LKB1基因转染对人肺腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨外源性LKB1基因表达对人肺腺癌细胞生物学行为的影响。方法:应用巢式PCR方法扩增LKB1基因编码区,利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA-LKB1质粒和空载体pcDNA3.1质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Western blot检测LKB1和STAT3在A549细胞中的表达变化。通过绘制生长曲线和克隆形成试验检测获得性表达LKB1基因后肺癌细胞的增殖变化,流式细胞术(FCM)分析其细胞周期及其凋亡的变化。结果:成功获得了稳定表达外源性LKB1基因的A549细胞系,与转染空白载体组比较,转染LKB1基因的细胞生长速度明显减慢,细胞周期中G1/G0期比例明显增加,S期比例减少,细胞凋亡率升高;同时STAT3蛋白的磷酸化水平明显降低。结论:LKB1可能通过下调STAT3蛋白磷酸化水平的表达从而抑制A549细胞的恶性生物学行为。     

外源性p53基因对人胃粘膜上皮细胞系GES－1的生物学效应

为了解ｐ５３基因在细胞癌变过程中的作用，分别将野生型和突变型的ｐ５３基因导入体外培养的人胃粘膜上皮细胞系ＧＥＳ－１中，进一步比较，分析转染ｐ５３基因对ＧＥＳ－１细胞的生物学效应发现：（１）外源ｐ５３基因改变了ＧＥＳ－１细胞的形态──转染野生型ｐ５３基因使得ＧＥＳ－１出现一些细胞分化的迹象，在其胞浆有明显的空泡，空泡周围有微管的环绕；（２）ｐ５３基因的转染改变了ＧＥＳ－１生长状态──野生型的ｐ５３基因转染的细胞的克隆形成率低于突变型ｐ５３基因以及空载体ｎｅｏ转染的细胞。实验还发现突变型ｐ５３基因改变了细胞生长习性，使细胞有选择生长优势，对细胞恶性度有促进作用。     

转染野生型p53基因诱发家兔动脉粥样硬化斑块不稳定性的实验研究

目的：探讨野生型p53基因对血管平滑肌细胞（VSMC）的促凋亡作用在构建动脉粥样硬化（As）不稳定斑块动物模型中的价值。方法： 54只雄性新西兰纯种兔用球囊损伤腹主动脉+高脂喂养10周, 于8周末随机分成A组（p53基因组，27只）和B组（LacZ基因组，27只），在腹主动脉斑块形成处分别转染携带野生型p53基因或LacZ基因的重组腺病毒载体；2周后，A组和B组各处死10只，观察斑块的自发破裂情况。然后两组剩余实验兔给予中国斑点蝰蛇毒（CRVV）和组胺药物触发，比较两组发生斑块破裂的发生率。应用免疫组织化学染色、流式细胞仪、原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）及电镜检测基因转染部位的平滑肌细胞的凋亡情况。结果： A组TUNEL测定的凋亡阳性细胞率显著高于B组（分别为2.5%±0.8%,1.0%±0.3%，P<0.05），流式细胞仪测定的细胞凋亡率亦明显高于B组（分别为20.04%±6.20%，6.89%±1.20%，P<0.01）；电镜结果显示胞核中异染色体边聚明显，凋亡小体多见；斑块中的VSMC显著减少，纤维帽变薄以及纤维帽/内中膜厚度明显少于B组（纤维帽厚度分别为132.9±56.7，181.8±59.7，P<0.05；纤维帽/内中膜厚度0.20±0.18，0.21±0.11，P<0.05），药物触发后斑块破裂的发生率显著高于B组（分别为85.7%，23.1%，P<0.01）。结论： 外源性人野生型p53基因转染As家兔后，可促进VSMC的凋亡的发生，导致As斑块向不稳定方向发展。     

野生型p53基因转染卵巢癌SKOV-3细胞对化疗药物顺铂敏感性的影响

目的 研究野生型p53基因转染卵巢癌SKOV－3细胞对化疗药物顺铂敏感性的影响。方法 用脂质体介导的转染技术，将含有全长人野生型p53 cDNA的真核表达重组质粒分别导入受不同浓度顺铂作用的SKOV－3培养细胞中，观察p53不同状态下对肿瘤细胞化疗敏感性的差异。结果 转染p53基因后的SKOV－3细胞集落形成率与未转染的SKOV－3细胞相比，抑制率为56．4％。用0.5μg/ml顺铂分别作用24h、48h后，集落形成数分别下降了76．2％、84．1％；用1μg/ml顺铂分别作用24h、48h后，集落形成数分别下降了89．5％、93．7％。转染p53基因后，肿瘤细胞S期和G2／M期的比例下降，G1／G0期的比例增加，p53基因的转染使卵巢癌细胞发生G1期阻滞。结论 外源性野生型p53基因的转染增加了卵巢癌SKOV－3细胞对化疗药顺铂的敏感性。     

野生型p53基因诱导肝癌细胞凋亡及p21（WAF1／CIP …

目的：研究野生型ｐ５３基因对人肝癌细胞系细胞凋亡的作用。方法：通过脂质体转染方法将野生型ｐ５３基因（ｗｔ－ｐ５３）导入ｐ５３缺陷的ＨＣＣ－９２０４细胞系中，并获稳定表达。结果：转染ｗｔ－ｐ５３后细胞生长缓慢，Ｇ１期细胞数量由转基因前的４８．５％增加到７８．０％，并有较多细胞逐渐死亡。电镜观察和ＤＮＡ分析证实细胞死亡方式主要是细胞凋亡。免疫组化结果显示细胞转染ｗｔ－ｐ５３后，ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１     

TGF-β1基因转染对大鼠树突状细胞生物学特性的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)基因转染对大鼠树突状细胞生物学特性的影响。方法 将TGF-β1基因导入体外培养的大鼠树突状细胞,经过G418筛选后,采用Western blot和水貂肺上皮细胞(Mv1)生长抑制试验,了解转染细胞TGF-β1的表达及其生物学活性。通过混合淋巴细胞反应,观察转染的树突状细胞对T淋巴细胞增殖的影响。结果 FGF-β1基因转染的树突状细胞可以分泌TGF-β1,而且具有特异性抑制Mv1增长的生物学活性。在混合淋巴细胞反应中,TGF-β1基因转染的树突状细胞对T淋巴细胞的增殖有抑制作用,而空载体pcDNA3对照组与未转染组的树突状细胞具有强烈的激发T细胞增殖的能力。结论 利用构建的TGF-β1表达质粒转染大鼠树突状细胞,转入的TGF-β1基因可以在树突状细胞内稳定表达,并且使树突状细胞的生物学特性发生相应的改变。     

人突变p27基因对大肠癌细胞生物学行为的影响

目的： 观察人突变p27基因（p27mt）对人大肠癌细胞生长的影响，探讨p27mt基因在大肠癌基因治疗中的作用及可能机制。方法： 以携带突变p27基因复制缺陷型腺病毒（Ad-p27mt）为载体，转染大肠癌细胞SW480；Western blotting方法检测p27mt蛋白的表达；细胞计数法检测p27mt对SW480细胞生长的抑制作用；用流式细胞仪检测细胞周期；用DNA片段分析法检测细胞凋亡。结果： Ad-p27mt转染SW480细胞后，p27在细胞中出现了蛋白高表达;77.96%的细胞阻滞于G₀/G₁期，而Ad-LacZ组及空白对照组分别为27.57%和25.29%；生长曲线显示Ad-p27mt对细胞生长有明显的抑制作用；DNA片段分析示p27mt基因可诱导细胞的凋亡。结论： p27mt对细胞周期有明显的阻滞作用，主要阻滞于G₀/G₁期；p27mt基因对细胞的生长抑制机制与诱导细胞凋亡和细胞周期的阻滞有关。     

转染野生型p53基因稳定表达后早期肝癌细胞的自发性凋亡

目的：研究外源性野生型ｐ５３基因（ｗｔ－ｐ５３）对ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞系的作用和意义。方法：通过脂质体介导方式将人ｗｔ－ｐ５３基因转染至肝癌细胞中。结果：转染ｗｔ－ｐ５３稳定表达早期，肝癌细胞发生自发凋亡，流式细胞仪检测结果显示典型的凋亡峰，其凋亡细胞数为５２．８％，细胞周期分析结果显示，转染ｗｔ－ｐ５３细胞中Ｇ１、Ｓ和Ｇ２期细胞分别为７９．１％，２０．５％和０．４％，亲本细胞则分别为４８．５％，２７．０％和２３．７％。琼脂糖电泳显示ＤＮＡ断裂呈梯状，透射电镜观察肝癌细胞发生染色质浓聚并边集。结论：转染的外源性ｗｔ－ｐ５３具有介导肝癌细胞凋亡的作用。     

人Blys转染细胞对B细胞功能的影响

利用RT-PCR方法从经IFN-γ激发的正常人外周血单核细胞总RNA中扩增出全长BlyscDNA,继而将BlyscDNA插入真核表达载体逆转录病毒载体pSIV1中。以脂质体转染法将重组逆转录病毒载体与两个辅病毒载体共转染包装细胞293T,将含完整病毒颗粒的上清转染小鼠成纤维细胞L929,经G418筛选获得稳定表达Blys分子的L929细胞;RT-PCR和流式细胞术检测证实Blys分子在L929的稳定和高水平表达。继而以该转染细胞与PWM驱动的人扁桃体B细胞共培养,体外实验表明Blys介导的共刺激信号能促进该培养体系B淋巴细胞增殖,与抗μ抗体信号协同能刺激B细胞分泌IgG。     

丙型肝炎病毒核心蛋白转染HepG2细胞对其p53表达的影响

目的 研究丙型肝炎病毒核心蛋白（HCV—core protein，HCV—C）对HepG2细胞周期、细胞凋亡和n53蛋白表达的影响。方法 表达HCV—C的真核表达质粒pcDNA3.1-core，通过Lipofectamine基因转染法转染HepG2细胞，经G418筛选获得稳定转染HepG2细胞，经Westem Blot证实HCV核心蛋白阳性表达。利用四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法，平板克隆实验和流式细胞术，蛋白印迹和免疫细胞化学法检测HCV核心蛋白对细胞生长增殖率、细胞周期、细胞凋亡率和p53蛋白表达的影响。结果 HCV—C转染组细胞增殖率显著高于空白质粒转染组和未转染组；HCV—C转染组细胞S期所占百分率高于未转染组；HCV-C转染组细胞凋亡率显著低于未转染组；HCV—C转染组细胞突变型p53蛋白的表达高于空白质粒转染组和未转染组。结论 HCV核心蛋白可能通过促进突变型p53蛋白的表达，促进HepG2从G0／1期进入S期，促进细胞生长增殖，抑制细胞凋亡。     

NEU3对人前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响

目的:探讨神经氨酸酶3(NEU3)与人前列腺癌DU145细胞活力、侵袭和凋亡的关系,并探讨其分子机制。方法:体外培养人前列腺癌DU145细胞,并分为空白对照组和处理组,处理组再分别给予神经氨酸酶活性抑制剂DANA处理和RNA干扰靶向沉默NEU3,采用CCK-8法检测细胞的活力;Transwell法检测细胞侵袭能力;q PCR法检测2种处理方式对凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA水平的影响;Western blot法检测2种处理方式对NEU3、基质金属蛋白酶2(MMP2)和Bcl-2表达的影响;流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:与空白对照组相比,DANA处理后前列腺癌细胞的NEU3表达无明显变化,细胞活力增强,MMP2蛋白表达减少,侵袭力减弱,凋亡无明显变化,Bcl-2的mRNA和蛋白表达减少(P 0.05);NEU3沉默后NEU3蛋白表达减少,细胞活力增强,MMP2蛋白表达和细胞侵袭力无明显变化,凋亡能力增强,Bcl-2的mRNA和蛋白表达均下降(P 0.05)。结论:抑制NEU3可以减弱人前列腺癌DU145细胞活力,增强细胞凋亡能力,但对侵袭能力无明显影响。     

重组质粒pEGFP-N1-NPRL2对人胃癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体对SGC-7901胃癌细胞体外增殖﹑细胞周期、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法:构建pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体,并进行酶切及测序鉴定。脂质体介导转染入SGC-7901胃癌细胞,应用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot法检测NPRL2的基因及蛋白水平情况,CCK8法检测细胞增殖的变化,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率的变化,Transwell实验检测NPRL2对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:成功构建了pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体。重组质粒转染SGC-7901细胞后,通过荧光显微镜观察到绿色荧光的表达,RT-PCR和Westernblot法检测到NPRL2 mRNA及蛋白的表达,CCK8法检测发现NPRL2能够明显抑制肿瘤细胞增殖(P<0.05),细胞周期分析显示NPRL2使细胞停在G0～G1期(P<0.05),细胞凋亡结果显示NPRL2能抑制细胞凋亡(P<0.05),Transwell侵袭和迁移实验显示NPRL2使细胞侵袭迁移能力均降低(P<0.05)。结论:NPRL2可抑制肿瘤细胞的增殖、周期、侵袭及迁移,并促进凋亡。     

外源性野生型p53基因对人肺腺癌细胞系GLC-82的生物学效应

目的：研究外源性野生型ｐ５３基因对人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２的生物学作用。方法：将含有野生型ｐ５３基因的ｐＤＯＲ－ｎｅｏ逆转录病毒载体，通过ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染ＧＬＣ－８２细胞，用流式细胞仪、电镜及３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，观察野生型ｐ５３基因对ＧＬＣ－８２细胞的生物学效应。结果：电镜观察可见，转染野生型ｐ５３基因，可使ＧＬＣ－８２细胞出现一些病理现象，如胞浆中有明显的空泡及线粒体肿胀；流式细胞仪分析显示，野生型ｐ５３基因可阻止ＧＬＣ－８２细胞周期停止于Ｇ１～Ｓ区；３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验提示，野生型ｐ５３基因能够抑制ＧＬＣ－８２细胞ＤＮＡ的合成。结论：这些结果阐明了野生型ｐ５３基因是抑制ＧＬＣ－８２细胞生长的部分机理。     

转染HPV16E6基因人树突状细胞疫苗的制备及生物学特性

目的：制备来源于人外周血并转染HPV16E6基因的树突状细胞（DC）疫苗，检测其细胞形态、分子表型及诱导的免疫效应。方法：细胞因子扩增人外周血DC，Lipofectamine转染HPV16E6制备DC疫苗。动态形态学观察，免疫细胞化学及流式细胞术检测分子表达．体外诱导并测定CTL活性。结果：转染DC呈形态迥异的多突起状，其E6蛋白、CD80、CD86和CD83分子的表达率依次为47．3％、82．5％、79．8％和85．7％，诱导杀伤Caski细胞的活性明显高于对照组（P〈0．01）。结论：转染DC疫苗保持了功能成熟DC的形态特征，且内源性表达E6蛋白，能诱导高效的特异性抗肿瘤免疫应答。     

幽门螺杆菌对AGS细胞p53、p21WAF1/CIP1和p27KIP1基因转录的影响

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物(Cyclin-dependent kinase inhibitors，CDKIs)负调控CDKs活性，主要有p16^INK4a和p15^INK4b及p21^WAF1/CIP1和p27^KIP1等两类。p53基因亦可调控细胞周期及凋亡，异常的细胞凋亡与消化道等肿瘤密切相关。本文采用MP-RT-PCR检测了cag-A^ ／CagA^ 和cagA^-／CagA^- Hp菌株感染前后AGS细胞p53、p21^WAF1/CIP1和p27^KIP1转录水平的改变，以期了解肋诱导细胞癌变和细胞周期阻滞的关系及可能的机制。     

p21WAF1／CIPI基因导入对p53突变人肺癌细胞系生长特性的影响

目的 探讨含突变ｐ５３基因癌细胞系ｐ２１基因的抗肿瘤作用。方法 构建人ｐ２１表达重组子,导入ｐ５３基因突变的人肺癌ＰＧ细胞每当增产同表达ｐ２１的细胞系;然后观察其形态太生长特性的改变;ＣＤＫ４,ＰＣＮＡ水平;对基因毒性物的反应性。结果 在含ｐ５３基因突变的ＰＧ细胞内导入的性ｐ２１基因,其高表达ｐ２１约是ＰＧ细胞的６倍,转谬为薄等异型性降低;生长速度下降（５０％）,叠落生长不明显;在０．５％血甭条件     

p53对核仁应激诱导卵巢癌细胞凋亡的影响

目的：探究p53对核仁应激诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法：体外培养SKOV3细胞,根据实验药物不同分成4个实验组：control组、BMH-21（核仁应激诱导剂）组、pifithrin-α(PFT-α;p53抑制剂)+BMH-21组和RG7112（抑制p53降解并激活p53通路）+BMH-21组。MTT法检测细胞活力;免疫荧光染色检测细胞中p53蛋白定位和表达水平,以及BMH-21诱导的核仁应激的发生;Western blot法检测蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：MTT结果显示,BMH-21组细胞活力比control组显著下降（P<0.01）,PFT-α+BMH-21组细胞活力与BMH-21组相比无显著变化（P>0.05）,而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著下降（P<0.01）;荧光显微镜观察发现,BMH-21组p53蛋白表达水平比control组显著升高,PFT-α+BMH-21组p53蛋白表达水平比BMH-21组显著降低,而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著升高,且大部分入核堆积;Western blot结果...     

外源性p53基因对人胃粘膜上皮细胞系GES—1的生物学效应

为了解ｐ５３基因在细胞癌变过程中的作用，分别将野生型和突变型的ｐ５３基因导入体外培养的人胃粘膜上皮细胞系ＧＥＳ－１中，进一步比较，分析转染ｐ５３基因对ＧＥＳ－１细胞的生物学效应发现：（１）外源ｐ５３基因改变了ＧＥＳ－１细胞的形态－转染野生型ｐ５３基因使得ＧＥＳ－１出现一些细胞分化的迹象，在其胞浆有明显的空泡，空泡周围有微管的环绕；（２）ｐ５３基因的转总收入籽ＧＥＳ－１生长状态－野生型的ｐ５３基因转     

人TACI-Fc融合蛋白对XG6细胞体外生长的调节作用

目的 建立人TACI-Fc基因转染细胞，获得该融合蛋白，研究其对多发性骨髓瘤细胞系XG6的生物学作用。方法利用RT-PCR方法从扁桃体细胞中克隆全长TACI cDNA片段，将该基因的胞外段sTACI与人IgGI Fc段连接到pcDNA真核表达载体上，使两者融合表达。脂质体法将重组质粒pcDNA-sTACI-Fc转入小鼠成纤维细胞系L929-ELISA法测定转染TACI-Fc基因的L929细胞培养上清中TACI-Fc的含量，培养上清经亲和层析柱纯化，获得纯化的融合蛋白TACI-Fc。然后应用台盼蓝染色活细胞计数和^3H-TdR掺入法检测其对XG6细胞的生长和增殖的调节作用。结果经RT-PCR和ELISA方法检测表明，成功构建了稳定表达sTACI-Fc融合蛋白的基因转染细胞。基因转染细胞的培养上清经亲和层析柱纯化，得到TACI-Fc融合蛋白。体外检测其生物学活性结果表明，该融合蛋白可有效地阻断Blys对骨髓瘤细胞株XG6的促增殖作用。结论本实验成功地将TACI胞外段与人IgG1 Fc段在真核细胞中进行融合表达，表达的蛋白质具有良好的生物学功能，这为进一步对TACI基因进行功能研究奠定了物质基础。     

转染野生型P53基因稳定表达后早期肝癌细胞的 …

研究外源性野生型Ｐ５３对ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞系的作用和意义。方法：通过脂质体介导方式将和ｗｔ－Ｐ５３基因转染至肝癌细胞中，结果：转染ｗｔ－ｐ５３稳定表达早期，肝癌细胞发生自发凋亡，流式细胞仪检测结果显示典型的凋亡峰，其凋亡细胞数为５２．８％，细胞周期分析结果显示，转染ｗｔ－ｐ５３细胞中Ｇ１，２和Ｇ２期细胞分别为７９１％，２０．％和０．４％，亲本细胞则分别为４８．５％，２７．０％和２３．７％。琼