烟草烟雾提取物促进髓样树突状细胞共刺激分子的表达北大核心CSCD

目的通过体外实验研究烟草烟雾提取物(CSE)对小鼠髓样树突状细胞(mDC)成熟的影响及可能的机制。方法小鼠骨髓来源的单个核细胞加入粒-单集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和含100 mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液诱导出可供实验用的高纯度的未成熟DC(iDC),分空白对照组和CSE刺激组;CSE刺激组按15 mL/L的终浓度加入CSE,两组继续培养24 h,流式细胞检测技术检测mDC的共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ的表达。结果空白对照组的mDC低表达CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ;CSE刺激后mDC表达CD40、CD80和MHC-Ⅱ比空白对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论烟草烟雾提取物促进小鼠骨髓来源的mDC的CD40、CD80和MHC-Ⅱ的表达。     

红霉素对小鼠髓样树突状细胞表面免疫分子表达的影响

目的探讨红霉素体外对小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)的表面分子Ⅱ类组织相容性抗原(MHCⅡ)和共刺激分子表达的影响。方法用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(IL-4)联合诱导培养小鼠骨髓来源的单个核细胞分化成未成熟DCs后随机分为对照组(A)和红霉素干预组(B),2组均予肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激,红霉素干预组同时按100μg/ml的终质量浓度加入红霉素干预,2组再培养24 h后用流式细胞仪检测技术检测DCs的MHCⅡ和共刺激分子表达。结果红霉素干预组的DCs表面分子MHCⅡ和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达水平明显低于对照组(P0.05)。结论红霉素可下调小鼠骨髓来源DCs的MHCⅡ和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达。     

TLR2激动剂Pam3CK逆转IL-10转染小鼠髓样树突状细胞免疫功能的研究

目的:观察TLR2激活剂Pam3CK对IL-10转染小鼠髓样树突状细胞免疫功能影响。方法:转染IL-10至小鼠髓样树突状细胞(mDC),TLR2配体Pam3CK刺激48小时,利用流式细胞仪检测DC表面标志MHCⅡ、CD80、CD86及FasL等分子的表达;ELISA检测细胞产生IL-6、TNF-α。结果:IL-10抑制mDC表达CD80、CD86、MHCⅡ类分子,降低其分泌IL-6、TNF-α,促进其表达FasL,而TLR2激动剂刺激增加了IL-10转染DC表达MHC-Ⅱ类分子及CD80、CD86,促进其产生IL-6及TNF-α,抑制了FasL表达。结论:TLR2激动剂可逆转IL-10诱发的DC免疫应答低下。     

阿司匹林对树突状细胞成熟及免疫功能的体外研究

研究阿司匹林在体外对小鼠树突状细胞(mDC)成熟及免疫功能的影响。在骨髓来源未成熟树突状细胞培养过程中,加入不同剂量(1mmol/L、2mmol/L)的阿司匹林,观察DC形态。流式细胞仪检测各组mDC表面共刺激分子CD86、CD80的表达;台盼蓝染色测细胞活力;混合淋巴细胞反应(MLR)检测mDC对T淋巴细胞刺激能力;ELISA法检测MLR上清液中细胞因子。与对照组比,阿司匹林处理的DC(aspirin-DC)表面CD80、CD86表达明显降低(P<0.01);对T淋巴细胞刺激能力减弱;MLR上清液中炎性因子(TNF-α、IL-1β)明显减少(P<0.01)。结果:在体外培养过程中给予阿司匹林干预能够抑制mDC的成熟及功能,呈剂量依赖性;阿司匹林对DC功能的抑制可能是阿司匹林抑制炎症反应,治疗冠心病的机制之一。     

香烟烟雾提取物抑制树突状细胞诱导CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)暴露及抑制CD40-CD40L路径对小鼠髓源性树突状细胞(BMDC)诱导CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)的影响。方法使用40 ng/m L重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)和10 ng/m L重组小鼠白细胞介素4(rm IL-4)联合诱导无特定病原体级健康雄性BALB/c小鼠骨髓来源的单个核细胞分化为树突状细胞(DC),流式细胞术检测小鼠BMDC表面CD40分子的表达,再采用免疫磁珠分选的方法从BALB/c小鼠脾脏细胞分离出CD4~+T细胞。将所培养出的小鼠BMDC与正常对照组小鼠脾脏细胞分选的CD4~+T细胞共培养,加入CSE及拮抗性CD40抗体,作用24 h;流式细胞术观察各组细胞CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg的变化,液相芯片技术检测细胞上清液白细胞介素10(IL-10)、IL-6的水平。结果 BMDC与CD4~+T淋巴细胞共培养可以促进CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg分化,经CSE刺激后,流式细胞术检测显示小鼠BMDC与CD4~+T细胞共培养后分化的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg数量降低,细胞上清液IL-10降低、IL-6的水平升高;而加入拮抗性CD40抗体细胞共培养组CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg增加,液相芯片检测细胞上清液IL-10上升、IL-6的水平下降。结论 CSE减少CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg数量,体外使用拮抗性抗CD40抗体阻断CD40-CD40L通路可以促进CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg。     

MRP8、MRP14及MRP8/14促进体外培养的小鼠骨髓来源树突状细胞的表型成熟

目的探讨髓样相关蛋白8(MRP8)、MRP14及其异二聚体MRP8/14对小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC)表型成熟的影响。方法体外培养及纯化小鼠BMDC,分为对照组、1μg/m L MRP14处理组、1μg/m L MRP8处理组、1μg/m L MRP8/14处理组。采用流式细胞术检测刺激后BMDC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)的表达情况。结果 MRP14、MRP8及MRP8/14均能促进BMDC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86表达,MRP14、MRP8均能促进BMDC表面共刺激分子MHCⅡ表达,且MRP14和MRP8/14促进BMDC表达CD80、CD86的能力强于MRP8。结论 MRP14、MRP8及MRP8/14通过增加BMDC表面共刺激分子的表达而促进BMDC的表型成熟,且MRP8、MRP14及MRP8/14三者促进DC表达各种共刺激分子的能力不同。     

地塞米松对烟草烟雾刺激的人巨噬细胞沉默信息调节因子1 表达影响的实验研究

目的:探讨地塞米松(DEX)对烟草烟雾提取物(CSE)刺激的人巨噬细胞中沉默信息调节因子1(SIRT1)表达的影响及其机制。方法:体外培养人类单核细胞系U937细胞,用佛波酯将其诱导分化为人巨噬细胞,将细胞分为5组:对照组(Control)、CSE组(CSE)、地塞米松组(DEX)、烟酰胺组(NAM)、吡咯烷二硫氨基甲酸组(PDTC)。CSE组用1%浓度烟草烟雾提取物刺激24 h;地塞米松组用10-6mol/L地塞米松预处理24 h后,用1%浓度CSE刺激24 h;烟酰胺组20 mmol/L浓度烟酰胺孵育24 h;吡咯烷二硫氨基甲酸组用20 nmol/L浓度吡咯烷二硫氨基甲酸孵育24 h。处理后分别用荧光酶标仪检测各组细胞ROS释放水平,ELISA试剂盒检测细胞上清液IL-6的浓度;蛋白印迹实验(Western blot)检测SIRT1和NF-κB蛋白表达。结果:烟草烟雾引起人巨噬细胞释放ROS增加(P 0. 01),促进IL-6释放(P 0. 01),抑制细胞中SIRT1表达以及促进转录因子NF-κB蛋白表达(P 0. 01)。DEX可抑制烟草烟雾诱导的人巨噬细胞上清中IL-6的含量(P 0. 01),降低烟草烟雾暴露引起的人巨噬细胞内ROS释放(P 0. 01);下调烟草烟雾诱导的人巨噬细胞NF-κB的表达(P 0. 01),增强烟草烟雾抑制的人巨噬细胞SIRT1蛋白表达(P 0. 01)。结论:DEX通过抑制CSE引起的ROS释放从而降低CSE对SIRT1的损害,进而抑制NF-κB表达,最终减少炎症介质IL-6释放。     

CⅡTA基因修饰树突状细胞增强荷肝癌小鼠抗瘤效应

目的:探讨MHC-Ⅱ类分子反式激活因子(MHCclassⅡtransactivator)CⅡTA基因对树突状细胞(Dendriticcell,DC)表面MHC-Ⅰ/Ⅱ类分子及共刺激分子CD80、CD86的上调作用,为肝癌生物治疗提供新的思路。方法:从小鼠骨髓中大量扩增DC,并用脂质体转染法将小鼠CⅡTA(mCⅡTA)基因转入DC中,用流式细胞术观察转染前、后DC表面MHC-Ⅰ/Ⅱ类分子及CD80、CD86的表达。建立小鼠肝癌模型,将荷肝癌小鼠分为4组,第1组:分别于肝癌组织块周围注入PBS;第2组:未转入mCⅡTA基因的DC;第3组:转入mCⅡTA基因的DC;第4组:转入mCⅡTA基因并经H22肿瘤抗原刺激的DC。每周1次,连续接种3wk,连续7wk动态测量肝癌的大小,观察转染mCⅡTA基因对荷肝癌小鼠抗瘤效应的影响。结果:转染mCⅡTA基因使DC上MHC-Ⅰ/Ⅱ分子的表达率由74.2%/66.7%明显上调为93.6%/91.4%;CD80/CD86的表达率由52.3%/60.5%明显上调为89.7%/91.5%(P<0.05)。免疫接种后,第4组荷肝癌小鼠肝癌组织块的平均面积明显小于第1、2、3组(在第3、4、5、6、7周时,与第1、2组相比较,P<0.05;在第5、6、7周时与第3组相比较,P<0.05)。结论:转入mCⅡTA后,DC表面MHC-Ⅰ/Ⅱ分子及CD80/CD86的表达率明显上调,DC的抗瘤效应增强。本研究为将DC应用于肿瘤的生物治疗提供了新的途径。     

Sel1L 对小鼠骨髓源树突状细胞的影响

目的:研究Sel1L(Suppressor/ enhancer of Lin-12-like)基因对小鼠骨髓源树突状细胞(BMDCs)分化及其功能的影响。方法:利用Cre-Loxp 重组系统构建Sel1L 基因敲除小鼠模型,用ELISA 和实时荧光定量法检测BMDCs 分泌细胞因子IL-6、IL-12 的表达;用免疫印迹法(Western bolt)检测BMDCs 细胞中Sel1L蛋白的表达;用流式细胞术检测BMDCs 细胞CFSE、细胞表面分子CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ及其对特异性CD4⁺ T 细胞抗原提呈能力的影响。结果:Sel1L的缺失抑制BMDC诱导分化过程中的增殖效率,上调DCs 分泌因子的能力和MHC-Ⅰ的表达,减少MHC-Ⅱ的表达,并抑制BMDCs 细胞对OVA323-339 抗原特异性T 细胞的增殖。结论:Sel1L 缺失可以抑制小鼠骨髓源树突状细胞的分化,下调DC 对OVA 特异性的CD4⁺ T细胞的抗原提呈功能。     

补体调节蛋白Crry对树突状细胞的调控及诱导同种移植免疫低反应

目的:探讨补体调节蛋白Crry对树突状细胞(DC)的调节作用及诱导同种移植免疫低反应性的机制。方法:分离BALB/c小鼠的骨髓来源树突状细胞,试验分为2组:①脂多糖(LPS)刺激组,即培养结束前加入外源性脂多糖(1 mg/L)刺激24小时;②Crry处理组,加入抗小鼠Crry抗体5μg/ml,结束前加入外源性脂多糖(1 mg/L)刺激24小时,流式细胞仪检测树突状细胞表面分子CD86、CD40、MHCⅡ的表达,ELISA法检测其细胞上清液中IFN-γ、IL-10和IL-12的水平,ELISA法检测细胞上清液中C3、C5、C3a和C5a的含量,并以BALB/c小鼠的DC作为刺激细胞,以C57BL/6小鼠的淋巴细胞作为反应细胞进行同种混合淋巴细胞培养,MTT法检测淋巴细胞增殖活性。结果:经LPS刺激后,培养的DC表面共刺激分子CD40、CD86和MHCⅡ分子的表达显著增加(P<0.05);Crry处理组DC表面共刺激分子CD86和MHCⅡ分子的表达较LPS刺激组显著降低(P<0.05),而CD40的表达无显著性差异;Crry处理组培养上清液中C3和C5的含量无明显变化,但C3a、C5a的含量较LPS刺激组显著减少(P<0.05);培养DC上清液中IFN-γ和IL-12的含量较LPS刺激组显著降低(P<0.05),IL-10的含量较LPS刺激组显著增加(P<0.05);培养的DC加入Crry抗体后,其淋巴细胞增殖活性显著降低(P<0.05)。结论:补体调节蛋白Crry可以对DC具有重要的调控作用,可以影响其共刺激分子的表达、补体的生成以及细胞因子的合成等,从而诱导同种移植免疫低反应性,丰富先天免疫对获得性免疫的调节作用。     

小反刍兽疫病毒对鼠源树突状细胞成熟分化的影响

目的研究和探讨小反刍兽疫病毒(PPRV)对小鼠骨髓来源的树突状细胞(BM-DCs)成熟和分化功能的影响。方法从小鼠骨髓中分离得到DCs,经过IL-4和GM-CSF诱导成熟;流式细胞术检测DCs表面共刺激分子表达及吞噬FITC-Dextran的能力;ELISA检测细胞因子IL-6、IL-12p40、IL-1β和IL-10的表达水平。结果利用LPS和PPRV处理DCs 24 h,发现与阳性对照LPS组相比,PPRV作用后显著抑制了CD40和MHC-Ⅱ的表达(P<0.05);滴度适度的PPRV可以显著增加CD40、CD80和CD86的表达,显著升高IL-6和IL-10的分泌(P<0.05),吞噬FITC-Dextran的能力并无显著差异,各组之间也无影响,且不同比例的PPRV对DC存活率无显著影响(P>0.05)。结论 PPRV在一定滴度范围内具有潜在的促进小鼠DC成熟的功能,为免疫学研究奠定基础。     

雷帕霉素和地塞米松对小鼠树突状细胞分化成熟的调控

目的：观察雷帕霉素（rapamycin，Rap）和地塞米松（dexamethasone，Dex）对堵养的小鼠骨髓来源的树突状细胞（DC）分化发育的影响。方法：（1）用GM-CSF＋IL-4定向诱导C57BL／6小鼠骨髓细胞分化为DC，分别加入Rap或Dex，然后用脂多糖（LPS）刺激。在倒置显微镜和扫描电镜下，动态观察DC形态学E的变化。（2）通过流式细胞术（荧光抗体双标记法）测定CD11c^＋细胞的比例及CD86和MHC-Ⅱ类分子表达的变化。（3）通过单向混合淋巴细胞反应（MLR）观察，Rap和Dex处理的DC刺激BALB／c小鼠同种异基因T细胞增殖的情况。结果：（1）经Rap和Dex处理后，DC在形态学上呈现稳定不成熟状态。（2）Rap处理的细胞表面CDIlc和MHC-Ⅱ类分子的表达仅有轻度降低，而CD86的表达明显降低。Dex处理的细胞表面CDIlc的表达与Dex的剂量呈负相关，CD86和MHC-Ⅱ类分子的表达均明硅降低。两种药物处理的DC均可抵抗LPS的促成熟作用。（3）MLR的结果显示，Rap和Dex处理的DC刺激同种异基因BALB／c小鼠T细胞增殖的能力均较低。结论：Rap和Dex均可使DC处于稳定的不成熟状态。与Dex相比，Rap对骨髓造血F细胞向DC分化的过程影响较小，而且在抑制DC表面协同刺激分子CD86表达的同时，对MHC-Ⅱ类分子的表达影响较小。     

红树林淡紫拟青霉胞外多糖对小鼠DCs 表型成熟的影响

目的:探讨红树林来源的淡紫拟青霉胞外多糖对小鼠骨髓源性树突状细胞(DCs)表型成熟的影响。方法:从小鼠骨髓腔中分离获得单核细胞,加入细胞因子rmGM-CSF、rmIL-4 诱导分化为未成熟DCs 并用不同浓度淡紫拟青霉胞外多糖干预,流式细胞术检测成熟DCs 的表面标志CD11c、MHC 、CD80、CD86 分子的表达及吞噬FITC-dextran 的能力,ELISA 检测该多糖对DCs 分泌IL-12 的影响;MTT 法检测该多糖对DCs 刺激T 细胞增殖的影响。结果:经400 μg/ ml 多糖作用48 h 后DCs 表面分子CD11c、MHC 、CD80、CD86 的表达显著上调,与空白对照组相比P<0.01,与LPS 组相比P>0.05;经该多糖作用后DCs 吞噬FITC-dextran 的能力下降,尤其300 μg/ ml 、400 μg/ ml 的多糖作用效果最明显,与空白对照组相比P<0.05;该多糖还可刺激DCs 分泌IL-12,尤其100 ~400 μg/ ml 的多糖刺激作用较强,与空白对照组相比P<0.05;另外,经该多糖处理的DCs 还可刺激T 细胞增殖,将不同比例刺激细胞与T 作用后均可见T 细胞增殖,与空白对照组相比P<0.05。结论:淡紫拟青霉胞外多糖可上调DCs 表面CD11c、MHCⅡ、CD80 和CD86 分子表达,降低其吞噬能力,促进其分泌IL-12,还可刺激T 细胞增殖,初步表明该多糖可刺激DCs 分化成熟。     

负载滋养层细胞抗原对小鼠树突状细胞表型及功能的影响

目的 研究负载滋养层细胞抗原对小鼠髓源性树突状细胞(DC)分化成熟过程的影响,获得致耐受性DC.方法 体外使用粒细胞巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导小鼠骨髓细胞定向分化、经LPS刺激获得成熟DC;通过外胎盘锥组织块培养法获得滋养层细胞,制备可溶性抗原,加入DC培养体系.流式细胞术检测DC表面共刺激分子及MHC-Ⅱ的表达,ELISA法检测DC分泌IL-10和IL-12的浓度,混合淋巴细胞培养评估 DC刺激同种T细胞增殖、活化的功能.结果 成熟DC表型为CD40high CD80highCD86highMHC-Ⅱhigh,分泌大量的IL-12和极少量的IL-10 ,体外能有效刺激T细胞的增殖;负载滋养层细胞抗原的DC表型为CD40midCD80lo wCD86lowMHC-Ⅱlow,在分泌大量IL-12的同时IL-10也明显升高,不能有效刺激T细胞增殖,并使T细胞分泌细胞因子呈现明显Th2偏倚.结论 负载滋养层细胞抗原后的DC表面共刺激分子及MHC-Ⅱ表达降低,刺激T细胞增殖能力下降;其自分泌和促使T细胞旁分泌的细胞因子呈现Th2偏倚,是一种耐受性DC.     

NBD多肽抑制HSP60诱导的小鼠骨髓树突状细胞激活

目的观察热休克蛋白60(HSP60)对小鼠骨髓树突状细胞(dendritic cell,DC)生物学活性的影响,并探讨核因子κB必需分子(NF-κB essential modulator,NEMO)结合的小分子多肽(NEMO binding domain,NBD)对DC活性的干预作用,为NBD多肽的临床应用提供理论依据。方法培养小鼠骨髓源性DC,分为对照组、HSP60组及NBD组,对照组在正常条件下培养,HSP60组加入终质量浓度为10μg/ml的HSP60,NBD组在加入NBD(50μmol/ml)4 h后给予10μg/ml的HSP60刺激,继续培养3 d。流式细胞术检测DC细胞表面CD80、CD86及MHC-Ⅱ分子的变化,ELISA法检测各组DC分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-12(IL-12)的质量浓度,免疫细胞化学检测DC核因子-κB(NF-κB)的表达,混合淋巴细胞培养检测T细胞增殖能力。结果 HSP60可促进DC高表达CD80、CD86及MHC-Ⅱ分子,促进Th1型细胞因子TNF-α、IFN-γ及IL-12释放、NF-κB高表达并易位于核内,并诱导T细胞增殖,NBD多肽可阻断HSP60的这些效应。结论 NBD多肽可抑制HSP60诱导的DC激活。     

大鼠外周血及骨髓来源树突状细胞的培养及鉴定

目的培养及鉴定大鼠外周血及骨髓来源树突状细胞(DC)。方法分离大鼠外周血及骨髓单个核细胞,加入20 ng/m L粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、10 ng/m L白细胞介素4(IL-4)培养10 d。流式细胞术检测CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)、整合素分子OX62的表达确定未成熟DC。成熟的DC在加入以上剂量的GM-CSF、IL-4处理基础上,再加入4μg/L肿瘤坏死因子α(TNF-α)处理,流式细胞术检测CD80、CD86、MHCⅡ、OX62的表达,光镜及透射电镜检测细胞形态。结果流式细胞术检测结果表明,外周血来源的DC OX62表达较高、骨髓来源的DC的OX62表达较低,经TNF-α诱导后,外周血来源的成熟DC和骨髓来源的成熟DC的OX62水平均明显增加。两种方法提取的DC光镜下形态无差别,电镜下可见外周血来源的成熟DC的突起明显多于骨髓来源的成熟DC。结论外周血更容易获得和诱导高纯度的成熟DC。     

4种细胞因子组合方式对小鼠树突状细胞分化发育的影响

目的观察在体外培养时4种细胞因子(CK)组合方式对小鼠骨髓源树突状细胞(DC)分化、增殖、发育的影响.方法用不同的CK定向诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,通过流式细胞仪(荧光抗体双标记法)测定CD11c+细胞比例、MHC-Ⅱ类分子的表达及在脂多糖(LPS)刺激后CD86表达的变化.结果GM-CSF+IL-3+SCF促进DC分化、增殖的能力明显高于其他3组(P＜0.05).该组CK所诱导的DC在LPS刺激后,CD86表达增加的幅度明显低于GM-CSF+IL-4组(P＜0.01).结论GM-CSF、IL-3和SCF对于促进小鼠骨髓细胞向DC定向分化、增殖有协同作用,分化后的DC多数处于发育早期,DC前体所占的比例较大.     

IL-17A 协同GM-CSF 和LPS 促进骨髓细胞衍生树突状细胞的分化和成熟研究

目的:探讨IL鄄17A 对小鼠骨髓细胞衍生树突状细胞分化和成熟的影响。方法:分离小鼠骨髓细胞,加入含GM-CSF(20 ng/ ml)RPMI1640 完全培基培养8 d,诱导小鼠骨髓单个核细胞向DC 分化,加入LPS(1 滋g/ ml)继续培养36 h,进一步诱导DC 成熟,同时在骨髓细胞衍生诱导DC 分化及成熟的不同阶段加入不同浓度的rmIL-17A(10、100 ng/ ml),采用流式细胞术检测DC 表面共刺激分子的表达,ELISA 方法检测DC 培养上清中IL-12p40 和IL-10 水平。结果:rmIL-17A 可促进GM-CSF 诱导骨髓细胞衍生DC 表面共刺激分子CD40、CD80、CD86 和MHC域的表达,且具有剂量依赖性,其中以高浓度rmIL-17A刺激组的CD40 及MHC域表达增加最显著;在LPS 诱导DC 成熟阶段加入rmIL-17A,骨髓细胞衍生DC 共刺激分子CD40、CD80、CD86 和MHC域的表达均明显增加,并且随着rmIL-17A 浓度的增加,CD86 和MHC域的表达水平也随之增高;同时与未加rmIL鄄17A 的对照组相比,低浓度rmIL-17A 组LPS 刺激骨髓细胞衍生DC 分泌IL-12p40 和IL鄄10 水平均显著增加(P <0.001),高浓度rmIL-17A 组IL-12p40 水平显著增高(P<0.001),但IL-10 水平没有变化。结论:IL-17A 可促进GM-CSF 诱导的骨髓细胞衍生DC 前体细胞表型发展,并能协同LPS 诱导骨髓衍生DC 的分化和成熟。     

再生丝素蛋白对小鼠骨髓来源树突状细胞分化、成熟的影响

体外研究再生丝素蛋白材料对小鼠骨髓来源树突状细胞分化、成熟的影响,探讨丝素蛋白的免疫原性及作为生物材料的意义。体外分离培养小鼠骨髓来源树突状细胞,接种于铺有再生丝素蛋白生物材料的细胞培养板中培养,在光学显微镜下观察细胞形态;FCM分析细胞表面相关分子的表达。同时用 MTT 法测小鼠骨髓来源树突状细胞细胞株 DC2．4在所选各种材料表面的生长增殖情况。结果表明：（1）再生柞蚕丝素蛋白和家蚕丝素蛋白均可支持小鼠骨髓来源的 DCs 生长和聚集;（2）MTT 结果表明再生柞蚕丝素蛋白与再生家蚕丝素蛋白相比可促进小鼠 BM来源 DC2．4的增殖;（3）再生柞蚕丝素蛋白和再生家蚕丝素蛋白上的小鼠 BM来源 DCs 表面低表达 CD11c、CD40、CD80、CD86、MHC -Ⅱ分子,与空白对照组 DCs 的表达谱相比无明显差别。再生柞蚕丝素蛋白与再生家蚕丝素蛋白相比,可较好地支持小鼠 BM来源 DC2．4的生长和增殖;再生丝素蛋白无刺激小鼠 BM来源 DCs 成熟的生物学效应。     

MyD88 RNA干扰抑制小鼠骨髓树突状细胞成熟的实验研究

目的：针对小鼠骨髓树突状细胞（DC）髓性分化因子88（MyD88）,采用RNA干扰技术抑制其合成,观察脂多糖（LPS）刺激后DC生物学活性的变化,探讨获得耐受性DC的方法,为DC的临床应用提供新思路和理论依据。方法：培养小鼠骨髓源性DC,分为对照组、LPS组及RNA干扰组,对照组不予任何处理,LPS组加入终浓度为1μg/ml的LPS,RNA干扰组于加入MyD88 siRNA12小时后给予1μg/mlLPS刺激,继续培养3天。免疫细胞化学检测DCMyD88、核因子-κB（NF-κB）的表达,Western blot检测DCMyD88的表达;流式细胞术检测DC细胞表面CD80、CD86及MHC-Ⅱ分子的变化,ELISA法检测各组DC分泌TNF-α。IFN-γ和IL-12的浓度,混合淋巴细胞培养检测T细胞增殖能力。结果：LPS促进DC高表达CD80、CD86及MHC-Ⅱ分子,促进Th1型细胞因子释放、MyD88高表达及NF-κB核移位,并诱导T细胞增殖,MyD88 siRNA可阻断LPS的这些效应。结论：MyD88 siRNA可抑制DC成熟,产生耐受性DC,增强同种未成熟DC的免疫耐受诱导作用,为进一步研究DC的临床应用奠定了基础。