实时荧光定量RT-PCR检测急性白血病中Bmi-1基因mRNA的表达及意义

[目的]建立荧光实时定量RT—PCR（FQRT—PCR）检测Bmi—1基因mRNA的方法并研究该基因在急性白血病细胞中表达的意义。[方法]根据Genbank提供的序列,设计目的基因Bmi-1及内参基因GAPDH的扩增引物,将Bmi-1及GAPDHRT—PCR扩增片段克隆入载体pMDl8-Tsimple,经测序鉴定正确后,进行纯化、定量及系列稀释,应用SYBRGreenI荧光染料,建立检测Bmi-1mRNA的FQRT—PCR方法,并对其线性及特异性进行评价。应用此方法检测21例急性白血病及10例健康人外周抗凝血中Bmi-1mRNA的表达水平。【结果]该方法的线性范围为1．0×10^3-1．0×10^8eopies／txL,相关系数为-1．00,熔解曲线分析扩增产物显示单-的峰,熔解温度（Tm）为80．4℃。急性白血病患者的相对表达量为0．56±0．12,健康对照组中Bmi-1mRNA的相对表达量为0．19±0．08,两者的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。[结论]实时荧光定量RT—PCR方法检测Bmi-1基因表达,具有高敏感性和高特异性等优点,可作为进-步研究Bmi-1基因的方法。Bmi-1基因参与急性白血病的发生,可能是一种新的肿瘤标志物。     

实时荧光RT-PCR定量检测BRMS1基因表达

目的建立一种实时荧光RT-PCR定量检测乳腺组织中BRMS1mRNA表达水平的方法。方法采明逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增目的基因片段,并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,计算出待测样本中BRMS1mRNA含量,并以BRMS1mRNA与GAPDHmRNA的比值作为BRMS1mRNA的表达水平。结果实时荧光RT-PCR检测BRMS1及GAPDH的线性范围为4×102-4×108拷贝/μl。批内和批间变异系数分别为3.9%-4.6%和4.8%-5.5%。BRMS1mRNA表达范围为0-1.65.结论实时荧光定量检测BRMS1mRNA含量的方法具有较高的灵敏度和较好的重复性。     

地佐环平对边缘叶癫痫发作大鼠海马P-糖蛋白表达的影响

目的 观察兴奋性谷氨酸受体（NMDA受体）拮抗剂地佐环平（MK801）对边缘叶癫痫大鼠发作后P-糖蛋白（P—gp）表达的影响,探讨NMDA受体是否能对癫痫发作后P—gp表达进行调控。方法 制备氯化锂．匹罗卡品癫痫发作大鼠模型,60只大鼠,随机分为6组：对照组、癫痫发作终止后0、3、6、24和72h组,用实时荧光定量RT-PCR检测癫痫大鼠发作终止后不同时程海马组织P—gp mRNA的表达。另取60只大鼠随机分为对照组、癫痫持续状态发作模型（SE）组、MK801干预组,各组均分为发作终止后6h和24h时间点。用实时荧光定量RT—PCR检测癫痫发作终止后6h大鼠海马P-gp mRNA的表达,用免疫组化检测大鼠癫痫发作终止后24h海马组织P—gp蛋白的表达。结果 癫痫发作终止后72h内的所有动物海马组织多药耐药基因1a（mdr1a）的表达均显著高于对照组,SE终止即刻其表达显著升高[5．6（2．9）×10^5 mRNA拷贝数／40ng总RNA,P〈0．05],SE终止后3h时其表达进一步升高[7．6（6．3）×10^5,P〈0．01],此后至SE终止后72h,mdrla mRNA的表达一直维持在该水平;mdr1b的表达在边缘叶发作动物呈一过性增高,发作终止后3、6h[分别为（3．3±0．4）×10^4和（3．6±1．0）×10^4,为对照组的2．2、2．4倍]均明显高于对照组（P〈0．01）。另外,在发作终止后6h时,MK801组mdr1a[（4．3±0．8）×10^5]和mdr1b[（2．0±0．7）×10^4]基因表达明显低于SE组（P〈0．01）;发作终止24h时,MK801组P—gp[（26．6±5．0）个微血管／400倍视野]蛋白表达也明显低于SE组[（39．0±4．1）个微血管／400倍视野,P〈0．01]。结论 NMDA受体拮抗剂MK801下调癫痫大鼠发作后P-gp的过度表达,提示NMDA受体可能参与癫痫发作过程中P—gp表达的调控,有效抑制NMDA受体的过度活化可能有助于防止癫痫发作后P—gp的过度表达。     

双黄连抑制流感病毒甲_1型基因的研究

目的建立实时荧光定量RT-PCR检测流感病毒甲1型多聚酶蛋白（PA）基因,了解双黄连作用病毒的效应。方法采用实时荧光定量RT-PCR法标准曲线测药物抑制甲1型PA病毒基因效应。结果以实时荧光RT-PCR法,重复测7次取平均值,对照组病毒基因为3.62×10^6±0.90拷贝数/mg,试验组病毒基因为4.57×10^5±1.23拷贝数/mg。发现病毒对照组基因明显高于试验组（P〈0.001）。结论提示双黄连可抑制流感病毒甲1型基因。     

实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中PRL-2基因的表达

【目的】建立TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测肝细胞再生磷酸酯酶2（PRL-2）mRNA表达水平，并应用该法检测原发性肝细胞癌中PRL-2基因的表达。【方法】构建含PRL-2基因开放阅读框架的T载体．制作标准曲线。提取手术切除12例人肝癌、门静脉癌栓（PVTT）和癌旁组织总RNA并逆转录为cDNA。应用实时荧光定量PCR法观察人肝细胞癌组织和门静脉癌栓及癌旁组织中PRL-2的表达水平。【结果】线性检测范围达5个数量级，最低检测下限为1×10^2拷贝，最高检测上限为1×10^6拷贝。PRL-2在所有的门脉癌栓及10例肝癌组织表达，仅在4例癌旁组织中表达。门脉癌栓PRL-2mRNA表达水平显著高于肝癌及癌旁组织（P〈0．01），肝癌组织表达显著高于癌旁组织（P〈0．01）。【结论】实时荧光定量PCR可以准确定量测定PRL-2基因的表达：PRL-2基因在门脉癌栓的更高表达提示其在肝细胞癌的发生、转移中可能起重要作用。     

非小细胞肺癌患者血中pin1 mRNA的表达及肺血管处理顺序的影响

目的：检测pin1 mRNA在非小细胞肺癌（NSCLC）患者循环血中的表达情况并探讨肺动静脉结扎顺序的影响及临床意义。方法：选择接受根治性手术的原发性NSCLC患者26例，按预定的结扎血管顺序术前将病例随机分为先结扎肺静脉组（PV组）和先结扎肺动脉组（PA组）。分另4采集其术前（麻醉后）外周血标本、术中结扎肺静脉后近心端和远心端血标本及术后第7天外周血标本。选择10例需手术治疗的肺部良性疾病患者作为对照，以10例健康人作为阴性对照。运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法定量检测患者循环血中pin1 mRNA的表达。结果：肺癌患者循环血中pin1 mRNA表达量显著高于肺部良性病变患者和正常人（分别为1．45-29．86，0．83—1．26，P＜0．05）；m期患者pin1 mRNA的表达量高于Ⅰ-Ⅱ期（分别为18．48±1．64，10．57±1．05，P＜0．05）；有淋巴结转移者pin1 mRNA表达量高于无淋巴结转移者（分别为18．93±2．10，10．02±1．23，P＜0．05）；肺静脉远心端的表达量高于近心端的表达量（分别为30．56±1．37，20．31±1．48，P＜0．05）；手术后1周的表达情况显著低于术前（分别为20．68±1．17，29．43±2．62，P＜0．05）；PV组的pin1 mRNA在肺静脉近心端表达低于PA组（分别为9．95±0．91，14．71±1．64，P＞0．05），在肺静脉远心端表达高于PA组（分别为16．84±2．36，13．36±1．78，P＞0．05）。结论：pin1 mRNA在NSCLC患者血液中有高表达，肺癌根治术术中先结扎肺静脉可在一定程度上减少pin1 mRNA在血中的表达即减少癌细胞入血。     

热化疗对结肠癌LOVO细胞胞嘧啶脱氨酶基因表达的影响

目的：探讨温热疗法对转染胞嘧啶脱氨酶基因的基因表达有无影响。方法：脂质体法将质粒GICEACDNa转染结肠癌LOVO细胞,G418筛选抗体克隆并扩增,给予前药5-氟胞嘧啶（5-FC）进行热化疗;以beta—actin为内参照用实时荧光定量PCR检测热化疗前后CD基因表达量有无变化。结果：实时荧光定量PCR（Real-TimeRT—PCR）检测得到热化疗前CD基因表达的ct值29．53土1．1974,beta—actinct值20．82±2．7385;热化疗后CD基因表达的ct值30．285±1．201,beta—actinct值21．225±2．237;行△△Ct法进行相对定量比较无明显差异（P〉0．05,t=1．4521,v=38）。结论：温热疗法对转染G1CEACDNa的LOVO细胞CD基因的表达无明显影响。     

科技期刊论文中参数与偏差范围的表示

1）数值范围：五至十可写为5-10；3×10^3～8×10^3，不能写成3-8×10^3。 2）百分数范围：20％-30％不能写成20-30％。     

实时定量RT-PCR方法检测豚鼠TSHR免疫BALB/c小鼠甲状腺TSHR的表达

目的：建立外标准法SYBR GREENI实时定量（real—time）RT—PCR方法，以检测豚鼠TSHR分子免疫对BALB／c小鼠甲状腺TSHRmRNA的表达的影响。方珐：取正常BALB／c小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA．逆转录后进行PCR，得到333bp扩增产物。经回收纯化后作为real—time PCR的标准品。稀释为10^6、10^5、10^4、10^3、10^2、10^1拷贝，制作标准曲线；并同时进行普通PCR，比较其灵敏度。优化反应条件使溶解曲线有特异扩增。检测豚鼠TSHR分子免疫的BALB／c小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达。结果：建立的外标准法SYBR GREENI实时定量RT—PCR方法可以灵敏的检测到10copy的核酸，灵敏度为普通PCR的10^4倍；溶解曲线只有特异峰，溶解温度为82．9℃。没有明显的引物二聚体和非特异峰出现。不同标准点批间变异系数范围为5．8％．14．3％（n=6）。与对照组比较，TSHR大分子免疫的BALB／c小鼠甲状腺组织TSHR mRNA水平显著升高（P〈0．05）。结论：外标准法SYBR GREENI实时定量lit—PCR具有灵敏度高，特异性强，重复性好的特点，比普通PCR更精确地检测出小鼠甲状腺组织TSHR mRNA的水平。     

荧光定量聚合酶链式反应联合检测性病病原微生物

目的：探讨荧光定量PCR联合检测性病病原体的,临床价值。方法：用荧光定理PCR（FQ—PCR）方法,对淋球菌（NGH）、沙眼衣原体（CT）、解脲支原体（UU）、梅毒螺旋体（TP）4种性病病原微生物进行定量测定,并与定性PCR比较。结果：两种PCR方法对NGH、CT、UU、和TP四种病原体检测的总符合率分别为94．83％、89．02％、95．79％、和95．65％,阳性率差异分别为1．72％、1．22％、2．11％和0,两种方法阳性率差异均无显著性意义（P〉0．05）。阳性标本定量平均拷贝数对数分别为6．71±3．36、5．56±2．48、6．83±3．17和4．89±3．52。结论：FQ—PCR操作简便、快速,并能准确定量。对于性传播疾病的诊断、病情的发展和预后监测、疗效评价、指导用药均具有很高临床应用价值。     

实时荧光定量PCR检测人肝癌组织皮层肌动蛋白基因

目的建立实时荧光定量PCR检测皮层肌动蛋白基因表达水平的方法。方法提取人肝癌组织总RNA,RT—PCR扩增CTTN和GAPDH基因片段并分别构建两片段阳性表达载体。采用SYBR Green I实时荧光定量PCR绘制两基因拷贝数标准曲线,实测人肝癌标本并进行方法学评价。结果成功构建pMD18-T（＋）／CTTN和pMD18-T（＋）／GAPDH重组质粒。CTTN和GAPDH基因模板拷贝数分别在1．6×10^3-1．6×10^7和1．6×10^4-1．6×10^7之间时标准曲线有良好线性关系,R^2分别为0．996和0．985。由Ct值统计两基因组内变异系数分别为0．11％～2．25％和0．75％-3．63％;组间变异系数分别为0．83％～1．48％和0．47％～1．36％。组间无统计学差异（P〉0．05）。结论成功建立实时荧光定量PCR检测人肝癌组织CTTN基因的方法,为研究人肝癌组织CTTN基因表达水平奠定了方法学基础。     

人3型腺病毒荧光定量PCR检测方法的建立

目的通过建立人3型腺病毒荧光定量PCR检测方法,快速鉴定人3型腺病毒感染,为早期诊断提供依据。方法以人3型腺病毒感染的细胞和常见的呼吸道消化道感染的病原体为研究对象,根据病毒六邻体高度保守的序列,设计荧光定量PCR反应体系,并分析实验的敏感性和特异性。结果人3型腺病毒TCID50细胞培养液中病毒核酸最低检出稀释度是10^-6,对应的拷贝数分别是5．802×10^3copies／mL和6．968×10^2copies／mL．呼吸道和消化道感染常见的病原体未出现交叉反应。结论荧光定量PCR的应用,可有效缩短检测时间,提高检测的敏感度。     

标准桃金娘油对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症的影响

[目的]研究标准桃金娘油对慢性阻塞肺疾病（COPD）大鼠模型气道炎症的影响。[方法]24只Wistar大鼠随机分为3组：①对照组：不加任何干预;②COPD组：吸烟14支／次×2次／d×6d／周×12周;③标准桃金娘油组：吸烟情况同COPD组,每日吸烟前给予标准桃金娘油灌胃治疗至第12周末。12周后测定肺功能;行支气管肺泡灌洗计数白细胞;用ELISA法测定肺部TNF—α、IL-6的含量;用HE染色评估肺部病理改变;用免疫组化法测定气道上皮ICAM-1的表达。[结果]①COPD组和标准桃金娘油组大鼠出现明显肺气肿病理改变和气流阻塞。②BALF细胞总数及中性粒细胞数结果：正常对照组分别为（1．30±0．10）×10^7／L与（0．09±0．04）×10^7／L,COPD模型组分别为（1．99±0．94）×10^7／L与（0．27±0．13）×10^7／L,P均〈0．05;标准桃金娘油组为（1．71±0．97）×10^7／L与（0．15±0．05）×10^7／L,较COPD模型组减少（P均〈0．05）。③支气管上皮ICAM—1表达及肺组织内TNF—α、IL-6表达：COPD模型组分别为6．99±0．81,（860．82±53．62）pg／mL,（689．01±49．05）pg／mL,较对照组[分别为4．22±0．74,（159．08±46．65）pg／mL,（411．5±26．60）pg／mL]增高（P均〈0．05）;标准桃金娘油组表达分别为5．04±0．88,（668．36±31．07）pg／mL,（589．64-4-19．03）ps／mL,较COPD组降低（P均〈0．05）。④COPD组BALF中性粒细胞数与支气管上皮ICAM-1表达强度呈正相关（r=0．571,P〈0．05）,也与肺组织中TNF-α、IL-6含量呈显著正相关（r=0．623、0．691,P均〈0．05）。[结论]吸烟可增加大鼠气道炎症反应,标准桃金娘油能改善由吸烟导致的气道炎症。     

伊贝沙坦对糖尿病大鼠肾氧化应激、NF-kB活性和ICAM-1 mRNA表达的影响

【目的】探讨伊贝沙坦对糖尿病大鼠肾脏氧化应激、NF—kB活性和ICAM-1mRNA表达水平的影响。【方法】将33只SD大鼠随机分为3组：正常对照组（C）、糖尿病组（D）和伊贝沙坦组（I）。糖尿病大鼠模型用链脲佐菌素诱导。大鼠饲养12周后,观察24h尿微量白蛋白排泄率（UAER）,取出肾脏作肾组织病理检查,测定肾组织中丙二醛（MDA）含量与超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱苷肽过氧化物酶（GSH—PX）活性变化。逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肾组织中细胞间粘附因子-1（ICAM-1）mRNA的表达。凝胶电泳迁移率变动分析（EMSA）检测核因子（NF）-kB的活性。【结果】UAER在D组（3784-100）及I组（149±58）均显著高于C组（30±13）．P〈0．01;I组UAER较D组显著降低,P〈0．01。与C组大鼠比较,D组大鼠肾组织MDA含量显著增高（5．8±0．9 vs 3．5±0．2）,P〈0．01;SOD、CAT及GSH—PX活性均显著降低（22．3±3．1,11,7±0．7,11．3±1．7vs39．2±2．0,18．2±0．5,23．2±3．9）,P〈0．01;I组肾组织MDA含量（4．3±0．6）明显低于D组．P〈0．01;SOD、CAT及GSH—PX活性（30．7±1．6,13．3±0．4,15．8±2．8）明显高于D组,均P〈0．01。NF-kB活性在D组大鼠肾组织（44．3±0．4）明显高于C组（14．6±0．8）,P〈0．01;I组（37．7±0．3）明显低于D组,P〈0．01。D组肾组织ICAM-1mRNA表达（2．14±0．2）明显高于C组（0．36±0．1）,P〈0．01;I组肾组织ICAM-1mRNA（1．37±0．1）表达明显低于D组,P〈0．01。【结论】伊贝沙坦可能部分通过减轻氧化应激反应以及下调糖尿病大鼠肾组织中NF—kB的活性,降低ICAM-1mRNA的表达水平实现对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。     

HBV感染者血清LHBs水平与HBV-DNA含量的关系

目的通过对HBV感染者血清中LHBs水平与HBV—DNA拷贝数的相关分析，探讨LHBs作为HBV复制指标的临床意义。方法340份HBV感染血清LHBs和HBV—M分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和时间分辨免疫荧光分析法检测，HBV—DNA定量检测采用荧光定量PCR法。结果340份HBV感染血清中，在HBV—DNA拷贝数为〈10^3、10^3-4、10^5-6和〉10^7拷贝／ml组别中，LHBs水平分别为（110．88±6．74）、（18．72±10．03）、（34．99±20．05）和（127．57±33．81）ng／ml，两者具有相关性，相关系数r=0．903（P=0．000）；LHBs的吸光度（OD值）和DNA拷贝数随着拉米夫定治疗时间延长而下降；148份HBeAg阳性血清中，HBV—DNA、LHBs阳性率分别为99．32％、93．24％：192份HBeAg阴性血清中，HBV—DNA、LHBs阳性率分别为68．75％、65．10％，两者差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论血清中LHBs水平能反映HBV感染者体内HBV复制程度，可作为判断HBV复制的血清学指标之一。     

PCR定量检测HBV—DNA与HBV标志物关系探讨

目的探讨PCR定量检测HBV-DNA拷贝数与乙肝病毒标志物常见模式的关系。方法对疑似乙型肝炎病毒患者428例采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA含量,酶联免疫吸附试验检测HBV-M。结果 92例HBsAg、HBeAg、抗HBc标志物均阳性的患者中,HBV-DNA定量拷贝数〉1.0×103/ml者有85例,平均拷贝数为1.42×107/ml;在12例HBsAg、HBeAg标志物阳性的标本中,HBVDNA阳性11例,平均拷贝数4.42×106/ml;在99例HBsAg、抗HBe、抗HBc标志物均阳性的标本中,HBV-DNA阳性者为39例,平均拷贝数为9.89×105/ml;而在207例HBV-M标志物全阴性的标本中,仍有4例检出HBV-DNA〉1.0×103/ml,平均拷贝数为9.54×103/ml。结论 在各种HBV标志物模式中,以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高,而血清中未检出HBV-M者并不能排除HBV感染。     

siRNA沉默结缔组织生长因子对鼠肝星状细胞生物学特性的影响

目的研究化学合成的小干扰RNA（483 siRNA）对大鼠原代肝星状细胞（HSCs）结缔组织生长因子（CTGF）蛋白表达及细胞生物学特性的影响。方法以胶原酶原位灌注消化、密度梯度离心分离大鼠原代HSCs,以脂质体Oligofectamine包裹483 siRNA转染培养72h的原代HSCs作为转染组,并设空白对照组。收集孵育96h的HSCs及培养上清液,采用Western blotting、免疫细胞化学染色、MTT和RT—PCR法分别检测细胞CTGF蛋白表达、α-SMA表达、细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;放射免疫法检测培养上清液中透明质酸及Ⅲ型前胶原含量。结果与对照组比较,转染组HSCs的CTGF蛋白表达下调（92±5）％,α—SMA染色阳性细胞减少（58±6）％,细胞增殖活性下调（18±5）％,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达分别下调（53±6）％和（41±7）％;培养上清中透明质酸和Ⅲ型前胶原含量分别降低（48±5）％和（33±8）％。结论483 siRNA能显著下调原代HSCs CTGF蛋白表达,并由此抑制细胞活化、增殖及细胞外基质的合成和分泌。提示针对CTGF靶位的siRNA可能具有防治肝纤维化的潜力。     

EphB4和EphrinB2 mRNA在子宫颈癌组织中的表达及其与血管生成的关系

目的检测EphB4和EphfinB2mRNA在子宫颈癌组织中的表达，探讨其在子宫颈癌发生、发展及血管生成过程中的作用。方法采用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）法检测90例子宫颈癌、15例子宫颈上皮内瘤样病变（CIN）和15例正常宫颈组织中EphB4和EphrinB2mRNA的表达，同时利用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接（SP）法检测上述组织的微血管密度（MVD），分析EphB4和EphfinB2mRNA的表达与各种临床病理参教和血管生成的关系。结果尽管所有子宫颈组织中均可检测出EphB4和EphrinB2mRNA的表达，但是EphB4mRNA在子宫颈癌（125．59±16．63）和CIN（122．61±17．30）组织中的表达强度均高于其在正常宫颈组织中的表达（95．72±4．63）（P均〈O．05）。EphfinB2mR．NA在子宫颈癌组织中的表达强度（111．11±22．86）明显高于其在CIN（94．48±6．30）和正常宫颈组织中的表达（93．56±7．89）（P均〈O．05）。EphB4mRNA在子宫颈癌组织中的表达强度与子宫颈癌的临床分期和肿瘤直径密切相关（P均〈O．05）。EphdnB2mRNA在子宫颈癌组织中的表达强度只与子宫颈癌的肿瘤直径密切相关（P〈0．05）。正常宫颈组织、CIN和子宫颈癌组织中MVD逐渐增加，分别为（11．33±2．38），（26．47±7．47）和（42．97±9．99）。子宫颈癌组织中EphB4和EphrinB2mRNA的表达均与MVD呈正相关。结论EphB4和EphfinB2在子宫颈癌的发生、发展及血管生成过程中可能起重要的作用。     

荧光实时定量PCR检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2肾上腺素能受体基因mRNA表达

目的建立荧光实时定量PCR法检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2肾上腺素能受体（AR）基因mRNA表达。方法随机选择ASAⅠ-Ⅱ级老年患者30例,分离外周静脉血淋巴细胞,采用荧光实时定量PCR法检测β1和β2-AR基因mRNA表达,并与半定量PCR检测结果进行比较。结果30例患者外周血淋巴细胞荧光实时定量PCR均检出β1和β2-ARmRNA表达,不同性别组同-基因表达量无显著差异（P〉0.05）;荧光实时定量PCR检测β2-AR mRNA表达量显著高于β1—AR mRNA（P〈0．001）,而半定量PCR随着循环次数增加,β1和β2-ARmRNA表达差异减小。结论所建立的荧光实时定量PCR成功检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2-AR基因mRNA表达,有较高的灵敏性及特异性;半定量PCR扩增平台期影响试验结果判断。     

rhG-CSF动员正常供者与恶性血液病患者外周血造血干细胞质量的比较

目的探讨正常供者与恶性血液病患者使用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）动员后,用血细胞分离机采集的外周血造血干细胞,通过形态学观察PBSC中淋巴细胞比例及单个核细胞活力。方法分别对15例正常供者和14例恶性血液病患者使用rhG—CSF动员剂,用血细胞分离机采集外周血中单核细胞（MNC）,观察有核细胞数、有核细胞分类、MNC计数及细胞活力。结果（1）正常供者组采集的PBSC有核细胞总数为（4．31±1．41）×10^8／kg,恶性血液病患者组有核细胞总数MNC数为（6．21±4．37）×10^8／kg。（2）恶性血液病组采集的PBSC有核细胞数高于供者组（P〈0．01）。（3）用淋巴细胞比值乘以有核细胞总数计算单个核细胞,正常供者组（2．82±1．03）×10^8／kg、恶性血液病患者组（2．58±1．79）×10^8／kg,正常供者组与恶性血液病组单个核细胞数比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）正常供者组MNC计数为（96．7±5．1）％,其中淋巴细胞占（65．9±9．4）％、粒细胞占（16．3±8．7）％、单核细胞占（16．5±4．0）％;恶性血液病组MNC计数为（92．7±15．6）％,其中淋巴细胞占（55．3±16．7）％、粒细胞占（24．3±16．5）％、单核细胞占（14．9±9．1）％。（5）正常供者组冻存前后细胞活力分别为（91．5±4．3）％、（67．4±9．1）％,恶性血液病组冻存前后细胞活力分别为（82．9±11．1）％、（56．5±20．1）％;两组冻存前后细胞活力差异均有显著性（P〈0．01）。（6）rhG—CSF动员前后正常供者组及恶性血液病组T细胞在CD3单克隆抗体＋rhIL-2刺激下,外周血T淋巴细胞的增生能力在应用rhG—CSF后下降[（68．5±15．1）％vs（52．3±12．5）％（P〈0．05）。结论单用rhG—CSF或化疗联合rhG—CSF动员均可采集到足够数量的外周血造血干细胞,应用淋巴细胞乘以有核细胞数作为外周血造血于细胞移植时计算输入外周血造血干细胞数量的指标时简便、快捷,不失为一良好的临床检测方法。