HL60/VCR耐药细胞荷瘤鼠模型的建立

目的建立白血病HL60/VCR耐药细胞株移植动物模型方法。方法将生长状态良好的耐药细胞株HL60/VCR1.0×107/0.2ml接种到BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下,定期观察裸鼠生长状况,测量移植瘤大小,留取标本检测不同脏器肿瘤负荷及多药耐药基因MDR1表达情况。结果 2.0×106HL60/VCR细胞皮下接种BALB/c-nu/nu裸小鼠,成瘤率为67.7%,免疫组化检测荷瘤裸鼠肝脏和脾脏均可见巢状分布白血病细胞,PCR检测成瘤组织表达MDR1基因。结论皮下移植可成功建立耐药细胞株荷瘤鼠模型,为研究多药耐药细胞株动物体内生物学行为及逆转多药耐药提供了动物模型。     

解毒化瘀药对白血病HL60/ADR耐药细胞凋亡影响的研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR耐药细胞凋亡的影响.方法:应用流式细胞仪检测解毒化疼药含药血清处理后的各组HL60/ADR细胞凋亡的情况.结果:解毒化瘀药中药复方能促进白血病耐药细胞HL60/ADR早期凋亡率,并呈浓度相关性.结论:解毒化瘀药含药血清能够促进HL60/ADR细胞凋亡.     

HL60/VCR白血病细胞多药耐药机制的初步探讨

目的探讨白血病细胞产生耐药的机制,以及VEGF在白血病细胞产生耐药过程中的作用。方法采用反复暴露并逐渐提高诱导药物浓度的方法建立HL60/VCR多药耐药细胞系,MTT法检测细胞的耐药性及交叉耐药性;RT-PCR检测诱导前后mdr1、MRP、TopoⅡα、GSTπ和VEGF mRNA的表达情况。结果诱导后的HL60/VCR耐药细胞不仅对VCR高度耐药,对其他类化疗药物亦具有交叉耐药性;与HL60相比,HL60/VCR的mdr1、TopoⅡα和VEGF mRNA的表达明显增强,GSTπmRNA的表达无明显变化;HL60和HL60/VCR均不表达MRP mRNA。结论耐药基因mdr1和TopoⅡα以及VEGF共同参与HL60/VCR多药耐药的形成。     

解毒化瘀含药血清抗白血病多药耐药细胞株K562／A及HL-60／A的体外实验研究

目的：以解毒化瘀法立意,选取解毒化瘀中药复方,拟通过体外细胞培养证实其是否存在抗多药耐药白血病细胞的作用。方法：采用MTT比色法,选择阿霉素诱导的白血病多药耐药细胞株K562／A及HL-60／A为靶细胞,观察不同浓度解毒化瘀含药兔血清对其细胞毒作用。结果：解毒化瘀含药兔血清对K562／A和HL-60／A有明显的抑制作用,且其细胞毒作用呈剂量依赖性。结论：解毒化瘀中药在抑制白血病多药耐药细胞生长方面具有深入研究的价值。     

HSP90β在ATRA诱导的白血病细胞株HL60耐药中的作用研究

目的:通过检测HSP90β基因在白血病细胞株HL60及其耐药株HL60/ATRA中的表达差异,探讨HSP90β基因在ATRA相关多药耐药性发生中的作用.方法:采用ATRA浓度递增及间歇诱导法建立HL60/ATRA耐药细胞株;用MTT法和流式细胞检测技术(Flow cytometry,FCM),分别检测HL60和HL60/ATRA细胞的增殖及细胞周期;RT-PCR、Western blot法检测HSP90 β基因在HL60及HL60/ATRA细胞中的表达;通过MTT法检测HL60和HL60/ATRA细胞对常用化疗药物(VCR、CTX、VP-16、ADM)敏感性.结果:成功构建了白血病细胞耐药株HL60/ATRA;在mRNA和蛋白两个水平,均检测到HSP90β在耐药株HL60/ATRA中的表达较HL60明显增高(P＜0.01);药敏结果显示HL60/ATRA细胞对VCR、CTX、ADM、VP-16的耐药倍数分别为10.74、5.51、4.01、3.24.结论:ATRA能够诱导HL60细胞中HSP90 β高表达,经ATRA诱导后的HL60/ATRA细胞对抗癌药物的敏感性显著降低、耐药性增高,这提示HSP90 β可能在ATRA相关多药耐药性的发生过程中发挥着重要作用.     

HL60/ADM的耐药性及逆转研究

目的：研究人类白血病多药耐药细胞株HL60／ADM对8种常用化疗药的耐药性及环孢菌素A(CsA)对其耐药的逆转作用。方法：MTT比色法检测细胞耐药性及CsA对细胞耐药性的影响，流式细胞仪检测细胞内柔红霉素(DNR)的浓度。结果：HL60／ADM对DNR、ADM、VCR、Har、VP16、MIT交叉耐药，对DNR耐药性最强，对Acla和Ara-c基本不耐药。CsA使HL60／ADM细胞内药物浓度增加，而对HL60的胞内药物浓度基本无影响。结论：HL60／ADM对Acla基本不产生耐药性，阿克拉霉素可能成为治疗白血病和克服白血病多药耐药性的重要药物。CsA对HL60／ADM的耐药性有部分逆转作用。     

解毒化瘀药调控白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin通路研究

目的探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin信号基因表达的影响,逆转耐药的机制。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀药含药血清处理后HL60/adr细胞survivin的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达。结果解毒化瘀药含药血清能够降低HL60/adr耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα信号,降低survivin基因的表达。结论解毒化瘀药能够降低HL60/adr细胞NF-κB信号通路,影响NF-κB-survivin途径,逆转耐药。     

紫杉醇诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察抗微管药紫杉醇对急性白血病细胞株HL－60是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl－2基因在此过程中的作用。方法：（1）以紫杉醇处理HL－60细胞,观察细胞生长抑制作用的时间效应和剂量效应,在光镜和电镜下观察细胞形态变化;（2）用流式细胞仪检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）的变化;（3）用RT－PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因的表达水平。结果：（1）在一定剂量和时间范围内紫杉醇能抑制HL－60细胞生长;（2）紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡,并显示剂量效应：（3）在紫杉醇诱导HL－609细胞凋亡过程中,bcl－2基因表达水平下调。结论：紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡;bcl-2基因参与了紫杉醇诱导HL－60细胞凋亡的调控。     

扶正祛邪复方中药对P388/VCR裸鼠移植瘤模型耐药机制的研究

目的:本研究建立P388/VCR细胞白血病多药耐药模型,予小、中、大剂量的扶正祛邪复方中药联合长春新碱(VCR)作用于裸鼠模型,检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达。方法:建立裸鼠P388/VCR细胞耐药模型,随机分成正常(NOR)、模型(MOD)、化疗(VCR)、中药小剂量+VCR(LOW)、中药中剂量+VCR(MED)、中药大剂量+VCR(HIG)组。观察用药前、后裸鼠的精神、觅食、皮肤色泽、活动度,测量用药后裸鼠瘤体重量情况,计算抑瘤率。切除瘤体后用RT-PCR检测Bcl-2表达量。结果:VCR、LOW、MED、HIG抑瘤率分别是:30.66%,39.02%,44.25%,55.4%。中药各组抑瘤率均大于化疗组。Bcl-2表达情况:与VCR组相比,中药各组Bcl-2表达量均出现显著降低(P0.05);各中药浓度组之间比较,HIG组Bcl-2表达量高于MED组和LOW组(P0.05)。说明扶正祛邪复方中药逆转P388/VCR细胞耐药机制可能是通过下调Bcl-2表达实现的,与中药浓度无关系。结论:(1)扶正祛邪复方中药能抑制P388/VCR细胞增长;(2)扶正祛邪复方中药可降低P388/VCR裸鼠模型Bcl-2的表达,与中药浓度无关;(3)逆转白血病耐药细胞株P388/VCR的机制之一可能与下调Bcl-2的表达相关。     

Bcl—XL在白血病多药耐药细胞株HL60／VCR中的表达及意义

0引自BCI－X。是新近被证实的bCI－2基因家族成员之一，其结构和功能与bC人2相似，可抑制细胞凋亡D‘．关于它与多药耐药（MDR）关系的研究越来越受到重视［’j．我们采用SABC免疫组化和Westernblot方法检测敏感细胞HL60和耐药细胞HI．60／VCR的Bcl－XL表达，以初步探讨Bcl－X。与白血病MDR形成的关系．回方法1．l细胞林和试剂HL60敏感细胞株为上海细胞生物所提供；HL60／VCR耐药细胞株来源于美国纽约MemorialSloan－Kett，ringCancerCenter，在含200pg／L长春花碱（VCR）的RPMI1640培养液中传代，无VCR培养液培养2Wb…     

复方黄黛片含药灭活兔血清对NB4细胞株的作用

目的:研究复方黄黛片含药灭活兔血清对人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株的作用。方法:以兔为实验血清的供体,将兔血清灭活,以灭活前给药与否为分组依据,采用双道原子荧光法检测血清中砷的浓度,以细胞抑制率及凋亡率为观察指标,对实验结果进行分析。结果:给药前、后灭活兔血清中砷浓度分别为(0.0100±0.0010)mg/L和(0.1100±0.0064)mg/L,差异有统计学意义(P<0.01);两组兔血清对NB4细胞株生长均有抑制作用,且对NB4细胞株生长的抑制作用具有一定的浓度及时间依赖性,实验组间,各浓度及时间组间差异有统计学意义(P<0.01)。两组兔血清均可诱导NB4细胞株发生凋亡,且该作用具有一定的浓度及时间依赖性,实验组间,各浓度及时间组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:复方黄黛片含药灭活兔血清可明显抑制NB4细胞株的生长,抑制作用呈一定的浓度、时间依赖性。复方黄黛片含药灭活兔血清也可诱导NB4细胞株发生凋亡,作用也呈一定的浓度、时间依赖性。     

穿山甲煎液诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：探讨中药穿山甲对急性髓细胞性白血病细胞株HL-60的作用。方法：以人白血病细胞株HL-60为研究对象。采用形态学观察。流式细胞仪、Caspase-3酶活性测定、免疫组化等方法。结果：穿山甲浓度在2.5-10mg/ml范围内可抑制HL-60细胞生长,并诱导其发生凋亡;并激活Caspase-3酶活性。下降bcl-2基因表达。结论：穿山甲对HL-60细胞有诱导凋亡作用。     

雄黄对HL—60／ADR作用的初步研究

目的：探讨中药雄黄对HL－60／ADR耐药细胞在抑制生长、逆转耐药、诱导凋亡方面的作用和影响。方法：（１）MTT比色法观察对细胞的换制;（2）用免疫组化法检测细胞Pgp的变化;（3）流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：（1）雄黄抑制HL－60／ADR耐药细胞的生长,药物浓度与HL－60／ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系;（2）随着药物浓度的增加和时间的推移,HL－60／ADR细胞中MDR基因的表达产物Pgp阳性率逐步降低;（3）随着药物浓度的增加,HL－60／ADR细胞凋亡率增加。结论：雄黄可抑制HL－60／ADR 细胞生长,逆转其耐药,促进细胞凋亡,与剂量呈依赖性,其机制可能与Pgp表达下降有关。     

蟾酥灵对HL-60/ADR作用的研究

目的 :探讨中药蟾酥灵对HL -60 /ADR耐药细胞在抑制生长、诱导凋亡方面的作用和影响。方法 :①MTT比色法观察对细胞的抑制 ;②流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 :①蟾酥灵抑制HL -60 /ADR耐药细胞的生长 ,药物浓度与HL -60 /ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系 ;②随着药物浓度的增加 ,HL -60 /ADR细胞凋亡率也增加。结论 :蟾酥灵可抑制HL -60 /ADR细胞生长 ,促进细胞凋亡呈剂量依赖性     

去甲斑蝥素诱导HL60细胞凋亡的研究

探讨去甲斑蝥素 (NCTD)对人早幼粒白血病细胞株HL60细胞增殖的抑制作用。用流式细胞仪测定NCTD对HL60细胞体外培养过程中细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示 :NCTD作用 4 8h对HL60细胞有较强生长抑制作用 ,作用 2 4h后达到凋亡高峰 ;1、5、10、50 μmol L的NCTD作用 2 4h后 ,G1期细胞百分数均减少 ,S期与G2 M期细胞百分数均增加 ,呈现G2 M期阻滞现象。说明NCTD可诱导HL60细胞凋亡 ,抑制瘤细胞分裂生长 ,且有明显的时间和剂量效应     

苦参碱逆转人胃癌细胞株SGC7901/VCR耐药性实验研究

目的 研究苦参碱(Matrine)对人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药的逆转效应及其机制.方法 以长春新碱(VCR)诱导的人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR为研究对象,MTT法研究苦参碱对体外培养的人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR细胞增殖的影响及逆转效应、用间接免疫荧光法经流式细胞仪检测MRP的表达并分析其机制.结果 MTT法显示苦参碱在0.5、1.0、2.0 mg·mL-1浓度下处理SGC7901/VCR细胞72 h后,其生长抑制率依次为10%、15%、32%,且可以逆转SGC7901/VCR对VCR的耐药,呈剂量依赖性,逆转倍数分别为9.4、13.4、24.5倍.0.5 mg·mL-1苦参碱与SGC7901/VCR细胞共同培养24 h后,SGC7901/VCR细胞的MRP表达从(36.00±4.32)%降低至(25.00±3.85)%(P<0.01).结论 苦参碱可以体外逆转人胃癌细胞多药耐药细胞SGC7901/VCR的耐药性,其逆转机制与降低MRP的表达有关.     

水蛭提取物对人白血病HL60细胞体外抑制作用研究

目的：研究水蛭提取物对人白血病HL-60细胞的体外抑制作用.方法：用液氮快速冻融法制备水蛭提取物,将不同浓度提取物作用HL-60细胞,观察提取物对HL60生长与增殖的影响、诱导调亡效应、并计算出水蛭提取物作用HL-60的半数抑制浓度（IC50）.结果：浓度高于0.1mg/mL的水蛭提取物对HL60有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性;水蛭提取物作用HL60细胞48h的IC50为1.4mg/mL;另外水蛭提取物也具有诱导HL60细胞凋亡作用.结论：水蛭提取物可抑制HL60细胞增殖并诱导调亡.     

复方黄黛片中药血清药理学研究方法的建立

目的:建立复方黄黛片(CRNIT)中药血清药理学研究方法. 方法:以兔为含药血清的供体,以NB4,K562等人白血病细胞株为研究对象,采用析因设计,观察给药与否、血清灭活与否、血清浓度及培养时间各因素对白血病细胞株抑制率的影响及四因素间的交互作用. 结果:①正常、含药兔血清砷浓度分别为(0.010±0.001) mg/L和(0.110±0.006) mg/L(P<0.01);②给药与否、血清灭活与否、血清浓度、培养时间各因素不同水平间的差异有统计学意义,且四因素间有交互作用;③不同组合的兔血清在100～400 mL/L浓度下对NB4,K562细胞株的生长均有不同的抑制作用,抑制率与浓度间呈现出良好的依赖关系. 结论:① 0.75g/(kg*d)的剂量灌服于兔并给药5 d是制备复方黄黛片含药血清较为理想的给药方案;②给药与否、血清灭活与否、血清浓度、培养时间是构建CRNIT含药兔血清反应体系的关键因素;③对正常血清进行灭活处理有助于减少因动物健康生理状态与病理状态的差异而对实验结果产生的影响;未灭活的含药兔血清可全面展示复方黄黛片的抗白血病作用;④当反应体系中血清浓度为100～400 mL/L时,实验结果稳定.     

活血化瘀中药复方诱导K562细胞凋亡

目的研究活血化瘀复方对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞增殖、凋亡的影响.方法 通过台盼蓝拒染法活细胞计数,绘制细胞生长曲线.光镜、透射电镜观察细胞形态学变化.流式细胞检测定量观察细胞凋亡及其与药物的关系.结果 活血化瘀复方对K562细胞生长具有抑制作用,并且细胞呈现典型的凋亡形态学改变.流式细胞检测显示药物血清作用6h,K562细胞即已出现凋亡,100 mL·L-1含药血清组细胞凋亡率较50 mL·L-1含药血清组高(13.4±1.3)% vs (7.6±0.9)%, P<0.01.结论 活血化瘀复方具有抑制白血病细胞生长,诱导白血病细胞凋亡的作用,从而为其临床应用提供了理论依据.     

TRAIL联合三氧化二砷对HL-60细胞生长及凋亡的影响

目的　研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL) 联合三氧化二砷 (As2O3) 诱导急性早幼粒白血病细胞株HL 60凋亡, 探讨其应用于临床的可行性。方法　在对数生长期的 HL 60 细胞中分别加入不同浓度的TRAIL和1μmol/L的As2O3, 采用MTT比色法测定TRAIL和 As2O3 单独和联合应用时对细胞的生长抑制率, 并用流式细胞术检测细胞凋亡。结果　TRAIL联合 As2O3 可协同降低 HL 60 细胞活力, 抑制细胞增殖, 诱导细胞凋亡。当TRAIL浓度小于100μg/L时, 其作用随培养时间延长及药物浓度增加而增强 (P<0 .05), 而当 TRAIL浓度再增高时, 对细胞生长抑制率和凋亡率的增强作用不明显 (P>0 .05)。结论　TRAIL与 As2O3 具有协同作用, 能高效杀灭白血病细胞。TRAIL是一种有望应用于白血病临床治疗的新型生物制剂。