NK细胞的活化及其介导的抗病毒作用

NK细胞是一类独特的淋巴细胞亚群,占人外周血淋巴细胞的10%～15%,其表面标志为CD3-CD19-CD16+CD56+。根据CD56分子的表面密度,将NK细胞分为:CD56bright和CD56dim两个亚群,前者以分泌细胞因子为主,后者以杀伤功能为主。NK细胞不表达T细胞的表型(CD3或TCR),也不表达B细胞的表型(CD19或BCR)。NK细胞具有如下特点:①强大的细胞毒活性。它对刺激因素产生的应答十分迅速,而且免疫应答强度高。②杀伤活性无需抗原刺激,也不受MHC分子的限制。病毒感染或恶性转化细胞的     

结核性胸液中NK细胞的亚群及表型功能特征分析

目的探讨结核性胸液(PFC)中NK细胞的亚群分布及表型功能特征。方法以正常人外周血单个核细胞(PBMC)作对照,利用多种标记抗体进行表面和细胞内细胞毒效应分子染色,再利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析结核性胸水中NK细胞亚群的异质性和生物学特征。结果 NK细胞可以分为CD56+CD16-、CD56+CD16+和CD56-CD16+三个亚群,与PBMC中的NK细胞相比,PFC中CD56+CD16-NK细胞亚群明显增加,而CD56+CD16+NK细胞亚群比例明显下降;结核性胸液中CD56+CD16-及CD56+CD16+NK细胞亚群表达较低水平的颗粒酶B,CD107a/b的比例在结核性胸液中3个NK细胞亚群中均有增加(P<0.05)。结核性胸液中NK细胞表达高水平表面抑制性受体NKG2A及表面活化性受体NKG2D。活化分子CD69及CD25在结核性胸水中NK细胞上的表达均有所增加(P<0.05)。结论结核性胸液中的NK细胞比例与PBMC相比发生变化,结核性胸液中的NK细胞表达低水平杀伤分子颗粒酶B但表达高水平活化分子CD69,提示NK细胞在结核感染中发挥其生物学功能。     

两种不同HLA-B分子对NK细胞表面受体表达的研究

目的：探讨两种HLA-B分子(HLA-B51和HLA—B39)对NK细胞表面活化性受体CDl6和抑制性受体KIR3DL1表达的调节。方法：采用流式细胞仪检测NK细胞分别与转染HLA-BSl和HLA-B39分子的K562细胞相互作用后，CD16和KIR3DL1的表达情况。结果：外周血淋巴细胞与K562细胞作用24小时后，CD56 CD16 细胞数、KIR3DL1 细胞数均明显增加。与表达HLA-B39的K562细胞相比，表达HLA-B51的K562细胞与外周血淋巴细胞作用后，CD56 CD16 细胞数、KIR3DL1 细胞数均明显下降。结论：NK细胞杀伤靶细胞时，活化性受体CD16表达上调后会伴有抑制性受体KIR3DL1的上调；HLA-B51分子表达在K562细胞后，表达外源性HLA-B51分子的K562细胞与NK细胞作用，NK细胞表面受体KIR3DL1的表达可下调，同时伴有CD16的表达下调。     

结直肠癌患者外周血淋巴细胞亚群比例及表面受体表达的变化

目的 根据结直肠癌T细胞、自然杀伤(NK)细胞、 NKT细胞表面蛋白受体表达情况，探索结直肠癌患者免疫功能评价体系。方法 收集144例结直肠癌患者和87例健康对照组的外周血样本，通过流式细胞术、细胞培养等方法，分析患者外周血淋巴细胞亚群表面受体与健康对照组的差异。结果 与健康对照组相比，结直肠癌患者外周血总淋巴细胞、 CD16^brightCD56^dimNK细胞、 NKT细胞百分比降低；T细胞、 CD16^brightCD56^dimNK细胞、 NKT细胞表面抑制型受体T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域(TIGIT)百分比增加；T细胞、 NK细胞、 NKT细胞表面趋化因子受体CC趋化因子受体7(CCR7)略降低。结论 结直肠癌患者外周血NK细胞亚群比例及表面受体表达谱存在差异。     

NK细胞特征可用于诊断EBV感染NK细胞增殖性疾病和评估疗效

EB病毒(EBV)较易感染的淋巴细胞为B细胞,偶尔感染T细胞和NK细胞,引发EBV感染的T/NK细胞淋巴增殖样疾病(LPD),包括慢性活动性EBV感染、EBV相关噬血综合征、蚊虫过敏、牛痘样水痘病、侵袭性NK细胞白血病和NK/T细胞淋巴瘤。NK细胞缺乏象TCR重排或T细胞亚群那样明显的标记,但NK细胞有一系列的杀伤免疫球蛋白受体(KIRs)和CD94-NKG2杂二聚体的C类植物凝集素。每个NK细胞选择性表达一个或多个KIRs,同时也选择性表达CD94-NKG2A,CD94-NKG2B,CD94-NKG2C中的一个。自2003年3月-2004年4月有学者研究了连续的4例EBV感染NK…     

人外周血NK细胞亚群、表型和生物学特征

目的：探讨人外周血NK细胞的异质性和生物学特征。方法：利用多种标记抗体进行细胞表面和细胞内细胞毒效应分子染色，再利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析NK细胞亚群的多样性和生物学特征。结果：NK细胞可分为CD56^ 、CD56^ ’CD16^ 和CD16^ 三个亚群。所有CD56^ NK细胞均表达CD95，但表达水平的高(CD95^bright)和低(CD95^dim)不同。在CD95^bright和CD8^ 细胞亚群中有43．5％的细胞同时表达颗粒酶B和穿孔素。而CD56^ CD16^ 和CD16^ 细胞表达CD95均为CD95^bright，同时表达颗粒酶B(83．6％)和穿孔素(89．8％)。结论：NK细胞乃异质性群体，随着CD56表达减少和CD16表达增加。其生物效应功能逐渐成熟。     

9.1C3分子对人NK细胞和T细胞细胞毒作用的抑制效应

目的探讨9.1C3分子是否作为抑制型受体调节NK细胞和T细胞的杀伤功能。方法用抗CD56抗体和羊抗鼠IgG免疫磁珠分离混合淋巴细胞培养中活化的淋巴细胞 ,分选CD56 细胞和CD56 -细胞分别作为效应细胞。采用重导向杀伤实验(redirectedkillingassay,RKA)观察抗9.1C3抗体对效应细胞杀伤小鼠肥大细胞瘤细胞P815作用的影响。结果发现人NK细胞和T细胞对P815细胞均有一定的杀伤作用 ,在效靶比为4∶1 ,2∶1和1∶1时 ,NK细胞和T细胞的杀伤率分别为:6.4% ,3.4% ,1.1%和21.2 % ,16.7 % ,6.5 %。用抗CD16和抗CD3抗体分别刺激NK细胞和T细胞时 ,它们对P815细胞的细胞毒作用显著增强 ;在相同的效靶比例 ,它们对P815的杀伤率分别为:47.1 % ,32.2% ,19.1 %和64.4 % ,50.3% ,39.5 %。但用抗9.1C3抗体刺激效应细胞时 ,不仅NK细胞的杀伤作用完全被抑制 ,CD16介导的NK细胞的杀伤作用也被明显下调 ,其杀伤率仅为18.5 % ,9.7 %和7.0 % ;但对CD3介导的T细胞的杀伤作用只轻度被抑制。结论9.1C3分子可能是一种新的抑制型杀伤细胞受体 ,对NK细胞和T细胞细胞毒作用的负调节可能有所不同。     

C型凝集素样自然杀伤(NK)细胞受体在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中表达及意义

目的 探讨C型凝集素样自然杀伤(NK)细胞受体CD94和NKG2在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义.方法 运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测C型凝集素样NK细胞受体CD94和NKG2在经组织形态、免疫组织化学、EB病毒原位杂交及T细胞受体PCR克隆性重排分析确诊的21例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤以及对照组同部位B细胞淋巴瘤8例、淋巴结外周T细胞淋巴瘤(PTCL)10例、脾脏5例、胸腺5例和慢性炎性鼻黏膜5例组织中的表达情况并进行随访.结果 21例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤具有典型的形态学改变,表达CD3ε、CD56和细胞毒蛋白,TCR重排阴性,20例EB病毒阳性;RT-PCR扩增结果显示,在21例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中,18例(85.7%)CD94呈阳性表达;NKG2总阳性率为95.2%(20/21),各亚基表达阳性率依次为NKG2A/2B(85.7%)、NKG2D(61.9%)、NKG2F(14.3%)、NKG2C,/2E(4.8%).对照组中PTCL和B细胞淋巴瘤均不表达CD94和NKG2,仅2例脾脏和2例慢性炎性鼻黏膜组织表达CD94,1例脾脏组织表达NKG2A/2B,1例胸腺组织表达NKG2D.CD94和NKG2在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达与T细胞淋巴瘤和B细胞淋巴瘤比较,差异均有统计学意义(P均<0.01).CD94和NKG2同时表达于17例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤,共表达率为81.0%(17/21).结论 CD94和NKG2在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中呈特异性和顺序性表达,提示多数病例肿瘤细胞处于活化和功能NK细胞阶段.对这些分子的检测有可能成为NK细胞源性淋巴瘤诊断的重要手段.     

人早孕蜕膜基质细胞及免疫活性细胞趋化因子受体CXCR6的表达

目的分析人早孕期蜕膜基质细胞趋化因子配基受体对CXCL16/CXCR6的表达及免疫活性细胞趋化因子受体CXCR6的表达,以探讨CXCL16/CXCR6在蜕膜免疫活性细胞募集中的可能规律.方法收集早孕期蜕膜组织,分离蜕膜基质细胞和免疫细胞,分别采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学、流式细胞术分析蜕膜基质细胞CXCL16和CXCR6的表达;流式细胞术分析蜕膜CD56^＋CD16^-NK细胞、CD56^＋CD16^＋NK细胞、NKT细胞、T细胞、γδT细胞、单核细胞CXCR6的表达.结果人早孕蜕膜基质细胞高水平转录趋化因子受体CXCR6,低水平转录其配体CXCL16,但CXCL16和CXCR6在蛋白水平的表达偏低.早孕蜕膜γδT细胞CXCR6阳性率为87.29%;CD14^＋单核细胞CXCR6阳性率为47.71%;NKT细胞CXCR6阳性率为44.14%;T细胞CXCR6表达率为32.91%;而蜕膜两种NK细胞（CD56^＋CD16^-、CD56^＋CD16^＋）几乎不表达CXCR6.结论人γδT细胞、单核细胞、NKT细胞、T细胞可能通过表达趋化因子受体CXCR6被募集到蜕膜局部并驻留,从而参与早孕期母胎界面的免疫调节.     

人早孕期蜕膜基质细胞下调蜕膜NK细胞杀伤活性

通过分析人早孕期蜕膜基质细胞(decidual stromal cell,DSC)对蜕膜NK细胞(dNK)表面趋化因子受体CXCR4与细胞内颗粒酶B表达水平的影响,研究早孕蜕膜基质细胞对局部NK细胞的训导作用。收集早孕蜕膜组织,分离DSC及蜕膜免疫活性细胞,进一步通过磁珠分选蜕膜CD3-CD56bright NK细胞,将分离的蜕膜NK细胞与DSC按1∶1比例共培养24h,收集蜕膜NK细胞,流式细胞仪检测其表面趋化因子受体CXCR4和细胞内颗粒酶B(granzyme B)的表达水平。结果显示,与对照组相比,在与DSC细胞共培养之后,趋化因子受体CXCR4+NK细胞的百分率明显上升,而蜕膜NK细胞内颗粒酶B阳性率显著下降(P<0.05)。结果表明,人早孕母-胎界面DSC细胞上调蜕膜NK细胞表面趋化因子受体CXCR4的表达,下调NK细胞内颗粒酶B的表达水平,可能抑制其杀伤活性。     

急性髓细胞白血病患者外周血淋巴细胞亚群的特征及临床意义

目的通过检测急性髓细胞白血病患者外周血各淋巴细胞亚群的分布,探讨该类患者免疫功能状况。方法通过流式细胞术检测健康对照组(n=20)、急性髓细胞白血病初发患者(n=31)及完全缓解期患者(n=31)外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞、TCRγδ+T细胞、CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、CD16+CD56+NK细胞比例;通过细胞杀伤实验分析NK细胞和γδT细胞的杀伤活性以及与Treg的关系。结果与对照组相比,初发白血病患者和完全缓解患者外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞比例无明显差异,但CD4+CD25+Treg比例明显增高,TCRγδ+T细胞和CD16+CD56+NK细胞比例明显下降。初发病患者NK细胞和γδT细胞具有杀伤活性,但Treg能明显抑制其杀伤活性。结论急性髓细胞白血病患者外周血γδT和NK细胞虽具有杀伤功能,但比例明显下降,Treg对其杀伤功能具有抑制作用。     

Graves病患者131I治疗前后CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞的变化

目的:通过对Graves病患者131I治疗前后外周血各淋巴细胞亚群和CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞含量以及相关基因Foxp3mRNA表达水平的测定,探讨131I治疗方法是否可以通过改变调节性T细胞的含量从而改善Graves病患者的免疫功能异常。方法:采集30例Graves病患者131I治疗前及治疗后1个月的外周血,流式细胞仪检测外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16+CD56+淋巴细胞亚群及CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞的百分率,Real-TimePCR检测外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达水平。结果:和治疗前相比,Graves病患者131I治疗1个月后外周血CD3+CD4+T细胞和CD3-CD19+B细胞百分率都明显减少(P<0.05),CD3-CD16+CD56+NK细胞百分率明显增加(P<0.05),CD3-CD8+T细胞、CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞百分率和Foxp3mRNA的表达水平无明显变化。结论:131I不能通过增加调节性T细胞的含量而改善Graves病患者的免疫耐受障碍,但可以通过减少CD4+T和B淋巴细胞的含量和增加NK细胞的含量来控制过度的免疫应答。     

不明原因自然流产与蜕膜NK细胞表面活化性受体表达的相关性研究

探讨不明原因自然流产患者蜕膜NK细胞杀伤活性与其细胞表面活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D表达的相关性。选取21例早孕不明原因自然流产患者为病例组,25例正常早孕人流妇女为对照组,收集两组的蜕膜组织,Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞,MACS磁珠分选CD3-CD56+NK细胞。以K562细胞为靶细胞,用细胞染色及流式细胞技术检测两组蜕膜NK细胞杀伤活性,用流式细胞技术检测两组蜕膜CD56brightCD16-NK和CD56dimCD16+NK细胞上活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D的表达,并与NK细胞杀伤活性进行相关性分析。结果:(1)早孕蜕膜NK细胞具有杀伤活性;(2)病例组蜕膜NK细胞的杀伤活性较正常对照组显著增强(P=0.014);(3)病例组蜕膜CD56brightCD16-NK细胞中NKp44的表达比正常对照组显著升高(P=0.021);病例组蜕膜CD56dimCD16+NK细胞中NKp46和NKp44的表达比正常对照组显著升高(分别P=0.026,P=0.041);其余活化性受体的表达两组未见明显差异;(4)蜕膜NK细胞杀伤功能与蜕膜CD56brightCD16-NK细胞中NKp44的表达呈显著正相关(r=0.677,P<0.05),和蜕膜CD56dimCD16+NK细胞中NKp46的表达呈显著正相关(r=0.634,P<0.05)。蜕膜NK细胞活化性受体NKp46和NKp44表达增加,从而使蜕膜NK细胞的杀伤功能增强可能在不明原因自然流产的发病中起重要作用。     

重度子痫前期蜕膜NK细胞Tim-3的表达及其相关作用

目的 探讨重度子痫前期Tim-3+CD56+CD16-NK细胞的表达及其对滋养细胞侵袭及血管内皮细胞成管能力的影响.方法 分离重度子痫前期患者(sPE组)及正常妊娠孕产妇(Normal组)的胎盘蜕膜组织中单个核细胞,细胞流式检测蜕膜NK细胞(decidual NK cell,dNK)细胞所占比例;免疫磁珠分选CD56+...     

强直性脊柱炎患者外周血免疫细胞比例及CXCR6表达水平的研究

为研究强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)患者外周血中免疫细胞比例以及趋化因子受体CXCR6的表达水平对AS的影响,检测AS患者和健康对照者血常规、CRP和ESR,分析AS患者的炎症情况;流式细胞术分析淋巴细胞亚群比例以及CXCR6在外周血CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T淋巴细胞和γδT细胞上的表达水平,并分析髓源抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell, MDSC)和Treg水平。研究发现AS患者中性粒细胞绝对值、CRP、ESR、CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T淋巴细胞、NK细胞、γδT细胞和MDSC的比例明显高于对照组(P0.05),而Treg比例没有明显差异。同时,CXCR6在CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T淋巴细胞和γδT细胞的表达水平高于对照组(P0.05)。研究表明外周血中CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T淋巴细胞、γδT细胞和MDSC等免疫细胞的比例升高且CXCR6参与AS外周免疫细胞的招募,这些因素在AS炎症反应中发挥重要作用。     

自然杀伤细胞受体

<正>免疫系统最显著的特点是特异性识别,而免疫识别的分子基础是抗原(或配体)识别受体.自70年代以来,对T细胞受体(TCR)、B细胞受体(BCR)分子和基因结构以及信号转导的深入研究,极大地推动了T细胞、B细胞免疫识别功能乃至整个免疫学的发展.自然杀伤细胞(natural kill cell,NK)不表达TCR、BCR,如何区别“自身”和“非己”一直是个谜.直到90年代初,Ljunggren和Karre等发现MHC I类分子可保护细胞免受NK细胞杀伤,而丢失了MHC I类分子的靶细胞(病毒感染细胞或转化的肿瘤细胞)对NK细胞的杀伤十分敏感,据此提出了NK细胞所识别和清除的是一类“失去自己(missing self)”的细胞.此后,NK细胞受体(natural killer cell receptor,NKCR)的研究进入一个崭新的阶段.目前已经明确,NKCR不仅种类繁多,而且在不同的环境下执行抑制或刺激的功能,1997年Lanier在Immunity杂志上发表了题为“Natural kill cells:from no receptor to too many”的评论文章,正是反映了NKCR研究发展趋势.鉴于NK细胞在抗肿瘤、抗病毒感染中的重要作用,从60年代起对NK细胞的发育、形态、表面标记、功能及其调节先后进行了大量的研究.NK细胞不表达TCR和BCR,是一个独立于T细胞、B细胞的淋巴细胞群,可能与T细胞共有一个前体,主要在骨髓中发育,由于在光镜     

早孕外周血及蜕膜中NK细胞表型及T淋巴细胞亚群的变化

目的: 检测孕妇外周血及蜕膜中T淋巴细胞亚群和NK细胞表型, 探讨它们与母-胎界面免疫耐受的关系.方法: 收集20例早孕同一患者的蜕膜组织及外周血, 密度梯度离心法分离出淋巴细胞, 流式细胞术(FCM)检测两组中NK细胞、 T细胞含量及其表面分子CD16、 NKG2A、 NKG2D表达水平.结果: 蜕膜自然杀伤(dNK)细胞占蜕膜淋巴细胞(57.15±4.0)%, 外周血自然杀伤(pNK)细胞占外周血淋巴细胞(11.46±1.58)%; dNK细胞表面CD16的表达明显低于pNK细胞, 二者分别(10.3±3.9)%与(95.6±2.6)%(P＜0.05); dNK细胞表面NKG2A的表达明显高于pNK细胞, 二者分别为(87.10±4.5) %与(27.5±4.2)% (P＜0.01), dNK细胞NKG2D的表达水平与外周血NK细胞相近, 分别为(88.70±4.1)%与(93.10±3.6)% (P＜0.05); 蜕膜中的CD4 T淋巴细胞的表达低于外周血中CD4 T淋巴细胞, 二者分别为(13.70±1.0)%与(15.85±2.4)% (P＜0.05), 蜕膜中CD8 T淋巴细胞表达明显低于外周血中CD8 T淋巴细胞, 二者分别为(15.23±1.5)%与(18.85±1.73)%(P＜0.01).结论: 妊娠期蜕膜中的NK细胞及T淋巴细胞可能是同维持母-胎界面的免疫耐受的重要原因.     

iNKT细胞多样性调节机制及其在疾病中的作用

iNKT细胞(invariant nature killer T,iNKT)是T淋巴细胞中独特的亚群.它们表达恒定的TCRVα14与NK细胞的部分标识CD161(NKI.1)分子和NK细胞受体NKR-P1C.iNKT细胞也被认为是经典的NKT细胞.iNKT细胞受体的恒定部分是TCRVα14链.     

流式细胞术检测过敏性紫癜患儿外周血调节性T细胞的研究

目的了解过敏性紫癜（HSP）患儿外周血调节性T细胞数量的改变及其在过敏性紫癜患儿免疫功能紊乱中的调控作用。方法应用四色流式细胞术,对35例过敏性紫癜患儿和35例正常儿童的CD4^＋CD25^hi调节性T细胞、CD3^＋T淋巴细胞、CD3^＋CD4^＋辅助T细胞、CD3^＋CD8^＋抑制T细胞、CD19^＋B淋巴细胞、CD3^-CD16^＋ 56^＋NK细胞进行测定。结果HSP患儿外周血CD4^＋CD25^hi调节性T细胞、CD3^＋CD4^＋辅助T细胞、CD3-CD16^＋56＋NK细胞的百分率下降均明显低于对照组;CD19^＋B淋细胞的百分率则显著增高;而两组间CD3^＋T淋巴细胞、CD3^＋CD8^＋抑制T细胞的变化差异无统计学意义。结论HSP患儿体内存在细胞及体液免疫功能紊乱,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞具有维持自身免疫耐受和调节免疫应答的功能,其数量下降可能是导致过敏性紫癜发病的重要原因之一。     

NKT细胞一种新型的T细胞

NKT细胞 (natural killer T cell)主要是指携带一恒定的 T细胞受体 (TCR) αβ和 NK细胞活化性受体的 CD4- CD8-CD4 CD8- T细胞 ,是由 Budd等在 1987年首先报道的 ,以后有大量的研究表明这类细胞是不同于传统 T细胞的新一类T细胞 ,在发育、表型、及免疫功能等方面有其自身的特殊性 ,尤其是近年来的研究认为 NKT细胞在机体免疫自稳、抗感染和抗肿瘤免疫等方面具有重要的作用。1　 NKT细胞的表型特征NKT细胞具有与成熟的激活 /记忆型 T细胞相似的一些表型 (见表 ) ,其中 NKT细胞最显著的特征是其表达的TCR和 NK细胞的激活受体…