川楝素对人结肠癌细胞LoVo生物行为学的影响

目的探讨川楝素对人结肠癌细胞LoVo生物行为学的影响。方法采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭实验,观察川楝素对人结肠癌细胞LoVo增殖、黏附和侵袭能力的影响。结果川楝素能有效抑制人结肠癌细胞LoVo增殖(P0.01)。川楝素作用人结肠癌细胞LoVo 24 h后,细胞的黏附能力明显降低(P0.01),侵袭的细胞数与对照组比较明显减少(P0.01)。结论川楝素有抑制人结肠癌细胞LoVo的增殖、黏附及侵袭的能力。     

双歧杆菌脂磷壁酸对不同大肠癌细胞株转移能力及VEGF表达的影响

目的 研究双歧杆菌脂磷壁酸(ipoteichoic acid,LTA)对血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达及其对大肠癌细胞株侵袭、转移能力的影响.方法 采用噻唑蓝比色(MTT)法检测经双歧杆菌LTA处理前后大肠癌细胞株LoVo和HT-29对人工基底膜(Matrigel)的黏附能力变化;Transwell小室体外侵袭迁移实验检测经LTA处理前后两株细胞侵袭、迁移能力的改变.RT-PCR和Western blot检测经LTA作用前后,VEGF在两株细胞中的表达差异.结果 经20、50、80μg/ml双歧杆菌LTA处理后,LoVo细胞和HT-29细胞在30、60、90、120 min时的黏附率明显低于对照组(P<0.01);经50μg/ml双歧杆菌LTA处理24 h后,LoVo细胞和HT-29细胞的侵袭能力及VEGF的mRNA和蛋白质的表达,与对照组比较有显著性差异(P<0.01).结论 双歧杆菌LTA能抑制大肠癌细胞黏附、侵袭、迁移的能力,下调其VEGF的mRNA和蛋白质的表达.     

VEGFR-3siRNA对人结肠癌细胞生长和侵袭力的影响

目的 探讨不同浓度血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3)小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人结肠癌细胞生长和侵袭力的影响.方法 设计合成VEGFR-3siRNA,以不同剂量转染到人结肠癌细胞株(human colon adenocarcinoma cell line,LoVo)细胞中,采用四甲基偶氮唑蓝显色法[3-(4,5-dimethl-2 thiahiazoyi)-3,5-di-phenyl-tetrazolium bromide,MTT]观察细胞生长变化,应用半定量逆转录-聚合酶链反应、Western-blot检测转染前后VEGFR-3 mRNA和VEGFR-3蛋白表达的变化,基质-黏附实验检测细胞转染后黏附能力,体外侵袭试验检测转染后肿瘤细胞侵袭性的改变.结果 VEGFR-3 siRNA引起LoVo细胞生长抑制,在一定范围内呈浓度、时间依赖性;转染siRNA后VEGFR-3 mRNA和VEGFR-3蛋白表达下降;转染siRNA 72 h后LoVo细胞的黏附能力显著下降,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);VEGFR-3 siRNA使LoVo细胞侵袭能力明显下降,LoVo细胞穿膜细胞数明显低于空白对照组、非特异性对照组(P＜0.05).结论 VEGFR-3siRNA能够在LoVo细胞中引发RNA干扰效应,下调VEGFR-3基因的表达可以抑制细胞增殖,使LoVo细胞黏附力和侵袭能力明显下降.     

genistein抑制人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3体外侵袭作用的分子机制

目的 探讨 genistein 抑制人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系 SKOV3体外侵袭作用的分子机制.方法 利用微孔滤膜培养小室进行双室联合培养,建立体外趋化运动模型,观察 genistein 对SKOV3趋化运动能力的影响;用免疫组化和原位杂交方法检测 genistein 对细胞表面黏附分子CD44v6、基质金属蛋白酶及其组织抑制物MMP-9/TIMP-1,MMP-2/TIMP-2蛋白和mRNA表达水平的影响.结果 20 μmol/L和40 μmol/L genistein处理SKOV3细胞后,细胞的运动能力分别下降至对照组的 (46.9±5.8)%和(28.3±4.7)%,差异显著(P＜0.01).免疫细胞化学和原位杂交检测结果表明:和对照组相比,20 μmol/L genistein处理SKOV3细胞后48 h,CD44v6、 MMP-9及MMP-2的蛋白和mRNA表达均减弱(P＜0.05),而TIMP-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平增强(P＜0.05).结论 genistein明显抑制SKOV3细胞的趋化运动能力、降低SKOV3细胞黏附分子CD44v6的表达、下调MMP-9与MMP-2表达,并上调TIMP-1与TIMP-2表达,这可能是其抑制人卵巢癌细胞系SKOV3体外侵袭作用的重要分子基础.     

环氧合酶-2抑制剂对人结肠癌细胞增殖及侵袭力影响的研究

目的 研究环氧合酶-2(COX-2)抑制剂SC236对人结肠癌细胞株增殖及侵袭能力的影响,探讨COX-2抑制剂用于结肠癌转移治疗的可能性.方法 人结肠癌细胞株LS-174T经环氧合酶-2抑制剂SC236处理后,用MTT法检测其增殖能力的变化,用黏附基质分析法和Transwell法检测其侵袭能力的变化,并通过免疫组化方法检测细胞中COX-2、VEGF及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达.结果 经SC236处理后,LS-174T细胞的增殖受到抑制,侵袭能力和黏附率下降,运动能力减低,细胞中COX-2、VEGF及MMP-2蛋白的表达减低.结论 SC236能通过COX-2途径抑制结肠癌细胞的生长和侵袭,其机制可能与其抑制肿瘤的血管生成、减低MMP-2的表达有关.     

shRNA沉默survivin基因对人膀胱移行细胞癌T24细胞生物学行为的影响

目的 构建survivin特异性短发夹RNA(shRNA)的表达载体,探讨其对人膀胱移行细胞癌T24细胞的生物学行为的影响.方法 将构建survivin特异shRNA表达载体转染T24细胞,RT-PCR、Western blot检测survivin mRNA及其蛋白的表达水平;通过细胞生长曲线、随机运动实验、Matrigel穿膜实验检测肿瘤细胞生长、运动及体外侵袭能力.结果 经EcoR I和Hindm双酶切和测序鉴定,成功筛选含目的 DNA片段的重组载体pshRNA-survivin2,并成功转染T24细胞;转染pshRNA-survivin2后町显著抑制细胞中survivin mRNA及其蛋白的表达,抑制率分别为61.73%和73.27%;pshRNA-sur-vivin2组的细胞侵袭力与运动能力均有明显的下降,第3、5大时肿瘤细胞生长抑制率分别为59.13%、83.86%.结论 应用pTZU6+1质粒载体构建survivin的shRNA表达载体,能有效抑制其survivin mRNA及其蛋白的表达,并可抑制T124细胞的增殖、运动及体外侵袭能力.     

PARP抑制剂5-AIQ对CT26细胞侵袭及转移的影响

目的探讨多聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerases,PARPs]抑制剂5-氨基异喹啉酮[5-Aminoisoquinolinone.HCl,5-AIQ]对小鼠结肠腺癌CT26细胞基质黏附、运动、侵袭能力的影响。方法应用Westernblot检测5-AIQ对PARP表达的影响,细胞-基质黏附实验、细胞运动及侵袭实验观察5-AIQ抑制CT26细胞PARP后,其基质黏附、运动及侵袭能力的变化。结果5-AIQ处理组PARP表达明显弱于未处理组(P<0.05);黏附实验结果显示,与5-AIQ未处理组比较,5-AIQ100、500μmol/L处理组的吸光度值明显降低(P<0.01),其黏附抑制率分别是14.54%、21.69%;运动及侵袭实验中,5-AIQ500μmol/L处理组与未处理组的细胞数差别显著(P<0.05),其运动及侵袭抑制率分别是30.09%、37.47%。结论5-AIQ可抑制CT26细胞PARP的表达,并可降低CT26细胞基质黏附、运动及侵袭能力,5-AIQ在抗肿瘤侵袭转移中可能发挥作用。     

三羟基异黄酮对肝癌细胞SMMC7721生物学行为的影响

目的探讨三羟基异黄酮(Genistein,Gen)对肝癌细胞SMMC7721增殖、黏附、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法应用MTT法、Transwell、RT-PCR及Western印迹法检测三羟基异黄酮作用后,SMMC7721细胞增殖、黏附、迁移、侵袭能力及其Snail mRNA和蛋白表达的变化。结果 Genistein可显著抑制SMMC7721细胞的增殖,同一时间不同浓度各组细胞的生长抑制率有明显差异(P<0.01),相同浓度下作用48 h和72 h组细胞的生长抑制率明显高于24 h组(P<0.01)。低毒剂量(10μmol/L)三羟基异黄酮作用SMMC7721细胞30、60、90和120 min时,细胞的黏附能力明显降低(P<0.01),各时间点细胞的黏附抑制率分别为29.22%、27.35%、26.58%和24.19%。10μmol/L三羟基异黄酮作用SMMC7721细胞24 h后,迁移和侵袭的细胞数明显减少(P<0.01),细胞的迁移和侵袭抑制率分别为54.79%和55.42%。10μmol/L三羟基异黄酮作用SMMC7721细胞3、5和7 d后,细胞Snail mRNA和蛋白的表达水平逐渐下降(...     

南蛇藤总萜提取物对肝癌 7721 细胞侵袭转移能力的影响

目的 研究南蛇藤总萜提取物对肝癌 7721 细胞侵袭和黏附能力的影响。方法 南蛇藤总萜提取物作用肝癌 7721 细胞后,MTT 法及细胞黏附法检测细胞毒作用及对黏附能力的影响;流式细胞仪检测基质金属蛋白酶-2 (MMP-2) 表达的变化;ELISA 法检测血管内皮生长因子 (VEGF) 分泌量的变化。结果 10、20、40、80 μg/mL 南蛇藤总萜提取物作用肝癌 7721 细胞后,其生长抑制率分别为 (8.62±0.87)%、(13.42±1.07)%、(27.64±2.13)%、(47.16±3.08)%,呈剂量依赖性。南蛇藤总萜提取物可以抑制肝癌 7721 细胞与人脐静脉内皮细胞和基底膜成分 Matrigel 的侵袭、黏附能力,能明显下调 MMP-2 和 VEGF 的表达,且呈一定的量效关系。结论 南蛇藤总萜提取物可以抑制肝癌 7721 细胞增殖,降低细胞的侵袭、黏附能力,其机制可能与下调 VEGF 和 MMP-2 的表达有关。     

β1整合素抗体阻断对LoVo细胞与Ⅰ型胶原黏附的影响

目的观察β1整合素在大肠癌LoVo细胞与细胞外基质黏附中的作用。方法采用激光共聚焦显微镜检测β1整合素在LoVo细胞的表达。β1整合素单克隆抗体加入LoVo细胞悬液中37℃反应30min,流式细胞仪分析其与LoVo细胞膜表面β1整合素结合情况。β1整合素单克隆抗体阻断后,观察黏附于Ⅰ型胶原LoVo细胞形态学和数量变化。同时观察LoVo细胞趋化运动的变化。结果激光共聚焦显微镜显示β1整合素表达于LoVo细胞膜。β1整合素单克隆抗体预孵LoVo细胞30min后流式细胞仪检测其结合率为(95.57±6.92)%。β1整合素抗体阻断后,不规则角形黏附细胞减少,主要为圆形或类圆形;45min计数与Ⅰ型胶原黏附LoVo细胞数分别为100±8和153±15(P<0.001);趋化运动细胞分别为18±7和31±9(P<0.001)。结论β1整合素抗体阻断后能抑制LoVo细胞与Ⅰ型胶原的黏附,下调其趋化运动特性,膜表面β1整合素可能为大肠癌黏附、侵袭和转移重要蛋白质分子之一。     

大蒜素对大肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨大蒜素对大肠癌细胞系Lo Vo细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:体外培养的Lo Vo细胞,用不同浓度大蒜素处理24、48、72 h,MTT法测定其对Lo Vo细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;大蒜素(浓度分别为3、6、12μg/m L)处理Lo Vo细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测Casepase-3相对活性、western blot法检测环氧合酶2(COX-2)、P16基因表达情况。结果:大蒜素(浓度2~32μg/m L)能抑制Lo Vo细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;大蒜素(浓度分别为3、6、12μg/m L)作用Lo Vo细胞48 h后,细胞凋亡率分别为12.5%、23.3%、35.4%,对照组凋亡率为3.4%;Casepase-3相对活性显著增加;COX-2的表达降低,而P16的表达升高,呈剂量依赖性。结论:大蒜素能抑制Lo Vo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3活性、下调COX-2基因的表达及上调P16基因有关。大蒜素是一种前景广阔的抗肿瘤药物。     

大蒜素对大鼠肝星状细胞基质金属蛋白酶抑制剂-1表达的影响

目的 观察大蒜素对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖及细胞外基质降解酶-金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的影响,探讨大蒜素抗肝纤维化的作用及其机制.方法 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6.MTT法检测大蒜素作用下对大鼠肝星状细胞增殖的影响、Real-time RT-PCR检测肝星状细胞的TIMP-1mRNA水平、Western blot检测肝星状细胞的TIMP-1蛋白的表达水平.结果 HSC-T6大蒜素处理组与空白对照组比较,增殖抑制率明显提高,差异有统计学意义（P ＜0.01）;TIMP-1的mRNA及蛋白表达水平均明显下降,并且大蒜素浓度增高时,TIMP-1的mRNA及蛋白表达水平则逐渐下降,大蒜素高浓度（24μg/mL）组对TIMP-1的抑制作用明显高于空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 大蒜素对HSC-T6增殖和TIMP-1的表达均有抑制作用,为临床开发抗肝纤维化的新药物提供了理论基础.     

大蒜素对肾细胞癌ketr-3细胞增殖影响

目的观察大蒜素对肾细胞癌ketr-3细胞生长、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的ketr-3细胞。倒置显微镜下观察ketr-3细胞的形态学变化,采用四唑盐比色法(MTT)及流式细胞术(FCM)检测不同时期ketr-3细胞形态变化、增殖以及细胞凋亡的作用。结果大蒜素对肾细胞癌ketr-3细胞生长具有抑制作用,在作用24、48、72h点上不同浓度的大蒜素对ketr-3细胞的抑制率之间差异有统计学意义(P0.05)。大蒜素作用24 h即可检测到凋亡细胞,0.05 mg/m L、0.1 mg/m L、0.3mg/m L、0.5mg/m L药物组凋亡率分别为9.21%、27.43%、37.72%、46.52%,1mg/m L组的凋亡率最高,达到62.21%,而对照组仅为3.13%,差异有统计学意义(P0.05)。结论大蒜素能够诱导ketr-3细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制细胞增殖。     

大蒜素对人胃癌SGC7901细胞生长的影响

目的探讨大蒜素（diallyl trisulfide,allicin）对人胃癌细胞株SGC7901体外生长的影响。方法大蒜素处理胃癌细胞株SGC7901,MTT法检测SGC7901的生长,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测Ki67的表达。结果大蒜素作用于SGC7901细胞后,对其增殖表现出了明显的抑制作用,且呈浓度依赖性;大蒜素作用于SGC7901细胞12、24和48 h后,细胞凋亡率分别为2.41%、7.30%和15.44%,明显高于对照组（P〈0.05）;大蒜素作用48h后,Ki67的阳性表达率下降（P〈0.05）。结论大蒜素可以抑制胃癌SGC7901细胞的增殖和诱导细胞凋亡。     

肝细胞性肝癌中乙酰肝素酶与nm23-H1的表达及其临床意义

目的：探讨乙酰肝素酶（HPA）和nm23-H1在原发性肝细胞肝癌（HCC）中的相互关系,及其作为CC术后转移复发预测指标的价值。方法：选用33例HCC癌组织和癌旁组织标本,9例肝脏良性肿瘤瘤周肝组织作正常对照。用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）和免疫组化S－P法检测标本中HPA mRNA和nm23-H1蛋白的表达,并结合患者的临床病理指标和随访结果进行分析。结果：33例HCC中,16例HPA表达阳性,其阳性率显著高于癌旁组织和正常肝组织（P＜0．01）。HPA表达与肿块大小、包膜形成、AFP水平、HBsAg状态和有无肝硬化等无关（P＞0．05）;但高转移复发倾向组和随访转移复发组HPA表达率显著高于低转移复发倾向组（P＜0．05）和无转移复发组（P＜0．01）;此外,HPA基因表达多见于分化较差（P＜0．05）、TNM分期较晚（P＜0．05）的患者。nm23-H1蛋白在HCC癌组织中的阳性率显著低于癌旁和正常肝组织（P＜0．05）。nm23-H1与肿块大小、包膜形成、AFP水平、HBsAg状态、有无肝硬化、Edmondson分级和TNM分期均无关（P＞0．05）;但高转移复发倾向组和随访转移复发组HPA表达率明显高于低转移复发倾向组（P＝0．018）和无转移复发组（P＝0．024）。nm23-H1在HPA阳性组和阴性组表达差异无显著意义（P＝0．082）。按随访结果判断,HPA阳性预测转移复发准确率为78．6％（11／14）;nm23-H1阴性预测准确率为68．8％（11／16）;PHA阳性和nm23-H1阴性联合应用预测准确率为88．9％（8／9）。结论：HPA表达阳性和／或nm23-H1阴性患者有较高的肿瘤侵袭性和术后转移复发倾向,二者联合检测可提高预测HCC术后转移复发的准确性。     

Effects of adenovirus delivered tissue inhibitor of metalloproteinases transfection on biological behaviors of cervical cancer cell lines

OBJECTIVE: To explore the effects of adenovirus delivered tissue inhibitor of metalloproteinases-3 (Ad-TIMP-3) on the biological behaviors of cervical cancer cell lines and to evaluate its potential application in cervical cancer gene therapy. METHODS: We transferred Ad-TIMP-3 into cervical cancer cells. The TIMP-3 mRNA expression was assessed by RT-PCR, and the TIMP-3 and p53 protein expressions were assessed with Western blot. The apoptotic changes of cells were illustrated with morphology and DAPI staining. The viability of cells was determined with MTT assay. The abilities of in vitro invasion and adhesion were evaluated by the invasion and adhesion assays respectively. RESULTS: After infection, the TIMP-3 mRNA and protein were significantly upregulated in a time-dependent manner. Overexpression of TIMP-3 markedly increased p53 protein level in spite of the backgrounds of p53 gene in cells. Ad-TIMP-3 infection induced massive apoptosis of cervical cancer cells with a marked bystander effect. The abilities of in vitro invasion and adhesion were inhibited significantly (P < 0.01). The cytotoxicity of Ad-TIMP-3 was significantly stronger than that of Ad-p53 (P < 0.05, P < 0.01). CONCLUSIONS: Ad-TIMP-3 infection has cytotoxic effects on cervical cancer cells and can inhibit the expressions of these malignant phenotypes. Ad-TIMP-3 may be a potentially useful agent for cervical cancer gene therapy.     

大蒜素对人白血病HL-60细胞生长和凋亡的影响

目的: 探讨大蒜素对人白血病HL-60细胞生长抑制和诱导凋亡作用。方法: MTT比色分析法检测大蒜素对HL-60细胞生长的抑制作用,光镜观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞术分析大蒜素对HL-60细胞凋亡的影响。结果: 20mg/L、40mg/L、60mg/L大蒜素均能抑制HL-60细胞生长,其抑制作用呈剂量-效应关系,40mg/L大蒜素能诱导HL-60细胞出现典型凋亡形态学变化。大蒜素诱导HL-60细胞有凋亡现象和阻滞细胞周期于G₂/M期。结论: 大蒜素对人白血病HL-60细胞生长有抑制作用,其抑制作用与诱导HL-60细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

内皮素3基因对结直肠癌LoVo细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨内皮素3(endothelin 3,EDN3)基因对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响及其相关机制.方法 实时荧光定量PCR检测EDN3 mRNA在人结直肠癌组织及对应癌旁组织中的表达情况,半定量PCR检测EDN3及内皮素受体B(endothelin receptor B,EDNRB) mRNA在结直肠癌细胞(CaC02、LoVo、HT-29)中的表达情况.将包装过载体pCDH-CMV-MCS-EFl-Puro-EDN3的病毒感染至结直肠癌细胞LoVo,MTS、克隆形成法、划痕法、Transwell检测EDN3对细胞增殖、克隆、迁移和侵袭能力的改变.Western blot检测LoVo中p-ERK1/2和t-ERK 1/2蛋白改变.结果 EDN3在人结直肠癌组织和细胞中表达降低.表达EDN3基因的重组载体成功感染至LoVo细胞.MTS和克隆实验结果显示,实验组和对照组细胞增殖和克隆形成差异无统计学意义(P＞0.05),划痕实验和Transwell实验提示实验组细胞迁移和侵袭能力明显低于对照组(P＜0.01).Western blot检测结果显示磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降(P＜0.01).结论 EDN3在结直肠癌组织和细胞中表达降低,过表达EDN3能抑制结直肠癌LoVo细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与ERK1/2信号通路有关.