β-胡萝卜素和维生素C对白血病细胞c-myc基因表达的影响

为了研究β 胡萝卜素和维生素C(VC)对白血病细胞中c myc癌基因表达的影响 ,以探讨其抑制白血病细胞增殖的分子机理。分别添加不同浓度的 β 胡萝卜素和VC体外培养白血病细胞株HL 6 0 2 4、48、72h后 ,利用台盼蓝拒染法检测两种微量营养素对细胞增殖的抑制作用 ;同时取作用 2 4h的细胞利用Northern印迹杂交检测细胞中c myc基因的表达。结果发现 :VC(5、10、10 0 μmol L)对HL 6 0细胞增殖具有显著性抑制作用 (P <0 0 5 ) ,而且低浓度的VC(5 μmol L)对HL 6 0细胞的抑制作用出现较早。β 胡萝卜素三个剂量组 (10、5 0、10 0 μmol L)均可抑制HL 6 0细胞增殖 ,作用有显著性 (P <0 0 5 ) ,且呈剂量 效应关系。VC(5 μmol L)对HL 6 0细胞内c myc的表达没有显著性作用 (P >0 0 5 )。β 胡萝卜素 (5 0 μmol L)对HL 6 0细胞内c myc的表达有显著性促进作用 (P <0 0 5 )。提示VC抑制HL 6 0细胞增殖的效应与c myc的表达无关。β 胡萝卜素可能通过上调c myc基因的表达 ,进一步诱导白血病细胞凋亡 ,从而抑制白血病细胞增殖。     

9-羧酸蒽对人髓性白血病细胞株HL-60凋亡的研究

目的　研究氯通道抑制剂 9-羧酸蒽 ( 9-AC)对人髓性白血病细胞株HL - 6 0的影响 ,并对相关机制进行探讨。方法　体外培养人白血病细胞株HL - 6 0 ,采用透射电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等观察9-A对HL - 6 0细胞的作用。结果　在 5× 10 -4 mol/L 9-AC作用 48h后 ,细胞发生明显的改变。电镜下细胞形成典型的凋亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳出现特征性梯形条带。流式细胞仪分析表明 ,实验组HL - 6 0细胞出现明显的亚二倍体峰 -凋亡峰。结论　 9-AC具有明显的诱导白血病细胞HL - 6 0凋亡的作用。     

枸杞多糖对小鼠睾丸细胞DNA损伤的保护作用

目的 :研究枸杞多糖 (LBP)对过氧化氢 (H2 O2 )引起的睾丸细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法 :睾丸细胞先用不同浓度LBP作用 1h ,再加入 10 0 μmol LH2 O2 共同培养 2 5min ,然后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定DNA链断裂情况 ,分析LBP的抗氧化损伤作用。结果 :H2 O2 作用一定时间后 ,可引起DNA链断裂。 50、10 0、2 0 0、40 0 μg mL的LBP预处理可使H2 O2 染毒细胞的拖尾百分率和尾长显著降低。结论 :LBP本身没有致氧化损伤作用 ,它能够清除自由基 ,对氧化应激所致的睾丸细胞DNA损伤具有抑制作用     

浓缩铀诱发细胞凋亡的形态及基因调控

目的　研究浓缩铀诱发人白血病HL 6 0细胞凋亡的电镜形态特征 ,以及对相关基因bcl 2和bax的调控作用。方法　探讨受浓缩铀内照射不同时间 ,诱发HL 6 0细胞凋亡的电镜形态 ;运用免疫组织化学技术探讨浓缩铀对HL 6 0细胞bcl 2和bax蛋白的表达 ,运用RNA分子杂交技术探讨浓缩铀对HL 6 0细胞bcl 2mRNA的转录水平表达的影响。结果　人白血病HL 6 0细胞在浓缩铀辐照作用下 ,可呈现核断裂和核染质边聚。对照的HL 6 0细胞中bcl 2蛋白呈高度表达 ,为 (88± 7) % ,而受浓缩铀辐照下 ,可下调至(6 1± 5 ) %。bax在对照细胞中表达很低 ,在浓缩铀作用下 ,未见明显改变。经浓缩铀辐照后 ,可使HL 6 0细胞中的bcl 2mRNA表达呈明显下调。结论　浓缩铀内照射可诱发人白血病HL 6 0细胞凋亡发生 ,且其诱发HL 6 0细胞的凋亡作用与其下调凋亡相关基因bcl 2的表达相关联     

极低频磁场对细胞色素氧化酶亚基1基因转录水平的影响

目的　克隆和鉴定本研究室经DD法在Daudi细胞中筛选到的一个极低频磁场的特异反应基因 (MF 1) ,并在多种磁场敏感细胞中证实该基因反应的普遍性 ,为揭示磁场所致生物学效应的作用机制提供实验依据。方法　克隆、序列分析MF 1片段 ;选择HL 6 0、L12 10和中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)等细胞 ,用Northern技术观察该基因在不同条件的磁场辐照 (5 0Hz磁场 ,磁通密度分别是 0 .1mT和 0 .8mT ,辐照时间分别是 2 0min和 2 4h)后该基因转录水平的变化。结果　克隆测序及与GeneBank同源性比较表明 ,MF 1序列与细胞色素氧化酶亚基 1基因 (CO1)有 10 0 %同源性。HL 6 0、L12 10和CHL等细胞在 0 .1mT、0 .8mT磁场辐照 2 0min后 ,CO1转录水平 (分别为 0 .38± 0 .12、0 .37± 0 .0 4 )均比对照组 (0 .5 8± 0 .12 )下降 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;辐照 2 4h后 ,3种细胞该基因转录水平 (分别为 0 .4 6± 0 .0 9、0 .4 5± 0 .0 9)亦比对照组 (0 .6 5± 0 .0 6 )下降 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　CO1是磁场辐照密切相关的反应基因之一。磁场可能通过影响CO1的转录水平来影响细胞色素氧化酶的活力 ,从而影响多种生物学效应     

STAT3的活化对霍奇金淋巴瘤细胞凋亡的调控作用

目的　探讨STAT3的活化对霍奇金淋巴瘤 (HL)细胞凋亡的调控作用。方法　采用SP免疫组织化学方法检测了 4 5例不同亚型HL之RS/H细胞的STAT3、促凋亡基因fas和抗凋亡基因bcl- 2的表达。结果　在4 5例HL中 ,STAT3、fas及bcl- 2蛋白的阳性表达率分别为 6 4 4 % (2 9/ 4 5 )、6 2 2 % (2 8/ 4 5 )和 75 % (30 / 4 0 )。在不同亚型 (LP、NS、MC、及LD)中 ,STAT3的阳性表达强度无明显差异 (P >0 0 5 ) ;fas阳性强度依次降低 (P <0 0 5 ) ,而bcl- 2阳性强度逐渐增高 (P <0 0 5 )。统计学分析表明STAT3和fas两者的表达强度呈明显负相关 (γ= - 0 5 76 3,P <0 0 5 ) ,而STAT3和bcl- 2蛋白两者的阳性强度呈明显的正相关 (γ =0 6 35 7,P <0 0 5 )。结论　STAT3活化可能通过抑制细胞凋亡导致HL中RS/H细胞的恶性转化及高增殖性     

枸杞多糖对人前列腺癌PC-3细胞的影响及其抑瘤效应

目的探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对人前列腺癌PC-3细胞的影响及其机制,观察LBP对人前列腺癌PC-3细胞致瘤作用的干预效果。方法通过细胞生长抑制率、彗星实验、流式细胞术、原位末端标记法(TUNEL)和Bcl-2、Bax蛋白表达来检测LBP对人前列腺癌PC-3细胞的影响;致瘤性实验检测LBP对人前列腺癌PC-3细胞致瘤力的影响。结果LBP能抑制人前列腺癌PC-3细胞的生长;可致PC-3细胞DNA链断裂;能诱导PC-3细胞凋亡;使Bcl-2/Bax蛋白比值显著下降;LBP干预组肿瘤体积增长缓慢,肿瘤体积和重量均明显小于和轻于人前列腺癌裸鼠移植模型组。结论LBP对抗人前列腺癌PC-3细胞和肿瘤生长抑制作用的机制,可能与其损伤人前列腺癌PC-3细胞DNA链、诱导细胞凋亡和调控凋亡相关基因表达有关。     

DNA依赖蛋白激酶抑制剂对1,4-苯醌诱导的非p53依赖的HL60细胞凋亡的影响

目的 探讨DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)抑制剂NU7026和渥曼青霉素(Wortmannin)对1,4-苯醌(1,4-BQ)诱导的人早幼粒白血病细胞(HL60)细胞凋亡的影响.方法 HL60细胞分为染毒组(0、5、10、25和50μmol/L1,4-BQ染毒24 h)和NU7026 、Wortmannin预处理组(10μmol/L NU7026、25μmol/L Wortmannin分别预处理1h后以0、5、10、25和50 μmol/L 1,4-BQ染毒24 h),用流式细胞仪Annexin V/PI双染法和DNA Ladder法分析检测细胞凋亡水平.将HL60细胞分为空白对照组、NU7026处理组(10 μmol/L)、Wortmannin处理组(25 μmol/L)、1,4-BQ染毒组(10 μmol/L)、NU7026+1,4-BQ组(10μmol/L NU7026预处理1h,以10 μmol/L 1,4-BQ染毒24 h),25 μmol/L Wortmannin+1,4-BQ组(25μmol/L Wortmannin预处理1h,以10 μmol/L 1,4-BQ染毒24 h),用real-time PCR法检测Bax mRNA基因表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HL60细胞的p53蛋白表达.结果 流式细胞仪Annexin V/PI双染法结果显示,NU7026+10 μmol/L 1,4-BQ处理组细胞凋亡率为17.6％±1.19％,Wortmannin+ 10μmol/L 1,4-BQ处理组细胞凋亡率为15.2％±1.22％,两组细胞凋亡率均高于10 μmol/L 1,4-BQ染毒组(6.3％±1.04％);NU7026+25tμmol/L1,4-BQ处理组细胞凋亡率为46.2％±3.55％,Wortmannin+25 μmol/L1,4-BQ处理组细胞凋亡率为26.9％±2.62％,两组细胞凋亡率均明显高于25 μmol/L 1,4-BQ染毒组(14.1％±1.54％);NU7026+50 μmol/L1,4-BQ处理组细胞凋亡率为61.8％±1.78％,明显高于50 μmol/L1,4-BQ染毒组(35.9％±4.51％),以上各组的差异均有统计学意义(P＜0.05).DNA Ladder法结果与流式细胞仪检测数据基本一致.与NU7026组和1,4-BQ染毒组比较,NU7026+1,4-BQ组Bax mRNA表达水平升高;与Wortmannin组和1,4-BQ组比较,Wortmannin+1,4-BQ组Bax mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测HL60细胞不表达p53蛋白.结论 DNA-PK抑制剂NU7026和Wortmannin促进1,4-BQ诱导的非p53依赖的HL60细胞凋亡.     

枸杞多糖对人食管癌细胞Eca-109的抑制作用及凋亡的研究

目的研究枸杞多糖(LBP)诱导人食管癌细胞Eca-109的凋亡作用及其作用机制。方法体外培养的人食管癌细胞Eca-109,细胞经不同剂量LBP处理后,采用MTT法测定细胞的增殖情况,流式细胞仪分析LBP对Eca-109细胞周期和凋亡的影响,用RT-PCR技术检测Eca-109细胞Survivin mRNA的表达。结果 LBP可明显抑制人食管癌细胞Eca-109的生长,并能诱导Eca-109细胞凋亡,凋亡率(%)分别为6.20±0.62、12.80±0.47和18.10±0.70,与对照组(0.78±0.91)%比较,差异有统计学意义(P0.01);各剂量药物处理组的肿瘤细胞SurVivin mRNA表达水平均明显降低(P0.01)。结论 LBP可抑制Eca-109细胞增殖,诱导细胞凋亡,该作用可能与下调细胞Survivin表达有关。     

正常皮肤表皮HLA-DR+ DC的免疫定性

目的　探讨正常皮肤表皮 HL A - DR+ 树突状细胞 （HL A - DR+ dendritic cell,HL A- DR+DC）的免疫表达特点。方法　应用免疫组化 SABC法对 2例正常人上肢皮肤 HL A - DR+ DC进行定性研究 ,连续切片观察 HL A- DR+ DC复合表达 CD1a、S- 10 0、F a、Som atostatin的情况。结果　表皮中 HL A - DR+ DC数量约为 8个 / mm2 ,这种细胞不表达 F a和 Somatostatin,部分表达CD1a和 S- 10 0。结论　 HL A- DR可表达于多数活性细胞 ,但表皮中 HL A - DR+ DC的免疫表达特点不同于 L C和 DDC,可能是表皮 DC的亚型之一     

表没食子儿茶素没食子酸酯体外诱导HL-60细胞凋亡

目的 为研发天然抗白血病新药，研究茶多酚主要活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体外诱导细胞凋亡的作用。方法 采用体视显微镜、DNA凝胶电泳及透射电镜技术，观察EGCG对体外诱导人急性早幼粒白血病细胞(HL-60)凋亡的影响及其诱导凋亡的最佳作用时间和最佳作用浓度。结果 发现EGCG实验组中，HL—60细胞生长被显著抑制，DNA凝胶电泳中可见DNA条带，其细胞超微结构明显改变。当250ug／m1 EGCG作用细胞6h时，其诱导细胞凋亡的作用最明显。结论 EGCG可体外诱导HL-60细胞凋亡．可能是抗白血病的侯选药。     

蟾酥作用后HL-60细胞基因表达谱变化的研究

目的研究蟾酥作用后HL-60细胞基因表达谱的变化，为蟾酥诱导HL-60细胞凋亡的可能机制提供依据。方法采用细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡；应用DNA芯片技术检测蟾酥作用前后HL-60细胞基因表达谱的变化。结果1％(v／v)的蟾酥可明显诱导HL-60细胞凋亡。细胞凋亡发生前，在检测的1152个基因中共有9个基因表达改变，其中8个基因上调，1个基因下调。结论在蟾酥诱导HL-60细胞发生凋亡过程中有多个基因参与，BCL-2下调以及IL-8上调与凋亡的发生关系密切。     

Proteomic study of granulocytic differentiation induced by apigenin 7-glucoside in human promyelocytic leukemia HL-60 cells

Background

Nutritional factors is one of the most important regulators in the progression of cancer. Some dietary elements promote the growth of cancer but others, such as plant-derived compounds, may reverse this process.

Purpose

We tried to investigate yet another approach of cancer prevention through cancer cell differentiation, using a common non-mutagenic flavonoid apigenin 7-glucoside.

Methods

HL-60 cells were treated with or without apigenin 7-glucoside. Cell proliferation was measured by MTT assay, and the cell cycle distribution was estimated by propidium iodide staining of DNA. To determine cellular differentiation, cell surface differentiation markers CD11b and CD14 were used. Two-dimensional gel electrophoresis was then performed to identify proteins that may be important in HL-60 cell differentiation following apigenin 7-glucoside treatment.

Results

Apigenin 7-glucoside inhibited HL-60 cell growth, dose- and time-dependently, but did not cause apoptosis. The distribution of cells at different stages in the cell cycle indicated an accumulation of treated cells in G₂/M phase. Moreover, apigenin 7-glucoside induced granulocytic differentiation of HL-60 cells. Ten proteins that might play essential role in granulocytic differentiation were identified by proteomics.

Conclusions

A complete understanding of the preventive effects of plant-based diet on cancer depends on the mechanisms of action of different plant components on processes. We hope these findings may contribute to the understandings of the different approaches for chemoprevention of cancer.     

ω-3PUFA及其诱导的外源性跨膜型TNFα对肿瘤细胞生长的影响

目的:探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)及其诱导的外源性跨膜型TNFα对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:将ω-3PUFA可调控的跨膜型TNFα真核表达载体转导入HL-60和MCF-7细胞,免疫荧光细胞化学方法检测ω-3PUFA对转染细胞外源基因表达的调控,生长曲线、流式细胞和DNA梯形带分析检测ω-3PUFA对转染细胞增殖能力和凋亡的影响。结果:在6.0×10-5mol/Lω-3PUFA诱导下转染细胞外源性跨膜型TNFα表达增加。HL-60和MCF-7细胞经6.0×10-5mol/Lω-3PUFA处理后增殖能力减弱,但只有HL-60细胞周期阻滞于G0/G1期及形成DNA梯形带。经ω-3PUFA处理后,以上变化在HL-60和MCF-7转染细胞中均更为显著。结论:ω-3PUFA诱导的外源性跨膜型TNFα基因产物可以增强ω-3多不饱和脂肪酸的抗肿瘤能力,而诱导细胞凋亡可能是其中重要机制之一。     

^147Pm诱发人白血病细胞凋亡的电镜形态及DNA凝胶电泳研究

研究了受荧光涂料激发能源１４７Ｐｍ 辐照人白血病ＨＬ－ ６０ 细胞所诱发的细胞凋亡。实验中估算了１４７Ｐｍ 在不同阶段培养细胞中的辐射累积吸收剂量。通过透射电镜的形态观察,发现当ＨＬ－６０ 细胞在受１４７Ｐｍ 辐照时,可诱发明显的核断裂、核边聚,以及呈现膜包裹着的凋亡小体形成为特征的细胞凋亡。进而抽提了ＨＬ－ ６０ 细胞的ＤＮＡ,进行琼脂糖凝胶电泳观察,显示出阶梯状条带形成的细胞凋亡特征。从而提示了１４７Ｐｍ 辐照可导致人白血病ＨＬ－ ６０ 细胞凋亡。     

Induction of apoptosis by Antrodia camphorata in human premyelocytic leukemia HL-60 cells

Antrodia camphorata (A. camphorata) is well known in Taiwan as a traditional Chinese medicine, and it has been shown to exhibit antioxidant effects. In this study, the ability of A. camphorata to induce apoptosis was studied in cultured human premyelocytic leukemia HL-60 cells. Treatment of the HL-60 cells with a variety of concentrations of the fermented culture broth of A. camphorata (25-150 microg/ml) resulted in dose- and time-dependent sequences of events marked by apoptosis, as shown by loss of cell viability, chromatin condensation, and internucleosomal DNA fragmentation. Furthermore, apoptosis in the HL-60 cells was accompanied by the release of cytochrome c, activation of caspase-3, and specific proteolytic cleavage of poly (ADP-ribose) polymerase (PARP). This increase in A. camphorata-induced apoptosis was also associated with a reduction in the levels of Bcl-2, a potent cell-death inhibitor, and an increase in those of the Bax protein, which heterodimerizes with and thereby inhibits Bcl-2. The data suggest that A. camphorata exerts antiproliferative action and growth inhibition on HL-60 cells through apoptosis induction and that it may have anticancer properties valuable for application in drug products.     

枸杞多糖对人单核细胞细胞因子表达的影响

目的 :　探讨枸杞多糖 LBP- X对人外周血单核细胞 (PBMC)白细胞介素 - 2 (IL- 2 )和肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)基因表达的影响。方法 :　采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)检测IL- 2和 TNF- α基因表达的水平。结果 :　在加入 5～ 40 mg/L LBP- X培养适当时间后 ,LBP- X可剂量依赖性地提高人 PBMC、IL- 2和 TNF- α基因表达水平。结论 :　 LBP- X可通过调节 IL- 2和TNF- α基因的表达而增强免疫功能。     

A comparative study of proapoptotic potential of cyano analogues of boswellic acid and 11-keto-boswellic acid

Semi-synthetic analogues of β-boswellic acid (BA) and 11-keto-β-boswellic acid (KBA) were comparatively evaluated for in vitro cytotoxicity against human myeloid leukaemia (HL-60) and human cervical carcinoma (HeLa) cells. 2-Cyano analogues of both the triterpenes were observed to have significant cytotoxicity against both the cells, displaying cytotoxicity in HL-60 cells at low concentrations. Further investigations suggested the proapoptotic potential associated with the two molecules to induce cytotoxicity in HL-60 cells, where one of them showed early proapoptotic effect as evidenced by several biological end-points of the apoptosis such as annexinV binding, DNA fragmentation and increase in sub-G0 DNA fraction and apoptotic bodies formation (Hoechst 33258 staining and SEM studies).     

沙棘汁对细胞免疫功能及抑瘤作用的影响

沙棘汁经口投予昆明种小鼠连续7天后,脾细胞对白细胞介素-2(IL-2)的反应性和IL-2的分泌均明显增强(P<0.01),并可明显提高NK细胞活性(P<0.05)。沙棘汁对S_(180)腹水肉瘤的增殖有一定抑制作用,并对NS-1,HL-60,YAC-1肿瘤细胞DNA具有明显的抑制作用(P<0.05)。     

The inhibitory effect of dibutyryl cyclic AMP on docosahexaenoic acid-induced apoptosis in HL-60 cells through activation of the phosphatidylinositol-3 kinase pathway

Objective Docosahexaenoic acid (DHA) is known as a chemopreventive substance for cancers. Previously we reported that DHA induces apoptosis in HL-60 cells. The aim of this study was to clarify the role of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3-kinase)/Akt signaling during DHA-induced apoptosis in HL-60 cells. Methods The inhibitory effects of dibutyryl cAMP (db-cAMP) or LY294002 (a specific inhibitor of the PI3-kinase/Akt pathway) on DHA-induced apoptosis in HL-60 cells were evaluated by the appearance of apoptosis, and from the activities of caspases (3 and 8), the phospholylation of Akt, and cleavage of Bid using DNA indexes, emzymatic measurement of fragmented substrates, and Western blotting, respectively. Results The pre-incubation of db-cAMP reduced the activation of caspasses (3 and 8) during the occurrence of DHA-induced apoptosis in HL-60. However, the inhibition of PI3-kinase/Akt signaling by LY294002 resulted in recovery of the caspases’ activities, appearance of apoptotic cells, and cleavage of the Bid molecule when LY294002 was co-treated with db-cAMP before the occurrence of DHA-induced apoptosis in HL-60. It was also confirmed that LY294002 strongly inhibited phospholylation of Akt during db-cAMP induced-reduction of DHA-induced apoptosis in HL-60. Conclusion We demonstrated that DHA-induced apoptosis was sensitive to the modulation of PI3-kinase activity by treatment with db-cAMP or LY294002. These results may provide new insights into the mechanisms of the anti-cancer activity of DHA.