CD14与TLR2、TLR4在天然免疫中的相互作用

CD1 4与Toll样受体 (TLRs)是天然免疫中重要的模式识别分子。CD1 4能够结合细菌内毒素脂多糖 (LPS) ,TLR2可以介导多种G+ 细菌细胞壁成分与细胞的反应 ,TLR4是介导LPS细胞内信号转导的关键分子。在天然免疫中CD1 4与TLR2 /TLR4协同作用 ,能够介导机体与多种病原体成分的反应。本文主要就CD1 4与TLR2 /TLR4的协同作用作一综述     

TLR4基因沉默下调TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用

目的 研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路发挥的作用,以及沉默TLR4基因后,对TLR2信号通路的影响.方法 利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,将细胞随即分为正常组(N组)、正常+烟曲霉孢子刺激组(N+Af组)、正常+TLR4-siRNA组[TLR4(RNAi)组]、正常+TLR4-siRNA+烟曲霉孢子刺激组[ TLR4(RNAi) +Af组],RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白的表达变化.结果 (1)TLR4基因沉默前:与N组比较,N+Af组TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达量均显著升高(P＜0.05).(2)TLR4-siRNA( 100nmoL/L)转染RAW264.7细胞,沉默效率达83％.(3)TLR4基因沉默后:与N组比较,TLR4( RNAi)组TLR2、MyD88 mRNA的表达量均显著降低(P＜0.05);与N+Af组比较,TLR4( RNAi)+Af组的TLR2、MyD88 mRNA和TNF-α蛋白的表达量均显著降低(P＜0.05);与TLR4( RNAi)组比较,TLR4(RNAi)+ Af组MyD88 mRNA表达量显著升高(P＜0.05),而TLR2 mRNA及TNF-α蛋白表达量却无显著变化(P＞0.05).结论 RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用;当沉默TLR4基因后,TLR2信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,沉默TLR4基因下调了TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用,可能TLR4较TLR2在抵抗烟曲霉孢子刺激时发挥更重要的作用.     

CD14与TLR2、TLR4在天然免疫中的相互作用

CD14与Toll样受体(TLRs)是天然免疫中重要的模式识别分子。CD14能够结合细菌内毒素脂多糖(LPS)，TLR2可以介导多种G^ 细菌细胞壁成分与细胞的反应，TLR4是介导LPS细胞内信号转导的关键分子。在天然免疫中CD14与TLR2／TLR4协同作用，能够介导机体与多种病原体成分的反应。本文主要就CD14与TLR2／TLR4的协同作用作一综述。     

TLR2和TLR4信号在肿瘤发生和发展中的作用及机制的研究进展

TLR2和TLR4信号活化对肿瘤发生发展具有抑制和促进双重作用,其机制涉及T细胞活化、细胞凋亡、NK细胞功能、免疫抑制和肿瘤转移等多个环节.本文对TLR2和TLR4信号在肿瘤发生发展中的作用及机制的最新研究进展进行综述.     

人TLR2和TLR4胞外区cDNA的克隆

目的 从脂多糖诱导的外周血单个核细胞克隆人Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)胞外区cDNA.方法 用不同浓度脂多糖在不同时间刺激单个核细胞后提取总RNA,RT-PCR方法半定量测定TLR2和TLR4的表达,应用pUCm-T载体克隆胞外区cDNA,双酶切以及DNA测序进行鉴定.结果 单个核细胞在四种浓度脂多糖刺激3 h,6 h和12 h后.TLR2和TLR4表达并不相同.15 μg/mL脂多糖作用6 h TLR2表达最高,10 μg/mL脂多糖作用3 hTLR4表达最高.经RT-PCR扩增TLR2和TLR4胞外区cDNA分别为1 700 bp和1 900 bp,T载体克隆、酶切鉴定及测序分析后证实,目的 片段与GenBank中序列一致.结论 脂多糖的诱导对外周血单个核细胞TLR2和TLR4表达有显著影响,并且成功克隆了胞外区cDNA.     

TLR2、TLR4 及 MyD88 高表达与 Cm 呼吸道感染肺组织炎症相关

目的:探讨沙眼衣原体呼吸道感染过程中C3H/ HeN(C3H)小鼠过度炎症反应的机制。方法:C3H 与C57BL/6(C57)小鼠鼻腔吸入1伊103 IFU 沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Cm),建立沙眼衣原体小鼠肺炎模型,使用RT-PCR 检测感染后不同时间点小鼠肺组织Toll 样受体TLR2、TLR4 及转导蛋白MyD88 mRNA 的表达。结果:使用1伊103 IFU 的Cm 呼吸道感染C3H与C57BL/6(C57)诱导小鼠衣原体肺炎,Cm 感染在高易感性的C3H 小鼠及低易感的C57 小鼠均诱导Toll 样受体的表达,但在感染后第7 天及第14 天,高易感的C3H 小鼠肺组织中TLR2 和TLR4 mRNA 的表达均显著高于C57 小鼠,尤其TLR2(P<0.001 或P<0.05),进一步研究发现Cm 呼吸道感染C3H 小鼠肺组织MyD88mRNA 的表达也显著高于C57 小鼠,并在感染后第14 天仍维持高表达。结论:Cm 呼吸道感染诱导TLR2、TLR4 及MyD88 在高易感的C3H 小鼠肺组织高表达,可能与C3H 小鼠肺组织过度炎症反应相关。     

TLR2/TLR4在失血性休克引发的脾组织TIPE2和TLR2/TLR4信号通路分子表达上调中的作用北大核心CSCD

目的研究发现,肠淋巴液回流是导致失血性休克后免疫功能紊乱的重要因素。本研究应用TLR2^(-/-)和TLR4^(-/-)小鼠探讨失血性休克对脾组织TIPE2和TLR2/TLR4信号下游分子表达的影响。方法将不同(C57BL/6J、TLR2^(-/-)、TLR4^(-/-))来源雄性小鼠随机分为Sham组、Shock组、Shock+Drainage组,分别予以不同手术处理后,无菌获取各实验组小鼠的脾组织。应用RTPCR技术分别检测WT小鼠脾组织TIPE2、TLR2、TLR4、MyD88、TRIF、TRAF3、TRAF6的mRNA表达。应用Western blotting技术分别检测不同小鼠(C57BL/6J、TLR2^(-/-)、TLR4^(-/-))脾组织TIPE2、TLR2、TLR4、MyD88、TRIF、TRAF3、TRAF6的蛋白表达。结果与Sham组相比,失血性休克后脾脏组织TIPE2、TLR2/TLR4及其下游分子表达水平均上调,肠淋巴液引流显著降低了失血性休克导致的TIPE2、TLR2/TLR4及其下游分子的高表达。TLR2的缺失降低了Shock组脾组织TIPE2、TLR4、MyD88、TRAF6的蛋白表达。TLR4缺失降低了Shock组TIPE2、TLR2、MyD88、TRIF、TRAF6的蛋白表达。结论以TLR2、TLR4作为干预靶点,TIPE2可能通过负反馈机制调控TLR2/TLR4信号通路下游分子mRNA和蛋白的表达,有利于促进失血性休克后免疫平衡状态的恢复。     

百合固金汤、四逆汤含药血清对TLR2和TLR4比值的影响

TLR2和TLR4是识别结核分枝杆菌的主要模式识别受体,TLR4也是LPS致炎通路中的经典受体,参与介导感染性休克的发生。许多治疗感染性疾病的方药均能对TLR2和TLR4产生影响,但是目前尚未有文献报道TLR2和TLR4比值与治疗药物之间的关系。作者通过"养阴"和"回阳"的代表方百合固金汤和四逆汤含药血清对Raw264.7巨噬细胞表面TLR2和TLR4的调节及抗MTB感染效果的研究发现,两种不同类型的方药对TLR2和TLR4比值的影响不同,提示中医不同治则在针对感染性疾病治疗中的机制差异。     

TLR2和TLR4单克隆抗体对DSS诱导的小鼠结肠炎肠黏膜细胞因子及肠道菌群的影响

目的 研究Toll样受体2单克隆抗体(Toll-like receptor 2 monoclonal antibody,TLR2McAb)、Toll样受体4单克隆抗体(TLR4McAb)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎组织学改变及肠道菌群结构的影响.方法 雄性BALB/c小鼠分为正常对照组(A)、急性期溃疡性结肠炎模型组(B)、TLR2McAb干预组(C)、TLR4McAb干预组(D)、TLR2McAb+TLR4McAb共同干预组(E),每组10只.A组饮用蒸馏水,B～E组饮用5%DSS水溶液以产生急性期溃疡性结肠炎,造模开始同时,每隔48 h予A、B两组小鼠腹腔内注射生理盐水,C～E组小鼠分别予以10μg的TLR2McAb、TLR4McAb、TLR2McAb+TLR4McAb,期间观察小鼠的疾病活动指数(disease activity index,DAI).干预7 d后处死小鼠,HE染色观察结肠炎症,并进行结肠组织病理学评分(histopathological score,HS);使用real-time PCR法检测各组结肠黏膜中IFN-γ、IL-4、IL-17表达;留取盲肠内粪便对大肠杆菌、双歧杆菌及乳酸杆菌进行培养并比较各菌群菌落计数(colony forming units,CFU)的变化.应用SPSS13.0软件进行统计学分析,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 (1)与A组比较,B组的DAI及HS显著增高(DAI:9.700±2.406 vs 0.500±0.707,P<0.01;HS:16.500±2.991 vs 6.400±3.273,P<0.01);C、D组与B组比较DAI及HS差异均无统计学意义(P>0.05);E组的DAI及HS明显低于B组(DAI:5.700±3.498 vs 9.700±2.406,P<0.05;HS:9.500±3.308 vs 16.500±2.991,P<0.01).(2)与A组比较,B组小鼠结肠黏膜IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达明显增高;而C～E组结肠黏膜三种细胞因子的表达均有不同程度的降低.(3)A组大肠杆菌数量较少,B～E四组大肠杆菌均明显生长(与A组比较P<0.05),C～E组大肠杆菌数值与B组比较有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05);B组双歧杆菌及乳酸杆菌数量均明显少于A组及C～E组(P<0.05),使用TLR2McAb、TLR4McAb干预后,C～E组双歧杆菌及乳酸杆菌数量上升,与A组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 TLR2McAb、TLR4McAb同时干预对DSS诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎有显著改善作用;两种McAb均能明显提高小鼠肠道内双歧杆菌及乳酸杆菌的菌群数量,从而改善肠道菌群结构,但对大肠杆菌数量无明显影响,且两抗体同时干预对肠道菌群结构的改善未见显著协同作用.     

地塞米松对小鼠哮喘模型脾巨噬细胞TLR2和TLR4 mRNA表达的影响

目的 检测变应性哮喘模型鼠及地塞米松（dexamethasone,DM）处理的模型鼠脾脏巨噬细胞TLR2和TLR4 mRNA的表达.方法 采用贴壁法分离BALB/c小鼠脾巨噬细胞,以SYBR-greenⅠ作荧光指示剂,次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶基因（hypoxanthine-phosphoribosyl-transferase gene,HPRT）作管家基因,应用LightCycler实时PCR技术,检测TLR2和TLR4 mRNA与管家基因HPRT cDNA的荧光域值循环数（the number of PCR threshold value cycles,Ct）,分别记为Ct2、Ct4和CtH,计算Ct2、Ct4与CtH的比值（Ct2/CtH、Ct4/CtH）为标本的TLR2和TLR4在mRNA水平上的相对表达量.结果 对照组与哮喘组小鼠Ct2/CtH差异有统计学意义（P＜0.05）,哮喘组TLR2 mRNA表达下调;哮喘组与哮喘DM组小鼠Ct2/CtH差异有统计学意义（P＜0.05）,哮喘DM组TLR2 mRNA表达上调;对照组与哮喘组小鼠Ct4/CtH差异无统计学意义（P＞0.05）;哮喘组与哮喘DM组小鼠Ct4/CtH差异有统计学意义（P＜0.05）,哮喘DM组相对哮喘组TLR4 mRNA表达上调.结论 变应性哮喘模型鼠脾脏巨噬细胞TLR4mRNA的表达并没有变化,没有减弱对病原相关分子模式的识别;而变应性哮喘模型鼠脾脏巨噬细胞TLR2 mRNA的表达下调;DM可以上调哮喘组TLR2和TLR4 mRNA的表达;其中的机理有待进一步的深入研究.     

TLR在小鼠胸腺中的表达及其在胸腺细胞发育中的可能作用

检测体外培养和体内发育过程中,胎鼠胸腺处于不同发育阶段时Toll样受体(TLR)的表达,阐明TLR表达量与胸腺细胞发育相关性,为TLR和胸腺细胞发育分化相关研究提供基础数据。无菌取15d胎龄胎鼠胸腺进行体外培养(FTOC),在培养不同时间点(2d,4d,6d),检测处于不同发育期胸腺TLR的表达;同时在孕期不同天数(15~19d),分别取胎鼠胸腺,检测在体内发育过程中胸腺TLR的表达;在FTOC中加入二脱氧鸟苷培养6d以制备胸腺基质细胞,检测基质细胞与胸腺细胞TLR表达情况。结果:小鼠胸腺中检测到多种TLR。FTOC培养中:培养第2天(F2)开始检测到各种TLR,到培养第6天(F6),TLR1,TLR3,TLR6,TLR7,TLR8明显上调,而TLR4,TLR5保持低水平,TLR4在培养第6天又下降;体内发育过程中:TLR6表达量随胎龄增加有较明显上调,TLR1,TLR3-8保持低水平表达;TLR2,TLR9体内体外都未检测到明显表达。在对胸腺细胞与基质细胞TLR表达比较中发现TLR1,TLR5,TLR6,TLR7高表达于胸腺细胞。胎鼠胸腺表达某些TLR,并且在发育不同阶段表达量有所改变,提示TLR可能参与胸腺细胞的发育过程。     

HBV转基因小鼠脾脏DC的TLR2、TLR9和T细胞Elispot检测分析

目的:进一步研究HBV转基因小鼠免疫状态。方法:应用流式细胞仪和Elispot方法分别对转基因鼠脾脏树突状细胞(DC)的Toll样受体TLR2、TLR9和分泌γ干扰素T细胞功能进行检测。结果:与正常同种鼠比较,HBV转基因小鼠脾树突状细胞表达CD11c及TLR2、TLR9无明显差异,但分泌IFN γ的T细胞对HBsAg特异性刺激产生的斑点数存在显著差异(P<0 0 5 )。结论:提示HBV转基因小鼠的先天和后天免疫状态是正常的,仅对乙型肝炎病毒存在特异性免疫耐受     

TLR4在内毒素导致组织损伤过程中的信号转导作用

TLR4是内毒素激活信号转导的受体.LPS信号转导依赖于TLR4与LPS的直接作用.TLR4基因突变易感染革兰氏阴性细菌.对TLR4的研究有望给内毒素休克的治疗带来新的突破.并从阻断内毒素致病途径设想内毒素相关性疾病的治疗.     

TLR信号通路研究进展

TLR在识别病原体相关分子中起到关键作用,提示其与免疫炎症相关.TLR在天然免疫反应中不仅可以清除病原体,而且可通过识别病原体相关分子过程中有效建立获得性免疫体系.在TLR介导的细胞信号通路中,接头分子TLR/IL-1R结构域对免疫炎症反应起到了重要的作用,它可产生一些前炎症细胞因子如NO、1型干扰素等,并上调共刺激分子表达.现就TLR与其相关配体作用关系及TLR介导的天然免疫激活进行综述.     

TLR4/MD2/NF-κB信号通路与疾病的研究进展

TLR4/MD2/NF-κB是细胞内一条重要的信号通路,该通路主要参与脂多糖和软脂酸等刺激信号的识别及转导,既往认为该通路主要与感染性炎症有关;近年研究表明,它与肿瘤、自身免疫性疾病、代谢性疾病等密切相关,靶向TLR4/MD2成为治疗这些疾病的新策略。本文就TLR4/MD2/NF-κB信号通路转导及相关疾病研究进展进行阐述。     

TLR4与TNF-α在脑缺血再灌注小鼠海马CA1区神经元中的表达

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)在脑缺血再灌注损伤炎症反应中的作用。方法:采用抗TLR4抗体封闭阻断TLR4,应用HE染色观察小鼠海马CA1区组织病理学改变、Western Blot和RT-PCR检测海马TLR4蛋白和mRNA表达量,免疫组化方法检查TNF-α表达。小鼠随机分为3组,即假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)和TLR4阻断组(T组),各组又分12,24,48和72h4个时间点组。结果:缺血再灌注组TLR4蛋白、TLR4 mRNA和TNF-α表达水平明显高于假手术组表达水平(P0.05),而TLR4阻断组TLR4蛋白、TLR4 mRNA和TNF-α表达水平明显少于缺血再灌注组(P0.05)。相关分析表明,TLR4 mRNA表达水平与TNF-α含量呈显著正相关(P0.01)。结论:本结果提示缺血再灌注可激活TLR4,TLR4在脑缺血再灌注损伤中起重要作用;炎性因子TNF-α的产生、分泌可能与TLR4 mRNA表达存在密切联系。     

TLR2和TLR4单克隆抗体对DSS诱导的小鼠结肠炎肠黏膜细胞因子及肠道菌群的影响

Objective To evaluate the effect of TLR2McAb and TLR4McAb on intestinal flora of DSS-induced colitis in mice. Methods Fifty healthy male BALB/c mice (SPF level), were randomly assigned into five groups: the control group( group A), the UC model group( group B), TLR2McAb intervention group( group C), TLR4McAb intervention group( group D) and TLR2McAb + TLR4McAb intervention group(group E). Clinical symptoms were evaluated by the disease activity index(DAI), while tissue sam ples were evaluated by histological scoring(HS). The quantities of mRNA for IFN-γ, IL-4 and IL-17 were determined by real-time PCR. Meanwhile, fecal samples were obtained directly from the cecum for microbiological studies. Results After the treatment with TLR2McAb and TLR4McAb, DAI and HS were decreased significantly. Compared with group A, inflammatory cytokines such as IFN-γ, IL-4 and IL-17 in group B were higher. Compared with group B, expression of these three cytokines in group C to E was all markedly decreased. Group A showed a considerable predominance of Lactobacillus spp and Bifidobacterium spp,while the UC model group showed a conspicuous increase of Escherichia coli and decreases of Lactobacillus spp and Bifidobacterium spp. After treatment with TLR2McAb or/and TLR4McAb, Lactobacillus spp and Bifidobacterium spp increased to the normal level. But counts of E. Coli in the three intervention groups were not changed. Conclusion TLR2McAb and TLR4McAb suppressed the development of DSS-induced colitis and increase cecum counts of Lactobacilli and Bifidobacteria.     

TLR2和TLR4单克隆抗体对DSS诱导的小鼠结肠炎肠黏膜细胞因子及肠道菌群的影响

Objective To evaluate the effect of TLR2McAb and TLR4McAb on intestinal flora of DSS-induced colitis in mice. Methods Fifty healthy male BALB/c mice (SPF level), were randomly assigned into five groups: the control group( group A), the UC model group( group B), TLR2McAb intervention group( group C), TLR4McAb intervention group( group D) and TLR2McAb + TLR4McAb intervention group(group E). Clinical symptoms were evaluated by the disease activity index(DAI), while tissue sam ples were evaluated by histological scoring(HS). The quantities of mRNA for IFN-γ, IL-4 and IL-17 were determined by real-time PCR. Meanwhile, fecal samples were obtained directly from the cecum for microbiological studies. Results After the treatment with TLR2McAb and TLR4McAb, DAI and HS were decreased significantly. Compared with group A, inflammatory cytokines such as IFN-γ, IL-4 and IL-17 in group B were higher. Compared with group B, expression of these three cytokines in group C to E was all markedly decreased. Group A showed a considerable predominance of Lactobacillus spp and Bifidobacterium spp,while the UC model group showed a conspicuous increase of Escherichia coli and decreases of Lactobacillus spp and Bifidobacterium spp. After treatment with TLR2McAb or/and TLR4McAb, Lactobacillus spp and Bifidobacterium spp increased to the normal level. But counts of E. Coli in the three intervention groups were not changed. Conclusion TLR2McAb and TLR4McAb suppressed the development of DSS-induced colitis and increase cecum counts of Lactobacilli and Bifidobacteria.     

DC-SIGN/TLR4调控肾小管上皮细胞炎症反应研究

探讨肾小管上皮细胞天然免疫分子DC-SIGN与TLR4相互作用,以及对肾小管上皮细胞炎症反应的调控影响。采用免疫组化检测慢性肾炎患者肾组织DC-SIGN及TLR4表达;体外培养肾小管上皮细胞株(HK-2)并经LPS刺激,采用免疫共沉淀实验和荧光免疫组化检测DC-SIGN与TLR4结合及细胞表面共定位状况;ELISA检测经转染DC-SIGN siRNA后HK-2分泌IFN-β、TNF-α的变化,以及western blot检测TLR4信号通路中IKKε、p38、JNK及NF-κB的磷酸化水平。结果显示,慢性肾炎患者肾小管上皮细胞均显著表达DC-SIGN及TLR4,利用HK-2模拟炎症状态给予LPS刺激后,DCSIGN与TLR4可发生相互结合并共定位于细胞表面,且HK-2明显分泌炎症因子IFN-β、TNF-α,这一状况可被经转染DC-SIGN siRNA后予以抑制,且发现在此状态下TLR4-MyD88依赖途径信号分子p38、JNK磷酸化水平则显著上升,而TLR4-MyD88非依赖途径的IKKε、NF-κB磷酸化水平无明显变化。结果表明,肾小管上皮细胞炎症状态下可通过表达DC-SIGN,并与TLR4结合且相互作用,促进炎症因子分泌,从而调节肾小管上皮细胞炎症反应。提示可能与DC-SIGN和TLR4发生信号串话,并调控TLR4-MyD88非依赖途径有关。     

4-1BB信号对小鼠树突状细胞表面TLR4表达的调节

目的 探讨4-1BB（CD137）激发型单克隆抗体2A对小鼠骨髓来源的树突状细胞（DC）表面TLR4表达的调节.方法 用不同剂量2A、LPS以及2A与LPS联合,或用LPS预刺激后再加入2A,以流式细胞术检测这些处理因素作用下DC表面TLR4表达情况.结果 LPS可下调DC TLR4的表达,下调作用可维持24 h,而2A可使DC TLR4的表达上调,上调作用可维持12 h,并可拮抗LPS对TLR4的下调作用.用LPS预处理DC后再加入2A,也可拮抗LPS的下调作用.结论 4-1BB信号可以上调DC表面TLR4的表达.