拉米夫定对慢性乙型肝炎的抗病毒疗效与Th1/Th2变化的关系

目的观察拉米夫定（LAM）治疗前后患者血清Th1/Th2比值的动态变化。方法用酶联免疫吸附（ELISA）方法分别检测60例慢性乙型肝炎患者在拉米夫定治疗前,治疗后第3、6、9、12月时的血清IFN-γ和IL-4水平。选取20名健康献血员作为正常对照。结果LAM治疗前ALT高水平组IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比值较高,完全应答率较高,无应答率较低;治疗后完全应答组IFN-γ/IL-4水平接近或高于对照组,部分应答组和无应答组IFN-γ/IL-4水平低于对照组。结论拉米夫定治疗慢性乙型肝炎可增加Th1类细胞因子IFN-γ分泌,抑制Th2类细胞因子IL-4分泌,治疗后Th1/Th2平衡的恢复与抗病毒疗效有关。T细胞免疫功能的恢复是抗病毒治疗的关键之一。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者血清IFN-γ、IL-4的变化

目的 观察拉米夫定(LAM)治疗慢性乙型肝炎(慢乙肝)过程中血清IFN-γ、IL-4等细胞因子的动态变化.方法 用ELISA方法分别检测117例慢乙肝患者在LAM治疗前和治疗后第13、26、39、52周时的血清IFN-γ和IL-4水平.结果 LAM治疗后完全应答组IFN-γ/IL-4水平接近或高于对照组;部分应答组和无应答组IFN-γ/IL-4水平则低于对照组.结论 LAM治疗慢乙肝过程中,随着治疗时间的延长,患者Th1类细胞因子IFN-γ水平逐渐增强;Th2类细胞因子IL-4水平逐渐减弱,提示LAM治疗慢乙肝不但抑制病毒繁殖,而且长时间治疗可增强Th1类细胞优势应答,抑制Th2类细胞功能.     

阿德福韦酯对慢性乙型肝炎患者外周血IFN-γ和IL-18的影响

目的:观察阿德福韦酯治疗前后慢性乙型肝炎患者外周血干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-18(IL-18)的变化,探讨阿德福韦酯抗乙型肝炎病毒(HBV)的免疫效应机制。方法:选择参加阿德福韦酯Ⅱ期临床试验的42例慢性乙型肝炎患者作为研究对象,检测阿德福韦酯治疗前、治疗4、12、24、48周末患者血清IFN-γ和IL-18水平,以及HBV DNA及ALT水平变化。结果:治疗前患者IFN-γ及IL-18水平明显高于正常对照组(P<0.01)。治疗后,HBV DNA水平逐渐降低,各检测时间点之间比较差异均有统计学意义(P<0.01),ALT在治疗4周时较治疗前有所升高(P<0.05),然后逐渐下降直至正常。IFN-γ及IL-18水平逐渐升高,在12周时达到高峰(P<0.01),然后逐渐降低。完全应答组治疗前INF-γ和IL-18水平高于部分应答组和无应答组(P<0.01)。完全应答和部分应答组治疗后INF-γ和IL-18水平与治疗前比较均明显升高(P<0.01),而无应答组IFN-γ和IL-18治疗前后比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:阿德福韦酯除直接抑制病毒复制外,可促进Th1型细胞因子分泌,调动机体对HBV的细胞免疫,有利于HBV的清除。     

重型乙型肝炎患者血清干扰素诱导蛋白-10、干扰素γ的检测及临床意义

目的 探讨干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、IFN-γ与重型乙型肝炎(SHB)患者肝脏炎性反应程度及病情发展的关系.方法 采集40例SHB患者入院时、单次血浆置换(PE)开始、PE结束及PE后5 d血清,根据SHB患者PE后5 d病情转归分为好转组及恶化组;采集20例慢性乙型肝炎(CHB)患者及20例健康对照组血清;双抗体夹心ELISA法检测血清IP-10、IFN-γ、TNF-α水平.结果 入院时,SHB及CHB组患者血清IP-10水平分别为(683.6±174.6)、(216.1±102.9)ng/L,均高于健康对照组的(107.6±55.8)ng/L(F=9.036,P<0.01),且sHB组高于cHB组(P<0.01);SHB及CHB组患者血清IFN-γ水平分别为(19.8±8.8)、(16.7±7.8)ng/L,均高于健康对照组的(2.6±1.2)ng/L(F=9.288,P<0.01);SHB患者IP-10、IFN-γ与TNF-α均呈正相关(r=0.366,r=0.365;P<0.05),与凝血酶原活动度呈负相关(r=-0.401,r=-0.350;P<0.05),与血清TBil相关性不明显(r=0.223,r=0.219;P＞0.05),IP-i0与IFN-γ呈正相关(r=0.602;P=0.000).PE后5 d,SHB两组患者血清IP-10均明显下降(t=8.947,P<0.01;t=4.121,P<0.05),恶化组高于好转组(t=7.862,P<0.01),IFN-γ下降均不明显(t=0.491,P＞0.05).结论 IP-10、IFN-γ参与SHB的肝脏免疫损伤;血清IP-10水平与肝脏炎性损害程度有关;IP-10能反映SHB患者病情发展及转归.     

慢性乙型肝炎患者干扰素应答与外周血单核细胞IFN-α和IL-18表达的关系

目的分析慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单核细胞(PBMC)干扰素-α(IFN-α)及白细胞介素18(IL-18)mRNA的诱导表达差异,评价慢性乙型肝炎患者PBMC细胞免疫功能。方法对2004年6月至2005年5月华中科技大学同济医学院附属协和医院52例门诊和住院CHB患者,聚肌胞苷酸(PolyIC)体外刺激正常对照组和CHB组患者PBMC,取培养上清利用病毒保护试验测定IFN-α2b治疗前后PBMC表达的干扰素抗病毒生物学活性。同时用脂多糖(LPS)体外刺激不同组PBMC,RT-PCR检测PBMCIL-18mR-NA水平的变化。结果治疗前干扰素治疗应答组(n=13)和无应答组(n=27)PBMC分泌的干扰素生物学活性均显著低于对照组(n=20)(均P<0.01)。应答组干扰素活性随治疗时间延长而增加,1个月时已显著高于无应答组(P<0.01);无应答组干扰素活性始终处于低下水平。治疗前,应答组和无应答组PBMCIL-18mRNA水平也显著低于对照组(均P<0.01);治疗后,应答组IL-18mRNA水平随治疗时间延长而升高,1个月时也著显高于无应答组(P<0.01),无应答组IL-18mRNA水平始终较低。PBMCIFN-α活性和IL-18mRNA水平有良好的正相关性(r=0.922,P<0.01)。结论慢性HBV感染患者的细胞免疫功能受损,不能正常表达IFN-α和IL-18,但应答组患者经干扰素治疗后表达能力逐渐恢复。     

聚乙二醇干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎的疗效观察

目的研究聚乙二醇干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎的疗效及对血清细胞因子水平的影响。方法采用双抗体夹心ELISA法检测治疗各阶段患者血清TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-8和IL-10的变化。结果在治疗9个月时,完全应答19例,部分应答5例,无应答13例。HBeAg/HBeAb转换率为51.35%,HBVDNA阴转率为54.05%;在治疗3个月时,应答组血清IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL8水平与治疗前比较有显著统计学差异（P〈0.01）。在治疗前及治疗6个月时,完全应答组血清IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL8水平均高于部分应答组,后者又高于无应答组。结论聚乙二醇干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎,早期患者血清TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-8的变化对疗效及预后的判定具有一定的意义。     

拉米夫定治疗对慢性乙型肝炎患者PBMCs培养上清液中IFN-γ和IL-6表达的影响

目的研究拉米夫定对慢性乙型肝炎(CHB)患者血清病毒载量和PBMCs表达IFN-γ和IL-6的影响,探讨拉米夫定抗病毒治疗的理论基础。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测拉米夫定治疗前后慢性乙型肝炎患者HBVDNA载量和外周血单个核细胞(PMBC)经植物血凝素(PHA)培养后分泌IFN-γ、IL-6的水平变化。根据治疗前基线将慢性乙型肝炎患者的HBVDNA载量分为高(>107copies/ml)、中(105~6copies/ml)、低(<105copies/ml)三组。结果治疗前CHB患者IFN-γ为139.98±112.61pg/ml,对照组286.31±180.25pg/ml(P<0.01);IL-6为697.73±285.34pg/ml,对照组384.42±166.83pg/ml(P<0.01);IFN-γ在HBV高载量组最低,低载量组最高;IL-6在低载量组最低,高载量组最高。不同应答效应组IFN-γ和IL-6含量不同,完全应答组与部分应答组、无应答组比较有显著性差异(P<0.01;P<0.05)。结论CHB患者PBMCs表达IFN-γ和IL-6的水平与患者的病毒载量相关。抗病毒治疗后IFN-γ水平明显提高,有助于介导细胞免疫应答。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中外周血单核细胞产生Th_1/Th_2类细胞因子的动态观察

目的:观察拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中外周血单核细胞(PBMC)产生Th_1/Th_2类细胞因子(IFN-γ/IL-10)的动态变化。方法:用ELISA法分别检测20例慢性乙型肝炎患者在拉米夫定治疗前、治疗3个月、治疗6个月、治疗9个月时PBMC在PHA(100μg/ml)、HBcAg(1μg/ml)、HBeAg(1μg/ml)诱导下体外培养48h后培养上清液IFN-γ和IL-10的水平。结果:在拉米夫定治疗3个月时,无论是在非特异性抗原PHA还是特异性抗原HBcAg/HBeAg诱导下,同治疗前相比PBMC产生INF-γ和IL-10的水平无显著变化,在治疗6个月时,仅PHA诱导组产生IFN-γ的水平同治疗前相比显著升高,在治疗9个月时,备诱导组同治疗前相比,PBMC产生IFN-γ的水平显著增高,同时IL-10的水平也明显降低。结论:拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中,随着治疗时间的延长,乙型肝炎患者PBMC产生Th_1类细胞因子IFN-γ水平逐渐增强;产生Th_2类细胞因子IL-10水平逐渐减弱,提示拉米夫定治疗慢性乙型肝炎不但具有抑制病毒作用,而且长时间治疗可增强Th_1类细胞优势应答,抑制Th_2类细胞功能...     

乙型肝炎e抗原阳性慢性乙型肝炎患者在替比夫定治疗期间外周血Th1/Th2型细胞因子水平的动态变化情况

目的 探讨乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者在用替比夫定(LDT)治疗期间Th1/Th2型细胞因子水平的动态变化情况及其与治疗转归的关系.方法 收集接受LDT治疗的15例HBeAg阳性CHB患者在基线与治疗4、8、12、24、48周时的外周血,用流式细胞仪对其血清白细胞介素(IL)-2、-4、-6、-10,以及肿瘤坏死因子(TNF)α与干扰素(IFN)γ的表达水平进行动态检测;比较完全应答组,部分应答组、无应答组、病毒学突破组及各组在不同治疗时间点的Th1/Th2型细胞因子水平.对数据的统计学分析用重复测量设计方差分析与Spearman相关分析. 结果完全应答组的Th1型细胞因子水平高于部分应答组、无应答组及治疗中病毒学突破组;而Th2型细胞因子水平则低于其他各组,但各组之间的差异无统计学意义(P>0.05).在完全应答组内IL-2、TNF α及IFN γ水平自服用LDT 12周起及其后各时间点较基线时明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);部分应答组内从服药24周起IFN γ水平较基线时升高(P<0.05);无应答组在服药48周时IL-6及IL-10水平较基线时明显升高(P<0.05);在病毒学突破组自服药24周起的IL-4水平及服药12周起的IL-6水平与基线相比,逐渐升高,且差异具有统计学意义(P<0.05).结论 Th1/Th2型细胞因子的活性平衡与LDT治疗HBeAg阳性CHB患者的转归有一定相关性,这可能与LDT治疗对CHB患者的免疫应答有一定程度的恢复作用有关.     

粒细胞集落刺激因子对慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞产生细胞因子的影响

目的 观察重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)产生细胞因子的影响.方法 收集15例慢性重型肝炎患者和10例健康志愿者的外周静脉血,分离PBMC,分为空白对照组、G-CSF预处理加脂多糖(LPS)刺激组和LPS刺激组.体外培养48 h后分别用放射免疫法和酶联免疫吸附测定法检测各组培养上清液中的TNF-α、IL-6、IFN-γ和IL-10水平;并用反转录(RT)-PCR法检测PBMC中的TNF-α、IL-6、IFN-γ和IL-10 mRNA表达水平.数据行t检验和方差分析.结果 慢性重型肝炎患者和健康志愿者的PBMC在体外经LPS刺激后,培养上清液中的TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-10水平均明显高于空白对照组,而经G-CSF预处理的PBMC上清液中的TNF-α水平显著低于LPS单独刺激组[慢性重型肝炎:(2.56±1.28)μg/L比(5.30±4.27)μg/L,F=8.365,P=0.006;健康对照:(2.11±1.01)μg/L比(3.93±1.84)μg/L,F=16.346,P=0.003],IFN-γ水平亦显著低于LPS刺激组[慢性重型肝炎:(520.76±201.66)ng/L比(735.85±263.83)ng/L,F=41.799,P=0.005;健康对照:(264.74±100.21)ng/L比(410.51±191.78)ng/L,F=23.021,P=0.016],IL-6水平显著高于LPS刺激组[慢性重型肝炎:(982.35±387.06)ng/L比(733.00±278.69)ng/L,F=16.190,P=0.019;健康对照:(793.99±214.71)ng/L比(620.65±222.57)ng/L,F=47.921,P=0.015],IL-10水平亦显著高于LPS刺激组[慢性重型肝炎:(655.13±324.12)μg/L比(441.85±200.23)μg/L,F=22.986,P=0.012;健康对照:(491.52±139.46)μg/L比(355.90±154.02)μg/L,F=34.139,P=0.019].PBMC中的TNF-α、IL-6、IFN-γ、11710的mRNA水平变化与培养上清液相同.结论 G-CSF对慢性重型肝炎患者和健康志愿者的PBMC功能均有调节作用,G-CSF预培养可抑制PBMC在LPS刺激下TNF-α和IFN-7的释放,同时促进IL-6、IL-10的释放.     

α-干扰素治疗慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞TLR4表达和血清Thl／Th2型细胞因子的变化。

目的探讨慢性乙型肝炎患者在α-干扰素治疗前后外周血单个核细胞Toll样受体4（TLR4）的表达及血清Thl/Th2型细胞因子水平的变化及其临床意义。方法 50例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者予以普通α-干扰素治疗。在治疗前及治疗后3月和6月,使用流式细胞仪检测外周血单个核细胞表面TLR4表达;采用ELISA法检测血清IFN-γ和IL-4水平,并同时检测ALT、HBV DNA水平。结果在治疗3个月和6个月时,早期应答组和无应答组患者血清IFN-γ水平均升高,IL-4水平均降低;两组TLR4水平较治疗前均下降,但应答组患者TLR4下降更明显,有显著性差异（P〈0.05）;IFN-γ和IL-4的变化与TLR4的变化无明显相关（P均〉0.05）,TLR4与ALT呈正相关（r=0.78,P〈0.01）,TLR4的变化与HBV DNA变化无相关（P〉0.05）。结论在干扰素-α治疗后,慢性乙型肝炎患者Thl/Th2型细胞因子的变化可能与TLR4表达的变化无相关,而对干扰素治疗的疗效可能与TLR4表达的变化有关.     

慢性乙型肝炎患者应用拉米夫定前后T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+调节性T淋巴细胞及白细胞介素-10、干扰素-γ的变化

目的 观察慢性乙型肝炎(CHB)患者应用拉米夫定抗病毒治疗前后外周血T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Treg)及IL-10、IFN-γ水平的变化.方法 选择CHB患者90例,在应用拉米夫定抗病毒治疗前及治疗后52周时,用流式细胞仪检测患者外周血T淋巴细胞亚群;在治疗前及治疗后12、24、36、52周时,用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Treg频率,用双抗体夹心ELISA法检测IL-10、IFN-γ水平.组间及组内总体均数比较采用方差齐性的单因素方差分析或Dunnett's检验,组内治疗前后两时段均数比较采用配对t检验.结果 在90例CHB患者中,完全应答的32例患者的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+较治疗前升高(t=4.055、3.267、2.328,均P＜0.05),外周血CD4+CD25+Treg频率在0、12、24、36、52周时分别为(5.40±0.60)%、(4.99±0.59)%、(4.54±0.72)%、(3.86±0.95)%、(3.44±0.76)%;IFN-γ水平、IFN-γ/IL-10逐步上升,IL-10水平逐步下降.部分应答的43例患者的CD4+T淋巴细胞及CD4+/CD8+较治疗前升高(t=3.484、2.018,均P＜0.05),CD8+T淋巴细胞较治疗前无明显差异,外周血CD4+CD25+Treg频率在0、12、24、36、52周时分别为(5.65±0.60)%、(5.23±0.63)%、(4.65±0.98)%、(4.42±0.97)%、(4.32±0.82)%,IFN-γ水平、IFN-γ/IL-10升高,IL-10水平降低.无应答的15例患者的外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+、外周血CD4+CD25+Treg频率及IFN-y水平、IFN-γ/IL-10、IL-10水平较治疗前无明显变化.结论 应用拉米夫定治疗过程中,获得满意应答的CHB患者的外周血CD4+CD25+Treg频率下降,CD4+/CD8+、IFN-γ/IL-10的比例升高.

Abstract：

Objective To explore the correlation between the efficacy of lamivudine (LAM)therapy and changes of T lymphocyte subsets,CD4+ CD25+ regulatory T lymphocytes (Treg),and levels of interleukin-10 (IL-10)and interferon-gamma (IFN-γ)in the peripheral blood of patients with chronic hepatitis B (CHB).Methods Ninety CHB patients were enrolled in this study.T lymphocyte subsets in the peripheral blood were detected by flow cytometry at baseline and week 52 of LAM therapy.The frequencies of CD4+ CD25+ Treg in the peripheral blood were detected by flow cytometry and levels of IL-10 and IFN-γ were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)at baseline,week 12,24,36 and 52.The comparisons of overall means between groups and within groups were done by analysis of variance or Dunnett's test.The comparison of means before and after LAM therapy was done by paired t test.Results In 32 complete-responders of 90 CHB patients,the proportions of CD4+ T lymphocytes,CD8+ T lymphocytes and CD4+/CD8+ ratio were increased significantly after LAM therapy (t=4.055、3.267、2.328,all P＜0.05); the frequencies of CD4+CD25+ Treg at baseline,week 12,24,36 and 52 were (5.40±0.60)%,(4.99±0.59)%,(4.54± 0.72)%,(3.86±0.95)% and (3.44±0.76)%,respectively; the levels of IFN-γ,IFN-γ/IL-10 ratio were increased,while the IL-10 level was decreased after LAM therapy.In 43 partial-responders,the proportion of CD4+T lymphocytes and ratio of CD4+/CD8+ were increased after LAM therapy (t= 3.484,2.018,both P＜0.05); the proportion of CD8+ T lymphocytes was not changed significantly after therapy; the frequencies of CD4+ CD25+ Treg at baseline,week 12,24,36 and 52 were (5.65±0.60)%,(5.23±0.63)%,(4.65±0.98)%,(4.42±0.97)% and (4.32±0.82)%,respectively;IFN-γ level,IFN-γ/IL-10 ratio were increased,while IL-10 level was decreased.In 15 non-responders,the proportion of T lymphocyte subsets,the frequency of CD4+ CD25+ Treg,the levels of IFN-γ and IL-10 were not changed significantly after LAM treatment.Conclusions In CHB patients who have achieved response after LAM therapy,the frequency of CD4+ CD25+ Treg in the peripheral blood is decreased,while ratios of CD4+/CD8+ and IFN-γ/IL-10 in the peripheral blood are increased.     

甘草酸苷对乙型肝炎疫苗无应答者PBMC细胞因子mRNA表达的影响

目的:观察甘草酸苷(Glycyrrhizin,GL)对乙型肝炎疫苗无应答者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)细胞因子mRNA表达的影响,探讨GL增强机体免疫功能的作用机制.方法:分离乙型肝炎疫苗无应答者的PBMC,加入HBsAg和/或GL的条件下体外培养,CCK-8法测定PBMC的增殖能力,real-time PCR测定刺激后IFN-γ、IL-4、IL-10 mRNA的表达水平,并与应答组比较.结果:GL可刺激提高乙型肝炎疫苗无应答者PBMC的增殖能力,使之与应答者无显著性差异(F=3.104,P=0.138).HBsAg+GL+无应答组PBMC的IFN-γ、IL-10mRNA表达水平均高于HBsAg+无应答组,差异有统计学意义(q分别为34.93和26.18,均P<0.05),趋向于应答者分泌水平,GL+无应答组IFN-γ与IL-10的表达均高于HBsAg+无应答组(q分别为10.18和9.19,均P<0.05),但低于HBsAg+GL+无应答组(q分别为24.75和16.98,均P<0.05);而IL-4mRNA变化在无应答者3组间无统计学意义(P=0.304).结论:GL可以调节乙型肝炎疫苗无应答者的免疫状态,创造有利于保护性抗体产生的环境.     

高血压并冠状动脉粥样硬化与辅助性T淋巴细胞亚群

背景辅助性T细胞亚群中Th1细胞分泌干扰素(IFN-γ),Th2细胞分泌白介素4(IL-4),有报道认为动脉粥样硬化病人Th1/Th2平衡紊乱。目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),IFN-γ和IL-4与高血压患者冠状动脉粥样硬化的关系,研究他们的Th1/Th2功能平衡有无紊乱。方法临床及冠状动脉造影确诊的高血压合并冠状动脉粥样硬化患者30例为病例组,冠状动脉造影排除冠状动脉粥样硬化的高血压患者22例为对照组。采用放射免疫法检测血浆AngⅡ水平,ELISA法检测血浆中IFN-γ和IL-4水平。结果1)病例组AngⅡ[(64.7±30.1)vs对照组(36.1±12.0)ng/L,P<0.05]、IFN-γ[(10.3±5.4)vs(4.2±1.5)ng/L,P<0.01]水平增高;2)病例组IL-4水平无明显变化[(15.7±7.0)vs对照组(13.5±7.0)ng/L,P>0.05];3)病例组IFN-γ与IL-4比值较对照组增大(0.72±0.34vs0.35±0.17,P<0.01);4)AngⅡ水平与IFN-γ水平呈正相关(r=0.51,P<0.01),而与IL-4水平无相关性(r=0.11,P>0.05)。结论高血压患者的高AngⅡ水平使辅助性T淋巴细胞亚群Th1细胞活性升高,导致辅助性T淋巴细胞亚群Th1/Th2的功能失衡与冠状动脉粥样硬化发生、发展有关。     

白细胞介素-18对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞的作用及意义

目的 探讨白细胞介素-18(IL-18)对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)的作用及体外对转染乙型肝炎病毒(HBV)基因的人肝癌细胞系2.2.15(HepG2.2.15)细胞HBV DNA分泌的影响。方法 分离25例正常人及25例慢性乙型肝炎患者的PBMC,在乙型肝炎核心抗原(HBcAg)及不同浓度IL-18刺激下培养72h,收集其培养上清液,采用酶联免疫试验办法检测其中干扰素γ(IFN-γ)的含量;收集1例慢性乙型肝炎患者的PBMC,与已培养了24 h的HepG2.2.15细胞共孵育,经过不同浓度的IL-18刺激培养96h后,收集其培养上清液,采用聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA的含量。结果 PBMC在HBcAg联合0.2、1.0、5.0ng/ml的IL—18刺激下,慢性肝炎组培养上清液中IFN-γ的水平均较正常对照组明显增高(0.2ng/ml组:t 11.7,P<0.01;1.0ng/ml组:t-16.19,P<0.01;5.0ng/ml组:t-20.12,P<0.01);在HBcAg联合IL-18和IL-12刺激下,慢性肝炎IFN-γ的水平亦较正常对照组明显增高,分别为(1313.20±187.76)pg/ml和(390.75±43.23)pg/ml,t—23.94,P<0.01;在慢性肝炎轻、中、重度患者中,单独HBcAg刺激组与HBcAg联合不同浓度的IL-18刺激组相比,联合刺激组的IFN-γ的水平均较单独刺激组增高;HBcAg联合IL-18刺激组与联合IL-12和同一浓度的IL-18刺激组相比,IFN-γ的水平后者显著高     

长效干扰素α-2a治疗慢性乙型肝炎过程中外周血浆样树突状细胞的变化及其与疗效的关系

目的 观察长效干扰素(PEG-IFN α-2a)治疗慢性乙型肝炎过程中外周血浆样树突状细胞(pDC)亚群的变化及其与临床疗效的关系. 方法 41例慢性乙型肝炎患者接受PEG-IFN α-2a(180 μg)每周皮下注射一次,治疗48周;治疗过程中检测肝功能、血清HBV病毒学标志物和HBVDNA,在治疗前及治疗开始后2、12、24、36、48周分别检测外周血pDC数量和功能及Toll样受体(TLR)9的表达水平、血清肿瘤坏死因子(TNF)α及IFN γ水平.对数据进行成组设计t检验、非参数检验、重复测量资料的方差分析. 结果 应答组与无应答组比较,TLR9平均荧光强度、pDC数量及INF α分泌能力在治疗2周时均明显下降,应答组在12周时TLR9平均荧光强度恢复(66.25±13.10),无应答组仍处于低水平(51.47±16.85),差异有统计学意义(t=2.478,P＜0.05);12周时应答组pDC数量恢复(5.24±1.61),无应答组为(3.74±1.25),差异有统计学意义(t=2.644,P＜0.05);12周时应答组IFN α分泌能力明显升高(459.94±200.27) pg/ml,显著高于无应答组[(237.18± 123.57)pg/ml],差异有统计学意义(t=2.942,P＜0.05).治疗24周时,应答组血清IFN γ水平明显升高[(67.81±16.64) pg/ml],显著高于无应答组[(43.73± 15.97) pg/ml],差异有统计学意义(t=3.396,P＜ 0.05);TNFα水平为[(268.94±64.32)pg/ml],也显著高于无应答组[(206.45±78.28) pg/ml],差异有统计学意义(t=2.22,P＜0.05).结论 pDC在PEG-IFNα-2a治疗诱发的早期免疫应答中发挥重要作用,抗病毒治疗过程中pDC数量和功能的恢复可能是机体抗病毒治疗应答的重要因素.     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞Toll样受体3触发后Ⅰ型干扰素的表达

目的 了解慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞来源的树突状细胞Toll样受体3(TLR3)触发后Ⅰ型IFN表达情况.方法 选取CHB患者26例,健康对照者18例,抽取外周血用免疫磁珠细胞分选法获得纯化的单核细胞(同时留取血浆),体外培养诱导为未成熟的树突状细胞,给予聚肌胞苷酸(Poly Ⅰ:C)刺激,在刺激0、24 h收集细胞培养上清液,用ELISA法测定血浆及细胞培养上清液中Ⅰ型IFN(IFN-α,IFN-β)表达水平.均数间两两比较采用t检验.结果 在血浆中,两组Ⅰ型IFN表达水平的差异无统计学意义.刺激前(0 h),CHB组单个核细胞来源的树突状细胞表达的IFN-α、IFN-β分别为(80.00±16.15)ng/L和(36.39±13.90)ng/L,对照组分别为(76.76±15.90)ng/L和(37.14±13.68)ng/L,差异均无统计学意义(t=1.651,t=0.178;均P＞0.05).两组刺激后24 h的IFN-α表达水平均比刺激前(0 h)升高,但差异无统计学意义(t=1.534,t=1.243;均P＞0.05).刺激后24 h,对照组IFN-β水平为(54.57±16.80)ng/L,显著高于刺激前(0 h)的(37.14±13.68)ng/L(t=4.061,P＜0.05);但在CHB组,两者的差异无统计学意义(t=1.796,P＞0.05).刺激后24 h,两组的IFN-α表达水平差异无统计学意义(t=0.792,P＞0.05),而IFN-β水平在对照组为(54.57±16.80)ng/L,显著高于CHB组的(41.64±12.57)ng/L(t=2.921,P＜0.05).结论 CHB患者单个核细胞来源的树突状细胞存在功能障碍,不能正常表达Ⅰ型IFN.TLR3触发后单个核细胞来源的树突状细胞表达的Ⅰ型IFN以IFN-β为主.     

阿德福韦对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者Th1和Th2相关细胞因子的影响

目的 观察HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者阿德福韦治疗前后不同时相点血清IFN-γ、L-4的水平、Th1/Th2比值以探讨阿德福韦治疗对机体的免疫功能的影响.方法 采集30例阿德福韦治疗前、治疗16周、52周和132周患者血清,其中完全应答组14例,非完全应答组16例及健康对照组10例,ELISA检测IFN-γ和L-4的水平.结果 完全应答组各时相点IFN-γ水平显著高于部分应答组(P均＜0.05)及正常对照组(P＜0.05),部分应答组与健康对照组相比无差异(P＞0.05);完全应答组IL-4水平在治疗后逐渐下降,部分应答组变化不大;两组Th1/Th2比值均有所上升,但完全应答组升高显著.结论 阿德福韦治疗后慢性乙型肝炎患者细胞免疫应答有一定程度的恢复.     

慢性乙型肝炎患者血清IL-10、IL-12、IL-18和IFN-γ的检测及其临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎病理过程中细胞因子IL-10、IL-12、IL-18和IFN-γ血清水平的变化及其临床意义.方法 27例慢性乙型肝炎患者和25例健康人均于清晨空腹采血以双抗夹心ELISA法检测IL-10、IL-12、IL-18和IFN-γ水平并同时检测肝功能和乙肝病毒血清学指标.结果慢性乙型肝炎患者血清IL-10、IL-12、IL-18和IFN-γ水平均显著高于对照组(P<0.01),其中慢性乙型肝炎重度患者IL-12、IL-18和IFN-γ水平较轻中度患者显著增高(P值分别<0.01,<0.01,<0.05);HBeAg阴性组IL-12和IL-18较HBeAg阳性组明显升高(P值分别<0.05 和<0.01),而IL-10和IFN-γ则无明显变化;上述各因子均与血清ALT、T-Bil呈显著正相关(r分别=0.588、0.477,0.520、0.612,0.545、0.855,0.606、0.864),IL-12还与HBVDNA量呈显著负相关(r=-0.51).结论慢性乙型肝炎患者存在异常的细胞免疫应答,IL-10、IL-12、IL-18和IFN-γ均参与了慢性乙型肝炎的病理生理过程,并且与肝炎的病情变化密切相关.     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞细胞因子的检测及意义

探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中细胞因子的临床意义.检测30例CHB患者阳MC培养上清中IL-4、IL-10和IFN-γ的水平,同时选择7例健康人群作对照组.CHB组IL-4水平显著高于健康对照组(P＜0.05),而IFN-γ水平则显著低于健康对照组(P＜0.01);HBeAg( )组IL-4水平明显高于HBeAg(-)组(P＜0.05),而IFN-γ则显著低于HBeAg(-)组(P＜0.05);HBV DNA水平与IL-4水平呈正相关,与IFN-γ水平呈负相关.CHB存在异常细胞免疫应答,Th1/Th2水平失衡可能与HBV持续感染有关.