蛋白与蛋白相互作用研究的生物信息学进展

通过研究蛋白与蛋白相互作用，从而更好地对蛋白功能进行注释，甚至应用于药物开发，是蛋白组学的主要任务之一。人类基因组的大规模测序和其他各种高通量的生物技术的采用为蛋白质调控网络的研究创造了条件。本文回顾了近年来生物信息学在蛋白与蛋白相互作用方面取得的最新研究成果，对各种计算方法进行了比较，并对该领域今后的发展方向做了预测。     

β—淀粉样蛋白及Tau蛋白和Alzheimer病关系的研究

β－淀粉样蛋白是一种正常细胞的代谢产物，是因β－淀粉样蛋白前体基国 变或“α－分泌酶”作用后产生的，并与载脂蛋白Ｅ结合而沉积于脑内形成老年斑，新的观点认为α－淀粉样蛋白沉积是Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病的病因和结果。Ｔａｕ蛋白异常磷酸化可以形成神经原纤维缠结，Ｔａｕ蛋白异常磷酸化的原因可能是促细胞激活蛋白激酶的结果和载脂蛋白Ｅ、ε４与Ｔａｕ蛋白结合，使Ｔａｕ不与微小管蛋白结合，降低其稳定性的结果。     

布鲁氏菌亲水性蛋白对电泳图谱成型影响的初步观察

提取布鲁氏菌外膜蛋白的过程中发现在光滑型、粗糙型、非典型菌细胞中都存在着一组亲水性的小分子蛋白(MW<28kD),实验证明,这组小分子蛋白的存在是获得清晰,真切的布鲁氏菌外膜蛋白电泳图谱不可缺少的一个因素。推测小分子亲水性外膜蛋白参与了布鲁氏菌已被公认的三组外膜蛋白之间的相互作用。因此,它是外膜蛋白达到综合平衡的必要组成部分。     

老年胃癌活检标本与手术切除胃癌组织p53、c-erbB-2、p21、nm23基因表达检测的比较研究

目的 探讨胃镜活检标本与手术切除胃癌组织p53、c-erbB-2、p21、nm23联合基因产物表达检测对胃癌诊断与治疗的价值。方法 应用免疫组化技术检测了胃癌胃镜活检标本及手术切除胃癌组织p53、c-erbB-2、p21、nm23等基因产物表达并对胃镜活检标本与手术切除胃癌组织的检测结果进行了比较。结果 p53蛋白表达阳性率38．0％～46．2％，c-erbB-2为36．5％-59．2％，p21为39．4％～69．2％，nm23为34．6％-71．8％，在非胃癌组织（胃、十二指肠溃疡、胃息肉、重度不典型增生胃炎）未见c-erbB-2、p21、nm23等基因表达。c-erbB-2、p21的表达与胃癌的分化程度有关，p21、nm23基因表达与肿瘤浸润深度、肿瘤转移程度有关。p53、c-erbB-2、p21、nm23四种肿瘤蛋白在胃镜活检标本和手术切除标本中表达无显著性差异，胃镜活检标本和手术切除标本四种基因产物表达检测阳性符合率分别为92．2％、85．5％、96．9和94．2％。结论 对胃癌组织尤其胃癌胃镜活检标本p53、c-erbB-2、p21、nm23基因表达检测在胃部良恶性肿瘤鉴别、非手术临床分期的判断及指导临床治疗等方面具有一定价值。     

刚地弓形虫致密颗粒蛋白GRA7基因的重组、表达及鉴定

目的构建弓形虫致密颗粒蛋白7(GRA7)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达。方法根据GRA7基因序列设计合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA7基因片段,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经酶切、PCR鉴定并测序;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析并纯化,Western blot分析其反应原性。结果 GRA7基因PCR产物大小约为714bp,与预期相符;重组质粒经酶切及PCR鉴定构建成功,测序结果与已知序列吻合;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA7融合蛋白分子质量单位约为53ku,该蛋白可被His标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫GRA7基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础。     

C反应蛋白提示什么？

陈先生:最近,医学杂志上常常提到 C-反应性蛋白,甚至谈及冠心痛的病因时,也提到 C 反应性蛋白,请问,它的发生和存在与心血管病有关吗?读者:陈先生     

肝纤维化组织中抗衰老蛋白及抗增殖蛋白的表达及其作用机制

目的探讨肝纤维化大鼠肝组织中抗衰老标志蛋白(RGN)及抗增殖蛋白(PHB)的表达及其作用机制。方法 48只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组(12只)、造模组(36只)。使用猪血清诱导大鼠肝纤维化,造模成功后随机分为肝纤维化组(16只)、CGII干预组(16只)。CGII干预组给予60 mg/ml CGII肌肉注射,肝纤维化组和正常对照组给予等量的等渗盐水肌肉注射,1次/d,连续6 w。取大鼠肝组织行HE和Masson染色;RT-PCR检测肝组织中RGN和PHB mRNA表达,免疫组化检测蛋白表达。结果 HE和Masson染色显示,肝纤维化组大鼠纤维化程度明显高于正常对照组;CGII干预组大鼠肝组织胶原变细、减少,纤维化程度较肝纤维化组明显改善。纤维化组大鼠肝组织中RGN和PHB蛋白表达量明显少于正常对照组(P0.01);CGII干预组RGN和PHB蛋白表达量明显高于纤维化组(P0.01)。肝纤维化组RGN和PHB mRNA表达水平明显低于正常对照组(P0.05);CGII干预组RGN和PHB mRNA表达水平明显高于肝纤维化组(P0.01)。结论 RGN和PHB在大鼠肝纤维化组织中表达降低,与肝纤维化存在相关性。     

弓形虫SAG1可溶性融合蛋白在大肠埃希菌中的表达及纯化

目的在大肠埃希菌中高效表达及纯化弓形虫SAG1抗原,为研制新型弓形虫病基因工程诊断试剂盒奠定基础. 方法将重组pGEX-SAG1表达载体转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus（DE3）-RP菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导下表达融合蛋白,并通过SDS-PAGE凝胶电泳分析表达产物的表达形式.通过降低培养温度和升高LB培养基的pH,诱导融合蛋白在上清中表达,表达产物以硫酸铵沉淀、GST亲和层析和Sephadex G-150凝胶过滤层析进行纯化.Western blot检测纯化融合蛋白的免疫反应性. 结果 37 ℃条件下,SAG1以融合蛋白（SAG1-GST）的形式在大肠埃希菌中高效表达,表达蛋白以包涵体形式存在.在27 ℃和升高LB培养基pH条件下,融合蛋白在上清中得到表达,经纯化后其SAG1可溶性蛋白纯度可达90%以上.Western blot分析纯化蛋白能被弓形虫感染者血清所识别.结论 SAG1可溶性蛋白在大肠埃希菌中得到了表达,经纯化后能被弓形虫感染者血清所识别,可用于制备弓形虫感染诊断试剂盒.     

乳酸菌对肠上皮细胞侵袭性大肠杆菌损伤的保护作用

目的:研究肠上皮细胞(Caco-2)在侵袭性大肠杆菌(entcroinvasivc Eschenchia coli,EIEC)感染后,紧密连接(TJ)相关蛋白表达的改变及乳酸菌对Caco-2细胞的保护作用机制.方法:将Caco-2感染模型分为正常组、感染组、乳酸菌处理组和庆大霉素处理组.采用免疫金标记及电镜观察上皮细胞间TJ的位置和超微结构.免疫荧光观察TJ相关蛋白(Claudin-1,Occludin,JAM-1,ZO-1)及F-actin的表达分布和超微结构变化.结果:紧密连接结构位于相邻上皮细胞间的顶端,间隙大小约25-38 nm.EIEC感染后,免疫胶体金定位不清,细胞骨架F-actin遭到破坏、相邻Caco-2细胞间TJ结构遭到破坏,TJ相关蛋白(Claudin-1蛋白,Occludin蛋白,JAM-1蛋白,ZO-1蛋白)的表达亦减少,而乳酸菌处理后F-actin的表达明显增多,可减轻EIEC引起的TJ结构受损,TJ相关蛋白的表达增多.结论:EIEC感染导致Caco-2细胞细胞骨架F-actin、TJ相关蛋白的表达和分布发生改变.乳酸菌可以明显抑制EIEC引起的单层细胞TJ结构和相关蛋白的破坏,并改善细胞骨架的分布表达.     

软骨型蛋白多糖的提纯及生物化学特点的研究

本文分别用Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析和氯化铯平衡密度梯度离心法从仔猪软骨提纯了软骨型蛋白多糖单体，它在ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－２Ｂ柱层析上显示了大分子的特点（Ｋａｖ＝０．２２）．能够与透明质酸结合形成巨大分子的聚合体。提纯的核心蛋白在ＳＤＳ电泳上显示出单一的银染色区带，分子量为４６０ｋＤａ，与抗人蛋白多糖单克隆抗体（３－Ｂ－３）呈强阳性反应．离子交换层析法简便、快速、经济更适合于以蛋白多糖损害为主要特点的软骨疾病的研究。     

自噬标记蛋白在恶性肿瘤中临床意义的研究进展

自噬是生物细胞的一种死亡形式,参与多种生理、病理过程。近年研究发现,自噬标记蛋白如自噬效应蛋白(Beclin1)、泛素结合蛋白(p62)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白轻链3蛋白(LC3)等与恶性肿瘤的发生发展密切相关。自噬标记蛋白与甲状腺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、胃肠道肿瘤、肺癌的发病具有密切关系,自噬标记相关蛋白表达的差异对恶性肿瘤的早期诊断、治疗、预后均有重要作用,可能成为肿瘤精确诊断、治疗的新靶点。     

Livin、Smac在肝癌中的表达及与凋亡、增殖的关系

目的探讨肝癌中Livin、Smac蛋白的表达及其与细胞凋亡、增殖的关系。方法应用免疫组化二步法检测肝癌及相应癌旁肝硬化组织各41例、肝血管瘤旁正常对照组织9例中Livin、Smac及PCNA的表达;应用TUNEL法检测肝细胞的凋亡。结果 41例肝癌中Livin、Smac的阳性率分别46.34%、34.14%,相应癌旁肝硬化组织中分别为24.39%、56.10%,正常对照组织中分别为0%、77.8%,肝癌中Livin、Smac的阳性率与非癌肝组织相比差异均有统计学意义（P〈0.05）;肝癌中Livin的表达与肝癌的转移与否有相关性（P〈0.05）,二者与肿瘤细胞的凋亡增殖比均有相关性（P〈0.05）;Livin和Smac在肝癌中的表达呈负相关（rs=-0.360,P〈0.05）。结论 Livin的相对高表达,Smac的相对低表达或表达缺失在一定程度上打破了肝癌中细胞凋亡与增殖的动态平衡,在肝癌的形成过程中起重要的作用。     

重组骨形态发生蛋白-7的复性及纯化

目的探讨重组骨形态发生蛋白-7（rhBMP-7）的复性及纯化获得高纯度rhBMP-7二聚体的方法。方法表达rhBMP-7的工程菌经发酵、裂菌、提取包涵体后,4℃下依次在尿素浓度为4、2、1 mol/L的磷酸盐缓冲液中透析使蛋白复性,然后再通过层析色谱纯化去除杂蛋白。结果纯化后rhBMP-7以单体和二聚体形式存在,纯度达95%以上,其中rhBMP-7二聚体含量可达60%以上。结论初步建立了先复性然后在低脲浓度下纯化的方法,能够获得含量较高的rhBMP-7二聚体。     

联合检测血浆中P21、P53及HSP70蛋白对肺癌诊断的Bayes判别分析

目的　探讨血浆中肿瘤蛋白实测值建立的Bayes模型对肺癌的诊断价值。方法　采用Western斑点印迹法 ,对确诊的 3 1例肺癌 (肺癌组 )、3 4例非肿瘤性肺疾病 (对照组 )患者血浆中P2 1、P5 3及HSP70蛋白水平进行检测 ,并用其实测值建立Bayes模型。结果　与对照组比较 ,肺癌组P2 1、P5 3及HSP70蛋白水平均增高 ,差异具有显著性 (P <0 .0 1) ;Bayes模型的敏感性、特异性和准确率分别为 73 .3 3 %、78.3 8%和 81.67% ;联合细胞学检测 ,其诊断的敏感性可提高至 87.10 % ;18例细胞学阴性肺癌患者Bayes模型判定阳性 13例 ( 72 .2 2 % )。结论　P2 1、P5 3及HSP70蛋白联合检测建立的Bayes模型是一种新的诊断肺癌的方法 ,可补充细胞学的诊断价值。     

糖化唾液蛋白测定及临床应用

本文采用硫代巴比妥酸比色法测定正常人及糖尿病病人的糖化唾液蛋白。结果表明糖尿病组明显高于对照组(P<0.001),与糖化血浆蛋白及糖化血红蛋白呈正相关(r分别为0.701、0.684,P均<0.01),与空腹血糖无相关。实验提示,糖化唾液蛋白也能反映糖尿病病人以往血糖控制状况,可用作监测代谢控制的指标。     

糖尿病肾病与硫氧还蛋白及其相互作用蛋白关系的研究进展

随着人们生活行为,饮食结构及人口老龄化的改变,糖尿病(DM)的发病率与日剧增,成为严重威胁人类健康的慢性代谢性疾病,据国际糖尿病联盟统计,2000年全球有DM患者约1.51亿,而估计到2030年全球将5亿人患DM,DM是DM肾病     

小鼠皮层和海马Aβ前体蛋白表达的增龄性改变

目的 探讨年龄对小鼠皮层和海马神经元Aβ前体蛋白(APP) 695表达的影响.方法 C57BL/6J雄性小鼠按照年龄随机分为3组:2月龄组、12月龄组和20月龄组;采用免疫组织化学和免疫印迹方法观测各组皮层和海马神经元APP695蛋白的表达.结果 与2月龄相比,12月龄组海马和皮层神经元APP695蛋白水平明显升高(P＜0.05);20月龄组APP水平较12月龄组明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 小鼠皮层和海马神经元APP695的表达随着年龄的增长而增高.     

活化蛋白C抵抗现象与血栓性疾病的关系

活化蛋白C抵抗与血栓性疾病的关系密切相关.本文主要就APCR现象产生机制及其临床意义作一综述.     

研究发现靶向HIV的关键蛋白

据医学空间网9月30日报道，由Gregory Weiss领导的UC Irvine的研究人员成功地靶向一种HIV蛋白(Nef)。