半边旗5F对瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的通过对天然药物半边旗5F对瘢痕成纤维细胞凋亡作用的研究,以期探寻新的治疗病理性瘢痕的有效药物。方法以四甲基偶氮唑(MTT)法、流式细胞术和原位末端标记技术检测半边旗5F对成纤维细胞增殖和凋亡的影响。结果半边旗5F对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,且呈现浓度和时间依赖性。采用流式细胞术和TUNEL法检测凋亡指数,均呈剂量依赖性增高(P<0.05)。结论半边旗5F对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,并且能够诱导其发生凋亡,为寻找有效治疗增生性瘢痕的药物进行了新的尝试。     

半边旗提取物5F诱导HepG2细胞凋亡与p53活化及血管内皮生长因子抑制有关

目的 观察半边旗提取物 Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid (5F) 对人肝癌细胞 HepG2 增殖的影响,并探讨 p53、血管内皮生长因子 (VEGF) 及 Caspase3 在 5F 诱导的 HepG2 细胞凋亡中的作用。方法 采用 MTT 分析检测 5F 对 HepG2 细胞增殖的影响,并通过细胞凋亡检测 ELISA 试剂盒分析经 5F 处理的 HepG2 细胞胞浆核小体片段,以确定5F能否诱导细胞凋亡,采用 Hoechst/PI 分析鉴定凋亡细胞核形态。通过免疫印迹 (Western blotting)分析测定 p53 及 VEGF 蛋白表达水平,并通过 Caspases-3 分光光度法检测试剂盒检测 Caspase-3 活性。结果 通过细胞活性分析证实,5F 对 HepG2 的细胞毒作用随着 5F 质量浓度的升高而增强。5F 诱导 HepG2 产生胞浆核小体片段,并且该诱导作用具有剂量依赖性。5F 处理后,凋亡变化,如染色质浓缩,被 Hoechst/PI 染色所确定。5F 处理后 HepG2 细胞核内 p53 表达水平显著提高,而胞浆 VEGF 表达水平却下降,同时,Caspase-3 活性通过浓度依赖方式增强。结论 5F 所诱导的 HepG2 细胞凋亡与 p53 及 Caspase3 活化、VEGF负调控有关。5F 可能具有抗癌尤其是抗肝细胞癌价值。     

半边旗中二萜类化合物5F诱导胰腺癌细胞凋亡机制的探讨

目的:观察研究半边旗中二萜类化含物5F(11-羟基-15-氧-16-烯-ent贝壳杉烷-19酸)诱导人胰腺痛细胞株PC-3凋亡的效果及其机制.方法:在体外培养的胰腺癌细胞株PC-3中加入8.875umol/L,37.5umol/L,142umol/L浓度的5F孵育24h,RT-PCR分析各组细胞中mRNA-PUMA表达,MTT检测细胞相对存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡.利用Lipofectamine<'TM>2000将人类SiRNA-PUMA转染导入胰腺癌细胞PC-3中抑制PUMA的表达后,观察转染96h后的细胞株PC-3在上述浓度的5F的作用下各组细胞中mRNA-PUMA的表达、细胞凋亡以及细胞生长的变化结果:在5F作用下,细胞mlLNA-PUMA表达提高,细胞存活率随着药物浓度的提高明显降低,细胞凋亡率随着药物浓度的提高而明显提高,且呈量效关系:转染siRNA-PUMA后的细胞在5F作用下,细胞中mRNA-PbMA未见明显表达,细胞存活率和凋亡率与对照组比无显著性改变.结论:5F可能通过上调PUMA基因表达而促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长.     

半边旗中二萜类化合物5F诱导胰腺癌细胞凋亡机制的探讨

目的 观察研究半边旗中二萜类化合物5F(1la-羟基-15-氧-16-烯-ent贝壳杉烷-19酸)诱导人胰腺癌细胞株PC-3 凋亡的效果及其机制.方法 在体外培养的胰腺癌细胞株PC-3中加入8.875umol/L,37.5umol/L,142umol/L浓度的5F孵育24h,RT-PCR分析各组细胞中mRNA-PUMA表达,MTT检测细胞相对存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡.利用Lipofectamine.2000将人类siRNA-PUMA转染导入胰腺癌细胞PC-3中抑制PUMA的表达后,观察转染96h后的细胞株PC-3在上述浓度的5F的作用下各组细胞中mRNA-PUMA的表达、细胞凋亡以及细胞生长的变化.结果 在5F作用下,细胞mRNA-PUMA表达提高,细胞存活率随着药物浓度的提高明显降低,细胞凋亡率随着药物浓度的提高而明显提高,且呈量效关系;转染siRNA-PUMA后的细胞在5F作用下,细胞中mRNA-PUMA未见明显表达,细胞存活率和凋亡率与对照组比无显著性改变.结论 5F可能通过上调PUMA基因表达而促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长.     

半边旗提取物5F体外抑菌实验

目的：探讨半边旗提取物5F体外抗菌药效。方法：采用纸片扩散法,通过观察药物对实验菌种的抑菌圈大小,来判断药物的抗茵效果。结果：5F对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均有抑制作用。结论：半边旗提取物5F在体外能抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌生长,本研究为5F的抗菌效用提供了实验依据。     

半边旗5F对人病理性瘢痕动物模型生物性状的影响

目的 观察5F对人病理性瘢痕裸鼠模型瘢痕组织生物性状的影响.方法 以人病理性瘢痕移植于裸鼠建立动物模型,分别用不同浓度5F作用于动物模型,观察其形态学、组织学、瘢痕组织中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量的改变.结果 5F能使动物模型瘢痕体积缩小,组织结构向普通瘢痕转化,降低瘢痕中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量.结论 5F能明显抑制瘢痕动物模型组织的生长,在病理性瘢痕的治疗中可能有潜在的应用价值.     

半边旗二萜类化合物5F对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及Fas蛋白表达的影响

目的　观察中药半边旗二萜类化合物 5F对瘢痕疙瘩成纤维细胞 (keloidfibrolast,KFB)凋亡及对Fas蛋白表达的影响。方法　体外培养KFB ,①收集以浓度为 32 μg/ml的 5F作用 12、2 4、36、4 8h后的细胞 ;②收集分别用浓度为 8、32、6 4、 12 8μg/ml 5F作用 4 8h后的细胞 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测成纤维细胞的凋亡率及Fas蛋白的表达。结果　① 5F作用 12～ 4 8h成纤维细胞出现明显的凋亡 (P <0 0 1) ,对照组成纤维细胞未见明显凋亡 ;②随着药物浓度的增大Fas蛋白表达也增高 (P <0 0 1)。结论　 5F可以诱导KFB细胞凋亡 ,促进Fas蛋白的表达。     

半边旗提取物5F对人结肠腺癌细胞株SW620埃兹蛋白表达及活性影响

目的 观察半边旗提取物5F对人结肠腺癌细胞株SW620的埃兹(Ezrin)蛋白表达及活性影响.方法 采用四氮甲唑蓝[3-(4,5-dimethyhhiazol-2-yl)-2,5-diphenyhetrazolium bromide,MTT]检测5F对SW620细胞的增殖抑制作用,采用逆转录-聚合酶链反应(revers...     

半边旗有效成分5 F对腹膜炎小鼠血清NO和细胞因子的影响

目的：研究半边旗有效成分贝壳杉烷型二萜类化合物5F对腹膜炎小鼠血清一氧化氮（NO）和细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α、MCP-1的影响。方法预先给予50和100 mg·kg-15F溶液3 d后,腹腔注射50 mg·kg-1酵母多糖建立腹膜炎模型,Griess法测一氧化氮含量,流式细胞术检测IL-6、IL-10、TNF-α和MCP-1的水平。结果与模型组比较,5F可以降低腹膜炎小鼠血清一氧化氮水平（ P﹤0.05）,减少IL-6、IL-10、TNF-α和MCP-1含量（P﹤0.05或P﹤0.01）。结论5F可以有效减少酵母多糖诱导的腹膜炎小鼠血清一氧化氮、TNF-α、IL-6、IL-10和MCP-1含量。     

PsL5F诱导人未分化甲状腺癌FRO细胞凋亡的机制研究

目的 研究半边旗5F(PsL5F)对人未分化甲状腺癌FRO细胞的凋亡诱导及其分子机制.方法 用PsL5F处理FRO细胞,MTT法测定其对FRO细胞的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI标记法与流式细胞术联用检测PsL5F对FRO细胞的凋亡诱导;用CM-H2DCFDA和DiOD6(3)标记在流式细胞仪上分析PsL5F对FRO细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)的影响;Western blot方法分析Bax、Cyto C、凋亡诱导因子(AIF)及截断PARP的水平变化;Caspase-3活性用Caspase-3比色分析试剂盒测定.结果 PsL5F对FRO细胞具有显著的生长抑制作用,且呈现剂量和时间依赖性;PsL5F可诱导FRO细胞凋亡,表现出在100 mg/L浓度下,磷脂酰丝氨酸(PS)外翻细胞的比例呈时间依赖性逐渐增加;用100 mg/L PsL5F处理FRO细胞,在1 h时细胞内ROS水平即明显升高,ROS抑制剂还原型谷胱甘肽(GSH)可抑制PsL5F诱导的细胞内ROS水平升高和细胞凋亡;100 mg/L PsL5F处理可使FRO细胞MMP逐渐降低,GSH可抑制PsL5F诱导的MMP降低;同时,线粒体膜蛋白组分中Bax和细胞液蛋白组分中Cyto C、AIF逐渐增加;PsL5F处理使FRO细胞Caspase-3活性逐渐升高及其作用底物PARP断裂.结论 PsL5F对人未分化甲状腺癌FRO细胞的生长抑制作用是通过诱导细胞凋亡进行的.其中,细胞内ROS水平升高起到了非常重要的第二信使作用,线粒体是其作用的重要靶点.细胞凋亡是通过Bax转位到线粒体膜、引起MMP降低、Cyto C和AIF释放到细胞液、激活Caspases级联反应而进行的.     

半边旗提取物5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响及作用机制的实验研究

目的:探讨半边旗提取物5F(简称5F)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响及其作用机制.方法:以MTT法检测5F对HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO-8910PM细胞周期的影响;Western blot分析NF-κB(P65)、焦点粘附激酶(focal adhesionkinase,FAK)的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平.结果:不同浓度的5F分别处理细胞24 h后,对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;5F可使NF-κB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并下调FAK酪氨酸磷酸化水平.结论:5F通过影响HO-8910PM细胞周期、下调NF-κB(P65)表达及促进FAK的表达来抑制细胞生长.     

半边旗提取物5F对肝细胞癌BEL-7402生长抑制作用及增殖细胞核抗原表达的影响

目的 研究半边旗提取物5F对肝细胞癌BEL-7402细胞生长的抑制作用.方法 MTT法检测5F对BEL-7402细胞的生长抑制作用;用Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡:流式细胞仪检测5F对细胞周期的影响;免疫细胞化学法检测5F对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 5F抑制BEL-7402细胞的生长,其效果与5F的浓度和作用时间相关,24、48和72h的IC50分别为60.33、21.32和11.22 mg/L;荧光双染色法显示经5F作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体;细胞被阻滞在G2/M,PCNA阳性表达率降低.结论 5F在体外能有效地抑制BEL-7402细胞的生长,其诱导凋亡作用可能与下调增殖细胞核抗原(PCNA)表达有关.     

5F对胰腺癌细胞生长的影响及机制

目的:观察研究半边旗中二萜类化合物5F(1la-羟基-15-氧-16-烯-ent贝壳杉烷-19酸)诱导人胰腺癌细胞株AsPC-1凋亡的效果及其机制。方法:用脂质体转染法将PUMA/siRNA导入AsPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆。将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度8.875,37.5,142μmol/L浓度的5F中作用72h。RT-PCR检测不同组细胞经5F作用24h后的PUMA表达;MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Ho-echst33258和PI双染色染色了解细胞凋亡的变化。结果:5F促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当PUMA表达抑制后,受5F作用的细胞出现PUMA表达的降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞的明显增殖。结论:5F促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制其生长,其诱导凋亡与上调PUMA有关。     

PsL5F诱导人未分化甲状腺癌FRO细胞凋亡与细胞内ROS水平对JNK信号通路的影响

目的 研究半边旗5F(Pteris semipnnata L 5F,PsL5F)对人未分化甲状腺癌FRO细胞的凋亡诱导及其与细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平升高和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)激活的关系.方法 MTT法测定PsL5F对FRO细胞的生长抑制作用;流式细胞术与Annexin V-FITC/PI标记法联用检测PsL5F对FRO细胞的凋亡诱导;用ROS特异反应试剂CM-H2DCFDA标记在流式细胞仪上分析PsL5F对FRO细胞内ROS水平的影响;Western blot法分析PsL5F处理对FRO细胞ERK、JNK和p38MAPK磷酸化水平的影响.结果 PsL5F对FRO细胞具有显著的生长抑制作用,且呈剂量-时间依赖性;在PsL5F 100 mg/L浓度下,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻细胞的比例呈时间依赖性逐渐增加;用PsL5F处理FRO细胞,在1 h时细胞内ROS水平就表现出明显的升高,GSH可抑制PsL5F诱导的细胞内ROS水平升高和细胞凋亡到对照水平;PsL5F处理可使FRO细胞ERK、JNK和p38MAPK磷酸化而被激活,JNK抑制剂Dicumarol可减轻PsL5F诱导的细胞凋亡,ERK和p38MAPK的抑制剂PD098059和SB203580加剧PsL5F诱导的细胞凋亡.结论 PsL5F对FRO细胞的生长抑制作用是通过诱导细胞凋亡进行的;细胞内ROS水平升高起到了非常重要的作用;PsL5F处理可导致FRO细胞MAPKs信号通路激活,其中JNK信号通路是促凋亡信号,而ERK和p38MAPK作为生存信号被激活来对抗PsL5F诱导的细胞凋亡.     

半边旗提取物5F对乳癌细胞MDA-MB-231培养物诱导的HUVEC血管生成潜能的影响

目的:研究半边旗提取物5F对乳癌细胞MDA-MB-231培养物(乳癌细胞培养物)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成潜能的影响及其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度5F对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC增殖的抑制作用;Transwell小室法检测不同浓度5F对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC穿膜能力和趋化性运动能力的影响;细胞-基质黏附实验检测5F对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC黏附能力的影响;RT-PCR、Western blot法检测不同浓度5F对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC KDR、Flt-1 mRNA和蛋白表达的影响。结果:不同浓度5F处理6、24 h后对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC的增殖有一定程度的抑制作用(F组间=64.852,F时间=131.393,P<0.001)。20、40、80μmol/L 5F可抑制乳癌细胞培养物诱导的HUVEC体外穿膜能力、趋化性运动能力和黏附基质能力(F=48.206、147.613、22.081,P均<0.001)。不同浓度5F作用于乳癌细胞培养物诱导的HUVEC 24 h后,下调HUVEC KDR、Flt-1 mRNA和蛋白的表达(mRNA:F=86.381、79.175;蛋白:F=36.621、127.910,P均<0.001)。结论:5F抑制乳癌细胞培养物诱导的HUVEC体外增殖、穿膜能力、趋化性运动能力和黏附基质能力,其机制可能与下调细胞KDR mRNA和蛋白的表达水平有关。     

隐丹参酮对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制

目的探讨隐丹参酮(CPT)对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;Real Time RT-PCR法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21 mRNA表达的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21表达的变化。结果 CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901 24 h后,可明显抑制细胞生长,诱导细胞发生凋亡;在转录水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53 mRNA的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达;在翻译水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 CPT对人胃癌细胞SGC-7901具有诱导凋亡的作用,其机制可能与线粒体途径相关。     

苦参碱诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的 研究苦参碱对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法苦参碱处理人胃癌细胞株SGC-7901后，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应，显微镜下观察胃癌细胞形态变化，应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期和凋亡，用PCR-ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果不同浓度的苦参碱对SGC-7901有明显抑制作用，且呈时间依赖性及剂量依赖性，形态学观察也发现大量神经细胞的染色质凝聚，核碎裂，凋亡小体产生，细胞即出现明显的凋亡形态特征，FCM检测结果显示苦参碱作用后，G0／G1期细胞比例增高，S期、G2／M期细胞比例下降，苦参碱在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调，且随苦参碱浓度增大和时间延长，抑制作用逐渐增强。结论苦参碱对人胃癌细胞具有明显抑制作用，诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一。     

细胞凋亡与胃癌

过去通常认为 ,肿瘤是细胞原癌基因的激活和抑癌基因的失活 ,扰乱了细胞正常的增殖和分化 ,导致增殖过度分化异常所致。晚近 ,越来越多的研究证实 ,肿瘤的发生同时也是细胞凋亡的异常。胃癌同其他肿瘤一样 ,不仅有细胞过度增殖 ,同时也存在细胞的凋亡异常。细胞增殖过度和 (或 )细胞凋亡异常是胃癌发生的生物学基础。本文将就细胞凋亡在胃癌中的作用综述如下。1　细胞凋亡的概念细胞凋亡 (Apoptosis)是指在一定生理或病理条件下 ,由基因编程控制的细胞主动性死亡过程。这是人体清除损伤、衰老或不需要细胞的重要方式 ,对微环境没有或仅有极…     

半边旗抗肿瘤有效成分含量化的研究

目的探讨半边旗不同部位、不同采集季节其抗肿瘤有效成分含量的变化.方法用甲醇加热回流提取,反相高效液相色谱法定量分析.结果一年中8、9、10、11四个月份采集有效成分11α-羟基-15-氧-16烯-对映贝壳杉烷-19-酸(5F)含量较高,不同部位有效成分的含量差异很大,叶片含量最高,是根茎的二十倍以上.结论采集季节最好选在8～11月份;根茎有效成分含量低,应采收地上部分,保留根茎,以利于资源保护.