溶血磷脂酸与血管平滑肌细胞表型转化

2003年人类基因组计划的完成开辟了人类遗传学、人类病理学等研究领域的新时代,然而近年来解析人类基因组意义过程中遇到一系列的难题使人们认识到DNA序列本身并不能解释所有关于遗传信息传递、人类疾病生物学基础等问题.随着研究的深入,人们逐渐认识到不仅蛋白编码序列,而且非编码序列、表观遗传机制等也是影响遗传信息传递、疾病发生等过程中的重要因素.     

细胞自噬促进血管平滑肌细胞向合成表型转化的作用与机制

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)具有两种不同表型,即分化表型(收缩表型)和去分化表型(合成表型).VSMCs来自中胚层,由低分化合成表型发育至高分化收缩表型.在成熟动脉,生理状态下的VSMCs处于分化静止状态,稳定在具有成年特性的收缩表型,主要维持血管的收缩功能[...     

去甲肾上腺素促进血管平滑肌增殖和细胞表型转化

目的:研究去甲肾上腺素(NE)对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和增殖的影响及作用机制.方法:用NE分别作用体外培养和血清饥饿的血管平滑肌细胞,用5-BrdU标记VSMC的增殖、RT-PCR检测VSMC表型标志基因SM22a和增殖负性调控基因高血压相关基因-1(HRG-1)的表达.结果:NE和OX-LDL分别作用血清培养的VSMC后,SM22α和HRG-1表达下凋,5-BrdU标记的阳性增殖细胞增多;NE分别与α1-肾上腺素受体拮抗剂(α1-R-)和β1-肾上腺素受体拮抗剂(β1-R)共作用时,SM22α和HRG-1的表达明显上调.而当NE作用血清饥饿VSMC时,NE上调SM22α和HRG-1的表达.结论:NE对VSMC有促表型转化和增殖作用,且这种作用呈现像神经样的可逆性调节作用.其作用机制主要通过肾上腺索受体α1和β1来实现的.     

锌指蛋白基因抑制人平滑肌细胞表型转化的实验研究

目的探讨锌指蛋白基因A20抑制氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细胞增殖及表型转化的影响。方法用DOTAP脂质体转染pEGFPEHA20-N1原代培养的平滑肌细胞,经G418筛选,A20表达经免疫荧光鉴定。Brdu检测转染前后氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细胞增殖情况及α-SM-actin抗体检测细胞表型转化情况。结果 A20基因在平滑肌细胞得到有效表达,少量的氧化型低密度脂蛋白能诱导平滑肌细胞增殖,平滑肌细胞α-SM-actin骨架蛋白表达减少,而A20转染的平滑肌细胞增殖不明显,α-SM-actin骨架蛋白表达呈强阳性。结论 A20基因在动脉粥样硬化中能抑制平滑肌细胞的病理性增生。     

黑木耳多糖对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞表型转化及bFGF和PDGF表达变化的研究

目的通过黑木耳多糖对血管平滑肌细胞表型转化及bFGF和PDGF表达变化的影响,探讨黑木耳多糖降血脂和抗氧化以外的抗动脉粥样硬化形成作用。方法将30只新西兰白兔随机分为正常对照组、模型组和实验组3组,分别给予普通饲料（正常组）、高胆固醇饲料（模型组）以及高胆固醇加黑木耳多糖饲料（实验组）喂养。第12周末处死动物。取主动脉行组织形态学观察及用透射电镜和免疫组织化学方法分析平滑肌细胞表型转化及bFGF和PDGF表达变化。结果实验组主动脉斑块面积明显小于模型组,模型组和实验组分别为（0．44±0．10）和（0．30±0．83）,两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;透射电镜和免疫组化结果显示：模型组动脉粥样硬化斑块的平滑肌细胞内内质网、线粒体增多,主要为合成表型;而实验组平滑肌细胞内内质网、线粒体少．主要为收缩表型,并且斑块内bFGF和PDGF的表达减少。结论黑木耳多糖可抑制动脉粥样硬化过程中血管平滑细胞从收缩表型向合成表型的转化,从而抑制平滑肌细胞合成和分泌bFGF、PDGF和其他细胞外基质的能力,从而减少动脉粥样硬化形成中血管平滑肌细胞参与的过程。     

血管平滑肌细胞表型转变与糖尿病血管病变

血管平滑肌细胞按其形态、功能及细胞标志蛋白的不同可分为收缩型和合成型。血管平滑肌细胞受生化因子、细胞外基质成分、机械性刺激等多种因素的调节,其表型转变的分子机制主要与KLF4/Myo D/SRF轴相关。糖尿病的高血糖、胰岛素抵抗、脂类代谢紊乱、炎症反应可诱导血管平滑肌细胞表型转变,使其迁移、增殖能力增强,从而导致糖尿病血管病变。     

麝香保心丸对血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的: 观察麝香保心丸(SXBXW)对血管平滑肌细胞表型转化的影响。方法: 以血管平滑肌细胞系RASMC P8为模型,设对照组,SXBXW 0.25、0.5、1.0和2.0 g/L组,经不同浓度的SXBXW作用后,用流式细胞术测定RASMC P8细胞的收缩型特异性分子标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)表达的变化。结果: 与对照组相比,经SXBXW处理后,α-SMA和SM-MHC的阴性细胞百分比降低,阳性细胞百分比增加。结论: SXBXW能促使血管平滑肌细胞的表型从合成型向收缩型转化。     

大鼠严重烧伤后结肠平滑肌细胞表型转化的实验研究

目的观察大鼠严重烧伤后胃肠运动功能改变及肠道平滑肌细胞表型转化。方法正常对照组大鼠麻醉后脱毛不烫伤,烧伤组制备30%TBSAⅢ度烧伤大鼠模型,依照伤后时相点的不同分为伤后2h、6h、12h、24h、48、72h组,按时相点检测炭末推进率,观察严重烧伤后胃肠运动功能的改变;按时相点取材结肠标本,免疫组织化学染色,图像分析,观察严重烧伤后肠道平滑肌细胞表型转化的改变。结果伤后不同时相点,炭末推进率较正常对照组(74.20±4.28)%均显著降低,伤后6h最低为(38.52±3.93)%,黏膜下肌层平滑肌细胞的α-平滑肌肌动蛋白在伤后6h表达的阳性单位值较正常对照组(25.11±5.65)明显下降,伤后24h表达的阳性单位值最低(10.56±2.68),并持续到伤后72h且黏膜下肌层平滑肌组织明显增生,而肠壁组织平滑肌的α-平滑肌肌动蛋白表达无明显变化。结论大鼠严重烧伤后胃肠运动功能明显抑制;严重烧伤可引起肠道黏膜下层平滑肌细胞表型的改变,伤后胃肠运动功能抑制可能是由于肠道黏膜下层平滑肌细胞发生表型转化,α-平滑肌肌动蛋白可能在大鼠严重烧伤后起下调炎症反应及保护细胞的作用。     

Aβ1-40通过激活MAPKs通路诱导血管平滑肌细胞发生炎症及表型转化

目的:探究β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)对血管平滑肌细胞(VSMCs)的炎症反应、活力、迁移能力及表型转化的影响,并分析其机制。方法:以不同浓度的Aβ1-40干预VSMCs适当时间。用CCK-8和Transwell实验评估细胞的活力及迁移能力;用Western blot检测细胞中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等炎症因子水平,VSMCs表型转化标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)和Krüppel样因子4(KLF4)的表达,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路相关蛋白p-p38 MAPK、p-ERK1/2和p-JNK的蛋白水平。结果:在Aβ1-40的作用下,VSMCs中炎症因子IL-1β和TNF-α水平显著升高,表型转化相关蛋白表达发生改变,α-SMA表达水平显著下降,而OPN和KLF4的表达水平显著升高(P<0.05);且在一定浓度范围内,Aβ1-40可提高VSMCs的活力和迁移能力;另外,Aβ1-40处理可显著增加VSMCs中p-p38 MAPK、p-ERK1/2和p-JNK的蛋白水平(P<0.05)。应用...     

微小核糖核酸对血管平滑肌细胞表型转换影响的研究进展

血管平滑肌细胞(VSMC)作为血管中膜的主要构成细胞,其功能作用与其表型变化密切相关。合成表型具有增生及迁移能力,是各种心血管及周围血管病发生发展的主要病理基础,而收缩表型对维持血管弹性和收缩功能至关重要。较多微小核糖核酸(microRNAS,miRNAS)可通过相关途径和方式调控VSMC表型转换,从而在机体病理生理变化中发挥重要作用。本文综述涉及上述调节的miRNA研究的有关进展。     

同型半胱氨酸促进大鼠血管平滑肌细胞增殖和表型转化

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化和增殖的影响,以期为Hcy作为动脉粥样硬化(AS)独立危验因子的分子机制提供证据。方法:体外培养大鼠血管平滑肌细胞,用不同浓度的Hcy作用于细胞24h后:(1)MTT法测定细胞的增殖率;(2)流式细胞术检测细胞周期;(3)半定量RT-PCR法检测平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;(4)透射电镜观察VSMCs的形态学特征,确定其表型转换特征。结果:Hcy可导致细胞增殖率增加;G0/G1期细胞逐渐减少,S期细胞逐渐增多;SM22α mRNA表达下调,Hcy浓度增至1000μmol/L时差异显著;透射电镜显示,高浓度Hcy作用后VSMCs胞浆中内质网、高尔基复合体明显增多、胞核大、染色质疏松。结论:Hcy促进VSMCs增殖的同时可促进其表型的转化。     

ET-1促进人血管平滑肌细胞的表型变化和增殖

目的：研究ET-1与VSMC表型变化和增殖的关系。方法：用MTT法研究ET—1对平滑肌细胞增殖的影响，^3H-TdR法测定ET-1对平滑肌细胞DNA合成的作用，流式细胞仪法观察对平滑肌细胞增殖周期的影响，逆转录聚合酶链法观察对平滑肌细胞表型变化的影响。结果：与对照组比较，ET-1明显促进平滑肌细胞增殖；促进平滑肌细胞DNA合成；促进平滑肌细胞从G0期向S期的转变，G0／G1期细胞百分比明显降低，而S期细胞百分比增加；促进平滑肌细胞的表型转化，从第2d到第7d随时间延长1-Caldesmon表达逐渐增高。结论：ET-1促进平滑肌细胞表型转化，同时对平滑肌细胞增殖亦有明显的促进作用。     

miR-449a通过靶向KLF4蛋白导致血管平滑肌细胞表型转化

目的探讨miR-449a对于血管平滑肌细胞表型转化、增殖和迁移的作用。方法首先构建携带miR-449a抑制剂、miR-449a mimic的质粒和携带KLF4 siRNA的病毒,并将其转染到血管平滑肌细胞当中,用即时荧光定量PCR检测miR-449a的量,用Western blot检测KLF4的表达量,并检测表型转化相关代表蛋白SM-MHC、α平滑肌肌动蛋白、骨桥蛋白。同时,用CCK-8和细胞划痕试验来评估细胞的增殖和迁移状况。用免疫荧光检测蛋白表达量及细胞结构变化。用荧光素酶报告基因实验来证实miR-449a与KLF4之间的关系。结果实验发现,miR-449a的下调可以增加KLF4的表达以此达到促进血管平滑肌细胞表型转化的作用,并增加其增殖和迁移能力。结论可以通过上调miR-449a降低KLF4的表达,从而抑制血管平滑肌细胞的表型转化及降低其增殖和迁移能力。     

NKT细胞通过下调PDGFRβ抑制Ang Ⅱ诱导的小鼠血管平滑肌细胞表型转换

目的:探讨自然杀伤T细胞(NKT细胞)在高血压引起的小鼠血管平滑肌细胞表型转换中的作用及机制。方法:在野生型小鼠及CD1d基因敲除小鼠中,通过缓释泵持续灌注剂量为490 ng·kg^-1·min^-1的血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)14 d建立小鼠高血压模型,并在野生型小鼠中给予剂量为100μg/kg的NKT细胞特异性激动剂α-半乳糖神经酰胺(α-GC)。无创尾套法监测小鼠血压;HE染色观察小鼠主动脉壁厚度变化;Masson染色观察小鼠主动脉纤维化的程度;Western blot检测主动脉组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)及血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)的表达。结果:与对照组相比,灌注Ang Ⅱ 14 d后,小鼠血压、主动脉壁厚度、主动脉纤维化程度、分泌型标志蛋白OPN表达及PDGFRβ蛋白表达均显著升高(P<0.05),收缩型标志蛋白α-SMA的表达降低(P<0.05)。CD1d基因敲除加重以上变化(P<0.05),而α-GC则减轻上述改变(P<0.05)。结论:NKT细胞通过降低PDGFR...     

动脉ICC样细胞与血管平滑肌细胞收缩表型的关系

人们普遍认为血管平滑肌细胞(VSMC)是种多功能的间质细胞。以前人们假定VSMC有两种主要的表型:收缩型和合成型。新近的数据表明,连续的细胞表型(自成熟前期/合成期到收缩期)是VSMC分化过程一种比较准确的表达,表型上的多样性也由此而来。有数据指出,VSMC的多型群体共存于血管壁     

miR-30b在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的:观察微小RNA-30b(miR-30b)在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化中的作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术(sham)组和慢性肾衰竭所致血管钙化(CRF+VC)组.采用硝酸银染色检测血管钙化情况;免疫组织化学法检测成骨转录因子Runx2的表达.体外培养原代大鼠胸主动脉VSMCs并分为...     

不同体外条件培养对大鼠血管平滑肌细胞表型、增殖和细胞骨架的影响

目的 探讨不同体外培养条件与血管平滑肌细胞(VSMCs)表型、增殖和细胞骨架蛋白表达之间的差异及生物学意义。 方法 体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验分为6组：2代对照组、2代血清饥饿组、4代对照组、4代血清饥饿组、6代对照组和6代血清饥饿组;用5-Brdu标记增殖细胞;RT-PCR检测表型基因SM22ɑ mRNA的表达;免疫细胞化学检测细胞骨架蛋白SMɑ-actin、β-Tubulin和Desmin的表达。 结果 体外培养的VSMCs,随培养代数的增多,细胞骨架蛋白表达减少,电镜超微结构可见胞质中内质网、高尔基体等细胞器增多,有大量的分泌小泡;血清饥饿胞中线粒体增多并电子密度增高。 血清培养条件下SMɑ-actin随培养代数的增加其表达减少,血清饥饿培养可使SMɑ-actin表达可逆性上调;β-Tubulin和Desmin随培养代数的增加表达减少更明显,而血清饥饿上调作用也不明显,至第6代基本不表达。 结论 血清培养和血清饥饿培养在不同代中对VSMCs表型转化、增殖和细胞骨架有着不同的影响,它们之间存在着内在的联系,在维持细胞形态、收缩功能和血管重构方面起了重要作用。β-Tubulin和Desmin表达消失可能具有重要生物学意义。     

PDGF-BB对血管平滑肌细胞表型标志物表达的影响

目的:观察血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及分化相关基因表达的影响,探讨其可能的机制。方法:分离体外培养的SD大鼠胸腹主动脉VSMCs,分为空白对照组和不同浓度PDGF-BB处理组。分别采用MTT法、流式细胞术和伤口愈合实验检测PDGF-BB对VSMCs增殖、细胞周期和迁移活性的影响;用W estern b lotting分析检测VSMCs表型标志物的表达;用免疫沉淀和免疫共沉淀分析检测Krüppel样因子4(KLF4)磷酸化及与其它转录因子的相互作用。结果:PDGF-BB促进VSMCs增殖和迁移;上调增殖相关蛋白PCNA的表达,下调增殖抑制蛋白p27、分化相关蛋白SM22α的表达。PDGF-BB诱导KLF4的表达和磷酸化,促进KLF4与NF-κB的相互作用,抑制KLF4与Sm ad3、HDAC2的结合。结论:PDGF-BB可能通过影响KLF4磷酸化及其与不同转录调节因子的相互作用而诱导VSMCs表型转化。     

血管生成素样蛋白8促进大鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转化

目的 探讨血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的作用机制.方法 ApoE-/-小鼠西方饮食12周构建动脉粥样硬化模型小鼠.免疫荧光染色检测ANGPTL8在动脉硬化斑块中的表达与定位;采用慢病毒转染VSMCs构建ANGPTL8过表达稳转细胞株;将细胞随机分为5组,对照(co...