SOCS3基因转染对小鼠同种异体移植心脏存活时间的影响

目的研究腺病毒载体介导的细胞因子信号抑制因子3(suppressors of cytokine sig-naling3,SOCS3)基因转染对小鼠同种异体移植心脏存活时间的影响。方法以Balb/c小鼠为供体,以C57BL/6小鼠为受体,行同种异体心脏移植。C57BL/6同种异体小鼠心脏移植受体分为3组(21只/组):(1)对照组,单纯同种异体心脏移植;(2)Ad-SOCS3组,供体术前24h转染2×109pfu编码SOCS3基因的腺病毒载体;(3)Ad-GFP组,供体术前24h转染2×109pfu空病毒载体。每组10只受体用于观察生存期;每组5只受体分别于术后第1、3、5、7、9日处死,获取移植物,采用实时定量逆转录酶聚合酶链反应检测SOCS3mRNA表达的变化;每组6只受体于术后第6日处死,获取移植物和脾脏用于组织学检查及Foxp3mRNA、白介素(IL)-17mRNA表达的检测,同时检测脾脏的混合淋巴细胞反应(mixedlymphocytereaction,MLR)强度,采用流式细胞仪分析调节性T细胞(Treg)及Th17细胞的比例。结果供体术前SOCS3基因转染可明显增加术后移植物内SOCS3 mRNA表达;Ad-SOCS3组的移植心脏存活时间明显长于对照组、Ad-GFP组(P0.05)。术后第6日,Ad-SOCS3组移植物淋巴细胞浸润程度较轻、排斥反应强度级别较低、MLR较弱;该组移植物内Foxp3 mRNA水平及脾脏内CD4+CD25+Treg比例与其他两组比较差异无统计学意义(P0.05),但IL-17 mRNA水平及脾脏内CD4+IL-17+Th17比例较其他两组明显降低(均为P0.05)。结论腺病毒载体介导的供体SOCS3基因转染能够延长移植心脏存活时间,其机制可能与抑制淋巴细胞浸润、抑制T淋巴细胞同种抗原反应性以及抑制Th17免疫反应等有关,与Treg的产生及功能无关。     

阻断ICOS/B7h信号的供体特异性输血对移植受体CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的 观察阻断ICOS/B7h信号的供体特异性输血(DST)对异基因小鼠心脏移植术后体内CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的影响.方法 按陈氏方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验分3组,异基因组及同基因组:供心分别来源于BALB/C和C57BL/6小鼠,受体均为C57BL/6小鼠,未予治疗.治疗组:移植当天给予受体鼠(C57BL/6)尾静脉注射5×106 ICOS-Fc靶定的供体(BALB/C)脾B淋巴细胞,d0～6连续给予受体鼠尾静脉注射ICOS-Fc 200 μg/d.术后统计各组移植物的存活时间,通过流式细胞术检测受体鼠外周血中CD4+CD25+Treg的亚群比例,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植物中FOXP3的mRNA表达,在混合淋巴细胞反应中检测CD4+CD25+Treg对CD4+CD25-效应T细胞(Teff)的增殖抑制效率.结果 与异基因组比较,治疗组心脏移植物存活时间明显延长[(84.38±29.14)d比(7.00±0.76)d,P＜0.01].各组中,治疗组受体外周血中CD4+CD25+Treg亚群比例显著上调[(15.60±5.69)%,P＜0.01].与其他两组比较,治疗组心脏移植物中FOXP3 mRNA表达显著上调.以正常鼠为对照,耐受鼠脾脏中获取的CD4+CD25+Treg能够更高效地抑制CD4+CD25-Teff在混合淋巴细胞培养中的增殖效应.结论 通过阻断ICOS/B7h信号的DST可以诱导异基因小鼠心脏移植耐受,CD4+CD25+Treg在耐受的形成与维持中均起着重要作用.     

移植抗原特异性转基因CD8+T细胞对白细胞介素2的依赖性

目的研究白细胞介素2（IL-2）在调节移植抗原特异性转基因CD8^＋T细胞介导的免疫排斥反应中的作用。方法将经荧光染科CFSE标记后的C57BL／6小鼠和2CTg小鼠（CD4敲除鼠）淋巴细胞分别植入经致死剂量γ射线照射过的两组DBA／2J小鼠体内，检测CD4^＋与CD8^＋T细胞在体内分裂增殖的时相，并用胞浆内IL-2标志染色方法测定活化后T细胞表达IL-2的能力。以Balb／c小鼠为供者，糖尿病2CTg小鼠和2C Tg-IL-2KO小鼠（IL-2敲除鼠）为受者，进行胰岛细胞移植。观察CD8^＋ T细胞在介导移植排斥中的作用。结果DBA／2J小鼠输注了C57BL／6小鼠的淋巴细胞后，CD4^＋与CD8^＋T细胞分裂增殖均非常明显，前者表达大量IL-2，后者则不表达。DBA／2J小鼠输注了2CTg小鼠的淋巴细胞后。在完全没有CD4^＋T细胞存在的情况下，CD8^＋T细胞仍明显分裂增殖并大量表达IL-2。2CTg和2CTg—IL-2KO小鼠移植胰岛细胞后，前者迅速发生排斥反应，胰岛移植物的平均存活时间仅为8d，而后者胰岛移植物的平均存活时间〉50d。结论CD8^＋T细胞在产生和利用IL-2时有很大的可塑性。CD4^＋T细胞存在时，CD8^＋T细胞能有效利用CD4^＋T细来源的IL-2进行分裂增殖，在缺乏CD4^＋T细胞时，则利用自身来源的IL-2进行分裂增殖；移植抗原特异性CD8^＋T细胞的效应功能完全依赖于IL-2，排斥反应由CD8^＋T细胞介导时，阻断IL-2／IL-2受体通路可诱导移植物长期存活。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞诱导同种异体复合组织移植免疫耐受功能的研究

目的 探讨供体抗原特异性CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg),对同种异体复合组织 移植(CTA)受体大鼠细胞免疫耐受功能的影响.方法 采用免疫磁珠法分选CD4~+CD25~+Treg,将数 量1×10~6的CD4~+CD25~+Treg输注入CTA受体的大鼠,术后30 d采取外周血,尼龙毛柱分离T、B细 胞,检测在IgM 抗体刺激下的增殖放射强度的液体闪烁测定(CPM)值及血清lgG和IgA水平,判断 CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能的影响及CTA的存活情况,并进行统计学分析.结果 分选的CD4~+CD25~+Treg纯度为95.6%.T、B细胞CPM值:正常对照组分别为2436±358、2418±348,Treg 局部干预组为2273±136、2252±127,Treg全身干预组分别为2338±228、2315±218,Treg未干预组分 别为3749±245、3720±224;Treg 未干预组与其三组比较差异均有统计学意义(P<0.01).血清IsG、IgA水平:Treg 局部和全身干预组分别为(12.56±1.30)g/L、(2.38±0.21)g/L和(13.48±1.23) g/L、(2.86±0.24)g/L,与正常对照组(12.35±1.28)g/L、(2.36±0.12)g/L比较差异无统计学意 义(P>0.05),三组与Treg未干预组(16.58±1.12)g/L、(3.75±0.37)g/L比较差异有统计学意义 (P<0.01).Treg 局部和全身干预组CTA存活时间分别为(97±13)和(63±lO)d,显著长于Treg未 干预组的(22±8)d(P<0.01).结论 供体抗原特异性CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能有明显的 抑制作用,能诱导CTA免疫耐受,延长其存活时间,且局部应用效果优于全身.     

CD4+CD25+调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植自发性免疫耐受状态中的作用

目的 探讨CD4+CD25+调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植免疫耐受状态中的作用.方法 进行小鼠原位肝脏移植,诱导出移植免疫耐受后,向受体注射抗CD25抗体(PC61)以去除CD4+CD25+T细胞,检测受体内CD4+CD25+T细胞数量及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)的表达以确定CD4+CD25+T细胞完全被清除,同时观察受体生存时间.结果 与同种同系小鼠肝脏移植结果 相似,同种异系肝脏移植小鼠的生存时间亦均超过70 d.移植免疫耐受诱导后,PC61不同注射方案均能完全去除受体小鼠肝脏、脾脏及血液中的CD4+CD25+T细胞,且移植肝脏中Foxp3 mRNA的表达也明显降低,表明完全去除了CD4+CD25+调节性T细胞,但肝脏移植动物生存时间并未受到影响.结论 CD4+CD25+调节性T细胞对于小鼠肝脏移植自发性免疫耐受的维持并非必需.     

Th1/Th2类细胞因子转换对小鼠心脏移植物存活的影响

目的 探讨Th1/Th2类细胞因子转换对小鼠心脏移植物存活时间的影响。方法 采用小鼠腹部心脏移植模型，分为同种异体移植组（A组）、同种异体移植+免疫抑制处理组（B组）和同系移植组（C组），每组20对。观察移植物存活时间、供心病理改变、受鼠脾和供心内IFN-γ，IL-2，IL-4及IL-10 mRNA的表达水平。结果 A组及B组移植物平均存活时间分别为（7.8±0.77）d和（14.80±1.01）d，C组移植物存活均超过28d；3组间差异均有显著性（P<0.05）。A组与B组、C组比较，移植物的心肌细胞变性坏死严重，并有大量炎性细胞浸润。A组受鼠脾脏及供心内IFN-γ和IL-10 mRNA表达比其余两组明显增强；3组移植心组织IL-2及IL-4 mRNA均无表达；A组脾脏IL-2 mRNA表达最强；B组脾脏IL-4 mRNA表达明显强于其余两组。结论 Th1/Th2转换在延长移植物存活过程中起重要作用；IL-10也参与移植物排斥反应过程。     

小鼠异体Sertoli细胞诱导胰岛移植免疫耐受的作用

目的 观察小鼠Sertoli细胞是否能在异体内起到诱导局部免疫耐受、保护共移植异体胰岛的作用.方法 以糖尿病C57小鼠作移植受体,随机分4组,每组6只;以正常BALB/C小鼠为胰岛供体,正常C57小鼠和正常BALB/C小鼠各作为Serloli细胞供体.A组:单纯移植异体胰岛;B组:移植来源于C57小鼠的Sertoli细胞+BALB/C小鼠来源的胰岛;C组:移植均来源于BALB/C小鼠的Sertoli细胞及胰岛;D组:假手术组.监测各组移植受体的血糖尿糖变化,观察移植物的存活时间.结果 A组移植物平均存活时间为(6.50±2.35)d;B组为(55.67±4.84)d;C组为(51.33±5.05)d;D组未观察到血糖正常.B组及C组的移植方式均可逆转糖尿病小鼠的高血糖状态,移植物存活期均较A组有明显延长,其差异有统计学意义(P<0.05);而B组与C组的移植物存活时间差异无统计学意义(P>0.05).结论 同种异体来源的睾丸Sertoli细胞在异体内可起到诱导局部免疫耐受的效果,对共移植同种异体胰岛起到保护作用,其效果与自体睾丸Sertoli细胞相当.     

PD-L1.Ig与1,25(OH)2D3联合应用对异基因大鼠胰腺移植后急性排斥反应的影响

目的 探讨PD-L1.Ig联合1,25(OH)2D3对大鼠胰腺移植急性排斥反应的免疫调控作用以及对大鼠移植胰腺存活时间的影响.方法 以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,建立4组原位胰腺移植模型.每组12例,共48例.A组:对照组、B组:PD-L1.Ig组、C组:1,25(OH)2D3组、D组:PD-L1.Ig+1,25(OH)2D3组;观察术后各组血糖变化,移植物存活以及组织病理学改变;流式细胞检测受体血、脾以及移植胰CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD25+T细胞表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测移植物局部白细胞介素(IL)-2、-4、-10、-12表达水平;于术后第7天分别杀死各组受体和供体鼠各2只,取受体脾细胞与供体作混合淋巴细胞反应(MLR).结果 与A比较,PD-L1.Ig组并未显著延长移植胰腺存活时间(P＞0.05),C、D组对改善血糖水平和延长移植胰腺存活时间作用明显(P＜0.01),其中,D组移植胰腺存活时间最长(23.9±0.8)d;与A组比较,B组无明显改善,C组排斥反应较A组明显减弱,而D组几乎未发生排斥反应;CD3+CD8+T细胞计数D、C、B与A组比较均有减少,差异有统计学意义(P＜0.01).CD4+T细胞D、C、B与A组的差异有统计学意义(P＜0.05).CD4+CD25+调节性T细胞A、B、C、D组逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.01),且以D组较为明显(C组比A组P＜0.01);D组明显抑制移植物局部Th1型细胞因子IL-2、IL-12的产生,显著提高Th2型细胞因子IL-4、10的水平;与对照组比较,各治疗组受体T淋巴细胞在MLR中表现对供体淋巴细胞特异性低反应性,能有效抑制T细胞对同种异体抗原的反应.结论 共刺激阻断剂PD-L1.Ig联合1,25(OH)2D3可有效抑制细胞免疫应答,干预急性排斥反应,显著延长大鼠移植胰腺存活时间.     

CD4+CD25+调节性T细胞对同种胰岛移植免疫耐受的影响

目的 观察体外分离的CD4+CD25+调节性T细胞对同种胰岛移植免疫耐受的影响.方法 免疫磁珠法分离CD4+CD25+调节性T细胞,体外试验观察其对CD4+CD25-T细胞增殖的影响.将数量达1×106的CD4+CD25+调节性T细胞回输胰岛移植受体,对比其对移植物存活的影响.结果 分离的CD4+CD25+调节性T细胞体外试验可明显抑制CD4+CD25-T细胞的增殖.单纯胰岛移植组移植物物存活期为(5.57±0.79)d,回输受体CD4+CD25+调节性T细胞数量1×106、2×106时,胰岛移植物存活时间分别为(15.29±2.29)d和(25.43±2.30)d(P《0.01).CD4+CD25+调节性T细胞回输胰岛移植受体可显著延长移植物存活期,诱导免疫耐受的作用为剂量依赖性.结论 CD+CD25+调节性T细胞体外、体内试验可抑制效应性T细胞功能,诱导胰岛移植免疫耐受.     

地西他滨诱导体内Foxp3基因表达上调延长心脏移植小鼠的存活时间

目的 探讨甲基转移酶抑制剂地西他滨诱导体内叉状头螺旋转录因子(Foxp3)基因表达延长同种心脏移植小鼠存活时间的作用及其机制.方法 以经丝裂霉素处理的Balb/c小鼠和C57BL/6小鼠脾细胞作为刺激细胞,未经丝裂霉素处理的C57BL/6小鼠脾细胞作为反应细胞,进行体外单向混合淋巴细胞培养,观察地西他滨对培养体系中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)比例的影响.分别以Balb/c小鼠和C57BL/6小鼠作为供、受者,建立同种小鼠腹部异位心脏移植模型.实验组受鼠术后1～3 d经尾静脉注射地西他滨(1.5 mg/kg),同种对照组受鼠术后1～3 d经尾静脉注射等体积生理盐水.监测两组移植心存活时间,检测受鼠外周血CD4+ CD25+ Treg细胞比例及Foxp3 mRNA的表达,观察移植心组织病理学变化.结果 地西他滨能够上调体外同种混合淋巴细胞反应体系中CD4+ CD25+Treg细胞的水平.同种对照组和实验组移植心脏中位存活时间分别为7和11d,实验组较对照组明显延长(P＜0.01).与同种对照组相比,实验组CD4+ CD25+ Treg细胞比例和Foxp3 mRNA的表达均明显升高(P＜0.01);移植心肌炎症细胞浸润的程度明显减轻.结论 地西他滨能够诱导同种心脏移植小鼠体内Foxp3基因的表达,从而明显减轻急性排斥反应,延长移植心存活时间,其机制可能与Foxp3表达能够诱导CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞的增殖和分化密切相关.     

CD4+CD25+FOXP3+T细胞在肝癌肝移植肿瘤复发中的作用

目的 探讨肝癌肝移植病人移植前后外周血和肿瘤组织中CD4+CD25+FOXP3+T细胞比例变化及其临床意义.方法 用流式细胞仪检测肝癌肝移植病人和其他肝移植病人术后外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞的比例,并采用正常人作对照.用免疫组化法检测肝癌病人和非肝癌病人肿瘤组织中FoxP3的表达及CD8+T细胞浸润的比例.观察肝癌肝移植病人术后及肿瘤复发后调节性T细胞的变化及其对肿瘤复发的影响.结果 流式细胞检测显示肝癌肝移植、非肝癌肝移植的病人术后外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞占CD4+T细胞的比例较正常人明显升高,分别为(10.15±1.00)%、(5.30±1.64)%和(3.20±1.18)%,P<0.05.肝癌肝移植肿瘤复发病人较未复发病人外周血CD4+CD25+FOXP3+T比例明显升高,分别为(15.15±1.50)%和(6.80±1.50)%,P<0.01.免疫组化检测显示肿瘤组织中FOXP3+T细胞增多,CD8+T细胞浸润明显减少.结论 肝癌肝移植肿瘤复发的病人外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞比例升高.调节性T细胞可能通过减少CD8+T细胞浸润,加速肿瘤复发.     

脂肪间充质干细胞与胰岛联合移植对术后免疫状态及移植效果的影响

目的研究同系脂肪间充质干细胞(AMSC)与同种异体胰岛联合移植对胰岛移植术后免疫状态及移植效果的影响。 方法选择Lewis大鼠建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型作为胰岛移植受体,AMSC＋胰岛移植组经左肾包膜下联合移植Lewis大鼠AMSC及Wistar大鼠胰岛,单纯胰岛移植组经左肾包膜下单独移植Wistar大鼠胰岛,单纯AMSC移植组经左肾包膜下单独移植Lewis大鼠AMSC,阳性对照组为未进行移植的Lewis糖尿病大鼠,阴性对照组为正常Lewis大鼠。ELISA法检测血清细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度,流式细胞技术检测外周血CD4^＋、CD8^＋ T细胞比例,HE染色观察移植胰岛淋巴细胞浸润情况,观察血糖、胰岛素水平及胰岛移植物存活时间。采用单因素方差分析比较5组大鼠外周血淋巴细胞亚群比例和血清细胞因子水平,采用LSD法进行组间两两比较;血糖及血清胰岛素变化采用重复测量资料方差分析;采用独立样本t检验比较AMSC＋胰岛移植组与单纯胰岛移植组胰岛移植物淋巴细胞计数。采用Kaplan-Meier法绘制AMSC＋胰岛移植组与单纯胰岛移植组胰岛移植物生存曲线,并采用log-rank检验进行比较。P<0.05为差异有统计学意义。 结果AMSC＋胰岛移植组胰岛移植物平均生存时间为(26.8±3.0) d,长于单纯胰岛移植组的(19.0±1.3) d,两组大鼠胰岛移植物生存曲线差异有统计学意义(χ²＝4.494,P<0.05)。胰岛移植后各时间点,AMSC＋胰岛移植组大鼠移植后血糖和胰岛素水平均优于单纯胰岛移植组(P均<0.05)。胰岛移植前,5组大鼠外周血CD4^＋、CD8^＋ T细胞比例以及细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10差异均无统计学意义(F＝0.425、0.476、0.256、0.418、0.281和0.313,P均>0.05)。胰岛移植后第7、14、28天,AMSC＋胰岛移植组大鼠外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞比例均低于单纯胰岛移植组(P均<0.05),血清IFN-γ和IL-2浓度均低于单纯胰岛移植组(P均<0.05),IL-4和IL-10浓度均高于单纯胰岛移植组(P均<0.05)。胰岛移植第7天,AMSC＋胰岛移植组胰岛移植物平均淋巴细胞计数为(142±21)个/mm²,低于单纯胰岛移植组的(311±36)个/mm²(t＝8.245,P<0.05)。 结论与胰岛联合移植的AMSC能够提高胰岛移植的效果,可调节糖尿病大鼠体内IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10表达及抑制同种异体胰岛刺激的T细胞增殖,减轻胰岛移植物的免疫损伤。     

TGF-β Induces Foxp3 + T-Regulatory Cells from CD4 + CD25 − Precursors

CD4 + CD25 + regulatory T cells (Tregs) are potent suppressors, playing important roles in autoimmunity and transplantation tolerance. Understanding the signals necessary for the generation and expansion of Tregs is important for clinical cellular therapy, but only limited progress has been made. Recent reports suggest a role for TGF-beta in the generation of Tregs from CD4 + CD25 - precursors, but the mechanism remains unknown. Here, we demonstrate that TGF-beta2 triggers Foxp3 expression in CD4 + CD25 - precursors, and these Foxp3 + cells act like conventional Tregs. The generation of Foxp3 + Tregs requires stimulation of the T-cell receptor, the IL-2R and the TGF-beta receptor. More importantly, strong costimulation through CD28 prevents Foxp3 expression and suppressive function in an IL-4-dependent manner. Furthermore, TGF-beta-driven Tregs inhibit innate inflammatory responses to syngeneic transplanted pancreatic islets and enhance islet transplant survival. Thus, TGF-beta is a key regulator of the signaling pathways that initiate and maintain Foxp3 expression and suppressive function in CD4 + CD25 - precursors. TGF-beta and signaling through TGF-beta receptor, CD28 costimulation and IL-4 may be key components for the manipulation of Treg. The de novo generation of Foxp3 + cells from CD4 + cells has the potential to be used for treatment of autoimmune diseases and induction of transplant tolerance.     

Relationships between regulatory T cells and CD8+ effector populations in patients with squamous cell carcinoma of the head and neck

BACKGROUND: Homeostasis of circulating T cells is regulated in complex ways that have not yet been well defined. The balance between type 1 and type 2 T-cell subsets in cancer patients is thought to modulate antitumor immunity. Meanwhile, CD4+CD25+ regulatory T cells (Treg), which are potent inhibitors of antitumor immune responses, also play an invaluable role in maintaining immune homeostasis. METHODS: Peripheral blood was obtained from 42 patients with squamous cell carcinoma of the head and neck (SCCHN) and 24 healthy age-selected donors. The percentages of T-cell subsets and their cytokine profiles expressed in response to ex vivo stimulation were studied by multicolor flow cytometry. RESULTS: Although patients with SCCHN had a lower percentage (p < .05) of circulating CD4+ T cells than healthy donors, CD4+CD25+ regulatory T cells (Treg) were increased in the patients (p < .01). A significant increase in Th1 and Th2 CD4+ T cells was observed in the patients after ex vivo stimulation with phorbol 12-myristate 13-acetate /ionomycin. The percent of Treg inversely correlated with that of total CD8+ T cells (p < .05), CD8+IFN-gamma+ (Tc1) cells (p < .05), and CD8+IL-4+ (Tc2) cells (p < .01). There was a highly significant correlation between Tc1 and Tc2 CD8+ T cells (p < .0001) in SCCHN patients but not in controls. CONCLUSIONS: Treg are increased in proportion in the circulation of patients with SCCHN. These cells appear to downregulate cytokine expression in both Tc1 and Tc2 subsets of CD8+ effector T cells, which may be responsible for antitumor responses.     

小鼠CD4+CD25+T调节细胞的分离、纯化及其功能检测

目的 探讨小鼠CD4+CD25+T调节细胞(Treg)的分离培养、纯化及其部分功能检测.方法 采用免疫磁珠分离法(MACS)对分离小鼠的脾淋巴细胞进行分选CD4+CD25+Treg细胞,锥虫蓝细胞染色检测其活性,流式细胞仪检测分选所得活性细胞的纯度,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液中白细胞介素(IL)-2、IL-10水平的浓度.结果 MACS分离的CD4+CD25+Treg细胞的纯度达83%～96%.体外培养中Treg组、T组和混合组IL-2和IL-10的平均水平分别为:(10.25±2.31)、(40.32±8.05)ng/L;(5 8.21±13.05)、(11.52±3.01)ng/L;(39.54±12.82)、(31.25±4.36)ng/L,数据差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 采用MACS系统两步法,可获得高纯度、具有免疫抑制功能的Treg细胞,该细胞对CD4+CD25-T细胞的免疫抑制作用可能是通过IL-10对IL-2的调节作用实现的.     

门静脉输注供者脾细胞诱导的供者特异性免疫低反应性

目的 探讨经门静脉输注供者脾细胞能否诱导皮肤移植小鼠产生供者特异性的免疫低反应性及其可能机制.方法 取Balb/c小鼠,随机分为空白对照组(经小鼠门静脉输注RPMI 1640培养液)、受者脾细胞组(经小鼠门静脉输注Balb/c小鼠脾细胞)、供者脾细胞组(经小鼠门静脉输注C57BL/6小鼠脾细胞)、空白移植对照组(经小鼠门静脉输注RPMI 1640培养液,7 d后移植C57BL/6小鼠的皮肤)、实验对照组(经小鼠门静脉输注Balb/c小鼠脾细胞,7 d后移植C57BL/6小鼠的皮肤)、实验组(经小鼠门静脉输注C57BL/6小鼠脾细胞,7 d后移植C57BL/6小鼠的皮肤)以及第三方移植组(经小鼠门静脉输注C57BL/6小鼠脾细胞,7 d后移植C3H小鼠的皮肤).记录空白移植对照组、实验对照组、实验组和第三方移植组移植皮肤的存活时间,并观察移植皮肤的病理学变化;脾细胞输注后7 d,分别获取空白对照组、受者脾细胞组和供者脾细胞组小鼠的外周血、脾脏和肝脏,用流式细胞仪测定样本中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞)的比例.结果 实验组移植皮肤的存活时间为(19.8±4.6)d,明显长于空白移植对照组、实验对照组和第三方移植组,但仍未达到长期存活.皮肤移植后7 d,空白移植对照组和实验对照组的移植皮肤呈现重度急性排斥反应的病理学改变,而实验组移植皮肤呈现中度急性排斥反应的病理学改变.供者脾细胞组外周血、肝脏和脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例明显高于空白对照组和受者脾细胞组.结论 门静脉输注供者脾细胞可特异性地延长供者皮肤移植物的存活时间,减轻移植物的排斥反应,该效应可能与受者体内的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞增加有关.     

Human CD4+CD25+ Regulatory T Cells Suppress Anti-Porcine Xenogeneic Responses

Due to the shortage of human organs, xenotransplantation is being explored as an alternative to allotransplantation, but immune rejection remains a major hurdle to its implementation. We tested the ability of human CD4+CD25+ T cells (Treg cells) to suppress CD4+ T cell-mediated anti-porcine xenoresponses usingin vitroassays. Human Treg cells were hyporesponsive to porcine cell stimulation and suppressed the proliferative response of CD4+CD25- T cells in a dose-dependent manner, and comparison of the allo- and xenoresponses indicated that more Treg cells might be required to suppress the xenogeneic response than the allogeneic response. Stimulation of CD4+CD25- T cells with porcine cells resulted in secretion of IFN-gamma, TNF-alpha, IL-10, IL-6 and IL-2, and Treg cells suppressed the secretion of these cytokines, as well as the CD4+CD25- T-cell cytolytic response against porcine cells. These results suggest a potential role for Treg cells in promoting xenograft survival.     

Attenuation of Donor‐Reactive T Cells Allows Effective Control of Allograft Rejection Using Regulatory T Cell Therapy

Regulatory T cells (Tregs) are essential for the establishment and maintenance of immune tolerance, suggesting a potential therapeutic role for Tregs in transplantation. However, Treg administration alone is insufficient in inducing long‐term allograft survival in normal hosts, likely due to the high frequency of alloreactive T cells. We hypothesized that a targeted reduction of alloreactive T effector cells would allow a therapeutic window for Treg efficacy. Here we show that preconditioning recipient mice with donor‐specific transfusion followed by cyclophosphamide treatment deleted 70–80% donor‐reactive T cells, but failed to prolong islet allograft survival. However, infusion of either 5 × 10⁶ Tregs with direct donor reactivity or 25 × 10⁶ polyclonal Tregs led to indefinite survival of BALB/c islets in more than 70% of preconditioned C57BL/6 recipients. Notably, protection of C3H islets in autoimmune nonobese diabetic mice required islet autoantigen‐specific Tregs together with polyclonal Tregs. Treg therapy led to significant reduction of CD8⁺ T cells and concomitant increase in endogenous Tregs among graft‐infiltrating cells early after transplantation. Together, these results demonstrate that reduction of the donor‐reactive T cells will be an important component of Treg‐based therapies in transplantation.