用PCR-SSCP及DNA测序法研究胃癌p53基因突变

目的 探讨p53基因突变与人类胃癌发生的关系。方法 运用PCR、PCR－SSCP结合银染法对25例胃癌组织p53基因第4、第5－6和第7外显子进行突变检测;运用双脱氧链终止法对第7外显子阳性突变标本进行DNA测序。结果 在25例胃癌组织中检出突变5例,突变率为20％;在第7外显子阳性突变标本中发现了18bp的大片段缺失。结论 p53基因突变与人类胃癌的发生具有明显相关性,并且这种突变可能不仅仅局限于点突变,大片段缺失也是p53基因突变方式之一。     

银染mRNA差异显示方法的建立和吗啡诱导基因的克隆

目的：建立非同位素银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离吗啡相关基因。方法：以吗啡处理的ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，用５’ｄＴ１２ＭＧ锚定经物和两条随机引物合进行ＤＤＲＴ－ＰＣＴ扩增，经测序凝胶电泳分离后，用银染方法显示差异ＤＮＡ条带，在直视下从凝胶中回收差异条带并进行再扩增，扩增产物克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体。结果建立了非同位素的银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离和克隆了一些吗啡诱导的差异表达基因     

银染mRNA差异显示方法的建立和吗啡诱导基因的克隆

目的：建立非同位素银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离吗啡相关基因。方法：以吗啡处理的ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，用５’ｄＴ１２ＭＧ锚定引物和两条随机引物组合进行ＤＤＲＴＰＣＲ扩增。经测序凝胶电泳分离后，用银染方法显示差异ＤＮＡ条带，在直视下从凝胶中回收差异条带并进行再扩增，扩增产物克隆入ｐＧＥＭＴ载体。结果：建立了非同位素的银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离和克隆了一些吗啡诱导的差异表达基因。结论：建立的非同位素银染差异显示方法是简单快捷和高效的分离差异表达基因的方法     

单克隆抗体可变区DNA序列的测定

采用聚合酶链反应方法获得单克隆抗体重，轻链的可变区基因，并进行了ＰＣＲ产物直接ＤＮＡ序列测定，或将扩增产物分别插入ｐＵＶ１８质粒，筛选出阳性克隆，用未端终止法进行ＤＮＡ序列测定，得到大约３５０ｂｐ可变区基因，符合Ｉｇ可变区基因编码。     

非同位素法直接测序检测DNA片段突变的改良方法

癌基因、抑癌基因的突变常导致前者的激活或后者的失活，可见于多种人类恶性肿瘤[1]。突变的检测对预后和治疗反应的估计均有重要参考价值[2，3]。筛选癌基因或抑癌基因的突变常采用多聚酶链反应—单链DNA构象多形性分析（PCR－SSCP），或变性梯度凝胶电泳（DGGE）及固定变性凝胶电泳（CDG）[3，4]。然欲确定突变的存在、部位及形式还必须依赖DNA测序。用非同位素法直接测定PCR－SSCP中DNA突变片段的序列是一种简便，省时、无同位素污染之虑的好方法。但目前突变DNA片段再扩增的成功率尚不高IS］；且作为模板的PCR产物的纯…     

银染PCR-SSCP方法检测大肠癌组织线粒体DNA的突变

目的: 研究大肠癌组织线粒体DNA的突变情况. 方法: 用银染PCR-SSCP技术结合测序的方法检测40例大肠癌组织及其癌旁正常组织的线粒体DNA D-环区的点突变情况. 结果: 40例大肠癌组织中检测到7例点突变改变,突变率为18%(7/40),在检测的9个突变位点,3个突变位点存在于Dukes D期的1例大肠癌中,其他6个突变位点分别存在于Dukes C期的6例大肠癌组织中,其中498位C→ T, 16298位C→T两个突变位点在检测到点突变的7例大肠癌组织中均检测到. 结论:大肠癌组织线粒体DNA D-环区存在一定程度的点突变,突变的发生可能与大肠癌的易感性和恶性程度有一定相关性, 但是否是大肠癌的发病机制尚有待进一步研究.     

适用于线粒体基因组测序的高纯度线粒体DNA提取和鉴定方法优化

目的 优化线粒体DNA(mtDNA)提取和纯度鉴定方法以满足线粒体基因组测序的要求.方法 利用简化的蔗糖密度梯度离心法、DNA酶Ⅰ并结合质粒提取试剂盒提取纯化mtDNA、尽量降低核DNA(nDNA)污染的可能.获得的mtDNA经NanoDrop检测、琼脂糖凝胶电泳和荧光定量PCR绝对定量法测定nDNA/mtDNA拷贝数...     

核糖核酸的酶消化方法直接顺序分析

应用硷基特异性核酸内切酶进行RNA的顺序分析。以~(32)P标记RNA分子的5′或3′末端的四种硷基能被酶试剂部分裂解。放射性的水解产物经胶电泳按其大小而分离。放射自显影后它的核苷酸顺序从带谱上可以直接读出。核糖核酸酶(RNasc)T_1(G特异性)、U_2(A特异性)、Phy M(U+A特异性)和B.cereus(C+U特异性)是最常用于顺序RNA的四种酶。     

核糖核酸的直接化学顺序分析

本文根据Peattie(1979)方法系统而简明地介绍了RNA一级结构测定,包括原理、标记方法、化学修饰操作和顺序胶等。此外,还讨论了读胶常遇到的一些问题。作为一个例子,病毒RNA3′末端顺序结果的放射自显影图也作了简要说明。     

广西眼镜蛇神经生长因子的克隆及序列分析

目的:扩增广西眼镜蛇神经生长因子(NGF)的全长基因并进行序列分析.方法:应用聚合酶链反应技术,以广西眼镜蛇cDNA为模板,扩增出编码NGF的全长基因,并克隆至pMD18-T载体中进行基因测序.结果:所得序列与Genbank提供的序列(M61180)对比显示,广西眼镜蛇prepro-NGF与Naja kaouthia (monocled cobra)、Bungarus multicinctus、mouse、人的NGF同源性分别为99%、91%、66%、68%,将不同氨基酸相同的化学性质计算在内,同源性更高.结论:成功地获得了广西眼镜蛇NGF的全长基因,且序列与已知序列高度一致.     

DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法的选择

目的 比较4种聚丙烯酰胺凝胶银染方法,为初次使用者选择方法时提供参考。方法 用24 mer的引物作为上样样本,分别采用氨水法、低浓度硝酸银法、0.1%及0.2%硝酸银法染色。后2种配合不同的显色剂显色。结果 前2种未显色,0.1%及0.2%硝酸银可显色。结论 0.2%的硝酸银与氢氧化钠显色剂相结合具有最高的灵敏度;0.2%的硝酸银与碳酸钠显色剂相结合具有最佳的显像效果。     

银染法在对流免疫电泳中的应用

本文使用简化的银染法于免疫化学方面,如对流免疫电泳、免疫电泳、火箭电泳等,在对流免疫电泳中,发现其敏感性比考马斯亮兰染色高10倍,并且染色背景清晰。用3N 氯化钠替代生理盐水,改良漂洗电泳板的方法,可缩短漂洗时间,具有实用价值。     

微卫星多态性检测时银染色和同位素技术比较

为了比较银染色技术与传统的同位素技术在微卫星多态性检测中的优缺点，对ｌｌ８例正常男性基因组ＤＮＡ，用Ｙ染色体特异性微卫星作聚合酶链式反应，经聚丙烯醚胺序列分析后，分别作银染色和同位素检测。结果表明前者重复性好，结果满意，具有经济、对操作者和环境无害、一天即可出结果等优点。对银染色的不足之处进行了探讨。     

节旋藻（Arthrospira）3个样品镍铁氢化酶 hoxY基因的克隆与测序

目的：为鄂尔多斯高原碱湖节旋藻的多样性研究提供基础资料和理论依据。方法：本文对鄂尔多斯高原碱湖钝顶节旋藻（ Arthrospira platensis）、乍得湖钝顶节旋藻（ A. platensis）及极大节旋藻（ A. maxima）的镍铁氢化酶小亚基hoxY基因进行了克隆与测序，并进行同源性及亲缘关系的分析。结果：3个节旋藻样品hoxY基因部分序列长均为479 bp。鄂尔多斯高原碱湖钝顶节旋藻 hoxY基因与不同来源的钝顶节旋藻的同源性高达99.5%，与极大节旋藻的同源性达99.9%。 A. maxima与非洲乍得湖A. platensis间的亲缘关系更近，而鄂尔多斯高原碱湖钝顶节旋藻与乍得湖钝顶节旋藻的亲缘关系相对远。结论：hoxY基因保守性高，属内不同样品间序列变化很小。同种不同来源的钝顶节旋藻由于不同环境条件等因素的影响导致基因序列上碱基发生一定的差异。     

4种抗原用于斑点免疫金银染色试验诊断日本血吸虫病的比较

采用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)试验对4种日本血吸虫抗原的敏感性及特异性进行比较。结果显示粗提成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(JWU)、硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测40例日本血吸虫病人血清抗体的敏感性均达100.0％,40例正常人血清的可疑阳性反应分别为2.5％、0、2.5％和0,40例肝吸虫病人血清的可疑交叉率分别为2.5％、0、2.5％和0,表明在高敏感的IGSS检测系统中,粗提成虫抗原的敏感性和特异性与部分纯化者和虫卵抗原无显著性差异(P>0.05)。     

大鼠肺孢子虫肺炎动物模型建立及病原学病理学观察

纯系Wistar大鼠皮下注射醋酸可的松25mg/次,每周2次,用药7周即可成功诱发大鼠肺孢子虫肺炎。相差显微镜直接镜检、姬姆萨氏染色(Giemsa's stain)、六亚甲基四胺银染色(GMS stain)和亚甲胺蓝染色(TBO stain)均可检出包囊。其中六亚甲基四胺银染色可显示囊壁特征性的括弧样结构,具有确诊价值。病理改变主要为肺泡间隔增厚和淋巴细胞、单核细胞浸润,肺泡中少量蜂窝状渗出物。对肺孢子虫的滋养体、囊子前期和囊子的超微结构进行了电镜观察     

节旋藻( Arthrospira) 3 个样品镍铁氢化酶hoxY 基因的克隆与测序

目的:为鄂尔多斯高原碱湖节旋藻的多样性研究提供基础资料和理论依据。方法: 本文对鄂尔多斯
高原碱湖钝顶节旋藻( Arthrospira platensis) 、乍得湖钝顶节旋藻( A． platensis) 及极大节旋藻( A． maxima) 的镍铁
氢化酶小亚基hoxY 基因进行了克隆与测序，并进行同源性及亲缘关系的分析。结果: 3 个节旋藻样品hoxY 基因
部分序列长均为479 bp。鄂尔多斯高原碱湖钝顶节旋藻hoxY 基因与不同来源的钝顶节旋藻的同源性高达
99． 5%，与极大节旋藻的同源性达99． 9%。A． maxima 与非洲乍得湖A． platensis 间的亲缘关系更近，而鄂尔多
斯高原碱湖钝顶节旋藻与乍得湖钝顶节旋藻的亲缘关系相对远。结论: hoxY 基因保守性高，属内不同样品间序
列变化很小。同种不同来源的钝顶节旋藻由于不同环境条件等因素的影响导致基因序列上碱基发生一定的
差异。