PEDF和VEGF在翼状胬肉组织中的不平衡表达

目的 检测翼状胬肉组织中血管生长因子VEGF、FGF-2和抑制因子PEDF的表达，以研究PEDF在翼状胬肉发展中所起作用。方法 用免疫荧光组化法及免疫印迹法对9例原发性翼状胬肉组织进行PEDF、VEGF及FGF-2的检测、分析，并与8例正常人结膜、角膜组织进行对照研究。结果 PEDF在正常人结膜、角膜上皮中高表达，而在翼状胬肉组织中没有或弱表达。VEGF和FGF-2在翼状胬肉组织中高表达，而在正常人结膜、角膜组织中表达较弱。结论 在翼状胬肉组织中血管生长抑制因子PEDF没有或弱表达，而血管生长因子VEGF和FGF-2高表达，提示两者不平衡表达引起纤维血管增生。     

翼状胬肉与正常角膜和结膜的PEDF和VEGF水平

目的　研究色素上皮衍生因子 (PigmentEpithelium -DerivedFactor ,PEDF)及血管内皮生长因子 (VascularEndothelialGrowthFactor ,VEGF)在翼状胬肉和正常角膜及结膜组织中表达水平的差异。方法　 2 7例胬肉组织均取自原发性翼状胬肉患者 ,12例正常人结膜和 8例正常人角膜组织均来源于无眼病的供体眼或活体手术眼。采用WesternBlot测定翼状胬肉、正常角膜和正常结膜组织的PEDF和VEGF水平。结果　翼状胬肉的平均PEDF水平显著低于正常角膜 (P <0 0 1)和结膜 (P <0 0 1) ,仅相当于正常角膜的 1%、结膜的 13 % ;但其VEGF水平明显高于正常角膜 (P <0 0 1)和结膜 (P<0 0 5 ) ,是正常角膜的 10 0倍、结膜的 2倍。结论　与正常角膜和结膜相比 ,翼状胬肉的PEDF水平低而VEGF水平高。这种低水平的PEDF在翼状胬肉的形成与发展中可能起了重要作用     

翼状胬肉中Ki-67和VEGF的表达

目的了解Ki-67和VEGF在翼状胬肉组织中的表达。方法用免疫组织化学SP法对36例初发型翼状胬肉患者切除的翼状胬状组织进行Ki-67和VEGF的检测并与正常人结膜组织进行对照。结果Ki-67在所有的翼状胬肉组织上皮中均有表达,头部最为明显,全层均有不同程度的表达。在正常的结膜上皮内对Ki-67的表达较胬肉上皮明显减弱,仅在基底细胞层散在表达。VEGF在翼状胬肉上皮明显减弱,仅在基底细胞层散在表达。VEGF在翼状胬肉上皮基底细胞层细胞,血管内皮细胞以及成纤维细胞有阳性表达。结论翼状胬肉组织上皮中有Ki-67和VEGF的过度表达,提示翼状胬肉组织上皮中存在增殖调控的异常,上皮细胞可能发生了转化,上皮细胞在翼状胬肉的发生发展中可能起着关键的作用。     

翼状胬肉组织中Bcl-2和ICAM-1的表达

目的:研究翼状胬肉组织中Bcl-2和细胞间粘附分子–1(ICAM-1)的表达,以及Bcl-2和ICAM-1表达间的关系。方法:应用免疫组织化学法检测30例翼状胬肉组织中Bcl-2和ICAM-1的表达,并与正常结膜组织进行比较。结果:翼状胬肉组织中Bcl-2和ICAM-1的表达均明显高于正常结膜组织(χ2=5.92和χ2=6.65,P<0.01);翼状胬肉的临床分型与Bcl-2和ICAM-1的阳性表达有关﹙P<0.05﹚;翼状胬肉组织中Bcl-2和ICAM-1阳性表达间存在非常显著正相关﹙r=0.628,P<0.01﹚。结论:翼状胬肉组织中Bcl-2和ICAM-1的表达增加,在翼状胬肉的发生和发展中可能通过调控细胞增殖和细胞凋亡起着重要的作用。     

VEGF和CCR3在翼状胬肉组织中的表达及意义

目的：探究血管内皮生长因子(VEGF)及趋化因子受体3(CCR3)在翼状胬肉组织中的表达及意义。

方法：纳入行翼状胬肉切除联合自体结膜瓣移植术的患者18例18眼,术中取翼状胬肉组织; 行巩膜扣带环扎术的孔源性视网膜脱离患者14例14眼,术中取鼻侧球结膜组织。采用HE染色法观察翼状胬肉和正常结膜的组织学差异,采用免疫化学法分析VEGF和CCR3的表达水平,采用qRT-PCR法检测VEGF和CCR3 mRNA的表达水平。

结果：与正常结膜组织相比,翼状胬肉组织上皮层明显增厚,基质层组织排列紊乱,且VEGF(0.69±0.0875 vs 0.05±0.0024)和CCR3(0.45±0.0248 vs 0.03±0.0074)表达水平显著升高(均P<0.01)。翼状胬肉组织中VEGF mRNA表达水平约为正常结膜组织的12倍(12.33±2.84 vs 1.00±0.08),CCR3 mRNA的表达水平约为正常结膜组织的160倍(159.60±34.15 vs 1.00±0.09)。

结论：翼状胬肉组织中VEGF和CCR3表达明显升高,提示二者可能参与翼状胬肉的发生,促进疾病的发展。     

组织因子在翼状胬肉中的表达

目的探讨组织因子(tissuefactor,TF)在初发型进展期翼状胬肉中的异常表达。方法用免疫组织化学方法对30例初发型翼状胬肉中TF表达情况进行检测,并与20人正常球结膜组织对照。结果在翼状胬肉组织中,TF主要表达于上皮细胞胞质,在正常球结膜组织中TF无表达或呈弱阳性表达;其中初发型翼状胬肉组织中的阳性表达率为86.67%,在正常球结膜组织中的阳性表达率为15.00%,二者比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论 TF在翼状胬肉中的高表达提示TF可能在翼状胬肉发病机制中起作用,选择性的TF抑制剂有可能成为治疗翼状胬肉的新靶点。     

自身角膜缘结膜移植治疗翼状胬肉

目前治疗翼状胬肉（以下简称胬肉）仍以手术切除为主。手术方式很多,现将我院1994年12月至1999年12月在显微镜下行翼状胬肉切除术及自身角膜缘结膜移植术的体会报告如下。     

自体角膜缘干细胞球结膜移植治疗翼状胬肉

目的 探讨自体角膜缘干细胞球结膜移植治疗翼状胬肉的疗效以及显微手术技术的有关要点。方法 应用自体角膜缘干细胞球结膜移植治疗翼状胬肉38例52祗眼,其中静止期翼状胬肉13例22祗眼。活动期25例30祗眼,包括复发性胬肉3例4祗眼,隋访期最长18个月。最短6个月。结果 经过平均11.80个月观察,祗有1眼胬肉术后复发（占52祗眼的1.92%),其余病例无复发,角膜上皮稳定,泪膜正常,供区角膜创面正常愈合,结论 本术式是目前治疗翼状胬肉最为安全有效的方法。     

带角膜缘结膜瓣移位治疗翼状胬肉

目的探讨应用带角膜缘结膜瓣移位治疗翼状胬肉的术后疗效和复发率。方法41例44眼翼状胬肉，术中切除胬肉行带角膜缘结膜瓣移位至术区，术后随访6个月～2年。结果术后有2例3眼复发性胬肉再次复发，原发性胬肉无复发，复发率6．8％。结论带角膜缘结膜瓣移位治疗翼状胬肉术后疗效显著，复发率低。     

翼状胬肉切除自体角膜上皮和结膜移植观察

目的观察在手术显微镜下翼状胬肉切除联合自体纯角膜上皮和纯结膜组织移植的临床效果。方法对36例(36眼)鼻侧球结膜原发性翼状胬肉行手术显微镜下切除,并将术眼的颞上侧单纯角膜上皮和单纯结膜组织分别移植到术后角膜创面和结膜缺损(巩膜裸露)处,观察角膜创面上皮修复速度及结膜植片的血管化过程。结果随访观察5～16月,平均10月。36例全部治愈无复发者。角膜上皮植片两天内修复透明光滑,结膜植片2周血管化完成。结论翼状胬肉切除联合自体纯角膜上皮和纯结膜组织移植,取材方便,无排斥反应,术后伤口愈合快,复发率低。     

糖尿病视网膜病变发病机制中VEGF与PEDF的研究进展

糖尿病视网膜病变(diabeic retinopathy,DR)是糖尿病最常见和最严重微血管并发症之一,其基本病理改变是血-视网膜屏障(blood retinal barrier,BRB)破坏,新生血管形成.后期新生血管膜收缩牵拉视网膜脱离.DR的发病机制十分复杂,至今尚未完全阐明.任何病理改变在本质上均是体内动态平衡的失调,新生血管的形成亦然,血管刺激因素增强和(或)抑制因素减少使两者平衡失调即所谓的"血管生成开关".血管内皮生长因子(vascuar endothelial growth factor,VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF) 作为血管牛成因子与血管抑制因子的一对典型代表,在糖尿病视网膜病变中的作用已逐渐被人们认识.本文就二者在糖尿病视网膜病变中作用的研究进展做一综述.并为DR的相关药物治疗提供思路.     

EphrinB2 and EphB4 expression in pterygia: new insights and preliminary results

Objective: Pterygium is a growth of fibrovascular tissue onto the cornea, in which the mechanisms of cell proliferation and vascularization are unknown. The ephrin-Eph system, especially ephrinB2 and its receptor EphB4, has been shown to play an important role in tumor angiogenesis. EphrinB2 and EphB4 have also been reportedly involved in the pathogenesis of ocular angiogenesis. This study was designed to investigate the expression of ephrinB2 and its receptor EphB4 in pterygia.Design: Experimental study of the expression of ephrinB2 and its receptor EphB4 in pterygia.Participants: Twenty-three primary pterygia, 5 recurrent pterygia, and 11 normal conjunctiva were studied.Methods: Immunohistochemistry studies were used to assess ephrinB2 and EphB4 protein expression levels and the tissue distribution in the samples.Results: EphrinB2 and EphB4 staining was present at a dense level in the total epithelium of the head portions of both primary and recurrent pterygial specimens, although just in the basal and parabasal layer of the epithelium of most of the normal conjunctivae.Conclusions: EphrinB2 and EphB4 appear to be overexpressed in pterygium, and they may play important roles in its development.     

HIF-1与VEGF在翼状胬肉中的表达及意义

目的研究缺氧诱导因子-1（HIF-1）与血管内皮生长因子（VEGF）在翼状胬肉组织中的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学法研究HIF-1与VEGF分别在32例翼状胬肉与11例人正常球结膜组织中的表达。结果32例翼状胬肉中HIF-1的阳性表达率为62.5%（20/32）,VEGF的阳性表达率为84.8%（27/32）,11例正常结膜组织中HIF-1的阳性表达率为9.1%（1/11）,VEGF的阳性表达率为18.2%（2/11）,正常球结膜与翼状胬肉组织中HIF-1与VEGF的表达差异有统计学意义,且翼状胬肉中HIF-1与VEGF的表达呈正相关（P〈0.05）。结论HIF-1及VEGF在翼状胬肉中高表达,提示其可能参与了翼状胬肉的发生和发展。HIF-1与VEGF在翼状胬肉中的表达呈正相关,提示在翼状胬肉中HIF-1可能参与了对VEGF的调控。     

大鼠PEDF基因的克隆及腺病毒表达载体的构建

目的构建PEDF基因腺病毒表达载体，为基因治疗年龄相关性黄斑变性（AMD）奠定基础。方法从大鼠视网膜组织中提取总RNA，RT—PCR扩增PEDF基因cDNA，并将回收的PEDF基因克隆人质粒pGEM—Teasy载体中，亚克隆人腺病毒表达载体质粒pDC316中，DNA序列分析加以证实。利用腺病毒Admax系统，通过含有目的基因片段PEDF的穿梭载体pDC316／PEDF和病毒骨架质粒共转染293细胞的方法包装出重组腺病毒AdPEDF。Western Blot对重组腺病毒进行鉴定。结果基因测序表明PEDF基因包含了大鼠PEDF基因阅读框内的全部序列，与NCBI Sequence Viewer中公布的大鼠PEDF mRNA序列（NM-177927）完全一致。获得了表达PEDF蛋白的重组腺病毒。结论成功构建了PEDF基因腺病毒表达载体，为进一步研究基因治疗脉络膜新生血管奠定了基础。     

Corneal and conjunctival findings after mitomycin C application in pterygium surgery: an in‐vivo confocal microscopy study

Purpose: To perform a qualitative assessment of the topical side‐effects of mitomycin C on cornea after pterygium surgery. Methods: In‐vivo confocal microscopy (Heidelberg Retina Tomograph II in combination with the Rostock Cornea Module) was performed in 10 patients with unilateral primary pterygium. Mitomycin C 0.02% was applied topically to seven eyes for 5 min intraoperatively and twice daily for 5 days postoperatively. Three eyes underwent surgery without application of cytostatic agent. Patient follow‐up was 1 month. Results: After application of mitomycin C, complete epithelialization of the operated zone was found 2 weeks after surgery. In‐vivo confocal microscopy revealed signs of superficial punctate keratitis for 2 weeks in the central cornea only after application of mitomycin C. The presence of epithelial and stromal oedema in this group was noted for up to 2 weeks in the central cornea and for up to 4 weeks in the operated zone. In the control group, complete epithelialization was found after 1 week; there were no signs of oedema after 1 week in the central cornea or after 2 weeks in the operated zone. Leucocyte infiltration and increased Langerhans cell density were noted in both groups in the operated and central zones. Analysis of the conjunctiva revealed a decrease in goblet cell density following cytostatic application. Conclusion: Local application of mitomycin C delays corneal epithelialization, and prolongs postoperative epithelial and stromal oedema in both the centre and periphery. Moreover, signs of punctate keratitis were noted 2 weeks after surgery in central intact cornea. Nevertheless, in‐vivo confocal microscopy shows that these changes are reversible 4 weeks after application of mitomycin C 0.02%.     

色素上皮衍生因子基因修饰的人脐带间充质干细胞对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　观察色素上皮衍生因子色素上皮衍生因子（pigment epithelial-derived factor,PEDF）基因修饰的人脐带间充质干细胞（pigment epithelial-derived factor gene-modified human umbilical cord mesenchymal stem cells,PEDF-MSCs）对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI）模型中PEDF、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响及对视网膜神经节细胞的保护作用。方法　绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记的慢病毒（lentivirus,LV）为载体,将PEDF基因以感染复数（multiplicity of infection,MOI）为1、10、20、50体外转染至人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）中,应用RT-PCR及ELISA法分别检测以最佳MOI值转染细胞中PEDF的表达情况。选取健康SD雄性大鼠,采用高眼压的方法制成RIRI模型,随机分为正常对照组（N组）、磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline,PBS）治疗组（PBS组）、hUCMSCs治疗组（M组）及 PEDF基因转染的hUCMSLs治疗组（P组）;N组不予特殊处理,其余三组大鼠造模成功后立即进行干预治疗,PBS组给予PBS治疗,P组与M组分别给予 PEDF-MSCs、hUCMSCs治疗。5 d后处死大鼠,尼氏染色计数视网膜神经节细胞数目,计算视网膜内层厚度,RT-PCR检测大鼠视网膜 PEDF和VEGF的mRNA表达情况。结果　荧光显微镜下观察到转染率高达75.8％。RT-PCR结果显示,转染后PEDF-MSCs的上清液中PEDF mRNA相对表达量（4.34±0.29)明显高于hUCMSCs(1.08±0.15),差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA检测结果显示,转染后 PEDF-MSCs上清液中PEDF蛋白表达量［（83.09±7.58）μg·L^-1］明显高于hUCMSCs［（12.30±1.24）μg·L^-1］,差异有统计学意义（P<0.05）。尼氏染色结果显示造模后PBS组大鼠神经节细胞数量变少,治疗5 d后,P组、M组大鼠神经节细胞数量均高于PBS组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;P组高于M组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗5 d后,P组、M组大鼠视网膜厚度均厚于PBS组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;P组厚于M组。RT-PCR检测结果显示,P组PEDF mRNA表达水平显著升高,VEGF mRNA 表达水平下降,与PBS组、M组相比差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　玻璃体内注射PEDF-MSCs能上调RIRI模型大鼠视网膜PEDF表达,并下调VEGF 表达,对RIRI大鼠视网膜神经节细胞有保护作用。