磷脂酰肌醇3激酶/Akt通路参与TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞间质转分化过程

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／Akt通路在转化生长因子β1（TGF-β1）体外诱导的人肾小管上皮细胞（HKC）间质转分化（EMT）过程中的作用及意义。方法：将HKC细胞株细胞分成正常对照组、TGF-β1组及TGF-β1＋PI3K特异性抑制剂Wortmannin组，选取不同时相，免疫印迹（Western blot）测定总．Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的变化；Akt磷酸化水平用磷酸化Akt和总Akt水平的比值表示。结果：正常体外培养的HKC有微量的p-Akt、α-SMA表达，加入10ng／ml TGF-β1刺激0．5h后p-Akt水平显著升高，1h升至顶峰后逐渐减弱；α-SMA在10ng／mlTGF-β1诱导48h后表达显著升高。同时加用Wortmannin 10nmol／L组p-Akt、α-SMA表达明显抑制。结论：PI3K／Akt信号系统参与TGF-β1介导的EMT过程，PI3K特异性抑制剂wo永mannin可有效抑制TGF-β1介导的HKC的EMT过程。     

欧前胡素对小鼠急性肺损伤的影响及其机制研究

目的 探讨欧前胡素对小鼠急性肺损伤的影响及其作用机制。方法 将32只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、欧前胡素30?mg/kg组、欧前胡素60?mg/kg组。用欧前胡素预处理,脂多糖诱导进行模型复制,7?h后收集小鼠肺组织。测量肺湿/干重比,采用苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠肺组织病理学改变,检测小鼠肺组织中髓过氧化物酶（MPO）活力及活性氧类（ROS）的水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）,Western blotting检测小鼠肺组织中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、核转录因子κB（NF-κB）p65及基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）蛋白表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组小鼠肺组织损伤评分、肺组织ROS水平及PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白磷酸化水平升高（P?<0.05）,TNF-α、IL-1β的释放及MMP-9蛋白表达水平升高（P?<0.05）;与模型组比较,欧前胡素组能够减轻肺组织损伤,降低肺损伤评分（P?<0.05）,降低小鼠肺组织中ROS水平及PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白磷酸化水平（P?<0.05）,降低TNF-α、IL-1β的释放及MMP-9蛋白表达水平（P?<0.05）;与欧前胡素30?mg/kg组比较,欧前胡素60?mg/kg组小鼠肺损伤评分、肺组织ROS水平、Akt及NF-κB p65蛋白磷酸化水平、TNF-α的释放及MMP-9蛋白表达水平降低（P?<0.05）,PI3K蛋白磷酸化水平及IL-1β的释放差异无统计学意义（P?>0.05）。结论 欧前胡素对脂多糖诱导的急性肺损伤有保护作用,其作用机制可能与脂多糖诱导的急性肺损伤中ROS被抑制,以及ROS介导的PI3K/Akt/NF-κB通路被抑制有关。     

NOX4/ROS/STAT3通路对肝星状细胞活化增殖的影响

目的 研究肝星状细胞活化及增殖过程中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)和信号转导与转录激活因子3(STAT3)表达的变化,并探讨NOX4抑制剂GKT137831是否可通过抑制NOX4,减少活性氧(ROS)的产生,抑制STAT3信号通路,抑制肝星状细胞活化与增殖。方法 将大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)分为4组：对照组、TGF-β1组、TGF-β1+GKT137831组、GKT137831组。DCFH-DA荧光探针法检测HSC-T6细胞内ROS水平,CCK-8法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR法检测NOX4、STAT3 mRNA的表达;细胞免疫荧光和蛋白印迹法检测NOX4、STAT3、p-STAT3及α-SMA蛋白的表达。结果 与对照组相比,TGF-β1组HSC-T6细胞中NOX4 mRNA和蛋白表达上调,细胞内ROS水平升高,p-STAT3蛋白表达增加,细胞活化增殖能力升高(P<0.05);给予GKT137831处理后,HSC-T6细胞中NOX4 mRNA和蛋白表达下调,细胞内ROS水平下降,STAT3蛋白磷酸化减少,细胞活化增殖能力下降(P<0.05)...     

GHRP-6对心衰模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt/Caspase-9信号通路调节作用

目的:观察GHRP-6对心力衰竭模型大鼠心脏功能的调节作用和其对PI3K/Akt/Caspase-9信号转导通路的影响。方法:建立GHRP-6对心力衰竭模型大鼠心肌细胞的保护模型,比较PI3K p110α、Akt p-Thr308和Akt p-Ser473在正常对照组、假手术组和模型组大鼠心肌细胞左心室后壁和室间隔心肌细胞内的表达。流式细胞术(FCM)检测模型组与正常对照组和假手术组大鼠心肌细胞的凋亡率。结果:在大鼠心肌细胞左心室后壁和室间隔心肌细胞内,模型组大鼠心肌细胞的PI3K p110α、Akt p-Thr308和Akt p-Ser473阳性表达量较正常对照组和假手术组显著降低(P<0.05);与正常对照组、假手术组和模型组大鼠心肌细胞的分别比较,GHRP-6治疗组大鼠心肌细胞的阳性表达量显著升高(P<0.05)。模型组大鼠心肌细胞的Caspase-9和Caspase-3阳性表达量较正常对照组和假手术组显著增高(P<0.05);与正常对照组、假手术组和模型组分别比较,GHRP-6治疗组阳性表达量显著降低(P<0.05)。FCM结果显示,模型组大鼠心肌细胞与正常对照组和假手术组比较,凋亡率显著升高(P<0.05);GHRP-6治疗组与模型组比较,凋亡率明显降低(P<0.05)。相关程度分析显示,PI3K p110α与Akt p-Thr308、p-Ser473蛋白阳性表达量均呈中度正相关;Akt p-Thr308、p-Ser473与Caspase-9蛋白阳性表达量均呈中度负相关;Caspase-9与Caspase-3蛋白阳性表达量呈高度正相关。结论:GHRP-6通过调控PI3K/Akt/Caspase-9/Caspase-3信号转导通路,抑制心力衰竭模型大鼠心肌细胞凋亡,是其实现心肌细胞保护作用机制之一。     

Wortmannin对表皮生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖及迁移的影响

目的:研究PI3K抑制剂Wortmannin对表皮生长因子(EGF)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移及磷酸化Akt蛋白表达的影响,旨在探讨EGF诱导的VSMCs增殖和迁移的信号通路。方法:以低血清培养的VSMCs作为对照,采用细胞计数、划痕损伤实验和WesternBlotting技术,观察Wortmannin对EGF诱导的VSMCs增殖、迁移及磷酸化Akt蛋白表达的影响。结果:干预后24h,EGF组VSMCs增殖、迁移较对照组明显增强,同时磷酸化Akt蛋白的表达平行增高。而Wortmannin则明显抑制了VSMCs的增殖、迁移和磷酸化Akt蛋白的表达。结论:PI3K/Akt信号通路参与了EGF诱导的VSMCs增殖和迁移。     

血管紧张素-（1-7）预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤

 【目的】探讨较大剂量血管紧张素-（1-7）预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其信号机制。【方法】48只SD大鼠随机分为4组，每组12只：缺血再灌注对照组、血管紧张素-（1-7）预处理组、血管紧张素-（1-7）预处理加磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）抑制剂Wortmannin处理组、Wortmannin处理对照组，观察较大剂量血管紧张素-（１-7）预处理对大鼠离体缺血再灌注心脏左心室收缩压、冠状动脉流量、肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶释放、心肌梗死范围以及心肌蛋白激酶B（Akt）、糖原合成酶激酶-313（GSK-3β）磷酸化的影响。【结果】与缺血再灌注对照组相比，血管紧张素-（1-7）预处理组心脏左心室收缩压、冠状动脉流量显著提高，冠状动脉循环流出液中肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶含量降低，心肌梗死范围减小，心肌磷酸化Akt（Ser473）、磷酸化GSK-3β（Ser9）水平增高，P13K抑制剂Wortmannin能够抑制血管紧张素-（1-7）预处理所致的Akt、GSK-3β磷酸化，但只能部分消除血管紧张素-（1-7）预处理的心脏保护效应。【结论】较大剂量血管紧张素-（1-7）预处理能够减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤，P13K／Akt／GSK-3β信号通路参与介导血管紧张素-（1-7）预处理的心脏保护作用。     

血管紧张素-（1-7）预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤

【目的】探讨较大剂量血管紧张素-（1-7）预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其信号机制。【方法】48只SD大鼠随机分为4组，每组12只：缺血再灌注对照组、血管紧张素-（1-7）预处理组、血管紧张素-（1-7）预处理加磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）抑制剂Wortmannin处理组、Wortmannin处理对照组，观察较大剂量血管紧张素-（１-7）预处理对大鼠离体缺血再灌注心脏左心室收缩压、冠状动脉流量、肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶释放、心肌梗死范围以及心肌蛋白激酶B（Akt）、糖原合成酶激酶-313（GSK-3β）磷酸化的影响。【结果】与缺血再灌注对照组相比，血管紧张素-（1-7）预处理组心脏左心室收缩压、冠状动脉流量显著提高，冠状动脉循环流出液中肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶含量降低，心肌梗死范围减小，心肌磷酸化Akt（Ser473）、磷酸化GSK-3β（Ser9）水平增高，P13K抑制剂Wortmannin能够抑制血管紧张素-（1-7）预处理所致的Akt、GSK-3β磷酸化，但只能部分消除血管紧张素-（1-7）预处理的心脏保护效应。【结论】较大剂量血管紧张素-（1-7）预处理能够减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤，P13K／Akt／GSK-3β信号通路参与介导血管紧张素-（1-7）预处理的心脏保护作用。     

中和白介素⁃17对博来霉素诱导的特发性肺纤维化及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的：研究中和白介素?17（interleukin?17,IL?17）对博来霉素（bleomycin,BLM）诱导特发性肺纤维化及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法：C57BL/6小鼠随机分为对照组、BLM组、中和抗体组和自噬抑制组。BLM组、中和抗体组和自噬抑制组利用BLM（5 U/kg）诱导特发性肺纤维化模型形成,对照组给予等量生理盐水。造模第1天起自噬抑制组小鼠腹腔注射3?甲基腺嘌呤（3?methyladenine,3?MA）,每周5次,连用4周,其他3组则注射等量的生理盐水。中和抗体组和自噬抑制组小鼠分别从造模后第3 d起,每隔3 d尾静脉注射抗鼠IL?17抗体,于28 d取材,采用Masson三色染色和羟脯氨酸（hydroxyproline,HYP）含量测定评价肺纤维化程度和胶原蛋白的表达变化,利用ELISA检测肺泡灌洗液中转化生长因子?β1（transform growth factor?β1,TGF?β1）的含量,Western blot分析LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin?1、p62、p?PI3K/PI3K、p?Akt/Akt和p?mTOR/mTOR的蛋白表达。结果：与BLM组相比,中和抗体组羟脯氨酸和TGF?β1含量显著下降（P < 0.01）,肺纤维化程度明显降低（P < 0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin?1表达明显上调（P < 0.01,P < 0.05）,p62表达减少（P < 0.05）,而p?PI3K/PI3K、p?Akt/Akt、p?mTOR/mTOR比值显著降低（P < 0.05）。结论：IL?17在肺纤维化中的作用与抑制细胞自噬有关。中和内源性IL?17,能显著改善BLM诱导的肺纤维化,降低TGF?β1产生,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,激活细胞自噬。     

丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素PI3K/Akt信号通路的调节作用及其机制

目的：观察丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中胰岛素受体（IR）、胰岛素受体底物1（IRS-1）、PI3K和Akt的调节作用,初步探讨丝胶降血糖的作用机制。方法：36只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和实验组,每组12只。模型组和实验组大鼠采用高脂高糖饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ,35 mg·kg^-1·d^-1,连续2 d）的方法制备2型糖尿病模型,以STZ注射结束后72 h的空腹血糖≥ 11.1 mmol·L^-1作为成模标准。模型建立成功后,实验组大鼠给予2.4·kg^-1·d^-1丝胶灌胃,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,连续用药35d。取各组大鼠血液标本,采用葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖;取各组大鼠肝组织,采用免疫组织化学法和Western blotting法检测各组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白的表达,采用过碘酸-Schiff染色法检测各组大鼠肝糖原含量。结果：模型组大鼠血糖水平明显高于正常组（P<0.05）,实验组大鼠血糖水平明显低于模型组（P<0.05）。正常组和实验组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白呈棕黄色和（或）棕褐色颗粒,小部分呈弥散状;模型组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达量明显减少,呈棕黄色和（或）棕褐色颗粒,其中IR、IRS-1和Akt蛋白主要位于肝细胞胞膜和胞质,PI3K蛋白主要位于肝细胞胞质。各组大鼠肝切片均可见肝糖原阳性染色的红色或紫红色颗粒,其中模型组大鼠肝糖原染色浅,面积较小。与正常组比较,模型组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达水平及肝糖原含量明显降低（P<0.05）;与模型组比较,实验组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达水平及肝糖原含量明显升高（P<0.05）。结论：丝胶可通过上调糖尿病大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt的表达以增强肝脏胰岛素PI3K/Akt信号通路的转导效应,从而起到降低血糖的作用。     

miR-92b与PI3K/Akt在糖尿病肾病中相关性的初步研究

目的 探讨miR-92b 与信号通路PI3K/Akt 在糖尿病肾病中的相关性。方法 选取8 周龄的C57BL/6 雄性小鼠12 只,随机分为正常对照组和糖尿病肾病组,利用枸橼酸钠建立糖尿病肾病小鼠模型;选取人肾小管上皮HK-2 细胞12 瓶,随机分为高糖组、低糖组和左旋葡萄糖组,用高糖刺激建立糖尿病肾病细胞模型。利用实时荧光定量PCR 检测小鼠肾脏组织和细胞中miR-92b 表达水平,Western blot 检测小鼠肾脏组织和细胞中Akt 和PAkt 的表达水平。结果 糖尿病肾病组和高糖组miR-92b 表达水平明显低于对照组（P<0.05）,而P-Akt/Akt 表达水平明显高于对照组（P＜0.05）。将信号通路PI3K/Akt 抑制剂LY294002 加入到高糖诱导的糖尿病肾病细胞模型中,信号通路PI3K/Akt 被抑制的同时,miR-92b 表达显著升高（P＜0.05）。结论 糖尿病肾病时,miR-92b 与PI3K/Akt 的表达呈负相关。     

片仔癀通过PI3K/Akt信号通路诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡

目的探讨片仔癀诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）途径的关系。方法采用不同浓度片仔癀（0.4，0.8，1.2mg/mL）作用U2OS细胞，采用MTT法检测片仔癀对U2OS细胞增殖的影响；Hoechst 333258染色观察细胞凋亡情况；Western blot检测PI3K调节亚基p85α（PI3K p85α）、磷酸化PI3K调节亚基p85α（p-PI3K p85α）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核多聚（ADP-核酶）聚合酶（PARP）、裂解PARP（Cleaved PARP）等PI3K/Akt途径相关蛋白的表达。结果片仔癀可明显抑制U2OS细胞的增殖，呈时间和浓度依赖性，诱导U2OS细胞凋亡；Western blot显示p-PI3K p85α、p-Akt蛋白表达明显下调，Cleaved PARP表达量增加，与空白对照组相比有明显差异（P<0.05）。结论片仔癀可通过抑制PI3K/Akt信号途径PI3K p85α、Akt磷酸化，促进PARP裂解，诱导骨肉瘤U2OS凋亡。     

PI3K/AKT信号通路在TGFβ11致人腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt通路在转化生长因子BI(TGFBl)体外诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)上皮-间质细胞转分化(EMT)过程中的作用.方法 从人腹膜组织中分离和培养人原代腹膜间皮细胞.观察TGFβ1 对人腹膜问皮细胞Akt磷酸化的影响,在不同时间点检测p-Akt的表达水平.采用免疫印迹方法检测应用PI3K特异性抑制剂Wortmannin对TGFβ1诱导后细胞内p-Akt、a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)和E-钙黏附蛋白(E-Cadherin)表达的影响.结果 10ng/mL TGFβ1刺激HPMC 0.5 h后P-Akt水平开始升高,1 h后达到顶峰,2 h后逐渐减弱.TGFβ1诱导HPMC 48 h后a-SMA表达显著升高,E-cadhetin表达显著下降;同时加用Wortmannin则p-Akt、a-SMA表达明显抑制.结论 PI3K/Akt信号系统参与TGF β 1介导的人腹膜间皮细胞EMT过程,提示对其通路的抑制可有效阻止TGFβ1介导的腹膜纤维化.     

PI3K/AKT信号通路在TGFβ1致人腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt通路在转化生长因子β1(TGFβ1)体外诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)上皮-间质细胞转分化(EMT)过程中的作用。方法从人腹膜组织中分离和培养人原代腹膜间皮细胞。观察TGFβ1对人腹膜间皮细胞Akt磷酸化的影响,在不同时间点检测p-Akt的表达水平。采用免疫印迹方法检测应用PI3K特异性抑制剂Wortmannin对TGFβ1诱导后细胞内p-Akt、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏附蛋白(E-Cadherin)表达的影响。结果10ng/mLTGFβ1刺激HPMC0.5h后p-Akt水平开始升高,1h后达到顶峰,2h后逐渐减弱。TGFβ1诱导HPMC48h后α-SMA表达显著升高,E-cadherin表达显著下降;同时加用Wortmannin则p-Akt、α-SMA表达明显抑制。结论PI3K/Akt信号系统参与TGFβ1介导的人腹膜间皮细胞EMT过程,提示对其通路的抑制可有效阻止TGFβ1介导的腹膜纤维化。     

PI3K/AKT/mTOR途径在慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌萎缩中的作用

目的研究PI3K/AKT/mTOR信号通路在慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）大鼠骨骼肌萎缩中的作用。方法采用单纯熏香烟法复制慢阻肺大鼠动物模型。采用Western blot技术检测慢阻肺大鼠趾长伸肌中PI3K/AKT/mTOR信号通路中PI3K、总的及磷酸化的mTOR（t-mTOR,p-mTOR）、总的及磷酸化的GSK-3β（t-GSK-3β,p-GSK-3β）、总的及磷酸化的4E-BP1（t-4E-BP1,p-4E-BP1）、总的及磷酸化的p70S6K1（t-p70S6K1,p-p70S6K1）蛋白表达变化。结果 Western blot分析结果显示,大鼠趾长伸肌组织中PI3K的蛋白表达在两组间差异不显著（P〉0.05）;t-mTOR、p-mTOR、t-GSK-3β和p-GSK-3β的蛋白表达慢阻肺组显著高于对照组（P〈0.05,其中p-GSK-3β两组对照P〈0.01）;t-4E-BP1和t-p70S6K1的蛋白表达在两组间差异不显著（P〉0.05）,p-4E-BP1和p-p70S6K1的蛋白表达慢阻肺组显著高于对照组（P〈0.05）。结论慢阻肺大鼠趾长伸肌组织内PI3K/AKT/mTOR信号通路被激活,可能是骨骼肌萎缩的代偿机制之一。     

PI3K/Akt信号通路相关蛋白在胃癌细胞中的表达及其意义

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3–kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB/Akt）信号通路中相关蛋白磷酸化PI3K（phosphorylated phosphoinositide 3–kinase,p–PI3K）和磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p–Akt）在胃癌组织中的表达与胃癌相关病理参数之间的关系。方法 收集2017年1月至2018年12月南昌大学第二附属医院经胃镜病理确诊为胃癌并行手术切除患者的胃癌标本（n=100）和对应癌旁组织（n=100）,以及正常胃黏膜组织（n=48）,比较3种组织中p–PI3K和p–Akt的表达情况,探讨PI3K/Akt信号通路相关蛋白与胃癌相关病理参数之间的关系。结果 p–PI3K在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜中的阳性表达率分别为55.0%、23.0%及14.6%;p–Akt在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜中的阳性表达率分别为29.0%、13.0%及8.3%,胃癌组织中p–PI3K、p–Akt的表达率均显著高于癌旁组织及正常胃黏膜,差异均有统计学意义（P<0.05）。胃癌组织中p–PI3K、p–Akt的表达与患者的年龄、性别无明显相关性,差异无统计学意义（P>0.05）。肿瘤病理分期为Ⅲ～Ⅳ期、低分化、浸润深度穿透浆膜及淋巴结转移的患者胃癌组织中p–PI3K、p–Akt的阳性率更高（P<0.05）。结论 p–PI3K和p–Akt在胃癌组织中高表达,且与胃癌的相关病理参数存在显著相关性,PI3K/Akt信号通路可能参与了胃癌的发生与发展。     

膀胱癌PI3K/Akt/mTOR信号通路与免疫抑制性细胞的相关分子机制研究

目的探讨膀胱癌磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路与CD4~+CD25~+Treg细胞及其免疫功能的相关分子机制。方法通过N-甲基亚硝基脲(MNU)经尿道膀胱灌注法建立SD大鼠膀胱癌模型。PI3K抑制剂Wortmannin处理膀胱癌大鼠。Western-blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达;流式细胞仪检测大鼠组胸腺、脾脏CD4~+CD25~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分比分;Real time-PCR检测大鼠血浆中白细胞介素-2(IL-2)和IL-10 mRNA表达。结果相对于生理盐水对照组,Wortmannin组中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和转化生长因子-β(TGF-β)的表达明显降低(P均0.05),而且CD4~+CD25~+Treg细胞数量显著降低(P0.05),同时IL-10 mRNA表达水平明显下降(P0.05),而IL-2表达水平明显上升(P0.05)。结论膀胱癌中PI3K/Akt/mTOR信号通路调控CD4~+CD25~+Treg细胞的增殖和分泌功能。     

PI3K/Akt信号通路在增生性瘢痕中的调控作用

目的 探讨PI3K/AKT信号通路在增生性瘢痕中的调控作用。方法 构建兔耳增生性瘢痕模型,并随机分为4组：正常兔耳皮肤组（A）、瘢痕模型组（B）、DMSO刺激模型组（C）、PI3K特异性抑制剂（LY294002）刺激模型组（D）。通过组织病理学观察兔耳瘢痕的形态学变化;免疫组化和Western blot检测pAkt[S473]和p-Akt[T308]的表达量;免疫荧光双染色评估p-Akt[S473]和p-Akt[T308]的共定位情况;以及TUNEL评估皮肤组织中成纤维细胞的凋亡水平。结果 D组中瘢痕厚度及成纤维细胞数明显高于B和C组。免疫组化和Western blot检测结果表明,p-Akt[T308]和p-Akt[S473]在B组中的表达量明显高于A组,但在D组中显著低于C组。免疫荧光表明,p-Akt[T308]和p-Akt[S473]主要定位于瘢痕组织中的细胞浆内,且在D组中的共表达量低于B组。TUNEL检测结果证实,与A组相比,B组皮肤组织中细胞凋亡水平明显下调,且D组中细胞凋亡水平高于C组（P <0.01）。结论 阻断PI3K/Akt信号通路可通过抑制Akt磷酸化,导致...     

趋化因子受体CCR7介导树突状细胞抗凋亡机制研究

目的研究趋化因子受体CCR7对成熟树突状细胞（DCs）的抗凋亡作用，并对其机制进行探讨。方法体外培养大鼠骨髓来源DCs，脂多糖诱导成熟。加入CCR7配体CCL21进行刺激，以不加CCL21为对照组，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测磷酸化Akt、Akt蛋白表达，应用Wortmannin抑制PI3K/Akt信号通路进一步观察磷酸化Akt蛋白表达和细胞凋亡的变化。结果在CCL21的作用下，DCs细胞凋亡率明显低于对照组，而磷酸化Akt蛋白表达却明显增高（P〈0.05）。DCs经PI3K抑制剂预处理后，CCR7介导的Akt蛋白磷酸化及抗凋亡作用被阻断。结论在CCL21作用下，CCR7介导了抗凋亡效应，其对DCs的凋亡调控通过PI3K/Akt信号通路发挥作用。     

依达拉奉对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及机制研究

目的 探讨依达拉奉对心肌梗死（MI）大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法 50只SD大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、依达拉奉小剂量、中剂量及大剂量组5组。除假手术对照组外,其他4组大鼠均结扎冠状动脉左前降支复制MI模型。依达拉奉小剂量、中剂量及大剂量组分别腹腔注射依达拉奉1、3和6?mg/kg,假手术对照组和模型对照组大鼠注射同体积生理盐水。各组大鼠模型复制2?h后开始给药,连续给药14?d后进行相关检测,采用高分辨小动物超声仪测定大鼠心脏结构和功能,取腹主动脉血检测血清心肌酶（cTnT、CK-MB、LDH）和抗氧化标志物（SOD、MDA、GSH-Px）,采用TUNEL法测定心肌细胞凋亡指数,采用RT-PCR法检测心肌PI3K、Akt、Bcl-2及Bax mRNA表达,采用Western blotting检测心肌PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2及Bax蛋白的表达。结果 依达拉奉呈剂量依赖性降低MI大鼠左心室舒张末期内径（LVESD）和左心室收缩末期内径（LVEDD）水平（P?<0.05）,升高左心室射血分数（LVEF）和左室短轴率（LVFS）水平（P?<0.05）;依达拉奉呈剂量依赖性降低MI大鼠血清cTnT、CK-MB和LDH水平（P?<0.05）;依达拉奉呈剂量依赖性升高大鼠血清SOD和GSH-Px水平（P?<0.05）,降低MDA水平（P?<0.05）;依达拉奉剂量依赖性抑制MI大鼠心肌细胞凋亡指数（P?<0.05）;依达拉奉呈剂量依赖性升高MI大鼠心肌PI3K、Akt和Bcl-2 mRNA的表达（P?<0.05）,降低Bax mRNA的表达（P?<0.05）;依达拉奉呈剂量依赖性升高MI大鼠心肌PI3K、Akt、p-Akt及Bcl-2蛋白的表达（P?<0.05）,降低Bax蛋白的表达（P?<0.05）。结论 依达拉奉对MI大鼠心脏具有保护作用,可降低心肌细胞的凋亡,改善心肌抗氧化能力,并且调控PI3K/Akt信号通路。     

雷公藤多苷通过PI3K/Akt通路对糖尿病肾病大鼠热休克蛋白90及PGC-1α表达的影响

目的 探究雷公藤多甙（TG）通过PI3K/Akt通路对糖尿病肾病（DN）大鼠热休克蛋白90（HPS90）及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α（PGC-1α）水平的影响。方法 通过腹腔注射链脲佐菌素复制DN大鼠模型，并将其随机分为DN组、DN+TG组和DN+TG+SC79组（每组15只），另取15只健康大鼠作为对照组。TG灌胃剂量为20 mg/kg。大鼠腹膜内注射SC79（0.04 mg/g）以激活PI3K/Akt通路。通过HE染色验证模型复制结果和TG对肾组织的保护作用。生化检测大鼠24 h尿蛋白和肌酐，酶联免疫吸附试验检测炎症因子水平，HE染色观察各组大鼠肾损伤情况，Masson染色观察各组大鼠肾纤维化情况，qRT-PCR和Western blotting 分别检测HPS90和PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量。结果 DN组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6高于对照组（P <0.05），PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量低于对照组（P <0.05）；DN+TG组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6低于DN组（P <0.05），PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量高于DN组（P <0.05）。DN+TG+SC79组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6高于DN+TG组（P <0.05），PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量低于DN+TG组（P <0.05）。结论 TG可以通过抑制PI3K/Akt通路抑制HSP90的转录和翻译，从而促进PGC-1α的表达，并发挥抗炎和抗纤维化作用，从而缓解DN。