一株海洋真菌产青霉酸的发酵优化研究

目的 对一株海洋真菌Penicillium janthinellum HK1-6的青霉酸代谢产物进行发酵优化,以期获得足量的化合物研究青霉酸对水稻纹枯病菌的拮抗性。方法 采用正交实验设计对真菌HK1-6产青霉酸的土豆液体培养基进行优化,采用高效液相色谱法对青霉酸产量进行定量分析。结果 研究表明,真菌HK1-6高产青霉酸的土豆液体培养基各因素最优水平为葡萄糖30 g,土豆200 g,海盐10 g,pH为4,产量可达0.908 g/L,而原发酵条件下青霉酸产量约为0.423 g/L。结论 真菌HK1-6采用最优土豆液体培养基发酵后,青霉酸的产量显著提高,产量较原培养条件提高约2.1倍。     

2株海洋来源真菌共培养产物的研究

摘要：目的 对2株海洋来源真菌Stachybotrys sp. 3A00409与Aspergillus sclerotiorum MXH-17的共培养产物进行化学成分和生物活性研究。方法 采用溶剂萃取、柱色谱层析及半制备HPLC等方法对2株真菌共培养发酵产物的差异部分进行靶向化学分离,通过理化性质及波谱学方法并参阅文献进行化合物结构鉴定,并初步评价其细胞毒和抑菌活性。结果 以大米静置共培养作为目标培养模式进行大量发酵,经过目标化合物靶向分离,得到6个单体化合物,结构鉴定为二聚萘并-?-吡喃酮类化合物Asperpyrone A（1）、Fonsecinone A（2）、Asperpyrone C（3）、Aurasperone A（4）、Dianhydro-aurasperone C（5）和异色酮类化合物(7S, 8S)-sclerotinin A （6）。抑菌实验结果显示化合物1对大肠杆菌Escherichia coli表现出弱的抑菌活性,MIC为39.7 μmol/L。结论 共培养刺激微生物代谢产物产生是提高微生物化学多样性的潜在有力工具,本研究从海洋来源真菌Stachybotrys sp. 3A00409与Aspergillus sclerotiorum MXH-17的共培养产物中分离得到了单菌培养中未发现过的5个二聚萘并-?-吡喃酮类和1个异色酮类化合物。     

具有抗菌活性的海洋真菌天然产物研究新进展

近年来,病原微生物的耐药性已严重威胁到人类健康,从海洋微生物中寻找对耐药菌敏感的化合物成为研究的热点,其中海洋真菌因其能够产生大量结构新颖、活性显著的代谢产物而受到广泛关注。本文按照海洋真菌的来源进行分类,从海洋动物来源真菌、红树林来源真菌、海藻来源真菌、海水来源真菌等4个方面,综述了2014年来发表的具有抗菌活性的海洋真菌来源的新的天然产物,主要介绍天然产物的化学结构和生物活性,化合物结构式曾有文献报道的未包括在内,为具有抗菌活性的海洋真菌天然产物的进一步研究开发提供了参考。     

一种快速筛选抗菌活性海洋真菌的方法

摘要：目的 建立一种快速筛选抗菌活性真菌菌株的方法 方法 设计并改良了一种双层琼脂板快速筛选方法 结果 利用改良双层琼脂板筛选法，从一批真菌中快速筛选获得一株具有显著抗菌活性的菌株WZXY-33-10，并通过现代色谱学及波谱学方法从其发酵物中分离鉴定了2个抗菌活性化合物equisetin（1）和epi-equisetin（2）。结论 改良双层琼脂板筛选法可以作为一种快速发现抗菌活性海洋真菌的方法。     

海洋真菌095407的抗菌活性代谢产物的研究

目的对海洋真菌095407的抗菌活性成分进行研究。方法用多种色谱技术对化合物进行分离纯化，用光谱技术和理化性质鉴定化合物的结构，并用滤纸片琼脂扩散法测定化合物的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和白色念珠菌活性。结果从095407号真菌发酵液提取物中分离得到4个化合物，分别鉴定为3，4，5-三甲基-1，2-苯二酚（1）、decarboxydihydrocitrinone（2）、甘露醇（3）、刺芒柄花素（4）。结论化合物1为首次以天然产物的形式分离得到，活性测试结果表明化合物1和2具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性。     

1株海洋真菌Aspergillus sp. WHUF0313次级代谢产物及其活性研究

摘要：目的 研究1株深海来源曲霉属真菌Aspergillus sp. WHUF0313的次级代谢产物及其生物活性。方法 采用硅胶柱 层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析和半制备高效液相色谱等技术对该菌株的次级代谢产物分离纯化,并通过核磁共振 波谱(NMR)、质谱(MS)等方法,结合相关文献对比鉴定化合物结构;分别采用肉汤微量稀释检测法和MTS细胞增殖与毒性检 测法对化合物进行抗菌和肿瘤细胞毒活性测试。结果 从Aspergillus sp. WHUF0313的发酵产物共分离得到9个化合物,分别 为asperophiobolin G(1)、asperophiobolin F(2)、ophiobolin Q(3)、asperophiobolin H(4)、6-epi-ophiobolin G(5)、ophiobolin H(6)、 6-epi-ophiobolin K(7)、6-epi-21,21-O-dihydroophiobolin G(8)和asperophiobolin J(9)。结论 海洋真菌Aspergillus sp. WHUF0313能 产生多种活性次级代谢产物,化合物4对小鼠黑色素瘤B16有一定的细胞毒活性,化合物6和7具有较强的抗多重耐药幽门螺杆菌 和抗金黄色葡萄球菌活性,因此该菌具有开发为微生物源药物的潜在研究价值。     

1 株海洋真菌Talaromyces sp. HK1-18次级代谢产物及其抗菌活性研究

目的 研究 1 株分离于海南东寨港红树林自然保护区海桑根际土壤的真菌Talaromyces sp. HK1-18的次级代谢产物及其抗菌活性。方法 利用正、反相硅胶柱层析、凝胶柱层析和半制备高效液相色谱等色谱分离方法,对该菌的次级代谢产物进行分离纯化；利用核磁共振波谱以及参考文献等方法,鉴定化合物的结构；采用MIC法对化合物进行抗菌活性评价。结果 从该真菌中分离获得 8个化合物 (1～8),结构分别鉴定为 penicillide(1)、purpactin A(2)、vermistatin(3)、deoxyfunicone(4)、dankasterone A(5)、fortisterol(6)、过氧化麦角甾醇(7)、radiclonic acid(8)。结论 化合物6为首次从Talaromyces属真菌中分离得到。化合物1和8对多药耐药金黄色葡萄球菌(S. aureus ATCC 43300)显示出较强的抑制活性,MIC值均为0.78 μg/mL。化合物6对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(S. aureus ATCC 33591)显示出较强的抑制活性,MIC值为0.78 μg/mL。     

一株海洋真菌Penicillium chrysogenum次级代谢产物及其抗菌活性研究

目的 研究一株南海来源真菌Penicillium chrysogenum的次级代谢产物及抗菌活性。方法 运用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和HPLC半制备等方法对次级代谢产物进行分离和纯化;通过NMR、MS等方法鉴定化合物结构;利用抗菌活性模型对其进行活性评价。结果 从真菌P. chrysogenum中分离鉴定了5个化合物,包括一个结构复杂的生物碱taichunamide H (1),一个带有脂肪链的蒽醌1-O-methyl-averantin (2),两个聚酮类化合物versicone A (3)和 versicone B (4) 以及一个联苯醚diorcinol (5);其中,2对致病菌Canidia albicans和 Staphylococcus aureus具有显著的抑制活性,MIC值分别为6.25 μM和12.5 μM;5对海洋污损菌Photobacterium halotolerans显示抑制活性,MIC值为 50 μM。结论 化合物3和 4为首次从青霉菌中分离得到;化合物2具有显著的抗菌活性,具有重要的研究和潜在开发价值。     

一株海洋来源真菌 Nigrospora sp. 蒽醌类化合物及其生物活性研究

目的 对一株海洋来源真菌 Nigrospora sp. (TA26-9) 中的蒽醌类化合物进行结构表征,筛选评价生物活性。方法 采用波谱分析方法和单晶衍射技术对化合物进行结构表征,采用微量稀释法测定化合物对 10 株致病菌的抗菌活性,采用 Solis 改良法测定化合物的卤虫致死活性。结果 结构表征确定了 6 个蒽醌类化合物的结构：9α-hydroxydihydrodesoxybostrycin (1),9α-hydroxyhalorosellinia A (2),4-deoxybostrycin (3),bostrycin (4),3,5,8-trihydroxy-7-methoxy-2-methylanthracene-9,10-dione (5) 和austrocortirubin (6)。对化合物 1–6 及其乙酰化衍生物 3a,4a,5a–5d 生物活性评价表明,所有化合物对辣椒炭疽病菌 Colletotrichum capsici 都有选择性抗菌活性,MIC = 0.26–1.22 μM;除化合物 3 外,对玉米大斑病菌 Setosphaeria turcica 也表现出很好的抗菌活性,MIC = 0.27–4.82 μM。特别地,化合物 3a具有广谱抗菌活性,对 8 株致病菌的 MIC 在 0.27–4.32 μM之间,该化合物还显示卤虫致死活性,在 25 μg/mL 浓度下对卤虫 Artemia salina 的致死率为 78.9%。结论 海洋来源真菌 Nigrospora sp. (TA26-9) 中的蒽醌类化合物具有选择性抗菌活性,具有开发成抗菌剂的潜力。     

8株海洋真菌的抗氧化和抗肿瘤活性筛选

目的通过抗氧化和抗肿瘤活性双生物活性筛选模型评估来源于东海海洋的8株海洋真菌提取物的生物活性。方法对8株海洋真菌菌体甲醇提取物和发酵液乙酸乙酯提取物进行体外抗氧化活性(DPPH法)和抗肿瘤(MTT法)双生物活性模型筛选研究。结果菌株251#,28#,111#的发酵液提取物在剂量为2mg.mL-1时,对DPPH的清除率大于90%;当剂量为50μg.mL-1时,菌株28#,111#,21#发酵液提取物对HeLa和H460肿瘤细胞的抑制率均大于50%。结论菌株28#,111#发酵液提取物在体外具有较强的清除自由基的能力,对HeLa和H460肿瘤细胞具有较高的细胞毒性。提示菌株28#,111#的活性代谢产物可能来源于菌株生长过程中产生的胞外物。同时,表明海洋真菌是潜在的活性代谢产物的重要来源。     

海洋真菌分离及菌株Aspergillus versicolor ZLQ-43的次级代谢产物的研究D

目的 对来源于渤海地区样品进行海洋真菌分离,并深入研究目标菌株杂色曲霉Aspergillus versicolor ZLQ-43的抗肿瘤活性成分。方法 采用稀释涂布平板法进行海洋真菌的分离;应用溶剂萃取,TLC分析,柱色谱层析及制备HPLC等方法对菌株ZLQ-43的发酵产物进行研究;通过理化性质及波谱学方法并参阅文献进行化学结构鉴定;采用CPE MTT法评价其抗H1N1流感病毒活性,采用SRB法评价其抗肿瘤的活性。结果 从渤海地区样品中最终筛选分离到海洋真菌90株,从菌株ZLQ-43发酵提取物中分离得到聚酮类化合物6个,经结构鉴定分别为sterigmatocystin (1), dihydrosterigmatocystin (2), vericolorin B (3), paeciloquinone C (4), versiconol (5)和2,4-dihydroxy-6-((R)-4-hydroxy-2-oxopentyl)-3-methylbenzaldehyde (6)。化合物4、6具有中等强度的抗H1N1病毒活性,抑制率分别为67.6%和51.5%;化合物5在1 mg?mL-1浓度下对P388细胞增殖抑制率67.79%。 结论 菌株ZLQ-43能够产生结构多样的活性次级代谢产物,发现化合物1、3、5具有P388细胞增殖抑制活性,并首次报道化合物4、6的抗H1N1病毒活性。     

海洋真菌 Cochliobolus lunatus 产抗污损活性大环内酯化合物Zeaenol的发酵优化

目的 优化海洋真菌 Cochliobolus lunatus (TA26-46) 的发酵条件,以期提高抗污损活性大环内酯zeaenol的产量。方法 运用单因素试验设计和正交试验设计,对该菌株产zeaenol的氮源、前体、盐度和培养基中不同离子等发酵条件进行优化。结果 结果表明:最佳优化发酵条件为可溶性淀粉10 g.L,,氮源为硝酸钠5 g.L ,乙酸钠浓度为5 g.L,,盐度为1%。结论 在最佳发酵条件下, zeaenol产量可达155.4 mg.L,比优化前提高了5倍。     

2株深海来源真菌次级代谢产物的研究D

目的 对2株深海来源真菌Graphostroma sp. MCCC 3A00421和Aspergillus sp. MCCC 3A400414进行化学成分和生物活性研究。方法 采用溶剂萃取、柱色谱层析及半制备HPLC等方法对2株深海真菌的发酵产物进行化学分离,通过理化性质及波谱学方法并参阅文献进行化合物结构鉴定,并初步评价其细胞毒活性。结果 从菌株3A00421的发酵产物中分离得到了4个化合物,经鉴定其结构分别为3,5-dimethyl-8-methoxy-3,4-dihydroisocoumarin（1）、6-O-methylreticulol（2）、nectriapyrone（3）、demethyl nectriapyrone A（4）;从菌株3A00414中分离得到了5个化合物,经鉴定其结构分别为(22E,24R) -麦角甾-5,7,22-三烯-3β-醇（5）、WIN 64821（6）、diorcinol（7）、9-十八碳烯酸（8）、9,12-十八碳二烯酸（9）。其中化合物6具有中等强度的细胞毒活性,其IC50为7.14～15.78 μmol/L。结论 深海真菌是重要的活性物质来源和生物资源,本研究首次从深海来源Graphostroma属真菌的代谢产物中发现了2个异香豆素和2个苯并吡喃酮类化合物。     

海洋真菌Penicillium sp.产抗肿瘤天然产物brefeldin A的发酵优化研究

目的 对海洋来源真菌Penicillium sp.产抗肿瘤天然产物brefeldin A的发酵优化,以期获得高产率目标化合物。方法 运用单因素实验设计,重点考察了培养方式、发酵培养基组成 (如碳源、氮源、盐度等)以及培养条件 (温度、摇床转速)等因素。结果 最佳发酵条件为：马铃薯200 g/L,麦芽糖10 g/L,淀粉20 g/L,海盐15 g/L,28 ℃, 摇床转速160 r/min,培养14天。结论 在该发酵条件下,brefeldin A的实际产量达到40 mg/L,较优化前提高了近10倍。     

Cytotoxicity assessment of gliotoxin and penicillic acid in Tetrahymena pyriformis

Various studies have documented the associations between mold exposure and effects on health. Mycotoxins, which occur in spores and mold fragments, can be involved in processes that have pathological effects, such as adynamia of the immune system, recurrent infections of the respiratory tract, or asthma. Using Tetrahymena pyriformis, a single-cell organism well established as a suitable model for human respiratory epithelium-cell functionalities, we investigated dose-response relationships of the mycotoxins gliotoxin and penicillic acid. Our study focused on the viability (cell count, MTT assay), energy levels (adenosine-5'-triphosphate content), energy-providing processes (MTT reduction per cell), and cell respiration (oxygen consumption). Both mycotoxins acted as cytotoxins in a dose-dependent manner. Gliotoxin had a stronger inhibitory effect (EC50 0.38 microM) than did penicillic acid (EC50 343.19 microM). The energy-providing processes were not inhibited or were only weakly inhibited under the influence of gliotoxin, whereas penicillic acid caused stimulation of the physiological parameters. Summarizing the results, it is clear that the two investigated mycotoxins must have different modes of action. They are not only different in the strength of their toxic effects but also in a variety of physiological aspects. In addition, T. pyriformis showed differences in its ability to overcome the negative effects of particular mycotoxin exposures.     

海洋真菌来源化合物(+)-terrein的发酵优化及其药理活性研究

目的 对海洋来源真菌 Aspergillus terreus中的(+)-terrein代谢产物进行发酵优化,以期获得足够的样品进行药理活性评价。方法 采用不同发酵条件对微生物进行发酵优化,运用柱色谱层析技术对目标产物进行分离纯化,对化合物进行细胞毒及抗细菌活性评价。结果 研究表明,最优发酵条件为土豆液体发酵培养基,发酵时间为28天,在该条件下目标产物单一,易分离纯化。细胞毒活性测试结果显示,(+)-terrein具有强的细胞毒活性,对NCI-H460、A549和BT474肿瘤细胞株的IC50 值分别为3.12 μg/mL、3.32 μg/mL和3.45 μg/mL。结论 在优化条件下,(+)-terrein的产量可达0.254 g.L,且该化合物对NCI-H460、A549 和BT474肿瘤细胞具有较好细胞毒活性,具有开发为抗癌药物的潜在价值。     

海洋真菌烟曲霉H1-04发酵液中的硫代二酮哌嗪类产物及其抗肿瘤活性

目的 研究海洋来源真菌烟曲霉H1-04(Aspergillus fumigatus H1-04)发酵液中的抗肿瘤活性产物.方法 采用液液萃取、硅胶柱色谱、制备HPLC等技术,从烟曲霉H1-04的发酵产物中分离纯化活性产物.活性产物的结构经IR、MS、1H-NMR确证.采用SRB法和MTT法测试评价抗肿瘤活性.结果与结论 从烟曲霉H1-04发酵物中分离鉴定了4个硫代二酮哌嗪类化合物,分别是胶霉毒素(gliotoxin,1)、bisdethiobis(methylthio)gliotoxin(2)、bis-N-norgliovictin(3)、didehydrobisdethiobis(methylthio)gliotoxin(4).化合物1在浓度为0.1μmol·L-1时几乎能完全抑制小鼠白血病P388细胞和人肺癌A549细胞的增殖,抑制率分别为100%和99.1%;对小鼠乳腺癌tsFT210细胞也呈现很强的细胞凋亡诱导、细胞周期抑制、坏死性细胞毒等活性.化合物2～4对tsFT210细胞显示出不同程度的抗肿瘤活性.化合物2～4为首次从烟曲霉发酵物中分离得到,并首次报道2～4的抗肿瘤活性.