TLR2及TLR4在侵袭性肺曲霉病小鼠中的表达

目的 研究Toll样受体(TLR)2和TLR4在侵袭性肺曲霉病小鼠中的表达,探讨TLR2和TLR4在侵袭性肺曲霉病中的作用. 方法 将小鼠分为3组:A组为正常对照组;B组为未免疫抑制但感染烟曲霉菌组;c组为侵袭性肺曲霉病(IPA)模型组,给予免疫抑制并感染烟曲霉菌.在感染后8、24、48和72 h时相点,处死小鼠,取肺组织,采用组织病理学方法观察肺组织的病理损伤,RT-PCR法检测肺组织各个时相点的TLR2、TLR4、TNF.ot和β-tublin的表达.TLR2、TLR4、TNF-α的PCR产物电泳条带的扫描密度值与同时扩增的β-tublin电泳条带的扫描密度值的比值用以表示TLR2、TLR4和TNF-α的相对表达水平. 结果 病理观察结果显示,对照组小鼠的肺组织结构正常;正常小鼠感染烟曲霉菌后,小鼠的肺组织有炎症细胞浸润、出血等炎症反应,但未见孢子萌芽生成菌丝;而IPA模型小鼠的肺组织病理损伤严重,可见炎症细胞浸润、肺泡塌陷伴随出血,孢子聚积并萌芽生成菌丝.8、24、48 h 3个时间点的TLR4和24、48 h两个时相点的TNF-α在IPA模型小鼠肺组织中的表达要低于烟曲霉菌感染的正常小鼠(P<0.05),而TLR2在烟曲霉菌感染的正常小鼠和IPA模型小鼠肺组织中呈现低表达,但24、72 h时相点的TLR2在IPA模型小鼠的表达要低于烟曲霉菌感染的正常小鼠(P<0.05). 结论 TLR4及其下游分子TNF-α在IPA模型小鼠肺组织中低表达,在组织病理镜检中可见肺曲霉病典型肺组织病理损伤和孢子生成菌丝.     

miR-491通过下调Xklp2靶蛋白(TPX2)表达抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移

目的探讨miR-491在肝癌组织中的表达、临床意义及可能的分子机制。方法实时定量PCR检测miR-491在肝癌及癌旁组织中的表达,MTT法检测MHCC-97H细胞的增殖,TranswellTM实验检测MHCC-97H细胞的侵袭及迁移,Western blot法及免疫组织化学染色检测miR-491下游潜在靶点Xklp2靶蛋白(TPX2)的表达。结果 miR-491在肝癌组织中表达水平显著低于相应癌旁组织;肝癌组织中miR-491低表达与肿瘤大小、TNM分期、门静脉侵犯及Edmondson分级显著相关;低表达miR-491患者3年生存率明显低于高表达组;miR-491可显著抑制MHCC-97H细胞的增殖、侵袭及迁移,并下调TPX2的蛋白水平;miR-491低表达组TPX2蛋白水平明显高于miR-491高表达组,相关性分析显示肝癌组织中miR-491与TPX2蛋白表达呈显著负相关。结论 miR-491在肝癌组织中表达下调并与肝癌恶性临床病理特征有关,miR-491抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移的作用可能与下调TPX2表达有关。     

TLR2和TLR4在原发性肝癌中的表达

目的：本研究通过检测原发性肝癌Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的表达，分析其与临床病理生理因素的关系，探讨TLR2，TLR4在原发性肝癌疾病过程中的可能作用。方法：采用免疫组化法和实时荧光定量PCR分别在蛋白水平及mRNA水平检测原发性肝癌组织和配对癌旁组织TLR2、TLR4的表达。结果：原发性肝癌组织在蛋白水平和mRNA水平TLR2和TLR4的表达均明显低于癌旁组织（P<0.01）。但免疫组化结果显示不论是肝癌组织还是癌旁组织，TLR2和TLR4的表达均明显高于正常肝组织（P<0.01，P<0.05），有门静脉分支癌栓的患者癌组织TLR4的表达强度低于无门静脉分支癌栓的患者（P<0.05）。结论：肝癌组织TLR2和TLR4的表达与癌旁组织相比受到相对抑制，但高于正常肝组织，TLR2和TLR4信号途径可能参与了原发性肝癌的病理过程。     

miR-634 在肝癌中的表达及对肝癌细胞生物学行为的影响

目的:检测microRNA-634(miR-634)在肝癌中的表达水平及其对肝癌细胞常见生物学行为的调控作用。方法:采用实时荧光定量PCR(RT鄄qPCR)法检测肝癌细胞系(HepG2、SMMC7721、Bel7402、Bel7404、SNU739)、69 例肝癌组织及匹配癌旁组织中miR-634 的相对定量,分析miR-634 表达与肝癌患者性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、Child-Pugh 分级、BCLC 分期、门静脉癌栓及肝外转移的关系,同时构建miR-634 的真核表达载体并转染肝癌细胞系,采用活细胞计数试剂盒CCK-8、流式细胞仪Annexin V/ PI 双染法和Transwell 侵袭实验检测转染miR鄄634 对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。结果:与正常人肝细胞系L-02 相比,肝癌细胞的miR-634 水平均降低(P <0.05),表达量依次为HepG2 >SNU739 >Bel7402 > Bel7404 >SMMC7721;69 例肝癌组织的miR鄄634 水平为(0.253±0.019),低于匹配癌旁组织(P<0.05),且与肿瘤直径、分化程度、BCLC分期、门静脉癌栓及肝外转移均有关(P<0.05)。过表达组转染24 ~96 h 后的miR鄄634 水平持续升高,与对照组和空转染组的差异有统计学意义(P<0.05);与对照组和空转染组相比,转染组的增殖抑制率、凋亡率均升高,但穿膜细胞数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-634 在肝癌组织和细胞中均为低表达,且与临床病理参数有关,上调其水平可抑制肝癌细胞增殖及侵袭并诱导凋亡,对于肝癌防治有重要借鉴价值。     

黄芩苷通过上调miR-485抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭

目的 探讨黄芩苷对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法 将卵巢癌CAOV-3细胞分为对照组、黄芩苷组、黄芩苷+miR-NC组和黄芩苷+miR-485抑制剂组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-485的表达,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测MUC1蛋白表达。应用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验验证miR-485和MUC1的靶向关系。结果 与对照组相比,黄芩苷组CAOV-3细胞增殖活性和侵袭能力下降,细胞中miR-485表达升高,MUC1蛋白表达水平降低(P<0.05);与黄芩苷+miR-NC组相比,黄芩苷+miR-485抑制剂组CAOV-3细胞增殖活性和侵袭能力升高,细胞中MUC1蛋白表达升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-485靶向负调控MUC1的表达。结论 黄芩苷能够抑制卵巢癌CAOV-3细胞增殖和侵袭,机制可能与miR-485/MUC1通路有关。     

过表达miR-146a通过靶向SOX5抑制胃癌MKN-45细胞增殖和侵袭

目的 探讨过表达miR-146a对胃癌MKN-45细胞增殖、侵袭的影响及可能机制.方法 利用瞬时转染将miR-146a mimics(过表达miR-146a组)和miR-NC(阴性对照组)分别转染胃癌MKN-45细胞,建立过表达miR-146a胃癌MKN-45细胞系,采用MTT法检测转染后MKN-45细胞增殖能力,Tr...     

地塞米松对小鼠脾脏巨噬细胞内TLR4和TLR2表达的影响

为观察小鼠脾巨噬细胞内的TLR4和TLR2在脂多糖 (LPS )刺激后 ,地塞米松 (Dx )对其表达量的影响 ,在向BALB/c小鼠腹腔内注射LPS和Dx后采用贴壁法分离小鼠脾巨噬细胞 ,通过半定量RT PCR方法测定了TLR4和TLR2mRNA的表达量。结果显示 :①LPS刺激后 ,小鼠脾巨噬细胞内TLR4mRNA显著上调 (吸光度比为 0 11) ,TLR2上调不明显 (吸光度比为0 0 0 8) ;②预先注射不同剂量Dx ,分别为 0 1mg/kg、 1mg/kg、 10mg/kg ,再用LPS刺激小鼠。注射了Dx后巨噬细胞TLR4mRNA表达量较单纯注射LPS的小鼠显著降低 (吸光度比分别为 0 0 93、 0 0 5 0和 0 0 14 ) ;但TLR2mRNA表达量随着Dx使用剂量增加而增加 (吸光度比分别为 0 0 5 4、 0 0 80和 0 16 1)。该项研究表明TLR4是参与LPS引起炎症反应的主要Toll样受体 ,而TLR2不起主要作用 ;Dx对LPS刺激后TLR 4mRNA的表达有抑制作用 ,而对TLR2mRNA的表达有增强作用 ;Dx抑制LPS引起的炎症反应可能与抑制TLR4的表达有关     

老年非小细胞肺癌患者外周血TLR2、TLR4水平与肿瘤增殖、侵袭基因表达的相关性

目的 探究老年非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血Toll样受体(TLR)2、TLR4水平与肿瘤增殖、侵袭基因表达的相关性.方法 取2018年2月至2020年12月于我院收治的123例老年NSCLC患者,按照病理检查结果及TNM肿瘤分期分为早期(Ⅰ期)组27例、中期(Ⅱ～Ⅲ期)组66例、晚期(Ⅳ期)组30例,同时选取于...     

miR-320a靶向KLF5抑制结肠癌HCT116细胞增殖和侵袭的分子机制

目的 探讨过表达miR-320a对结肠癌HCT116细胞的生物学行为的影响,并初步分析miR-320a对KLF5的调控机制.方法 将miR-320a模拟物转染结肠癌HCT116细胞,建立过表达miR-320a结肠癌HCT116细胞系,采用CCK-8方法检测转染后HCT116细胞增殖能力,Transwell实验检测转染后...     

苦参碱通过TLR3下调PI3K/Akt通路抑制子宫肌瘤细胞的增殖、侵袭和迁移北大核心CSCD

目的:探讨苦参碱抑制子宫肌瘤细胞凋亡、侵袭和迁移的机制。方法:将子宫肌瘤细胞分为对照组(不做任何处理)、苦参碱低、中、高剂量组(分别用0.5、1.0、2.0 mg/ml的苦参碱处理)、pcDNA3.1/TLR3质粒(TLR3)+高剂量苦参碱组(2.0 mg/ml苦参碱处理)、NC组(转染空质粒+2.0 mg/ml苦参碱处理)。RT-qPCR检测各组细胞TLR3、PI3K mRNA表达;CCK-8法检测各组细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验检测各组细胞迁移;Transwell检测各组细胞侵袭能力;Western blot检测各组细胞TLR3、PI3K、p-Akt、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:与对照组相比,苦参碱低、中、高剂量组TLR3 mRNA、PI3K mRNA、TLR3、PI3K、p-Akt、MMP-2、MMP-9表达及细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与苦参碱高剂量组相比,TLR3+苦参碱高剂量组TLR3 mRNA、PI3K mRNA、TLR3、PI3K、p-Akt、MMP-2、MMP-9表达与细胞增殖、迁移和侵袭能力提高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05),TLR3-NC+苦参碱高剂量组与苦参碱高剂量组TLR3 mRNA、PI3K mRNA、TLR3、PI3K、p-Akt、MMP-2、MMP-9表达、细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论:苦参碱通过下调TLR3表达下调P13K/Akt通路,抑制子宫肌瘤细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-212-5p在肝癌组织中的表达及对HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨miR-212-5p在肝癌组织中的表达及对HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法应用qRT-PCR法检测96例肝癌组织及癌旁组织中miR-212-5p表达水平,同时设HepG2细胞组、miR-212-5pmimics组与miR-212-5pinhibitor组。培养72h后,采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭与迁移水平;qRT-PCR法检测细胞miR-212-5p表达水平。结果 肝癌组织中miR-212-5p表达水平升高,肿瘤最大径≥2cm、TNM分期越高、浸润深度越深、病理级别越低、有淋巴结转移、有复发的肝癌患者miR-212-5p高表达率更高（P<0.05）。miR-212-5p模拟物能增强HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力,抑制HepG2细胞凋亡（P<0.05）;miR-212-5p抑制剂能抑制HepG2细胞活力、增殖、侵袭及迁移能力,促进HepG2细胞凋亡（P<0.05）。结论 miR-212-5p在肝癌组织中高表达,miR-212-5p可促进HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力,抑制...     

lncRNA XLOC006926抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨lnc RNA XLOC006926调控肝癌细胞增殖和转移机制,结合肝癌患者临床病理特征,分析其临床意义。方法利用实时荧光定量PCR方法检测lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞系及肝癌患者配对(癌、癌旁)组织(n=88)中的表达水平。进一步通过CCK-8、克隆形成、划痕及transwell实验检测过表达或抑制lnc RNA XLOC006926对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时结合临床信息统计分析其与临床病理特征及患者预后的相关性。结果 lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞及肝癌组织中的表达显著降低,过表达lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,相反抑制lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力增强。结合患者临床信息分析,lnc RNA XLOC006926的表达量与肿瘤大小(P=0.007)、PVTT(P=0.024)具有显著相关性,其低表达预示着预后较差。结论 lnc RNA XLOC006926在肝癌发生发展中发挥了重要作用,参与调节肝癌细胞的增殖及迁移,有望成为肝癌发生发展的生物标志物和肝癌预防治疗的新靶点。     

circ＿0046263靶向miR-1184调控肝癌HCCLM3细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的：探讨circ＿0046263对肝癌HCCLM3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法：选取惠州市第三人民医院2017年1月至2020年12月收治的47例肝癌患者肿瘤组织及癌旁组织,RT-qPCR检测circ＿0046263和miR-1184表达;将肝癌细胞株HCCLM3随机分为si-NC组、si-circ＿0046863组、miR-NC组、miR-1184组、si-circ＿0046263+anti-miR-NC组、si-circ＿0046263+anti-miR-1184组,CCK-8检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;划痕实验检测划痕愈合率;Transwell检测侵袭细胞数;Western blot检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circ＿0046263和miR-1184的靶向关系。结果：与癌旁组织相比,肝癌组织circ＿0046263表达升高,miR-1184表达降低（P<0.05）。抑制circ＿0046263表达或过表达miR-1184后,肝癌细胞HCCLM3活性降低,细胞克隆形成数减少,细胞划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少,E-cadherin表...     

TLR9的激活对食管鳞癌细胞的增殖侵袭能力及NF-κB表达的影响

目的探索Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)的激活对食管鳞癌细胞的增殖侵袭能力及NF-κB表达的影响。方法流式细胞术检测TLR9在食管鳞癌细胞TE-3、TE-13、TE-15、TE-30中的表达;免疫荧光法检测TLR9在TE-13细胞中的表达;用CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)激活TE-13,实验分为阴性对照组(control)、低剂量CpG-ODN组(1μg/mL)、中剂量CpG-ODN组(3μg/mL)和高剂量CpG-ODN组(12μg/mL)。RT-qPCR检测食管鳞癌细胞TE13中TLR9和NF-κB mRNA相对表达量的变化;采用CCK-8和Transwell法分别检测TLR9的激活对TE-13细胞增殖和侵袭能力的影响。结果①TLR9在TE-13表达量高于其他3种食管鳞癌细胞系。②3、12μg/mL CpGODN作用后TE-13细胞中TLR9被充分激活并且上调NF-κB的表达,TLR9和NF-κB的表达显著均高于阴性对照组(P0.05);低剂量CpG-ODN组与阴性组相比差异无统计学意义(P0.05)。③CCK-8和Transwell法检测发现CpGODN浓度在3、12μg/mL时TLR9的激活可显著增加TE-13细胞的增殖和侵袭能力(P0.05),激活作用具有浓度依赖性。低剂量CpG-ODN组与阴性组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论 CpG-ODN可通过TLR9/NF-κB促进食管鳞癌细胞的增殖和侵袭,提示TLR9可能是治疗食管鳞癌的重要靶点。     

高表达miR-20b对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及可能机制

目的 探究高表达miR-20b对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及其可能机制.方法 将TPC-1细胞分为空白对照组、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-20b模拟物组(转染miR-20b mimics),实时定量PCR和Western blot检测各组细胞miR-20b和CCND1的表达,双荧光素...     

mi R-34a-3p抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭转移并下调Smad2/TGF-β信号通路

目的 探讨miR-34a-3p对胰腺癌细胞的作用及可能机制。方法 RT-qPCR方法检测miR-34a-3p在人胰腺导管腺癌细胞SW1990和胰腺导管上皮细胞HPDE中的表达情况;转染miR-34a-3p mimics后,采用CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞侵袭情况;Western blot检测细胞上皮-间质转化情况;进一步用生物信息学预测miR-34a-3p的下游靶基因,并用荧光素酶报告基因实验验证;然后采用Western blot检测靶蛋白以及靶蛋白下游调控蛋白的表达。结果 RT-qPCR检测发现miR-34a-3p在SW1990中的表达低于HPDE细胞。miR-34a-3p在SW1990细胞中过表达后,SW1990细胞增殖受到抑制、侵袭能力降低、E-cadherin表达上调、N-cadherin表达下调。生物信息学网站预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot证实Smad2是miR-34a-3p的靶蛋白,同时发现其下游蛋白TGF-β表达也显著下调。结论 miR-34-3p在胰腺癌细胞中的表达下调,miR-34-3p能够抑制胰腺癌细胞增殖、侵...     

miR-599靶向TLR2对支原体肺炎小鼠肺组织的保护作用及机制

目的 探究miR-599对支原体肺炎小鼠肺组织的保护作用及可能机制。方法 SPF级BALB/c小鼠60只随机分成对照组（Control组）、支原体肺炎组（MP组）和miR-599组（miR-599组）,每组20只。HE染色观察肺组织形态学变化;ELISA法检测血清炎症因子水平;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡;Real time-qPCR检测小鼠肺组织miR-599水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-599是否靶向TLR2;Western blot检测肺组织TLR2/4-MyD88-NF-κB信号通路蛋白表达。结果 miR-599过表达改善小鼠肺组织形态,降低肺组织细胞凋亡水平,抑制血清炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6水平,降低TLR2/4-MyD88-NF-κB信号通路蛋白表达。结论miR-599改善支原体肺炎小鼠肺组织损伤,其作用机制可能与靶向抑制TLR2调节TLR2/4-MyD88-NF-κB信号通路有关。