多重聚合酶链反应分析石蜡包埋组织多肿瘤抵制基因探讨

目的：建立一种敏感、特异和快速检测石蜡包埋组织中多肿瘤抑制基因（ＭＴＳ１）的方法。方法：利用改良的ＤＮＡ制备方法,成功的从甲醛固定、石蜡包埋组织中提取ＤＮＡ,同时用建立的多重聚合酶合链反应（ＰＣＲ）进行检测。结果：３０例石蜡包埋的正常组织与新鲜组织提取的ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增后,电泳图谱都出现５３６ｂｐ和３１０ｂｐ,即结果相同。结论：轵要提取、纯化得当,石蜡包埋组织在分子生物学研究领域中将有重要应用价     

多重聚合酶链反应检测口腔鳞癌多肿瘤抑制基因初探

为探讨多肿瘤抑制基因（ＭＴＳ１，ＣＤＫＮ２）与口腔鳞癌的关系，应用自行设计合成的ＭＴＳ１基因特异引物建立的多重聚合酶链反应（ｍ－ＰＣＲ）技术，检测ＭＴＳ１基因在口腔鳞癌中的表达水平。结果：１４例鳞癌中２例有ＭＴＳ１基因变异，提示二者相关。     

聚合酶链反应检测胃部疾患石蜡包埋组织中的幽门螺杆菌

目的：了解慢性胃炎、消化性溃疡等胃部疾患幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）感染情况,从流行病学角度探讨胃部疾患与幽门螺杆菌感染的关系。方法：收集临床确诊的慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌的石蜡包埋组织标本各80份,同时设正常对照标本80份。应用聚合酶链反应（Polymerase Chain reaction,PCR）检测其幽门螺杆菌。结果：三种病例及正常对照组其阳性率分别为：慢性胃炎组77．50％（62／80）,消化性溃疡组82．50％（66／80）,胃癌组62．50％（50／80）,正常对照组16．25％（13／80）。三病例组之间无显著性差异（P〉0．05）,而各病例组与正常对照组之间均有显著性差异（P〈0．001）。结论：幽门螺杆菌感染与慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌的发生关系密切,Hp感染很可能是胃癌发生的致瘤因子之一。     

多重聚合酶链反应分析Dystrophin基因缺失突变

应用mPCR技术、Dystrophin基因的14对外显子扩增引物对26例DMD／BMD患者进行了基因缺失性分析。其中16例的Dystrophin基因出现缺失突变，占61．5％。缺失突变（13／16）主要发生在基因中央突变热点区（exon 43-51),特别是exon 48更是缺失突变的集中位点（10／16）。本文对Chamberliam 9对引物的扩增条件作了一定修改，并用扩增Chamberlian引物的反应条件和参数扩增5对Beggs引物，获得良好结果。     

聚合酶链反应实验中使用石蜡包埋材料的一点体会

聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术是近年发展起来的一种快速、特定的ＤＮＡ片断体外扩增技术，为单克隆测序技术的一种。此法操作简单，能在普通实验室完成。我们经１年多的摸索，就ＰＣＲ实验中遇到的有关石蜡包埋组织中ＤＮＡ提取和扩增的一些问题及解决方法归纳如下。ａ．在...     

多重聚合酶链反应检测DMD基因的初步分析

目的 在更广泛的区域内寻找ＤＮＤ基因的缺失范围。方法 用２５对引物以多重ＰＣＲ技术对１７例ＤＭＤ或ＢＭＤ患者进行ＤＭＤ基因检测。结果 ８例患者（４７．１％）被检出ＤＭＤ基因片段性缺失,其中７例患者的缺失部位集中在４４～５１号外显子,另１例患者的缺失部位处于ＤＭＤ基因的５′端。结论 我国ＤＭＤ或ＢＭＤ患者ＤＭＤ基因的缺失热点主要位于该基因的中央部位,但亦有基因上游大片段的缺失。     

多重聚合酶链反应检测新生儿性别决定基因

目的为了提高聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测人类性别决定基因（ｓｅｘ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅＹ，ＳＲＹ）的检出阳性率，建立了多重ＰＣＲ检测方法，使其准确度提高，保证实验准确无误。方法使用自行设计的一对引物（Ａ）与日本学者的引物对（Ｃ），同时对ＳＲＹ基因进行扩增的多重ＰＣＲ检测（ｍｕｌｔｉｐｌｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎｓ，ｍｕｌｔｉｐｌｅＰＣＲ）方法。引物对Ａ扩增ＳＲＹ基因的产物为２８０ｂｐ（Ｙ）；引物对Ｃ作为实验内对照，其扩增产物为３５５ｂｐ（Ｙ）和５９０ｂｐ（Ｘ）。结果用这一多重聚合酶链反应技术测定了２０６例新生儿脐静脉血ＳＲＹ基因。其中１０５例男性标本均出现２８０、３５５和５９０ｂｐ三条扩增带；１０１例女性标本仅有一条５９０ｂｐ扩增带。结果证明本实验的特异性很好并且没有出现假阴性现象。结论两对引物同时扩增使实验更加准确，特别是使用了内对照，可以观察反应是否成功，起到了双保险的作用。避免了假阴性出现是本实验设计的主要特色。     

多重聚合酶链反应检测结核菌耐异烟肼相关基因

目的：建立耐异烟肼(isoniazid,INH)结核分枝杆菌(M.tuberclasis,MTB)多重聚合酶链反应(multiple PCR,multi-PCR)检测系统，在一次扩增中快速，特异地同时检出aphC启动子，inhA和kagG基因，用于快速初步诊断结核分枝杆菌对INH的耐药性．方法：根据结核分枝杆菌的aphC启动子，inhA和kagG序列，分别设计出3对特异性寡聚核苷酸引物，采用multi—PCR技术，同时检出对结核分枝杆菌耐INH起作用的3个基因．结果：应用multi—PCR反应体系，对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果；multi—PCR扩增的预期结果为：单基因引物出现一条特异性扩增区带，多重基因引物出现2或3条特异性扩增区带，经实验达到预期的扩增结果；对H37Rv标准株、INH敏感株及INH耐药株分别采用常规PCR和multi—PCR进行同时扩增，结果两种扩增方法均能扩增出预期的目的片段，符合率达100％．结论：multi—PCR能有效地为多基因耐药的临床病原体的诊断提供快速、准确的诊断手段，更能提高检验效率。     

聚合酶链反应检测肿瘤组织的端粒酶活性

目的：比较聚合酶链反应－微孔板杂交法（PCR－MPH）和聚合酶链反应－聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PCR－PAGE）检测肿瘤组织端粒酶活性的临床价值。方法：PCR－MPH以地高辛标记端粒重复片段特异的探讨与PCR变性产物杂交,经酶底物显色,通过测定吸光度判断结果;PCR－PAGE方法直接用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离PCR扩增端粒酶的合成产物,经银染色,分析端粒酶活性。结果：PCR－MPH方法能准确、特异地检测出肿瘤组织的端粒酶活性,其灵敏度比PCR－PAGE法高100倍,结论：两种方法均可用于临床检测,只是PCR－MPH方法更简单、便一些。     

石蜡包埋组织miRNA做为肿瘤标志物的研究进展

miRNA是一类长度为19~25个核苷酸的非编码小分子RNA,从转录后水平调控mRNA的翻译,与肿瘤的发生、转移和预后进程密切相关。近年来研究发现,石蜡包埋组织的miRNA仍然保持一定的完整性。该文就石蜡miRNA作为肿瘤标志物的研究进展进行综述。     

应用多重聚合酶链反应检测结核杆菌

作者合成两对引物，建立结核杆菌ＤＮＡ多重ＰｃＲ法，用以检测分枝杆菌标准菌株，仅人型和牛型结核杆菌呈阳性，灵敏度≥７ｃｆｕ结核杆菌呈阳性。４０例肺结核患者痰，经多重ＰＣＲ法检测２７例呈阳性，而采用Ｂａｃｔｃｃ４６０ＴＢ系统快速培养法培养仅１９例阳性；多重ＰＣＲ法栓出率较一对引物ＰＣＲ法高１５％～１７．５％，具有较好的敏感性和林异性。     

多重聚合酶链反应检测人子宫颈病毒感染

目的在同一反应体系中同时快速检测人子宫颈常见的人乳头状瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）、人疱疹病毒２型（ＨＳＶ－２）和巨细胞病毒（ＣＭＶ）以及沙眼衣原体（ＣＴ）感染。方法采用快速制备样品的方法简化了聚合酶链反应（ＰＣＲ）实验过程，应用多重聚合酶链反应检测四种病原体。结果整个ＰＣＲ检测过程仅需４小时，总检出率为５７％，各病原体检出率分别是ＨＰＶ－１６１１％、ＨＳＶ－２２１％、ＣＭＶ１４％和ＣＴ２１％。结论该方法既保持了ＰＣＲ的敏感性和特异性，又是一种简便、快速的诊断技术，可用于人宫颈感染的临床诊断和预后判断。     

逆转录－聚合酶链反应测定多药耐药基因

目的建立一个用于测定多药耐药基因（ｍｄｒ１）表达水平、反映临床耐药情况的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）半定量技术。方法根据处于指数增长期的ＰＣＲ产物量可反映最初模板量多少的原理，以白血病为疾病模型，通过对最佳模板量及最佳循坏数的分析、参比对照的设定等，建立了３５Ｓ－ｄＡＴＰ（３５硫－脱氧三磷酸腺苷）掺入的ＲＴ－ＰＣＲ法，并以此法对１９例临床白血病标本ｍｄｒ１ｍＲ－ＮＡ（信使核糖核酸）表达水平进行了检测。结果１９例临床标本检测发现，６例化疗耐药或复发病例中，５例有高水平的ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达（ｍｄｒ１／β－ａｃｔｉｎ：０．６８～０．７６）（β－ａｃｔｉｎ：β肌动蛋白）。１１例化疗完全缓解或部分缓解病例中，除２例有低水平ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达（ｍｄｒ１／β－ａｃｔｉｎ：０．３３、０．４０）外，其余９例均为阴性。ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达水平和临床化疗结果明显相关（Ｐ＝０．０１７）。结论所建立的方法基本上可反映白血病患者化疗耐药情况，指导临床化疗。     

简易提取石蜡包埋组织DNA

DNA的提取是 PCR成功与否的关键 ,而 DNA提取最好是用新鲜标本 ,但对回顾性研究只能从石蜡包埋组织中提取。传统的石蜡包埋组织 DNA提取是用二甲苯脱蜡 ,酚 -氯仿反复多次的抽提 ,这样使得 DNA不断破坏 ,大量丢失 ,操作非常繁琐 ,费时费试剂 ,不适宜处理大量标本 ,且试剂对人体有毒害作用 ,而得到的 PCR反应的结果阳性率低 ,污染严重。为此 ,本室将传统的石蜡包埋组织 DNA提取法进行改良 ,介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　本室 1996～ 2 0 0 0年存档的手术切除的甲状腺癌标本 41例。水浴恒温振摇器 (SHA- C型 ,深圳天南海北实…     

碎小组织石蜡包埋的改进

在制作组织切片中,技术人员对于碎小组织的包埋普遍感到棘手,原因之一是多个碎小组织往往不能包埋在同一平面;其二是在包埋过程中组织容易丢失,且在染色过程中碎小组织容易脱落,从而导致病理诊断的不全面或误诊,继而延长诊断时间,延误病人的治疗。笔经过半年的临床实践,取得     

微小病理组织石蜡包埋新方法

在病理组织切片制片过程中，组织包埋技术是一项十分关键的工艺，不仅直接关系切片质量，且对病理诊断的准确性影响极大。组织包埋通常先将已熔化的石蜡倾入组织包埋框内，再将组织置于包埋框内的石蜡中。此种包埋法，对于较大病检组织并不困难，但对体积小、数量多的微小标本，如胃肠粘膜等活检小标本，有时就不容易包埋在同一平面上。因包埋框内石蜡不断冷却凝固，故先放入的组织位置较深，后放入的就较浅，这样制作的切片，就会出现有的组织显露不全的缺陷。近年来，为了提高制片质量，保证病理诊断的准确性，我们对微小病理组织采用了铸块烫槽石蜡包埋法。现总结如下。     

多重半巢式聚合酶链反应检测巨细胞病毒DNA多聚酶基因

目的：探讨多重半巢式聚合酶链反应（msnPCR)在研究巨细胞病毒（CMV）DNA多聚酶基因（UL-54）中的应用价值。方法：从8例心肺移植患者血标本中提取DNA,以CMV-UL54为模板,自行设计6条特异性引物,建立msnPCR扩增系统。扩增产物在DNA测序仪上自动测序。结果：msnPCR能扩增出427bp和1052bp两条目的片段,扩增产物测序表面存在导致氨基酸改变的碱基有义突变。结论：msnPCR扩增结合测序,可检测CMV-UL54的7个功能区目片段中的碱基突变,msnPCR比普通PCR更加省时和经济。     

用涂片和石蜡包埋组织切片进行肿瘤细胞核DNA图像定量分析结果的比较*

石蜡包埋组织进行肿瘤细胞核DNA图像定量分析技术对于恶性肿瘤的早期诊断及其恶性程度和预后的评价具有参考意义。目前所用的方法有切片法和单细胞涂片法两种馏。前者简便易行，不破坏组织结构，但由于切片所致的细胞不完整而欠精确；后者准确性高，但操作步骤多，且缺少组织学背景，因而各有其优缺点。     

应用多重聚合酶链反应同时检测二种弧菌的探讨

目的：建立一种敏感、快速的多重聚酶链反应（ｍｕｔｉｐｌｅＰＣＲ）同时检测二种弧菌基因。方法：对７２份腹泻患者粪便进行了常规培养和生化鉴定,同时进行ＰＣＲ法检测。后者在实施中应用多重聚合酶链反应在一次ＰＣＲ反应中同时扩增副溶血性弧菌的热稳定直接溶血素（ｔｄｈ）基因和０１群霍乱弧菌的霍乱毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因。结果：在１１份培养阳性标本中经ＰＣＲ法检测,ｃｔｘＡ基因８份,ｔｄｈ基因３份,而常规培