糖尿病对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的:探讨AGE-RAGE系统对糖尿病大鼠自体移植静脉内膜增生的作用。方法:雄性SD大鼠40只，随机分为糖尿病组及正常对照组。两组均建立自体静脉移植模型，制模后的7 d和14 d测定血清AGE含量，取自体静脉移植标本行组织形态学观察，半定量RT-PCR检测RAGE，NF-κB p65及VCAM-1mRNA的表达，Western蛋白印迹和免疫组化方法检测RAGE，NF-κB p65及VCAM-1蛋白表达,并用免疫组化方法检测PCNA的表达。结果:术后7 d及14 d，与对照组比较，糖尿病组自体移植静脉内膜增生明显为重，PCNA，RAGE，NF-κB p65及VCAM-1mRNA和蛋白表达均增强，血清AGE含量增加，差异均有统计学意义（均P<0.05）。 结论:AGE-RAGE系统激活NF-κB，增强黏附分子的表达，可能是糖尿病大鼠自体移植静脉内膜增生加重的原因。     

晚期糖基化终产物及其受体对大鼠阴茎海绵体组织中内皮素-1活性的影响

目的：通过观察大鼠阴茎海绵体组织中晚期糖基化终产物（AGEs）及其受体（RAGE）的变化对内皮素1（ET-1）活性的影响，探讨AGEs在糖尿病性勃起功能障碍（DMED）发生发展中的作用。方法：成年雄性SD大鼠60只，随机取40只用于制作糖尿病模型，造模后共27只大鼠成模，将其分为两组：糖尿病（DM）组15只和糖尿病＋氨基胍给药（DM＋AG）组12只；另20只大鼠平分为两组：正常对照（NC）组和正常对照＋氨基胍给药（NC＋AG）组；两组氨基胍（AG）给药组大鼠造模后即在其饮水中按1g／L剂量加入AG。饲养8周后取各组大鼠阴茎海绵体组织，一部分用于免疫组化法观察分析AGEs及其受体的分布和表达，剩余部分匀浆后检测AGE-肽（AGE-P）含量和ET-1活性。结果：DM组阴茎海绵体组织中AGEs和RAGE的表达、AGE-P含量及ET-1活性明显高于正常对照组（P〈0．05）；正常对照组与NC＋AG组间比较在各项指标上则无明显差异（P〉0．05）。结论：糖尿病状态下AGEs与RAGE的结合效应可以引起大鼠阴茎海绵体组织中ET-1活性的增强，从而促进DMED的发生发展。     

晚期糖基化终产物及其受体对大鼠阴茎海绵体组织中氧自由基代谢的影响

目的 通过观察大鼠阴茎海绵体组织中晚期糖基化终产物（AGEs）及其受体（RAGE）的变化对氧自由基代谢的影响，探讨AGEs在糖尿病性勃起功能障碍（DMED）发生发展中的作用。方法 成年雄性SD大鼠60只，随机取40只用于制作糖尿病模型，造模成功的大鼠分为两组：糖尿病（DM）组和糖尿病＋氨基胍给药（DM＋AG）组；另20只大鼠亦分为两组：正常对照（CO）组和正常对照＋氨基胍给药（CO＋AG）组；氨基胍（AG）给药组大鼠造模后即在其饮水中按1g／L剂量加入AG。饲养8周后取各组大鼠阴茎海绵体组织，一小段用于免疫组化观察分析AGEs及其受体的分布和表达，剩余部分匀浆后检测AGE-肽（AGE—P）含量、丙-醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 DM组阴茎海绵体组织中AGEs和RAGE的表达、AGE—P含量及MDA含量明显高于CO组（P〈0．05），而SOD活性则明显低于后者（P〈0．05），而AG则明显减少了DM大鼠阴茎海绵体组织中AGEs和RAGE表达、AGE—P及MDA的生成，增强了SOD活性；CO组与CO＋AG组间比较在各项指标上则无明显差异（P〉0．05）。结论 糖尿病状态下AGEs与RAGE的结合效应可以引起大鼠阴茎海绵体组织中氧自由基的产生增多，抗氧化能力的下降，从而促进DMED的发生发展。     

晚期糖基化终产物及其受体对大鼠阴茎海绵体组织中内皮素-1活性的影响

目的:通过观察大鼠阴茎海绵体组织中晚期糖基化终产物(AGEs)及其受体(RAGE)的变化对内皮素1(ET-1)活性的影响,探讨AGEs在糖尿病性勃起功能障碍(DMED)发生发展中的作用。方法:成年雄性SD大鼠60只,随机取40只用于制作糖尿病模型,造模后共27只大鼠成模,将其分为两组:糖尿病(DM)组15只和糖尿病+氨基胍给药(DM+AG)组12只;另20只大鼠平分为两组:正常对照(NC)组和正常对照+氨基胍给药(NC+AG)组;两组氨基胍(AG)给药组大鼠造模后即在其饮水中按1g/L剂量加入AG。饲养8周后取各组大鼠阴茎海绵体组织,一部分用于免疫组化法观察分析AGEs及其受体的分布和表达,剩余部分匀浆后检测AGE-肽(AGE-P)含量和ET-1活性。结果:DM组阴茎海绵体组织中AGEs和RAGE的表达、AGE-P含量及ET-1活性明显高于正常对照组(P<0.05);正常对照组与NC+AG组间比较在各项指标上则无明显差异(P>0.05)。结论:糖尿病状态下AGEs与RAGE的结合效应可以引起大鼠阴茎海绵体组织中ET-1活性的增强,从而促进DMED的发生发展。     

晚期糖基化终产物诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的观察晚期糖基化终产物（AGE）修饰的牛血清白蛋白（BSA）对体外培养的人近端肾小管上皮细胞株（HK-2细胞）表达结缔组织生长因子（CTGF）的影响，并探讨可能的作用途径。方法将HK-2细胞在体外与不同浓度的AGE-BSA和BSA共同培养。间接免疫荧光法检测糖基化终产物受体（RAGE）。免疫印迹法观察HK-2细胞表达的CTGF蛋白质，ELISA和免疫印迹法检测TGF-β1的合成和分泌。结果在HK-2细胞的胞膜和胞质存在RAGE的表达。AGE-BSA以时间和剂量依赖方式上调HK-2细胞CTGF的表达，8、24、48及72h组分别为0h组的117％、138％、257％及339％：20、50及100mg／L组分别为0mg／L组的186％、240％及287％。在一定的剂量和时间范围内，AGE—BSA能够诱导TGF-β1蛋白质的表达和分泌。抗RAGE和抗TGF-β1的单克隆抗体能够部分抑制AGE-BSA诱导的CTGF蛋白质表达。结论人肾小管上皮细胞表面存在RAGE的表达。AGE—BSA可能部分地通过RAGE介导TGF-β1表达上调。诱导HK-2细胞CTGF表达。     

外敷氨基胍霜剂对糖尿病大鼠皮肤组织的影响

目的 观察外敷氨基胍霜剂对糖尿病大鼠皮肤组织晚期糖基化终末产物(AGE)形成、KC细胞增殖及氧化应激的影响.方法 将硬脂酸、液状石蜡、凡士林、羊毛脂、肉豆蔻酸异丙酯、甘油、50 g/L尼泊金醇、盐酸氨基胍等试剂按一定比例混合制成氨基胍霜剂,以不含有氨基胍的霜剂为基质.取健康大鼠背部皮肤,分别用5、10 g/L氨基胍霜剂和5 g/L氨基胍+10g/L氮酮霜剂处理,于用药后2、4、7、10、12、24 h测定药物透皮效果.将30只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组6只、糖尿病组8只、氨基胍治疗组8只、基质治疗组8只.后3组大鼠腹腔注射链脲佐菌素65 mg/kg,诱导糖尿病模型;对照组大鼠注射0.05 mmol/L柠檬酸缓冲液.注射1周后,正常对照组与糖尿病组大鼠不行任何治疗,氨基胍治疗组与基质治疗组大鼠背部分别连续外用10 g/L氨基胍霜剂与基质治疗4周.取各组皮肤组织,胶原提取液荧光强度检测法测定AGE含量,流式细胞仪分析表皮KC周期,检测氧化应激相关指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、总抗氧化能力、髓过氧化物酶(MPO)含量.对实验数据行t检验.结果 10 g/L氨基胍霜剂透皮效果优于5g/L氨基胍和5 g/L氨基胍+10 g/L氮酮的霜剂.1只基质治疗组大鼠未诱导成功.建模后4周,糖尿病组与氨基胍治疗组大鼠分别死亡4只和1只.糖尿病组大鼠皮肤组织AGE含量为每毫克羟脯氨酸(OHP)中(36.8±2.6)U,明显高于正常对照组的每毫克OHP中(24.6±2.7)U(t=7.2,P＜0.01);氨基胍治疗组AGE含量为每毫克OHP中(28.6±3.7)U,明显低于糖尿病组(t=-3.9,P＜0.05);基质治疗组AGE含量[每毫克OHP中(32.2±5.2)U]与糖尿病组相近(t=1.6,P＞0.05).糖尿病组大鼠S期KC比例为(5.3±0.6)%,低于正常对照组的(7.6±0.9)%(t=4.50,P＜0.01);氨基胍治疗组大鼠S期和G2/M期KC比例均明显高于糖尿病组(t值分别为6.80、3.17,P值均小于0.01);基质治疗组大鼠S期KC比例[(9.2±1.5)%]显著高于糖尿病组(t=4.90,P＜0.01).糖尿病组大鼠皮肤组织氧化应激指标含量均高于正常对照组,其中SOD和MPO差异有统计学意义(t值分别为4.4、3.7,P值均小于0.05);氨基胍治疗组各氧化应激指标含量均较糖尿病组降低,其中SOD含量显著低于糖尿病组(t=-1.4,P＜0.05);基质治疗组MDA、MPO含量显著低于糖尿病组(t值分别为2.6、2.9,P值均小于0.05).结论 外用氨基胍霜剂可以在一定程度上阻碍糖尿病大鼠皮肤组织中AGE的形成,改善表皮KC细胞增殖能力,适当降低皮肤组织氧化应激状态;单用霜剂基质也可适当降低皮肤组织氧化应激状态.

Abstract：

Objective To investigate the effects of aminoguanidine cream on the proliferation of keratinocytes (KC), content of advanced glycosylation end products (AGE) and oxidative stress in skin tissue of rats with diabetes. Methods Stearic acid, liquid paraffin, vaseline, lanolin, isopropyl myristate fat,glycerol, 50 g/L alcohol paraben, aminoguanidine hydrochloride etc. were mixed in certain proportion to make aminoguanidine cream, and cream without aminoguanidine was used as matrix. The dorsal skin of normal rats were harvested and treated by aminoguanidine cream with dose of 5, 10 g/L, or 5 g/L together with 10 g/L azone. The transdermal effect was respectively measured at post treatment hour 2, 4, 7, 10, 12,24. Thirty SD rats were divided into normal control(NC, n = 6) , diabetes(D, n = 8) , aminoguanidine cream-interfered(AI, n = 8), matrix cream-interfered groups(MI, n = 8) according to the random number table. Diabetes was reproduced by intraperitoneal injection of STZ (65 mg/kg) in rats of D, AI, and MI groups, and rats in NC group were injected with 0. 05 mmol/L citrate buffer as control. One week later, dorsal skin of rats in AI and MI groups were respectively treated with 10 g/L aminoguanidine cream and matrix cream by external use for 4 weeks. AGE content was determined with fluorescence detection from skin collagen extract. KC cell cycle was detected by flow cytometry. Skin tissue specimens were obtained for determination of levels of superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA), myeloperoxidase (MPO), and total antioxidant capacity. Data were processed with t test. Results Transdermal effect of aminoguanidine cream with dose of 10 g/L was better than that with 5 g/L or 5 g/L + 10 g/L azone cream. One rat was not induced successfully in MI group. Four weeks after model reproduction, 4 rats died in D group and 1 rat died in AI group. The AGE content in D group was obviously higher than that in NC group [(36.8 ± 2.6),(24. 6 ±2.7) U per milligram hydroxyproline, respectively, t = 7.2, P ＜0. 01], and that in AI group [(28.6 ±3.7) U per milligram hydroxyproline] was also lower as compared with that in D group(t = -3.9,P ＜ 0.05). There was no significant difference in AGE content between MI [( 32.2 ± 5.2) U per milligram hydroxyproline] and D groups(t = 1.6, P ＞ 0. 05). The percentage of KC in S phase was obviously lower in D group than in NC group [(5.3 ±0.6)%, (7.6±0.9)%, respectively, t =4.50, P ＜0. 01], while that in MI group [(9. 2 ± 1.5) %] was higher as compared with that in D group(t = 4.90, P ＜ 0. 01). It was more higher in AI group than in D group on KC percentage in S and G2/M phase (with t value respectively 6.80, 3.17, P values all below 0. 01). The oxidative stress indexes of skin tissue in D group were all higher than those in NC group, in which levels of MPO and SOD showed statistical difference(with t value respectively 4.4, 3.7, P values all below 0. 05). The oxidative stress indexes were all lower in AI group than in D group, especially in SOD level(t = -1.4, P ＜0. 05). Levels of MAD, MPO in MI group were significantly lower than those in D group(with t value respectively 2.6, 2.9, P values all below 0. 05).Conclusions Aminoguanidine cream can promote KC proliferation and appropriately reduce oxidative stress through inhibiting AGE formation to a certain extent in skin tissue of rats with diabetes. Signal use of matrix cream can also reduce oxidative stress in skin tissue of rats with diabetes.     

循环晚期糖基化终产物的检测方法和评价

晚期糖基化终产物（AGE）是蛋白质的氨基组、脂质和脂蛋白与糖的醛基组之间的非酶性糖基化／氧化反应的终产物。反应早期生成可逆的Schiff碱，该早期产物经过结构重建，转化成较为稳定的amadori产物，而后再经过一系列化学重排和脱水反应，产生不可逆的晚期产物即ACE。正常人体内该反应进行得非常缓慢，通常只发生于某些转换率很低的蛋白质如基质蛋白。蛋白质一旦被AGE修饰，即丧失其生理功能，将通过巨噬细胞等细胞表面AGE受体而被摄取、降解、清除。因此，正常情况下AGE修饰蛋白作为一种信号参与了机体清除衰老组织以及结构重建的…     

糖尿病大鼠肾组织中糖基化终产物受体基因表达的研究

目的 观察不同病程的糖尿病大鼠肾组织内糖基化终产物受体(RAG)mRNA的表达水平的改变。方法 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测病程12周内RAGEmRNA水平。结果 诱发糖尿病大鼠2周时肾脏皮、髓质内RAGEmRNA表达无明显变化,4周后其表达不断地显著增加(P<0.05)。诱发8周、12周的糖尿病大鼠,其糖化血红蛋白(GHb)水平明显升高(P<0.001)。结论 糖尿病状态下,肾组织内RAGE的高表达可能与糖尿病肾病的发病有关,且可能是高血糖诱发AGEs形成的结果。     

三七总皂苷通过抑制RAGE/MAPK信号通路减轻糖尿病性骨质疏松大鼠的炎症损伤

目的 探究三七总皂苷(PNS)调控晚期糖基化终产物受体(RAGE)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对糖尿病性骨质疏松症(DOP)大鼠炎症损伤的影响。方法 将SD大鼠分成对照组、模型组、二甲双胍(MET)组(100 mg/kg)、PNS低剂量组(PNS-L组，10 mg/kg PNS)、PNS高剂量组(PNS-H组，20 mg/kg PNS)、PNS-H+空载体质粒组(20 mg/kg PNS+15μL空载体质粒)、PNS-H+RAGE过表达组(20 mg/kg PNS+15μL RAGE过表达质粒);除对照组外，其余各组大鼠通过高糖高脂饲料喂养及腹腔注射链脲佐菌素进行DOP模型构建；造模成功后各组进行相应给药处理。采用双能X线骨密度检测仪检测大鼠股骨骨密度(BMD);血糖测试仪及酶联免疫吸附法检测空腹血糖(FBG)、血清空腹胰岛素(FINS)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、碱性磷酸酶(ALP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；三点弯曲实验和苏木精-伊红染色分别检测股骨生物力学及病理形态变化；蛋白印迹法检测RAGE/MAPK通路蛋白表达。结果 ...     

肾素血管紧张素系统在晚期糖基化终产物改变肾小球内皮细胞通透性中的作用

【摘要】 目的 探讨晚期糖基化终产物（AGE）对大鼠肾小球内皮细胞（rGEnC）紧密连接的影响及激活细胞内肾素血管紧张素系统（RAS）在其中的作用。 方法 采用原代培养的rGEnC,予不同浓度AGE（20、40、80 mg/L）分别作用6 h、12 h和24 h,采用跨内皮细胞电阻抗和异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白滤过率观察通透性的变化;Western印迹检测晚期糖基化终产物受体(RAGE)、紧密连接蛋白[occludin、claudin-5、连接黏附分子A（JAM-A）和闭合小环蛋白1（ZO-1）]和细胞RAS组分[血管紧张素原、肾素和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）1型受体（AT1）]蛋白表达量的变化;免疫荧光技术显示紧密连接的完整性;紫外光法和酶免疫分析技术测定细胞内外血管紧张素转化酶（ACE）活性及AngⅡ水平。 结果 AGE可引起内皮细胞通透性、RAGE表达量、ACE活性、AngⅡ浓度和AT1表达量的升高,occludin、claudin-5和JAM-A表达量的下降。加入抗RAGE抗体（100 mg/L）预处理后,上述AGE作用被阻断。AGE可引起上述紧密连接蛋白在细胞连接处的中断。予卡托普利（1 mmol/L）或缬沙坦（10 μmol/L）预处理可部分阻断AGE上述效应。 结论 AGE可通过上调RAGE表达,激活细胞内肾素血管紧张素系统,破坏肾小球内皮细胞紧密连接,导致其通透性的升高。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。