脑出血患者血肿周围脑组织中P75NTR、TrkA的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 通过对人脑出血后血肿周围不同区域组织中的P75NTR、TrkA表达的检测,探讨其在脑出血后血肿周围组织细胞凋亡中的作用. 方法采集脑出血血肿清除术患者的脑组织标本,分别运用DNA断裂原位末端标记(TUNEL)法及免疫组化技术检测血肿周围及远隔部位组织中细胞凋亡率与P75NTR、TrkA的表达. 结果相对于远隔部位组织,脑出血后血肿周围组织中的细胞凋亡率与P75NTR的表达水平明显增加(P<0.05),而TrkA的表达水平并没有明显变化(P>0.05).P75NTR的阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率呈正相关(r=0.628,p=0.000). 结论脑出血后血肿周围组织中凋亡细胞明显增多,P75NTR介导的细胞凋亡通路可能发挥了重要的作用;TrkA在脑出血发生后并没有增量表达以增加细胞存活,未起到拮抗P75NTR介导的细胞凋亡作用.     

早期脑出血后细胞凋亡与p75NTR、TrkA的相关性研究

目的 探讨p75NTR、TrkA在高血压脑出血(hypertensive intracerebral hemorrhage,HICH)早期的表达情况,初步阐明其与细胞凋亡的关系.方法 收集20例HICH病人脑出血后早期血肿周围不同部位组织标本,分为血肿表面组、半暗带组、脑皮质下区组;并在三组中将标本按出血时间(＞7h、≤7 h)、出血量(＞60 ml、≤60 ml)分组.采用免疫组化检测三组中p75NTR、TrkA的表达,TUNEL方法检测凋亡细胞率,统计分析p75NTR、TrkA及凋亡细胞的相关性.结果 TUNEL法检测结果:脑出血后越靠近血肿凋亡细胞越多(P＜0.01).HICH早期越靠近血肿表面p75NTR表达增加(P＜0.01),并与凋亡细胞率成正比(P＜0.05);TrkA在脑出血后有表达,不同部位TrkA表达无差异(P＞0.05),与细胞凋亡无明显关系(P＞0.05).血肿表面组p75NTR/TrkA比率较其余两组上升(F=4.851,P=0.011).随着出血时间延长、出血量增加,p75NTR表达增加(P＜0.05),而TrkA表达无变化(P＞0.05).结论 HICH早期病人p75NTR在TrkA低表达或者无活性环境中促进细胞凋亡,TrkA与细胞凋亡无相关,p75NTR/TrkA比率变化影响出血后细胞凋亡.     

大鼠脑出血后不同时期神经营养因子受体p75、神经生长因子前体、酪氨酸激酶A的表达及其与细胞凋亡的相关性

目的研究脑出血后血肿周围组织中神经营养因子受体p75(p75NTR)、神经生长因子前体(pro NGF)、酪氨酸激酶A(TrkA)的表达及细胞凋亡率,进一步探讨其在脑出血后的细胞凋亡中所发挥的作用。方法制作大鼠脑出血模型,于术后6 h、24 h、72 h、10 d处死各组大鼠获取所需脑组织标本,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化SP法检测p75 NTR、TrkA、pro NGF的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测p75 NTR、TrkA的基因表达水平。结果脑出血后p75 NTR、proNGF表达水平及p75 NTR/TrkA值与对照组比较显著升高(P 0. 01),且动态变化规律与脑细胞凋亡率相似;72 h后TrkA的动态变化规律与细胞凋亡率相反。结论脑出血后pro NGF与p75 NTR的结合可能参与介导脑细胞凋亡,p75 NTR/TrkA值增高时,pro NGF及p75 NTR以介导细胞凋亡为主; TrkA在脑出血后72 h内神经营养作用被抑制,72 h后可能发挥神经营养作用。     

proNGF，sortilin在脑出血患者血肿周围组织中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的：研究proNGF,sortilin在人脑出血后血肿周围组织中的表达,及其在继发性损伤细胞凋亡中的作用。方法：本实验采集临床手术病人的脑组织标本,利用DNA断裂原位末端标记（TUNEL）法检测血肿周围组织中的凋亡细胞,并同时运用免疫组化技术检测血肿周围组织及远隔部位组织中proNGF,sortilin的表达。结果：脑出血后血肿周围组织中的细胞调亡率明显增高（P<0.01）,proNGF的表达水平并没有显著变化（P>0.05）,而sortilin的表达水平则明显增加（P<0.01）,并且sortilin的表达水平与细胞凋亡率正相关(R= 0.648, P=0.00)。结论：sortilin 在脑出血表达增加,在依赖于P75NTR的细胞凋亡通路起了辅受体及分子开关作用,proNGF在脑出血后的表达量并未变化。     

人脑出血后proNGF、sortilin的表达及与细胞凋亡的关系

目的研究人脑出血后神经生长因子前体（proNGF）、sortilin在血肿周围组织中的表达及与细胞凋亡的关系。方法本实验采集临床手术患者的脑组织标本,利用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸生物素原位缺口末端标记法（TUNEL）检测血肿周围组织中的凋亡细胞,运用免疫组化技术检测血肿周围组织及远隔部位组织中proNGF、sortilin的表达。结果脑出血后血肿周围组织中细胞凋亡率明显增高（P〈0.01）,proNGF的表达水平并没有显著变化（P〉0.05）,而sortilin的表达水平则明显增加（P〈0.01）,并且sortilin的表达水平与细胞凋亡率正相关（R=0.648,P=0.00）。结论sortilin在人脑出血后表达增加,与细胞凋亡正相关,proNGF在脑出血后的表达量并未变化。     

大鼠脑出血后血肿周围组织中p75NTR表达及其与凋亡的时相性研究

目的 通过大鼠脑出血模型,探讨脑出血后不同时期p75NTR的变化规律及与细胞凋亡的关系.方法 采用大鼠脑出血模型,检测血肿周围凋亡细胞的比例,p75NTR的蛋白表达水平.结果 血肿周围6h即可见细胞凋亡,72 h达高峰,10d仍可见较高比例的凋亡细胞,与对照组比较有显著统计学差异(P＜0.01).实验组及对照组均可检测出p75 NTR蛋白和RNA表达,但各实验组与对照组比较有显著统计学差异(P＜0.05),尤以72 h为著(P=0.000).发现除6h组外,其余各组的p75NTR的RNA表达水平与凋亡比例呈正相关(P ＜0.001).结论 大鼠脑出血模型中血肿周围组织p75NTR蛋白和RNA表达水平增加,且与凋亡规律一致,24 h后RNA表达与细胞凋亡正相关.     

高血压脑出血血肿周围C反应蛋白变化与凋亡细胞的关系

目的探讨高血压脑出血患者血肿周围C反应蛋白表达及与细胞凋亡的关系。方法选取20例高血压脑出血患者血肿灶周围脑组织标本为实验组,5例手术通道血肿远隔部位脑组织标本为对照组。根据脑出血量大小实验组标本分为3组A(出血量35~45mL)、B(出血量45~70mL)、C(出血量≥70mL)组。所有标本均行TUNEL染色、C反应蛋白免疫组化染色。对资料进行统计学相关分析。结果实验组血肿周围脑组织都有不同程度TUNEL阳性凋亡细胞和C反应蛋白阳性细胞;越远离血肿周围,对照组TUNEL阳性细胞和C反应蛋白阳性细胞表达减少,同时血肿量较大者,血肿周围TUNEL阳性细胞和C反应蛋白表达更为显著。结论脑出血血肿周围脑组织大量表达C反应蛋白,TUNEL阳性凋亡细胞亦较明显,而血肿远隔部位CRP不表达或仅少量表达,TUNEL阳性细胞表达亦减少,CRP可能直接参与脑出血血肿周围脑组织细胞凋亡过程。     

大鼠脑出血后血肿周围脑组织p75NTR的表达及其与细胞凋亡的关系

目的研究大鼠脑出血后不同时期血肿周围组织中p75NTR的表达规律及与其细胞凋亡的相关性。方法采用自体动脉血注入右侧尾状核制备大鼠脑出血动物模型,分别于脑出血后6h、24h、72h和10d处死大鼠获取血肿周围脑组织标本,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法及实时荧光定量PCR检测p75NTR蛋白及mRNA的表达。结果脑出血后6hpp75NTR蛋白和nRNA表达水平即上升,24h继续升高,72h到达高峰,至10d仍维持在较高水平,与对照组相比均差异显著（P〈0．05）。脑出血后细胞凋亡率的动态变化趋势与p75NTR蛋白及mRNA表达变化一致,两者之间呈显著正相关（P〈0．05）。结论脑出血后p75NTR可能参与介导脑细胞凋亡。     

脑出血血肿周围脑组织细胞凋亡与细胞色素C表达的关系

目的 研究脑出血(ICH)患者血肿周围脑组织细胞凋亡与细胞色素C(Cyt-C)表达的关系.方法 选择不同时段行血肿清除术的ICH患者32例,选取手术过程中获得的血肿周围脑组织作为标本,采用TUNEL染色及免疫组织化学技术检测凋亡细胞和Cyt-C表达的变化.结果 ICH超早期组(＜8h)可见明显的TUNEL阳性细胞和Cyt-C阳性细胞;早期组(8～48h)二者均达到高峰;延期组(＞48h)TUNEL阳性细胞仍维持较高表达,而Cyt-C阳性细胞计数开始下降.凋亡细胞与Cyt-C表达呈正相关(r=0.87,P＜0.01).结论 ICH患者血肿周围脑组织中存在细胞凋亡,Cyt-C表达是细胞凋亡过程中的一个关键事件.     

高血压脑出血患者血肿周围脑组织细胞凋亡与Caspase-3表达规律的临床研究

目的初步探讨高血压脑出血患者血肿周围脑组织细胞凋亡的病理变化规律及其与Caspase-3的关系。方法术中获取19例不同时段脑出血患者血肿灶周围脑组织标本作为病例组,手术入路中远隔血肿部位脑组织标本5例作为对照组。根据脑出血后时间的不同将病例组分为:超早期组(<8h);早期组(8～24h);延期组(> 24h)。所有标本均行TUNEL染色以及Caspase-3免疫组化染色,利用图像分析仪观察阳性细胞数的变化规律,分析凋亡细胞与Caspase-3阳性细胞之间的关系。结果血肿周围脑组织存在TUNEL阳性细胞表达,出血后8～24h达高峰,随后下降,并且与Caspase-3的变化趋势相一致。结论细胞调亡是高血压脑出血患者血肿周围早期细胞死亡的主要形式。做为细胞凋亡的重要调控因子,Caspase-3的表达与脑出血后细胞凋亡的发生发展密切相关。     

神经生长因子对氧合血红蛋白诱导鼠神经细胞凋亡的作用研究

目的 研究神经生长因子(NGF)对氧合血红蛋白(OxyHb)诱导的小鼠神经细胞凋亡的作用,进一步探讨OxyHb诱导细胞凋亡及NGF对神经元保护作用的可能机制.方法 蛛网膜下腔注射OxyHb建立蛛网膜下腔出血的动物模型,尾静脉注射NGF,TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax、P75NTR和TrkA表达的情况.结果 注射OxyHb后出现神经细胞凋亡,Bcl-2表达降低,Bax和P75NTR表达增加,在NGF给药组,神经细胞凋亡数明显减少,Bcl-2表达增加.而Bax和P75NTR表达则明显降低.结论 小鼠局部脑组织蛛网膜下腔注射OxyHb可引起小鼠神经细胞发生凋亡,Bax和P75NTR表达增加可能是诱导凋亡的一个主要原因,而静脉注射NGF可以抑制OxyHb诱导的细胞凋亡,其机制可能是通过与受体结合,增加Bel-2蛋白表达,降低Bax和P75NTR表达水平以实现其保护作用.     

氯化锂预处理对脑出血后血肿周围神经细胞凋亡及核因子κB表达的抑制作用

目的 观察氯化锂预处理对大鼠脑出血后血肿周围神经细胞凋亡、炎症反应及核因子κB(NF-κB)表达的影响.方法 54只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脑出血组和氯化锂预处理脑出血组,每组各18只.氯化锂预处理脑出血组手术前7 d起每天腹腔注射氯化锂(1mmol/kg).利用立体定向技术,将Ⅳ型胶原酶用微量进样器精确注入大鼠内囊诱导成脑出血模型.跟据术后处死动物的时间不同,各组再分别分为1、3、7 d三个亚组.分别采用TUNEL法、苏木素-伊红染色和免疫组织化学染色观察血肿周围神经细胞凋亡、炎症反应及NF-κB表达的情况.结果 在脑出血后1、3、7 d,与脑出血组(TUNEL阳性细胞数:18.32±3.75,33.24±6.37,20.49±4.87;NF-κB阳性细胞数:55.34±5.83,30.63±3.27,9.53±2.37)比较,氯化锂预处理脑出血组血肿周围区TUNEL阳性细胞数(15.84±3.12,10.88±4.75,5.83±4.39)明显减少,NF-κB阳性细胞数(29.27±3.37,16.36±3.64,7.64±2.31)明显降低,比较差异有统计学意义(P<0.05),炎症反应也明显减轻.结论 氯化锂预处理可能通过降低NF-κB的表达来减轻脑出血后的炎症反应,减少脑出血后血肿周围神经细胞凋亡,其对脑出血后脑损伤有神经保护作用.     

Characterization of NADE,NRIF and SC-1 gene expression during mouse neurogenesis

The p75 neurotrophin receptor (p75NTR) is a member of the tumor necrosis factor receptor superfamily. p75NTR signaling events have been implicated in both cell cycle arrest and apoptosis depending on which effector molecules are associated with its intracellular domain after ligand binding. Two such effector proteins, p75NTR-associated cell death executor (NADE) and neurotrophin receptor interacting factor (NRIF) promote p75NTR-mediated apoptosis, whereas Schwann cell factor-1 (SC-1) mediates neurotrophin-dependent withdrawal from the cell cycle. An understanding of the expression profiles of these three interacting proteins and p75NTR during embryogenesis is critical for addressing whether these effector proteins might function outside of p75NTR-mediated signaling events. The distribution of NADE, NRIF and SC-1 mRNAs during murine development suggests that the action of these genes is in fact not limited to regions of p75NTR expression. Specifically, a detailed comparison of the spatial and temporal expression domains of NADE, NRIF and SC-1 during brain development revealed regions of co-expression with p75NTR but also illustrates a distinct and discordant spatial and temporal expression. These results yield novel insights into the unique developmental characteristics of the three p75NTR-interacting proteins, thus revealing their diverse signaling potential during embryonic development.     

大鼠脑出血后血肿周围脑组织PPARα的表达变化

目的观察大鼠脑出血后血肿周围组织过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）的表达变化。方法取成年雄性Wistar大鼠48只,采用自体血注入法制备脑出血模型。术后6、12、24、48、72、120h断头取脑,应用荧光定量PCR和蛋白印迹法检测血肿周围及对侧脑组织PPARαmRNA和蛋白的表达。结果与血肿对侧脑组织相比,血肿周围脑组织PPARα mRNA和蛋白表达在出血后6h显著升高并达高峰（P〈0．05）,随后降低,至48h与血肿对侧表达量无明显差异（P〉0．05）;然后再次升高,120h的表达量与6h无统计学差异（P〉0．05）。结论PPARα在大鼠脑出血后血肿周围脑组织动态表达变化提示其可能参与脑出血后继发性损伤过程。     

脑出血大鼠脑组织IGF-1的表达及其对细胞凋亡的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1（IGF-1）在实验性大鼠脑出血（ICH）后脑组织中的表达及其对细胞凋亡的影响。方法应用立体定向技术，将自体未抗凝血注入大鼠基底节区以制备ICH模型；将动物分为正常对照组、ICH组及干预组，分别在不同时间断头取脑以制作标本，连续切片分别作IGF-1免疫组化染色及TUNEL染色。结果ICH后2h血肿周围脑组织表达IGF-1，24h达表达高峰，7d时恢复正常；TUNEL染色阳性细胞于ICH后8h开始出现，3d时达高峰，7d时仍有表达；给予外源性IGF-1后，凋亡细胞显著减少，与同时点ICH组相比差别有显著性。结论ICH后IGF-1可抑制细胞凋亡的发生，从而减轻ICH后继发性脑损伤。     

Modulation of p75-dependent motor neuron death by a small non-peptidyl mimetic of the neurotrophin loop 1 domain

The p75 neurotrophin receptor (p75NTR) is expressed by degenerating spinal motor neurons in amyotrophic lateral sclerosis (ALS). The mature and pro-form of nerve growth factor (NGF) activate p75NTR to trigger motor neuron apoptosis. However, attempts to modulate p75NTR-mediated neuronal death in ALS models by downregulating or antagonizing p75NTR with synthetic peptides have led to only modest results. Recently, a novel ligand of p75NTR, compound LM11A-24, has been identified. It is a non-peptidyl mimetic of the neurotrophin loop 1 domain that promotes hippocampal neuron survival through p75NTR and exerts protection against p75NTR-mediated apoptosis of oligodendrocytes induced by proNGF. Thus, LM11A-24 appears to activate p75NTR-linked survival but not death mechanisms, and may interfere with the ability of neurotrophins to induce apoptosis. Given these findings, we hypothesized that LM11A-24 might be a particularly potent inhibitor of motor neuron degeneration. We examined the effects of LM11A-24 on apoptosis of cultured rat embryonic motor neurons. Interestingly, in contrast to the effects observed in hippocampal cultures, LM11A-24 was unable to prevent motor neuron apoptosis induced by trophic factor deprivation. However, picomolar concentrations of LM11A-24 prevented p75NTR-dependent motor neuron death induced by either exogenous addition of NGF or spinal cord extracts from symptomatic superoxide dismutase-1G93A mice, in the presence of low steady-state concentrations of nitric oxide. LM11A-24 also inhibited motor neuron death induced by NGF-producing reactive astrocytes in co-culture conditions. These studies suggest that modulation of p75NTR by small molecule ligands targeting this receptor might constitute a novel strategy for preventing motor neuron degeneration.