人源α-烯醇化酶B细胞表位鉴定及其与牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶的交叉反应预测

目的:预测鉴定人源α-烯醇化酶蛋白的B细胞抗原表位,探讨人源α-烯醇化酶与牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶之间的交叉反应性。方法:以人源α-烯醇化酶蛋白序列为基础,综合应用多个软件预测B细胞线性表位;再以人源α-烯醇化酶的蛋白晶体结构为基础,采用4个生物信息学软件综合预测B细胞构象表位;利用原核表达系统对人源α-烯醇化酶蛋白进行表达、亲和层析法进行,纯化抗原免疫BALB/c小鼠,化学合成预测的线性表位片段检测抗体反应,确定人源α-烯醇化酶蛋白B细胞表位。利用Clustal X进行蛋白质序列比对和Swiss-Model进行同源模建,研究人源α-烯醇化酶和牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶的交叉反应性。结果:人源α-烯醇化酶线性B细胞表位优势区域为9-25aa,28-43aa,70-85aa,163-178aa,229-244aa,280-295aa;构象性B细胞表位优势区域为:1-4/24-30/77-86/124aa,9-16/51-59aa,250-254/262-268/271-274aa;合成的线性表位片段中9-25aa免疫应答反应最强烈,其次是70-85aa,再次为28-43aa,163-178aa,229-244aa,280-295aa;牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶和人源α-烯醇化酶氨基酸序列同源性高达50.11%,两者在线性B细胞表位优势区域的9-24aa和32-42aa序列高度相似;空间构象比对结果显示牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶和人源α-烯醇化酶之间的RMSD值为1.055,且两者在3个构象性B细胞表位优势区域的空间构象高度相似,推测二者可能在上述区域发生交叉反应。结论:预测并鉴定了人源α-烯醇化酶蛋白的B细胞抗原表位,比较其与牙龈卟啉单胞菌的烯醇化酶可能发生交叉反应的位点,为研究人源α-烯醇化酶蛋白的自身抗原性和类风湿性关节炎发病机制提供了理论基础。     

脑烯醇化酶同工酶的研究进展

脑烯醇化酶(Enolase E、C,4,2,1,11)同工酶为脑糖元酵解途径中的关键酶。由于它在神经内分泌肿瘤,尤其是肺小细胞癌和神经母细胞瘤有异常过量的表达,可以作为有用的生物标记物应用于临床     

癫痫患儿血清神经元特异性烯醇化酶水平变化及临床意义

目的　研究癫痫患儿癫痫发作后血清神经元特异性烯醇化酶 (NSE)的变化。方法　采用放射免疫分析法对11例癫痫患儿发作后 4 8h内血清中NSE进行测定 ,并与 2 2例正常组进行对照。结果　 2 2例正常对照组血清中NSE进行测定值为 (6 .4 6± 3.35 ) μg/L ,癫痫发作组血清中NSE为 (17.4 5± 10 .1) μg/L ,两组比较有显著性差异 (P≤ 0 .0 1)。结论　癫痫发作组NSE水平明显高于正常对照组 ,提示癫痫发作后有一定程度的脑神经元损害。     

酿酒酵母烯醇化酶单克隆抗体的制备、筛选与鉴定

<正>烯醇化酶(enolase,ENO)是糖酵解过程中必需的关键酶,能催化磷酸甘油酸向磷酸烯醇式丙酮酸转变,也能在糖异生过程中催化逆向反应。白念珠烯醇化酶由440个氨基酸组成,相对分子质量(Mr)47 000左右。据研究,其含量分别约占白念珠菌孢子相和菌丝相的0.7%和2%[1],是白念珠菌含量最为丰富的蛋白质之一。近年来,住院患者院内侵袭性真菌感染(invasive fungi infection,IFI)的问题日益     

神经元特异性烯醇化酶对评价脑损害的临床价值

烯醇化酶是一种糖酵解酶,由三种具有不同免疫特性的亚基即a、β、γ亚基构成,以二聚体形式存在于组织细胞中。其中γγ-型烯醇化酶主要存在于神经元和神经内分泌细胞中,因而将其命名为神经元特异性烯醇化酶（NSE）[1]。在各种原因致神经系统损害时,脑脊液及体循环中均可检测出NSE,作为一个定量指标,NSE在神经系统疾病的诊断、判断疾病严重程度、估计预后及指导治疗等方面,具有重要意义。1NSE的来源及分布兔疫组化研究表明,NSE特异性存在于神经元和神经内分泌细胞的胞浆中,在神经系统中分布顺序为：大脑＞脊髓＞周围神经节。…     

新生儿缺氧缺血性脑病神经元烯醇化酶变化的研究

目的　探讨新生儿缺氧缺血性脑病时神经元烯醇化酶的变化,为HIE的诊断和治疗提供依据。方法　采用病历对照研究,将实验组分为三组:轻、中、重度HIE分别为2 1、4 9、8例;正常对照组73例。测定其血中神经元烯醇化酶的浓度变化。比较各组间检测指标的差异。结果　实验组NSE水平明显高于对照组,组间有显著性差异,P <0 .0 1:且实验组轻、中、重度间有显著性差异,P均<0 .0 5。结论　NSE水平与HIE的病情严重程度相关,是反映HIE严重程度比较客观的指标。     

脑外伤患者血清神经元特异性烯醇化酶测定及临床意义

为了探讨神经元特异性烯醇化酶 (ＮＳＥ)在脑外伤中的临床意义 ,从生化指标方面进一步了解脑外伤对脑实质的损害程度 ,我们测定了 79例脑外伤患者ＮＳＥ含量。现将结果报告如下。对象和方法一、对象 :急性脑外伤患者 79例 (男 5 1,女 2 8) ,年龄 2 0～6 8岁 ,均经临床确诊。根据我国第八届外科学会制定的分类方法 ,分为轻型 34例 ,中型 30例 ,重型 15例。对照组为健康体检人员 46名 ,无心血管疾病、脑梗塞、脑出血、糖尿病、肝肾疾病等。二、方法 :病人入院后取静脉血 2ｍｌ,分离血清 ,置 - 2 0℃保存待用。ＮＳＥ试剂盒由北京北方生物技术…     

2型猪链球菌双组分调控系统SalK/SalR抗吞噬机制的初步研究

目的 确定双组分调控系统SalK/SalR在2型猪链球菌抵抗THP-1单核细胞来源的巨噬细胞(THP-MΦ)吞噬中的作用.方法 透射电子显微镜观察野生株05ZYH33和突变株△salKR荚膜的变化,革兰氏染色及免疫荧光方法观察猪链球菌与THP-MΦ细胞的相互作用,通过THP-MΦ细胞吞噬模型评价猪链球菌的抗吞噬能力.结果 透射电子显微镜观察发现突变株△salKR荚膜消失,革兰氏染色结果和免疫荧光标记实验显示salKR缺失导致更多的猪链球菌被THP-MΦ细胞吞噬,THP-MΦ细胞吞噬模型进一步证实突变株△salKR比野生株更容易被THP-1细胞吞噬.结论 双组分调控系统SalK/SalR通过调控荚膜的形成来抵抗THP-MΦ细胞的吞噬.     

神经元特异性烯醇化酶ABC—ELISA方法的建立与应用

应用人脑神经元特异性烯醇化酶(NSE)和兔抗人NSE抗体,建立了测定NSE浓度的ABC—ELISA方法。该法灵敏度高、特异性强,标准曲线线性关系好;可用于临床分析病人血清的NSE浓度和诊断肺小细胞癌。     

肌型特异烯醇化酶RIA与临床意义（文献综述）

烯醇化酶(Enolase)是一种糖酵解酶，系统名称为2-乙磷酸甘油酸水合酶，它裂解2-磷酸甘油酸生成烯醇式磷酸丙酮酸，对体内糖代谢的顺利进行和能量产生均具有重要作用，同时烯醇化酶同功酶具有临床诊断价值。     

神经元特异性烯醇化酶酶联免疫吸附分析技术在体外培养神经元中的应用

ＭＴＴ法是用于反映体外培养神经细胞活性的指标，但对检测细胞活性没有特异性。本实验结合神经元特异性烯醇化酶免疫细胞化学技术特异性强、敏感谢性高的优点与酶联免疫吸附试验酶促底物邻苯二胺呈色形成弥散的可溶性有色产物，通过检测有色溶液的ＯＤ值来比较体外培养过程中神经细胞的活性以及相应的数目，在建立此方法的同时并用此方法检测了人胚脊髓提取液对神经细胞活性的影响。结果证明：分子量小于１０ｋＤ的人胚脊髓提取对体     

急性脑梗塞患者血清神经元特异性烯醇化酶测定的意义

烯醇化酶 (Ｅｎｄａｓｅ)是参与糖酵解的关键酶 ,由α、β、γ三种亚基以二聚体形式组成五种同工酶 ,其中γγ型特异地存在于神经元和神经内分泌细胞中 ,称为神经元特异性烯醇化酶 (Ｎｅｕｒｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃｅｎｏｌａｓｅ ,ＮＳＥ) ,ＮＳＥ占脑内全部可溶性蛋白的 1.5 % [1] ,而正常体液中含量甚微。近年来 ,ＮＳＥ作为神经元损伤的敏感性和特异性标志其与中枢神经系统疾病的关系已引国内外学者的极大关注 ,为探讨急性脑梗塞 (ＣＩ)患者血清ＮＳＥ变化的临床意义 ,现作如下探讨。资料和方法一、资料 :(一 )患者组 :42例 (男 2 7,女 15…     

抗人α-烯醇化酶单克隆抗体的研制及其抗原识别表位初步鉴定

研制抗人α-烯醇化酶的单克隆抗体,并对其生物学特性进行初步研究。利用原核表达系统对人α-烯醇化酶进行一系列重组表达。表达纯化后的人α-烯醇化酶作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术以及克隆化培养筛选稳定分泌抗人α-烯醇化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用免疫荧光技术、免疫组化技术对此单克隆抗体加以验证,并应用噬菌体随机十二肽库展示技术结合生物信息学方法对抗体识别表位进行初步鉴定。结果显示,克隆表达了人α-烯醇化酶,筛选获得一株稳定分泌抗人α-烯醇化酶单克隆抗体细胞株,此单克隆抗体的亚型为IgG1,它可与腹腔巨噬细胞的胞膜及胞浆的烯醇化酶特异性结合。噬菌体随机十二肽库展示技术筛选出的氨基酸序列经生物信息学分析,初步确定此单克隆抗体的抗原表位为第259-262氨基酸与第267-269氨基酸,其恰好位于人α-烯醇化酶三维结构表面的凸环上。成功制备了一株抗人α-烯醇化酶单克隆抗体并对其抗原识别表位进行初步鉴定,为探究人α-烯醇化酶在人体病理生理活性中的作用提供了研究工具。     

神经元特异性烯醇化酶光激化学发光免疫分析法的建立

研制检测人血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的光激化学发光免疫分析(AlphaLISA)快速检测试剂盒。采用受体微球用一株NSE单克隆抗体包被,用生物素标记一株单克隆抗体,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂盒,优化反应体系并对试剂盒的各项性能指标进行评价。结果显示:自制NSE试剂盒灵敏度为0.149 ng/ml,线性范围为0.149~600ng/ml,分析内、分析间的精密度分别为3.7%~4.3%、3.9%~5.2%,与细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、非神经元性烯醇化酶(NNE)均无交叉反应,154份临床血清样本用本试剂盒与罗氏化学发光试剂盒检测,其相关系数为0.979。发现自制NSE-AlphaLISA试剂盒的各项性能指标均能达到临床检测要求,可用于临床血清样本NSE浓度的测定。     

小鼠α烯醇化酶基因真核表达载体的构建与鉴定

目的构建小鼠α烯醇化酶（En01）基因的真核表达载体。方法以健康小鼠肾脏组织细胞的eDNA为模板,采用聚合酶链式反应（PCR）扩增Enol基因编码区的全部序列,克隆至真核细胞表达载体pCDNA3．1^＋中,测序鉴定目的基因用阳离子脂质体转染的方法转染中国仓鼠卵巢CHO细胞。结果PCR扩增的特异性片段长度为1304bp,以此构建重组质粒pCDNA3．1^＋-Enol,测序结果与Gen．bank中的鼠源Enol基因eDNA序列一致。转染中国仓鼠卵巢细胞后可检测到Enol蛋白的表达。结论构建的真核表达载体pCDNA3．1^＋-Enol可在真核细胞内正确表达,这为进一步的疫苗研究奠定了基础。     

神经元特异性烯醇化酶在新生儿HIE及高压氧治疗的临床研究

目的：动态观察神经元特异性烯醇化酶在新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）时及高压氧治疗前后水平的变化,以探讨在临床中的意义。方法：应用双抗体夹心法测定HIE病人于入院24h,3d,5d及高压氧治疗前后血清中NSE浓度与对照组比较。结果（1）ME患者24h,3d时血清NSE水平显著高于对照组,P＜0．05,5d时与对照组无差异,P＝0．756。（2）24h血清NSE含量显著高于3d,5d,P=0.0002,3d时血清NSE含量显著高于5d,P=0.038。（3）高压氧治疗后血清中NSE含量显著降低,P＝0．027,结论（1）HIE时血清中NSE含量明显增高,且其升高程度与病情危重程度密切相关。（2）高压氧对治疗HIE有较好的效果,且可改善预后,但一个疗程以不超过五次为宜。     

血清神经元特异性烯醇化酶对小细胞肺癌的诊断价值探讨

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一 ,而其中小细胞肺癌恶性程度最高、转移较早 ,据文献报道 ,临床确诊时 ,约 5 0 %已有远处转移。但小细胞肺癌 (ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ,ＳＣＬＣ)对放疗较为敏感 ,早期诊断、早期治疗可延长病人生存期。为探讨血清神经元特异性烯醇化酶 (ｎｅｕｒｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃｅｎｏｌａｓｅ,ＮＳＥ)对ＳＣＬＣ患者的诊断价值 ,我们应用放射免疫分析法对 2 9例小细胞肺癌患者及 4 0例正常人血清进行了ＮＳＥ的检测。材料和方法一、临床资料 :(一 )小细胞肺癌 (ＳＣＬＣ)组 :2 9例 (男 2 1,女 8) ,年龄 2 …     

神经烯醇化酶与中枢神经系统发育、损伤修复的研究进展

神经烯醇化酶（NSE）作为神经元发育、重塑的特异性标志物,在中枢神经系统发育和损伤修复过程中呈时空性表达分布。损伤后NSE的改变可以反映病理变化,通过调节NSE水平可以达到损伤后的修复效果,对神经系统的损伤修复有重要意义。本文中我们就NSE的分子结构、表达调控、生物学功能及其与中枢神经系统发育、损伤修复关系进行综述。