单克隆抗体标志乳胶凝集试验快速检测金黄色葡萄球菌及其耐药性

目的探讨金黄色葡萄球菌（SAU）的细菌学快速检测鉴定及其耐药性分析的试验方法。方法目标菌落先经传统鉴别方法怀疑葡萄球菌，采用Slidex MRSA Detection乳胶快速检测SAU菌株青霉素结合蛋白2a（PBP2a），确认耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）；设立SAU耐苯唑四林筛选试验对照，两组不符合菌株经PCR方法检测MceA基因确认。结果456株葡萄球菌中Slidex staph．plus乳胶凝集法阳性（鉴定为SAU）135株，135株凝集法阳性菌中最后确认为SAU127株，321株凝集法阴性菌最后确认为SAU11株，乳胶凝集法鉴定金黄色葡萄球菌灵敏度92．0％，特异性97．5％；Slidex MRSA Detection乳胶快速检测138株SA的PBP2a，阳性52株，138株SAU经苯唑西林筛选试验及PCR测定mceA基因，确定MRSA57株，乳胶凝集法快速检测SAU的PBP2a确定MRSA，灵敏度91．2％，特异性100％。结论单克隆抗体乳胶凝集法快速检测SAU及鉴定MRSA，具有较高灵敏度和特异性。     

微流芯片检测流感病毒多重逆转录聚合酶链反应产物的实验研究

[目的 ]　建立应用微流芯片检测甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒多重逆转录聚合酶链反应 (mRT -PCR)产物的方法 ,在mRT -PCR扩增核酸的基础上自动化灵敏的定量检测扩增产物 ,快速检测甲亚型、乙型流感病毒 ,帮助临床快速诊断和鉴别诊断其他呼吸道病毒感染 ,以及明确流感病毒在人群中感染、流行情况。　 [方法 ]　采用经MDCK细胞分离培养的甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒毒株病毒液 ,使用 3组特异引物经mRT -PCR扩增核酸 ,扩增产物分别采用毛细管电泳技术经Caliper10 0 0微流芯片分析仪自动化检测和经 2 %琼脂糖凝胶电泳法检测。　[结果 ]　设计三组引物对相应甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒靶基因的mRT -PCR扩增产物片段分别为 43 0bp、2 10bp、3 91bp ,本实验mRT -PCR扩增产物经 2 %琼脂糖凝胶电泳 ,与Marker比照 ,DNA条带基本在此位点附近 ;产物采用毛细管电泳法经Caliper10 0 0微流芯片分析仪后 ,分别于 413bp、2 0 3bp、3 79bp处出现陡峭的峰 ,如图所示。　[结论 ]　应用微流芯片采用毛细管电泳法可对流感病毒mRT -PCR产物进行定位及相对定量 ,有助于快速诊断流感病毒感染 ,有助于对流感的监测。     

2010年-2013年濮阳市脑炎、脑膜炎症候群细菌培养结果分析

目的对疑似脑炎、脑膜炎病例进行病原检测,明确濮阳市脑炎、脑膜炎病原菌分布构成。方法采取患者脑脊液、血液双份标本进行传统分离培养鉴定,脑脊液标本用乳胶凝集方法检测病原菌。结果 36例病例检出15种致病菌,病例全部为4岁以下儿童,男女比为1.18∶1,农村病例占91.67%(33/36),第一季度病例占所有阳性病例的44.44%。肺炎链球菌占阳性病例的30.56%(11/36),微球菌占阳性病例的16.67%(6/36),表皮葡萄球菌占阳性病例的8.33%(3/36),2012年的58份脑脊液标本乳胶凝集检测肺炎链球菌项目比常规培养多1份阳性,其他阳性结果一致。结论濮阳市脑炎、脑膜炎症候群细菌感染以G+球菌为主,肺炎链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌感染居多,春季相对高发,4岁以下农村幼儿是主要人群。乳胶凝集方法检测病原菌比传统培养鉴定方便快速,二者结合,对细菌性脑炎、脑膜炎监测、临床治疗及早选药有一定意义。     

新型冠状病毒RNA核酸的检测方法研究及应用

[目的 ]　研究和建立引起严重的急性呼吸道综合征 (SARS)的新型冠状病毒RNA核酸的检测方法。　 [方法 ]　使用一步法巢式逆转录聚合酶链扩增法 (RT -PCR)。　 [结果 ]　采自临床留观、疑似和临床诊断病人的 10 46份咽漱液 /咽拭子样品中 ,3份样品SARS冠状病毒RNA核酸为阳性 ;在 482份血清样品中 ,有 5份为阳性。　 [结论 ]　一步法巢式RT -PCR能检测患者急性期咽漱液 /咽拭子和血清样品中的新型冠状病毒RNA核酸 ,但样本采集的时间和咽漱液 /咽拭子采集的质量直接影响检测结果     

乳胶凝集法检测麻疹IgM抗体的应用

为了筛选敏感、特异、快速和经济的麻疹IgM抗体检测方法 ,比较了IgM抗体捕捉乳胶凝集法 (IgM PA)、IgM抗体捕捉酶联免疫吸附试验 (ELISA)法和IgM抗体间接ELISA法检测麻疹血清IgM抗体的优越性。用IgM PA法和两种ELISA法共检测 12 5份麻疹可疑病例和 30份正常儿童血清。结果表明 :三种方法检测 30名健康儿童血清均为阴性。检测 12 5份麻疹可疑病例血清 ,IgM PA检出阳性 80份 ,阳性检出率 6 4%;两种ELISA法检出阳性 75份 ,阳性检出率 6 0 %;两者差异无显著的统计学意义。IgM PA法检测可疑麻疹病人的敏感性为 10 0 %,特异性为 90 %。此方法操作简便 ,成本较低 ,适宜于地区和县级疾病预防控制机构应用。     

L-吡咯烷酮肽酶纸片快速筛检沙门菌的现场实验研究

[目的 ]　寻求快速筛选疑似沙门菌的新方法。　 [方法 ]　应用双糖管法和L -吡咯烷酮肽酶 (L -PYRase)纸片法对高桥地区 5 0 0 0份体检肛拭标本经增菌、培养后的可疑沙门菌 ( 4 84份 )进行筛检。　 [结果 ]　L -吡咯烷酮肽酶纸片法检出确切沙门菌的阳性率为 2 .0 7% ,双糖管法检出确切沙门菌的阳性率为 1.86% ,两种方法检出确切沙门菌的阳性率差异无显著性 ;双糖管法可疑阳性筛检率为 88.64 % ( 4 2 9/4 84) ,其中经证实的确切阳性率仅为 2 .10 % ( 9/4 2 9) ,即其假阳性率高达 97.90 % ;L -吡咯烷酮肽酶纸片法可疑阳性筛检率仅为 2 .0 7% ( 10 /4 84) ,但经证实的确切阳性率为10 0 .0 0 % ( 10 /10 ) ,无假阳性现象发生 ,两种方法可疑阳性筛检率差异有极显著性 ;纸片法灵敏度和特异性皆为 10 0 .0 0 %( 10 /10、474/4 74) ,而双糖管法的灵敏度为 90 .0 0 % ( 9/10 ) ,特异性仅为 11.60 % ( 5 5 /4 74)。　 [结论 ]　L -吡咯烷酮肽酶纸片法是一种准确、简便、快速的筛检沙门菌方法。     

多重PCR技术对贵州省肺炎链球菌脑膜炎病例病原分型的研究

目的研究用多重PCR技术对肺炎链球菌脑膜炎的病原进行分型。方法获取患者脑脊液标本,离心,上清液用乳胶凝集试剂进行抗原检测,沉淀进行革兰氏染色并提取其DNA。根据全国流行肺炎链球菌主要的血清型设计和合成9对特异性引物,优化多重PCR条件并对病原体DNA进行扩增,通过电泳对肺炎链球菌血清型进行初分类,然后用普通PCR对可疑血清型进行再次确定,最后对PCR产物进行测序和序列分析。结果乳胶凝集试验出现肺炎链球菌乳胶凝集颗粒,多重PCR分别在约600bp和220bp处出现阳性条带,考虑为CPSA和6B血清型;普通PCR进一步确认为CPSA和6B。测序后分析为肺炎链球菌血清群6,血清型为6A/6B/6C/6D-f。结论多重PCR技术由于使用的标本量少,且可以提高诊断速度、经济,故可以直接用于临床标本的肺炎链球菌血清分群/型。     

军团菌病流行病学调查及防制措施研究

[目的 ]　了解本区各种人群中军团菌感染情况 ;寻找较为理想的中央空调系统冷却水军团菌消除方法 ,为防制军团菌病提供科学依据。　 [方法 ]　收集各种人群血清用微量凝集法检测军团菌抗体。应用病例对照方法分析军团菌性肺炎特殊临床表现及感染危险因素。采用物理除菌方法进行现场军团菌杀灭效果对比实验。　 [结果 ]　本区各种人群军团菌抗体总阳性率为 7.5 9% ,肺炎及肺部感染者中军团菌抗体阳性率为 18.85 % ,中央空调冷却水军团菌培养阳性单位人群军团菌抗体阳性率比阴性单位高 4.0 9倍 ( χ2 =17.64 )。 2 3例军团菌性肺炎病例对照调查显示关节肌肉酸痛和胸痛是军团菌病较特异的临床体症 ,而发病前 2周曾去医院就诊或陪护及中央空调工作环境与军团菌的感染关系密切。应用ZG频谱式微电脑杀菌器做军团菌现场消除实验 ,经 72、2 40及 62 4h除菌效果观察均无军团菌生长 ,而对照组持续阳性 ,菌落数在 45～ 2 3 0cfu/mL。　 [结论 ]　本区各种人群中均存在军团菌的感染 ,应加强对辖区内商务大楼、宾馆饭店等中央空调冷却水的监测和卫生管理 ,对军团菌培养阳性 ,菌落数≥ 10 0 0cfu/mL应采取强制性控制措施。ZG微电脑杀菌器能有效杀灭军团菌。     

汕头市疑似流行性乙型脑炎病例检验方法比较

[目的]分析汕头市2003年34例疑似流行性乙脑病例的检验过程,探讨诊断方法的可靠性。[方法]采用病毒分离、间接免疫荧光法(IFA)和病毒中和试验对2种酶联免疫试剂(ELISA-1和ELISA-2)检测IgM抗体的结果进行验证。[结果]34例急性期标本(血清或脑脊液),乙脑病毒IgM抗体2例ELISA-1阳性,9例ELISA-2阳性,二者阳性结果无1例相同。用C6/36传代细胞对34例标本分离病毒,用IFA鉴定毒株,6例分离出乙脑病毒。经病毒中和试验检测急性期和恢复期双相血清,9例特异性抗体效价呈4倍增长,与ELISA-2检测结果一致。[结论]ELISA-2的特异性为100%(25/25)、敏感性为100%(9/9),可作为乙脑病例的早期快速诊断、鉴别诊断试剂。ELISA-1的特异性为92%(23/25)、敏感性为0(0/9),应淘汰。     

宁波市饮食服务从业人员梅毒抗体监测报告

[目的 ]　了解饮食、服务行业人员的梅毒抗体状况 ,探索防治措施。 [方法 ]　 1995～ 1999年我站对直管单位 2 90 95人采用快速血浆反应素环状卡片试验方法 ,进行梅素抗体检测 ,并对从业人员分布进行分析。 [结果 ]　 5年中共查出梅毒抗体阳性 77人 ,阳性率为 2 6 .47/万。其中 31～ 40岁组阳性率最高为 38.0 1/万 ;娱乐业阳性率为 6 1.0 2 /万 ;1995～ 1999年 ,阳性率由 4.35 /万上升至 48.10 /万。 [结论 ]　我市饮食、服务从业人员中梅毒抗体阳性检出率出现成倍上升趋势 ,应引起重视。     

二氧化氯对细菌DNA作用的观察

[目的]观察二氧化氯(ClO2)对细菌DNA损伤与致死效应之间的关系。[方法]联合运用凝胶电泳谱带分析、圆二色光谱和质粒转化率法。[结果]10mg/L和100mg/LClO2作用的总DNA电泳条带没有明显改变,1000mg/LClO2使DNA条带变窄但无弥散现象;100mg/LClO2作用后,DNA圆二色光谱两个负峰的振幅均有明显下降;分别以1、3和5倍于最小致死浓度的ClO2作用于含质粒的大肠杆菌,所提取的相应质粒对大肠杆菌DH5α的转化率分别降至对照组的(40.3±12.71)%、(31.261±5.57)%、(11±8.2)%。[结论]ClO2作用可导致DNA二级结构改变和菌内质粒转化率下降,但DNA可能不是二氧化氯杀菌作用的致死靶点。     

脉冲场电泳技术用于霍乱暴发的流行病学研究

[目的]探讨大连市2004年霍乱暴发中不同来源的霍乱弧菌之间的遗传相关性,进行同源性分析,并与表型分形、PCR检测CT毒素技术进行比较。[方法]2007年,选择2004年大连市霍乱暴发、散发疫情分离的34株稻叶型霍乱代表菌株,经噬菌体-生物分型和PCR技术检测CT毒素基因后,进行脉冲场电泳(PFGE)分型。[结果]分离自霍乱患者的22株霍乱菌株均为稻叶1b型,CT阳性。分离自暴发地区自备水的6株霍乱菌株为稻叶1b型,CT阳性。分离自市内外环境的5株霍乱菌株为非流行株,CT阴性。检测的34株霍乱弧菌PFGE分型为2大亚类4种带型,其中从金州区散发、开发区暴发疫点获得的人源菌株在PFGE图谱上带型相同,为2型;其他分离自散发病例的菌株在PFGE图谱上同优势2型的相似性分别高达97.50%、97.10%;分离自暴发地区自备水的霍乱菌株PFGE带型同样为2型,来自市内外环境的霍乱菌株PFGE带型都为4型,同优势2带型有很大差异。[结论]霍乱流行期间分离于患者和疫点自备水的霍乱弧菌PFGE图谱基本一致,与外环境分离的非流行株关系较远。     

溴氰菊酯处理蚊帐的毒理学安全性研究

目的对溴氰菊酯处理蚊帐的毒理学安全性进行初步评价。方法采用急性经口毒性试验,急性经皮毒性试验,眼刺激试验,多次皮肤刺激试验,致敏试验和28天反复吸入毒性试验,对溴氰菊酯处理蚊帐进行毒理学评价。结果溴氰菊酯处理蚊帐急性经口LD50大于5 000 mg/kg,急性经皮LD50大于5 000 mg/kg,对眼有轻微刺激性;无皮肤刺激性,为弱致敏物。28天毒性试验表明模拟人类使用环境,置于悬挂溴氰菊酯处理蚊帐中的实验动物无明显不良影响。结论溴氰菊酯处理蚊帐对实验动物无明显毒性,但如何全面评价溴氰菊酯处理蚊帐的安全性有待进一步探索。     

甲醛速测盒与乙酰丙酮法在检测水产品和水发产品中甲醛的对比试验

目的证实甲醛速测盒在检测水产品和水发产品中甲醛的可靠性。方法采用甲醛速测盒与乙酰丙酮法进行水产品和水发产品中甲醛的检测对比试验。结果通过531批次的甲醛速测盒定性测定与乙酰丙酮法的定量分析比较，大于5mg／k的批次中，阳性符合率为99．2％。结论甲醛速测盒适合现场检测与大批样品的筛选检测。     

胶体金法与病毒分离鉴定在流感诊断中的比较

[目的]比较流感病毒胶体金法快速诊断试剂盒与病毒分离鉴定方法在临床诊断应用中的优劣。[方法]采集临床流感样病人(ILI)鼻拭子标本,分别使用流感病毒胶体金法快速诊断试剂盒及病毒分离鉴定方法予以检测。[结果]2006年1月—2007年3月对851份样本进行现场快速检测,流感抗原阳性标本189份,阳性率为22.21%,其中A型为164份,B型为25份。在851份鼻拭子标本中分离到133株流感病毒株,其中125份为流感快速检测阳性标本。流感胶体金法快速检测试剂的灵敏度为93.98%,特异度为91.09%。[结论]采用胶体金法流感快速诊断试剂对早期流感样病人进行检测,能及时区别流感与其他上呼吸道感染,在临床诊治和流感爆发疫情处理上具有重要意义。     

Detection of lipopolysaccharide in suspected bacteriuric urine using a carbocyanine dye.

Currently practiced methods for the detection of gram negative bacteriuria require culturing and overnight incubation. Such an approach to bacteriuria detection is unacceptable for any screening program which requires rapid presumptive evidence of infection. In this study, the lipopolysaccharide-dependent formation of a unique dye absorption spectra of the cationic carbocyanine dye, 1-ethyl-2-[3-(1-ethylnaphtho[1,2d]-thiazolin-2-ylidene)-2-methylpropenyl] naphtho[1,2d]-thiazolium bromide, was used to detect bacteriuria caused by gram negative organisms in a hospitalized population. In an evaluation of 168 first morning and randomly collected suspected bacteriuric urines, the dye test detected 66% of the loop plate positive urines with false positive and false negative values of 28% and 34%, respectively. However, 37% of the false positive results occurred in urines containing less than 10(5) gram negative bacteria/ml and an additional 24% of the false positives were seen for patients currently receiving antibiotic treatment. Urine specimens were also evaluated using the limulus lysate assay for lipopolysaccharide.     

吸烟致大鼠肺组织蛋白质电泳图谱的改变

[目的]用双向电泳法测定烟草烟雾染毒大鼠肺组织差异蛋白的表达。[方法]雄性Wistar大鼠20只,平均体重(150±10)g,随机分为4组,每组5只。其中,3组为吸烟组,分别暴露于动式气体染毒装置进行烟草烟雾染毒1个月、2个月和4个月,每天2次,每次30min;另1组为不吸烟对照组,按常规饲养于动物房。分离不同剂量组大鼠肺组织,提取总蛋白,进行双向电泳测定。用ImageMaster2D Platinum软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异表达的蛋白质。[结果]病理切片显示吸烟组大鼠肺气肿改变明显,支气管炎症反应逐渐加重。双向电泳结果显示吸烟组大鼠肺组织总蛋白数增加,与对照组相比,有28个差异表达的蛋白点数,其中16个表达上调,12个表达下调。表达上调的蛋白点中,6个仅在吸烟组表达;下调的点中5个仅在对照组表达。[结论]双向电泳是一种有效的分离肺组织总蛋白的方法,烟草烟雾染毒可致大鼠发生肺气肿和支气管炎症反应,并引起大鼠肺组织蛋白质双向电泳图谱的改变。     

氢化物原子荧光法测定水中砷

[目的]应用氢化物原子荧光法测定水中砷含量的方法。[方法]样品处理后以氢化物原子荧光法测定。[结果]本方法检出限为1．0μg／L,在0～20．0μg／L范围内,线性关系良好,r=0．9996,回收率98．3％～100．2％。[结论]本法操作简便、快速,适合测定水中砷。     

某污灌区大白菜中有机提取物对小鼠的遗传毒性

[目的]研究污灌区大白菜有机提取物对小鼠的DNA损伤.[方法]以某污灌农田产出的大白菜为处理因素(下称"污灌区"),地下水灌溉的大白菜为对照(下称"对照区"),采用超声振荡法提取白菜中的有机污染物,灌胃法染毒.小鼠共分5组:试剂对照组(二甲亚砜)、对照区低剂量组、对照区高剂量组、污灌区低剂量组及污灌区高剂量组.每日染毒1次,连续染毒2周.用单细胞凝胶电泳实验和徼核试验检测白菜有机提取物对小鼠的DNA损伤情况.[结果]单细胞凝胶电泳实验:与试剂对照组比较,污灌区低剂量组拖尾长度增加(P＜0.05);污灌区高剂量组拖尾率、拖尾长度均增加(P＜0.05);且污灌区高剂量组拖尾率高于对照区高剂量组.微核试验:污灌区高剂量组微核率高于试剂对照组(P＜0.05). [结论]该污灌区白菜中含有致小鼠遗传毒性的有机污染物.     

饼干中食用色素日落黄的快速测定法

目的建立饼干中食用色素日落黄的快速测定方法。方法使用自制的样品处理装置,简便快速地提取日落黄,用高效液相色谱法测定。结果日落黄含量在1.0～10.0 mg/L范围内相关系数为0.999 8,检出限为0.30 mg/L。相对标准偏差为1.64%～5.70%,回收率为87.2%～94.0%。结论该方法简便易行,结果准确可靠,适用于大批量样品的检测。