的：检测超促排卵治疗过程中卵泡液内颗粒细胞卵泡刺激素受体（ FSHR ）的表达水平,探讨FSHR表达与体外受精-胚胎移植（ IVF-ET）中卵子质量和临床妊娠率的关系。方法随机选择在本中心行第一周期IVF-ET的患者35例。采卵日收集卵泡液中的颗粒细胞,检测FSHR的表达。结果卵子的卵裂率随颗粒细胞FSHR表达强度的增加而升高（r＝0．681,P＜0．05）;卵子的受精率随颗粒细胞中FSHR表达的增加而升高（r＝0．647,P＜0．05）;与临床妊娠组相比,非妊娠组患者卵泡液中颗粒细胞FSHR表达水平显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）,年龄、不孕年限、获卵率、卵子成熟度、优胚率差异无统计学意义。结论在IVF-ET中,卵泡液中颗粒细胞FSHR的表达水平将会影响卵子的质量,进而影响临床妊娠率。     

促卵泡刺激素受体mRNA的稳定性研究

采用核酸酶保护测定 (NPA)和定量反转录竞争性多聚酶链反应方法 (RT- PCR) ,测定了表达重组促卵泡刺激素受体 (FSHR)的转染细胞 (Y1)的 FSHR m RNA的稳定性和半衰期。对照组 FSHR m RNA量在 8h内保持恒定水平 [NPA,(2 .9± 0 .3) pg/ μg RNA;RT- PCR,(2 .7± 0 .3) pg/ μg RNA]。用 [3H]尿苷结合到 RNA的方法 ,观察到 Actinomycin D(Act D,5 μg/ ml)在 1h内可抑制 m RNA合成达 90 %。在 Act D存在的条件下 ,FSHR m RNA量在 1h后出现一个时间依赖性的显著下降 ,用 NPA测得的半衰期为 (3.6± 0 .2 ) h,RT- PCR为 (3.1± 0 .1) h。提示m RNA的降解速率在 FSHR基因稳定表达维持上起着非常重要的作用。     

Stability of human follicle-stimulating hormone receptor mRNA in stably transfected cells

Follicle- stimulating hormone( FSH) is essentialfor ovarian follicular development in the female andenhances spermatogenesisin themale. FSH exerts itsactions via specific,high affinity membrane- boundreceptors( FSHR) that are coupled to guanine nu-cleotide binding proteins and stimulates the enzymeadenylyl cyclase[1] . The isolation,cloning and se-quencing of FSHR c DNAs from several species[2 ]have facilitated analysis of FSHR m RNA expressionin the ovary and testis. m RNA contentfr…     

Antisense oligodeoxynucleotide inhibits expression of recombinant porcine follicle-stimulating hormone receptor

Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ（ＯＤＮｓ）ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｎｅｗｔｏｏｌｆｏｒｔｈｅｄｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｉｎｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｓ,ｉｎｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｉｎｖｉｖｏ．Ｉｄｅａｌｌｙ,ａｎａｎｔｉｓｅｎｓｅＯＤＮｉｓｔａｒｇｅｔｅｄｉｎａｓｅｑｕｅｎｃｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｍａｎ－ｎｅｒｔｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓ（ＲＮＡｏｒＤＮＡ）ｔｏｏｆｆｅｒｔｈｅｅｘｃｉｔｉｎｇｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｓｅｌｅｃｔｉｖｅ…     

PKA信号通路调控体外培养大鼠脑片的CRH mRNA表达的研究

目的探讨大鼠下丘脑神经元表达促肾上腺皮质激素释放激素(CRH) mRNA的蛋白激酶A (PKA)信号调控机制.方法通过大鼠下丘脑脑片实验模型,运用Western blot及逆转录多聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察CRH激活下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体(CRH1R)后PKA信号通路的活性变化,及其与CRH mRNA表达的关系.结果 CRH可引起下丘脑脑片磷酸化PKA、磷酸化环腺苷一磷酸反应元件结合蛋白(CREB)及CRH mRNA含量明显增加,而CP-154526、H89可显著抑制磷酸化PKA、磷酸化CREB及CRH mRNA含量的增加.结论在下丘脑离体脑片培养条件下,CRH可通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRH mRNA的表达的超短正反馈调节.     

超排卵周期中血清抗苗勒氏管激素及其它卵巢激素预测卵巢反应性的应用价值

目的 探讨血清抗苗勒氏管激素水平及其它卵巢激素在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)/单精子卵泡腔内注射(ICSI)超排卵周期中与卵巢反应性的相关性及其预测价值.方法 49例初次接受辅助生殖技术的病人,于IVF/ICSI本周期月经第2～3天及人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射日,分别检测血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、抗苗勒氏管激素(AMH)水平.根据IVF周期中的获卵数、E2峰值水平的情况.将49例患者分为卵巢正常反应者20例(A组)及卵巢高反应者29例(B组),比较2组IVF-ET/ICSI临床效果及注射重组卵泡刺激素(rFSH)后AMH、E2及P水平的变化.结果 (1)A、B组IVF月经第2～3天(D2)AMH水平分别为(2.100±0.96)ng/ml、(4.49±2.55)ng/ml IVF周期hCG注射日的AMH水平分别为(0.94±0.29)ng/ml、(2.25±1.55)ng/ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).(2)获卵数与IVF月经第2～3天AMH水平、hCG注射日的AMH水平及P水平呈显著正相关(D2AMH:r=0.822,P<0.01;hCG注射日P:r=0.474,P<0.05,hCG注射日AMH:r=0.843,P<0.01).结论 基础AMH水平、IVF周期hCG注射日的AMH水平均是预测卵巢反应性较好的标记物.     

睾酮对体外培养小鼠卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素的影响

目的 探讨睾酮对体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞抗苗勒管激素（anti-Mullerian hormone,AMH） 分泌的影响。方法 小鼠卵巢颗粒细胞原代培养,添加不同浓度睾酮,ELISA 法检测颗粒细胞AMH 的表达。结果 ELISA 法证实颗粒细胞中有AMH 表达,不同浓度（10-8 mmol/L、10-7 mmol/L、10-6 mmol/L） 睾酮作用24 h 可促进颗粒细胞分泌AMH,且随睾酮浓度的增加、作用时间延长,AMH 分泌明显增加（P ＜ 0.01）。结论 睾酮促进小鼠卵巢颗粒细胞分泌AMH,高浓度比低浓度作用更强。     

正常大鼠逼尿肌P2X受体亚型mRNA表达的实验研究

目的研究正常大鼠逼肌P2X受体亚型的表达情况.方法提取大鼠逼尿肌组织总mRNA,并以脑组织作为阳性对照,行RT-PCR,反应所得产物于1.5%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙啶染色(EB)观察,照相.结果在大鼠逼尿肌上发现了6种P2X受体亚型的mRNA表达,其中P2X1相对表达较高,而P2X6不表达.脑组织中7种P2X受体亚型均有表达.结论正常大鼠逼尿肌内有6种P2X受体亚型mRNA表达,提示P2X受体亚型对逼尿肌舒缩功能的调节作用具有深入研究的价值.