苦参碱诱导U937细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:探讨苦参碱(Mat)抑制人淋巴瘤细胞(U937)增殖及诱导其凋亡的机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察Mat对U937细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化;Annexin V双标记染色结合FCM检测凋亡率;RT-PCR方法检测Bcl-2 mRNA表达.结果:Mat(0.2～0.5 g/L)作用24,48,72 h后对U937细胞均有增殖抑制作用(P<0.05或P<0.01),在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性,其半数抑制浓度(IC50>)为0.4 g/L;Mat 0.2～0.5 g/L组作用U937细胞72 h后,s期细胞比例均增加,细胞发生S期阻滞(P<0.01);细胞凋亡率分别为3.25%,5.32%,8.17%,11.20%,与U937细胞对照组(1.84%)及Mat 0.1 g/L组(1.95%)相比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).RT-PCR显示Bcl-2 mRNA表达明显减弱,且随剂量增加越明显.结论:Mat在一定浓度和时间对U937细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是使细胞发生S期阻滞;Mat可以下调U937细胞Bcl-2表达,促进细胞凋亡.     

大肠杆菌致U937细胞凋亡的研究

目的 探讨大肠杆菌感染对人U937细胞凋亡的诱导作用。方法 以细胞形态学观察及Annexin V／PI双染流式细胞仪检测分析大肠杆菌感染U937细胞后，不同作用时间U937细胞的凋亡情况。结果 Hoechst 33258染色荧光显微镜下观察：大肠杆菌感染20min及30min后偶见细胞凋亡，感染60min及90min时可见许多细胞有典型的凋亡形态学改变，并可见凋亡小体；AnnexinV／PI双染可见U937细胞凋亡百分率随大肠杆菌感染时间延长而增高。感染60min及90min时，细胞凋亡率与其它组相比明显增高，差异有显著性（P〈0．001）。结论 大肠杆菌以时间依赖方式诱导人类U937细胞凋亡。     

大肠杆菌感染对人巨噬细胞系U937凋亡的影响

目的：探讨大肠杆菌（E.coli）感染与人巨噬细胞系U937细胞凋亡的关系.方法：以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测及Hoechst 33258荧光染色,Giemsa染色等细胞形态学观察为指标,研究E.coli感染对U937细胞凋亡的诱导作用.结果：Giemsa染色：E.coli感染10,20 min（U937：E.coli=1：20）后偶见细胞凋亡,感染30,60及90min时可见许多细胞有典型的凋亡形态学改变,并可见凋亡小体;Annexin V FITC/PI双染可见U937细胞凋亡百分率随E.coli感染时间的延长而增高.感染30,60及90min时,细胞凋亡率与对照组相比明显增高,有显著性差异（P＜0.001）.Hoechst 33258荧光染色结果表明当细胞与细菌浓度比较低时（1：10）即可引起部分U937细胞发生凋亡,U937细胞凋亡百分率随E.coli感染剂量的增加而增加,且Hoechst 33258荧光染色及流式细胞仪二种方法所得结果一致.结论：E.coli以时间和剂量依赖方式诱导U937细胞凋亡.     

青蒿素对人白血病U937细胞凋亡及分化的影响

目的:通过青蒿素对经典人白血病细胞系U937的作用研究,探索青蒿素治疗白血病的可能.方法:采用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、细胞形态学、DNA电泳及NBT还原试验等方法观察不同浓度青蒿素促进U937细胞凋亡及诱导分化作用.结果:青蒿素在浓度>6 μmol/L时可显著抑制U937细胞的增殖,促进其凋亡,并表现出剂量和时间依赖效应(P<0.01);在诱导分化浓度下,青蒿素可促进U937细胞向成熟粒细胞分化(P<0.01).结论:青蒿素对白血病细胞U937的选择性促凋亡作用以及诱导分化效应表明其可能是一种理想的高效低毒抗白血病药物,有望进入临床应用.     

抗PNAS-2单链抗体对白血病U937细胞凋亡的影响

目的 观察抗PNAS-2单链抗体与PNAS-2抗原特异性结合的能力,并在此基础上探究其对急性单核细胞白血病U937细胞凋亡的影响.方法 运用反转录病毒转染法将抗PNAS-2单链抗体表达载体pMIG-PNAS-2ScFv转入U937细胞(pMIG-PNAS-2ScFv组),同时设转染pMIG空载体(NC组)及未转染载体的U937细胞(U937组)为对照.流式细胞仪检测转染效率;激光共聚焦显微镜观察单链抗体表达情况及与靶抗原特异性结合的能力;流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡;Western blotting观察PNAS-2表达及促凋亡因子caspase-3激活情况.结果 成功将抗PNAS-2单链抗体编码序列转入U937细胞,所表达的单链抗体能与PNAS-2抗原特异性结合.与NC组和U937组相比,pMIG-PNAS-2ScFv组细胞凋亡率明显上升(P<0.05),活化型caspase-3表达增加,但PNAS-2含量并无变化.结论 抗PNAS-2单链抗体能有效结合U937细胞内的PNAS-2抗原并有促进U937细胞凋亡的作用,其促凋亡机制可能与PNAS-2功能位点被封闭后功能失活而无法发挥抑凋亡作用有关.     

川芎嗪联合阿糖胞苷对人白血病 U937细胞的增殖、凋亡影响及相关机制的研究

目的：探讨川芎嗪(TMP)联合阿糖胞苷(Ara-c)对白血病细胞株 U937增殖、凋亡的影响及相关机制的研究,为临床寻找有效的化疗增敏剂提供实验依据和理论基础。方法实验分为对照组、TMP 组、Ara-c 组及 TMP 联合 Ara-c 组。应用CCK-8法检测各组细胞的增值抑制率;流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率;蛋白质印迹方法检测各组细胞内凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax 的表达情况。结果TMP(0.5 mg·ml-1)组与 Ara-c(0.02,0.04,0.08,0.16μg·ml-1)组联合作用后,U937细胞的增殖抑制率明显高于相同浓度下 Ara-c 组,差异有统计学意义(t =5.38,t =8.23,t =14.61,t =17.31,P 均<0.05)。TMP(0.5 mg·ml-1)联合 Ara-c(0.08μg·ml-1)组的凋亡率(27.32±3.64)明显高于 Ara-c 组[(15.07±3.85)%]、TMP 组[(3.17±2.20)%]和对照组[(1.8±1.18)%](t=12.25,P <0.05;t=24.15,P <0.05;t=25.52,P <0.05)。蛋白质印迹结果显示,Ara-c 能在一定程度上下调 Bcl-2蛋白的表达,上调 Bax 蛋白的表达;联合用药后 Bcl-2、Bax 蛋白表达水平改变更明显(t=6.32,P <0.05,t=2.60,P <0.05;t=39.06,P <0.05,t=41.67,P <0.05)。结论TMP 能够增强 Ara-c 抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用,从而提高 U937细胞对 Ara-c 的化疗敏感性,其机制可能与下调抑凋亡蛋白 Bcl-2表达,上调促凋亡蛋白Bax 表达有关。     

不同血液透析液对U937细胞凋亡和PKCδ表达的影响

目的 研究不同血液透析液对U937细胞蛋白激酶C-δ(PKCδ)表达及细胞凋亡的影响.方法 在对数生长期人单核细胞株U937细胞培养液中添加不同血液透析液进行干预,分为A液+B液组(血液透析液A液+B液组合)、A液+B液+PKCδ特异性抑制剂(rottlerin)组、A液+B粉组(血液透析液A液+B粉组合)、A液+B粉+ rottlerin组,同时设立空白对照和正常对照组.分组干预后24 h和48 h分别收集细胞,Hoechst33258染色后荧光显微镜观察细胞形态学改变;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR和Western blotting 检测PKCδ mRNA和蛋白表达.结果 A液+B粉组凋亡细胞明显增多,呈凋亡典型形态学改变,分组干预24 h和48 h的细胞凋亡率明显高于相应时间点空白对照组、正常对照组和A液+B粉+rottlerin组(P<0.05);同时与两对照组和A液+B粉+rottlerin组比较,A液+B粉组U937细胞PKCδ mRNA和蛋白表达均明显上调(P<0.05).A液+B液组细胞凋亡率及PKCδ mRNA和蛋白表达与两对照组和A液+B液+rottlerin组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 血液透析液A液+B粉组合对U937细胞有明显促凋亡作用,其机制可能与上调细胞PKCδ表达有关;与A液+B粉组合比较,选择A液+B液组合作为血液透析液可降低患者外周血单核细胞的细胞凋亡率.     

干扰素对U937细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的 探讨干扰素α对白血病U937细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法 以不同浓度的干扰素α作用于体外培养的U937细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪及hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR—ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 干扰素α可显的降低U937细胞端粒酶活性，抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论 干扰素α能抑制U937细胞的生长并诱导细胞发生凋亡，降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

甲氨喋呤和三磷酸腺苷诱导U937细胞凋亡机制探讨

目的 :探讨甲氨喋吟、三磷酸腺苷诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中P73mRNA的表达变化 ,以进一步了解P73基因在U937细胞凋亡中的作用。方法 :用上述药物诱导U937细胞凋亡 ,凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量等方法 ;采用半定量逆转录PCR (RT -PCR)检测P73mRNA的表达变化。结果 :甲氨蝶呤、三磷酸腺苷均可诱导U937细胞凋亡。 5 μmol/L的甲氨蝶呤和0 .2 5g/L的三磷酸腺苷分别作用于U937细胞 6h、2 4h ,光镜下见细胞明显聚集、体积缩小 ,Wright’s Giemsa染色见染色质明显浓缩、核碎裂等现象 ,而对照组未出现上述现象 ;DNA片断电泳见清晰的梯形条带 ;流式细胞仪检测 :5 μmol/L的甲氨蝶呤作用于U937细胞 6h、8h、10h ,细胞的凋亡率分别为 :5 .15 %、11.4 3%、14 .7% ,0 .2 5 g/L的三磷酸腺苷作用于U937细胞 2 4h、36h、4 8h细胞的凋亡率分别为 :2 .33%、11.90 %、35 .4 9% ,而对照组的细胞凋亡率分别为 :0 .0 0 %和 1.0 9% ;半定量RT -PCR结果 :与对照组相比 ,仅三磷酸腺苷处理 4 8h组P73mRNA的表达下调。结论 :在U937细胞凋亡过程中P73的mRNA表达差异无统计学意义。     

不同血液透析液对U937细胞凋亡和PKCδ表达的影响

目的 研究不同血液透析液对U937细胞蛋白激酶C-δ（PKCδ）表达及细胞凋亡的影响。方法 在对数生长期人单核细胞株U937细胞培养液中添加不同血液透析液进行干预,分为A液＋B液组（血液透析液A液＋B液组合）、A液＋B液+PKCδ特异性抑制剂（rottlerin）组、A液＋B粉组（血液透析液A液＋B粉组合）、A液＋B粉+ rottlerin组,同时设立空白对照和正常对照组。分组干预后24 h和48 h分别收集细胞,Hoechst33258染色后荧光显微镜观察细胞形态学改变;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR和Western blotting 检测PKCδ mRNA和蛋白表达。结果 A液+B粉组凋亡细胞明显增多,呈凋亡典型形态学改变,分组干预24 h和48 h的细胞凋亡率分别为（34.99±3.54）%和（46.35±4.22）%,明显高于相应时间点空白对照组的（7.40±1.33）%和（7.62±0.95）%、正常对照组的（5.37±0.29）%和（6.46±1.02）%和A液＋B粉+rottlerin组的（23.58±4.12）%和（33.70±4.50）%（P<0.05）;同时与两对照组和A液＋B粉+rottlerin组比较,A液＋B粉组U937细胞PKCδ mRNA和蛋白表达均明显上调（P<0.05）。A液＋B液组细胞凋亡率及PKCδ mRNA和蛋白表达与两对照组和A液＋B液+rottlerin组比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 血液透析液A液＋B粉组合对U937细胞有明显促凋亡作用,其机制可能与上调细胞PKCδ表达有关;与A液＋B粉组合比较,选择A液＋B液组合作为血液透析液可降低患者外周血单核细胞的细胞凋亡率。     

和厚朴酚对人白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响

 【目的】 探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响&#65377;【方法】 将U937细胞和正常外周血单核细胞分别与HNK共培养,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态,用噻唑蓝比色法(MTT)检测HNK对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测凋亡;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Caspase-3&#65380;Caspase-7 mRNA水平变化&#65377;【结果】 HNK对U937的体外增殖有显著抑制作用,48 h半数抑制浓度(IC50)为11.8 μg/mL,而对正常外周血单核细胞的IC50为40.3 μg/mL,Annexin V/PI双标染色显示,细胞凋亡与和厚朴酚呈浓度和时间依赖相关&#65377;HNK明显降低U937细胞线粒体膜电位,增加Caspase3/7活性及mRNA表达水平,但对正常外周血单核细胞的增殖抑制和凋亡作用不明显&#65377;【结论】 HNK可能通过激活caspase-3/7抑制U937细胞增殖&#65380;诱导U937细胞凋亡&#65377;     

锰超氧化物歧化酶转染间充质干细胞对糖尿病足伤口的愈合作用

目的阐明锰超氧化物歧化酶（MnSOD）转染间充质干细胞（MSC）对糖尿病足（DF）的治疗作用和机制,为干细胞技术治疗疾病奠定研究基础。方法链脲佐菌素法建立C57BL/6J小鼠糖尿病足模型,分别以2×104 MSC的实验组（pcDNA3.1-MnSOD转染MSC）、空白质粒组（仅转染pcDNA3.1）和对照组（未转染者为MSC）进行局部注射治疗,在7、14 d观察伤口愈合情况,并分别切取皮肤组织,进行CD34免疫组化染色,观察血管密度变化,ELISA法检测各组观察点的匀浆皮肤组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽氧化还原酶（GSHPX）变化。结果与空白质粒组相比,MnSOD-MSC实验组伤口愈合明显加快,差异有统计学意义（P〈0.01）;MnSOD-MSC实验组血管密度比空白质粒组高,差异有统计学意义（P〈0.05）;MnSODMSC实验组GSHPX、SOD含量明显比空白质粒组表达增高,差异有统计学意义（P〈0.01）1。结论 MnSOD转染MSC可以促进抗氧化酶类表达增高,促进血管内皮细胞抗自由基损伤,加速血管新生和糖尿病足愈合。     

苦参碱抑制U937细胞增殖与诱导凋亡的体外实验研究

目的 探讨苦参碱对U937细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 U937细胞培养:在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中传代培养,细胞处于对数生长期时加药;通过细胞生长曲线、细胞形态、MTT实验、细胞周期测定、乳酸脱氢酶(LDH)活性测定方法观察苦参碱对U937细胞的诱导凋亡与增殖的影响.结果 与对照组相比,0.2～1.0 mg/mL的苦参碱均显著抑制U937细胞的生长(P＜0.01),且苦参碱对U937细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性,苦参碱作用U937细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)为0.4 mg/mL;随细胞增殖LDH比活性相应上升,与对照组相比,0.2、0.3 mg/mL苦参碱组LDH比活性均明显降低(P均＜0.01),苦参碱作用浓度越高,LDH比活性降低越明显;0.2～1.0 mg/mL苦参碱可使U937细胞发生S期阻滞,且随苦参碱浓度增加,G0/G1期细胞减少和S期细胞增多越明显(P＜0.01).结论 0.2～1.0 mg/mL苦参碱对U937细胞具有诱导凋亡与增殖抑制作用,呈时间-剂量依赖关系.     

增强Mel 18基因表达抑制U937细胞生长

目的 研究Mel 18基因在急性白血病细胞株U937的表达情况及其对U937细胞生长的影响.方法 RT_PCR方法检测Mel 18在U937细胞中的表达.用亚克隆技术构建真核表达质粒pLenti6/V5-Mel 18,脂质体转染法将重组质粒pLenti6/V5一Mel 18和对照质粒pLenti6/V5一LacZ分别导入U937细胞,以RT-PCR法和流式细胞仪检测U937细胞转染后Mel 18的表达情况,CCK-8法检测细胞增殖活性.结果 U937细胞中未检测到Mel 18的表达.成功构建了Mel 18的正义真核表达质粒pLenti6/V5-Mel 18,并将其成功导入U937细胞.pLenti6/V5一Mel 18质粒转染U937细胞24 h后,流式检测Mel 18蛋白的阳性表达率为(23.75±2.32)%.相对于亲代细胞,转染pLenti6/V5-Mel 18组与转染pLenti6/V5一LacZ组的24 h增殖活性分别为(70.86±1.08)%和(95.89±1.26)%,48 h增殖活性为(46.93±1.12)%和(95.43±1.63)%,差异均有极显著性意义(P<0.01).结论 U937细胞不表达Mel 18基因,上调Mel 18的表达能明显抑制U937细胞的生长.     

超氧化物歧化酶的抗炎作用研究

为研究超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的抗炎作用，采用猪血来源的ＳＯＤ对几种不同炎症动物模型的抗炎作用进行了研究。结果表明：ＳＯＤ对大鼠角叉菜胶和巴豆油所致炎症以及蛋清和佐剂所致关节炎具有显著抗炎作用，且具有明显剂量依赖性。     

赖氨匹林对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的研究赖氨匹林(aspisol)对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法取处于对数生长期的Hela细胞,实验分为4组:阴性对照组只加等体积的低糖DMEM培养液Hela细胞;实验组加入不同浓度的aspisol,使其终浓度分别为1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L。采用描计细胞生长曲线法检测细胞增殖状态;HE染色、AO/EB方法进行凋亡细胞形态学的观察。Annexin V-FITC/PI双染检测赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞凋亡情况;流式细胞术分析赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞周期的变化。结果与对照组比较,aspisol(1,5,10 mmol/L)可呈时间、浓度依赖性抑制Hela细胞的增殖;HE染色光镜下见Aspisol组细胞密度减小,细胞变圆,胞核染色变浅。赖氨匹林(1,5,10mmol/L)作用24 h后诱导Hela细胞的早期凋亡率分别为(5.73±0.87)%、(19.11±2.86)%、(33.72±5.06)%,与对照组(0.46±0.69)%比较,差异有统计学意义(P<0.01),并呈浓度依赖性。细胞周期检测显示赖氨匹林对Hela细胞有G0/G1期阻滞作用。结论 aspisol对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导其凋亡和改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期。     

曲格列酮影响大鼠系膜细胞增殖和凋亡的实验研究

目的 探讨曲格列酮对大鼠系膜细胞(mesangial cell,MC)增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养大鼠系膜细胞为研究对象,应用不同浓度曲格列酮刺激系膜细胞.采用流式细胞仪检测系膜细胞凋亡,并用DNA倍体分析检测细胞周期,采用锥虫蓝染色检测系膜细胞增殖.结果 系膜细胞经低浓度曲格列酮(1、5 μmol/L)干预后出现明显凋亡,与正常对照组相比,差异有统计学意义(均P<0.05).经不同浓度曲格列酮干预后,系膜细胞增殖明显抑制,与正常对照组相比,差异有统计学意义(均P<0.05).同时5 μmol/L曲格列酮干预系膜细胞后可将细胞周期阻滞于G2/M期.结论 曲格列酮可明显抑制系膜细胞增殖,促进系膜细胞凋亡.     

5,7-二甲氧基黄酮诱导白细胞U937细胞凋亡

目的:研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-dimethoxyflavone,DMF)诱导人前单核细胞系U937细胞凋亡作用。方法:体外培养U937细胞,PI染色FCM分析Sub-G1细胞百分率;ELISA法检测细胞培养液组蛋白/DNA碎片、Caspase-9和Caspase-3活性。结果:DMF增高U937细胞Sub-G1百分率(P<0.05),呈浓度依赖性。DMF以浓度依赖方式刺激U937细胞组蛋白/DNA碎片渗漏(P<0.05)。DMF能有效诱导U937细胞Caspase-9和Caspase-3活化。结论:DMF诱导U937细胞凋亡作用与其激活线粒体途径相关。     

氨茶碱对K562细胞增殖与凋亡的影响

目的 为探讨磷酸二酯酶抑制剂在慢性粒细胞白血病细胞系增殖与凋亡中的作用,研究了非选择性磷酸二酯酶抑制剂氨茶碱对K562细胞系的影响.方法 采用MTT检测观察细胞增殖变化,膜联蛋白V染色观察细胞凋亡率.结果 MTT显示氨茶碱对K562细胞系增殖呈浓度依赖性抑制作用,膜联蛋白V染色显示氨茶碱诱导细胞凋亡率增加.结论 氨茶碱可诱导K562细胞凋亡.