淫羊藿苷抑制正常黑素细胞黑素合成的研究

目的:观察中药单体淫羊藿苷对体外培养的正常黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响。方法:选择高、中、低3个浓度的中药单体作用于体外培养的黑素细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率。采用间接免疫荧光染色法对药物作用的黑素细胞和对照的酪氨酸酶(tyrosinase熏TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinaserelatedprotein-1熏TRP-1)、TRP-2进行标记,然后采用激光共聚焦显微镜半定量分析淫羊藿苷作用后细胞内3种成分表达量的变化。结果:淫羊藿苷明显抑制酪氨酸酶活性和黑素的生成(P<0.01),且呈浓度依赖性,但淫羊藿苷抑制黑素生成的作用较氢醌弱(P<0.01);淫羊藿苷以浓度依赖的方式促进细胞的增殖,氢醌则抑制了细胞的增殖;淫羊藿苷对黑素细胞内TYR和TRP-2的表达没有明显影响,但是对TRP-1的表达却明显增加了。结论:淫羊藿苷能够抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,这种抑制可能主要通过抑制酪氨酸酶活性起作用。     

中药单体芍药甙促进黑素合成的机制研究

目的:确定芍药甙(paeoniflorin)对促进黑素合成的作用.方法:MTT法测定芍药甙对黑素细胞增殖影响,多巴氧化法和NaOH法测定黑素细胞内酪氨酸酶活性和黑素合成, 定量定时RT-PCR和蛋白印迹法测定酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达.结果:100 μg/mL芍药甙对细胞的生长有抑制作用;5～10 μg/mL浓度可促进促黑素细胞的增殖;芍药甙增强酪氨酸酶的活性,增加黑素合成;上调TYR,TRP-1 mRNA表达.结论:芍药甙可促进黑素细胞增殖,通过上调酪氨酸酶的活性促进黑素合成.     

威灵仙等4种中药抑制黑素生成作用的机制研究

目的：研究威灵仙等4种中药对melan-a小鼠黑素细胞酪氨酸酶（Tyr）活性、Tyr及酪氨酸酶相关蛋白（TRP）基因转录与蛋白表达的影响,对4种中药抑制黑素生成的作用机制进行初步探讨.方法：用中药提取物处理melan-a小鼠黑素细胞后进行黑素含量测定,左旋多巴染色、实时荧光定量反转录（RT）-PCR和Western blot分别测Tyr及TRP-1、TRP-2的mRNA和蛋白表达水平.以熊果苷作为阳性对照.结果：4种中药在20 μg/mL浓度时具有明确的抑制黑素生成的作用,并且都不同程度地抑制Tyr的氧化活性.威灵仙、五倍子可以同时降低Tyr及TRP-1、TRP-2的基因转录和蛋白表达量.而麦冬、白苏叶可以降低Tyr及TRP-1、TRP-2的合成,但是对基因表达无影响.结论：威灵仙及五倍子提取物可以通过抑制Tyr、TRP-1、TRP-2的基因表达及蛋白合成和Tyr的多巴氧化活性这三方面实现其抑制黑素产生的作用;麦冬、白苏叶在基因转录后的酶蛋白水平发挥抑制黑素生成的作用.     

葛根素促进黑素细胞黑素合成及其机制的初步探讨

目的 探讨葛根素对正常人黑素细胞黑素合成的影响和可能机制。 方法 用噻唑蓝（MTT）法、NaOH裂解法观察葛根素对黑素细胞增殖及黑素合成作用,RT-PCR及Western印迹法检测葛根素对黑素细胞小眼畸形相关转录因子（MITF）、酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TRP-1）基因转录和蛋白表达水平的影响。 结果 1 ~ 40 μmol/L浓度范围内葛根素对体外培养的黑素细胞增殖影响与正常对照组相比,差异无统计学意义（P > 0.05）。与正常对照组相比,40 μmol/L葛根素可显著促进黑素细胞的黑素合成（P < 0.05）,并可显著增加MITF、TYR、TRP-1 mRNA及蛋白的表达（P < 0.05）。40 μmol/L葛根素使MITF、TYR、TRP-1的蛋白表达量分别比正常对照组增加8.69%,10.28%和10.58%（P < 0.05）;并使MITF、TYR、TRP-1的mRNA表达量分别比正常对照组增加2.48倍,1.91倍和1.63倍（P < 0.05）。 结论 葛根素能增加MITF、TYR、TRP-1 mRNA及蛋白的表达水平,促进黑素合成。     

欧前胡素抑制人表皮黑素细胞黑素生成

目的：评价欧前胡素对培养人表皮黑素细胞黑素生成的作用。方法：体外分离、纯化培养人表皮黑素细胞。随机分为空白组、熊果苷组和欧前胡素组（12．5μM,25μM和50μM）,作用48h,观察黑素细胞形态．检测黑素细胞活力、酪氨酸酶活性和黑素含量,免疫荧光显微镜观察欧前胡素对黑素细胞酪氨酸酶的影响。结果：不同浓度（0、12．5μM、25μM和50μM）欧前胡素作用于黑素细胞48h后,细胞活力分别为100％、107．8％、87．5％和59．7％。低浓度欧前胡素不影响黑素细胞形态,高浓度（50μM）对黑素细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量有抑制作用,呈剂量依赖性。欧前胡素对酪氨酸酶蛋白在细胞内定位未见明显影响,但酪氨酸酶荧光强度降低。结论：欧前胡素抑制体外培养人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性而降低黑素生成。     

芦荟素对Melan-a鼠黑素细胞株黑素生成及其相关基因表达的影响

目的:研究芦荟素对Melan-a鼠黑素细胞株的黑素生成及其相关基因表达的影响。方法:分别测定不同浓度芦荟素作用后的Melan-a鼠黑素细胞株的细胞增殖率、酪氨酸酶(TRY)含量及黑素量变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定酪氨酸酶相关蛋白(TRP)-1和TRP-2的表达,并与相应浓度的氢醌进行比较。结果:0.01～10.00mmol/L的芦荟素对黑素细胞的增殖率无影响,芦荟素可显著抑制Melan-a鼠黑素细胞株的TRY活性和黑素量生成,抑制作用随芦荟素的浓度升高而增加,0.10mmol/L芦荟素处理的Melan-a鼠黑素细胞株的TRY抑制率及黑素量与0.10μmol/L的氢醌相当(P>0.05);芦荟素还能显著下调TRP-1和TRP-2 mRNA的表达水平(P<0.01),但是TRP-1和TRP-2的变化与TRY及黑素量的变化不平行。结论:芦荟素显著抑制Melan-a鼠黑素细胞株的TRY活性、黑素量和TRP-1/TRP-2 mRNA的表达水平,直接测定黑素细胞TRY浓度和黑素量比检测TRP-1/TRP-2mRNA更能确切地反映芦荟素对黑素细胞的影响。     

墨旱莲乙醇提取物动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成的影响

目的选择离体实验中对黑色素合成的关键酶—酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)有激活作用的墨旱莲(旱莲草),研究其动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成及相关基因犤TYR、TYR相关蛋白(TRP-1/2)mRNA犦表达的影响。方法以棕色豚鼠为动物模型,用Schmorl法染色,计数含黑素的细胞;用多巴(DOPA)-氧化酶染色,计算每100个基底细胞中DOPA阳性细胞数。培养的小鼠B16黑素瘤细胞以四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、氢氧化钠(NaOH)法和体外氧化DOPA反应方法分别测定细胞的增殖活性、黑素生成量及TYR活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TYR及其TRP-1/2基因的表达。结果墨旱莲乙醇提取物可使豚鼠表皮基底层中含黑素颗粒细胞增多,使豚鼠表皮内DOPA阳性细胞增多(P<0.05);具有促进小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及TYR活性作用(P<0.05),对细胞TYR基因有上调作用,而对TRP-1/2mRNA的表达无明显作用。结论墨旱莲乙醇提取物具有促进黑素合成及上调酪氨酸酶基因表达的作用,对白癜风色素恢复有较好应用和开发的前景。     

白癜风复色区黑素细胞特异性抗原表达的研究

目的：研究白癜风复色区黑素细胞分布及gp100、酪氨酸酶（TYR）等抗原的表达。方法：对白癜风患者复色区皮肤活检的组织标本以免疫组化染色识别gp100、TYR、酪氨酸酶相关蛋白（TRP）-1和TRP-2,以HPIAS-1000彩色病理图文报告系统定量分析阳性表达的强弱。结果：色素脱失斑处未见活性黑素细胞,复色区黑素细胞数目与正常人皮肤比较差异无统计学意义（P〉0．05）。色素脱失斑内岛状复色区皮肤,近毛囊部位黑素细胞数目较多,远离毛囊部位数目较少;色素脱失斑边缘复色区内,黑素细胞在表皮及毛囊的基底层中分布较均匀。复色区黑素细胞树突短粗、数目变少。复色区阳性细胞gp100和TRP-2图像灰度值与正常皮肤比较差异无统计学意义（P〉0．05）,TYR低于正常皮肤（P〈0．05）,而TRP-1明显低于正常皮肤（P〈0．01）。结论：色素脱失斑处有功能黑素细胞缺失。复色区内可见黑素细胞,其结构、功能皆完整,数目与正常人无明显差别。复色区黑素细胞可能来源于毛囊组织．亦可能来源于色素脱失斑边缘正常黑素细胞。TRP-1的高表达可能导致复色区黑素细胞的形态异常。     

甘草提取物对人黑素细胞黑素合成的影响

目的: 评价甘草提取物对人原代黑素细胞酪氨酸酶及黑素合成的影响.方法:选择2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0 mg/L6个浓度的甘草作用于体外培养的人表皮黑素细胞72 h,分别测定细胞增殖活性、酪氨酸酶活性和黑素含量,western blot方法检测甘草作用后黑素细胞中酪氨酸酶蛋白的表达.结果: 甘草显著抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性.结论: 甘草通过下调酪氨酸酶的表达抑制黑素合成和酪氨酸酶活性.     

黑素生成素对黑素瘤mel586细胞白癜风相关基因-1和酪氨酸酶表达的影响

采用MTT法测定黑素生成素对细胞增殖率的影响;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;半定量RT-PCR检测黑素生成素对黑素细胞白癜风相关基因-1（VIT-1）,酪氨酸酶（TYR）和酪氨酸酶相关蛋白-1（TRP1）基因表达的影响。结果：黑素生成素能促进黑素瘤细胞mel586的增殖,并与浓度呈正相关性,对TYR和TRP-1mRNA表达无明显促进作用;黑素生成素在浓度为6μg/mL和12μg/mL时对黑素瘤细胞mel586酪氨酸酶活性有促进作用（P〈0.05）。黑素生成素治疗白癜风有效的机制可能与提高VIT-1的表达量和促进细胞增殖有关。     

毛囊黑素细胞酪氨酸酶及相关蛋白1和2等分化标记分子的研究

目的:研究毛囊黑素细胞生物学特性,特别是与黑素合成相关酶蛋白和黑素小体结构蛋白在毛囊中的表达及分布情况。方法:取正常人头皮,采用HMB-45和识别酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2)等抗体免疫组化染色黑素细胞,研究毛囊中黑素细胞的分布、形态及TYR、TRP1和TRP2等黑素细胞分化标记分子的表达情况。结果:有功能的黑素细胞位于毛漏斗部基底层和生长期毛母质内接近毛乳头处,毛母质黑素细胞树突计数均值为5.1,高于表皮黑素细胞(P<0.01)。毛髓质中黑素细胞与皮质细胞比值约为1∶4.2,而在基底层基底细胞与黑素细胞之比约为1∶9.7。毛球HMB-45,TYR,TRP1和TRP2阳性,阳性颗粒仅局限于毛皮质和毛髓质内。图像分析结果表明:毛球部黑素细胞HMB-45、TYR、TRP1灰度值低于表皮黑素细胞(P<0.05)、毛球部、毛漏斗部及表皮的黑素细胞TRP2灰度比较差异无显著性(P>0.05)。结论:毛囊中有活性的黑素细胞主要位于毛球和毛漏斗部,它们均表达黑素细胞分化标记抗原gp100、TYR、TRP1和TRP2。而且毛母质黑素细胞前3种分子表达量高于表皮黑素细胞。     

白癜风皮损黑素细胞HMB-45、酪氨酸酶及其相关蛋白1的免疫组化研究

目的:研究白癜风白斑处黑素细胞分布及酪氨酸酶(TYR)等标记分子的表达情况。方法:对吸疱法所取白斑皮肤以免疫组化染色识别TYR、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)和HMB-45,以Mias99彩色图像分析软件定量图像分析阳性表达的强弱。结果:白斑处黑素细胞数目明显低于正常对照(P<0.01),患者非皮损处与正常人皮肤比较差异无显著性(P>0.05)。皮损处黑素细胞树突减少,平均为3.4个,低于对照组(P<0.05)。残留黑素细胞各抗体呈强阳性染色。白斑毛囊之间可见黑素细胞散在、呈围管样分布。白斑处阳性细胞HMB-45图像灰度值低于正常着色皮肤(P<0.05),而TRP1高于正常皮肤(P<0.01),TYR与正常皮肤无差异(P>0.05)。结论:白斑处仍然有黑素细胞。残存黑素细胞树突回缩、数目变少,而且黑素细胞中黑素细胞标记分子表达异常。     

芍药苷对黑素细胞生物活性的影响

目的:检测芍药苷对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法:建立正常人表皮黑素细胞培养体系,加入不同浓度(5~640μg/mL)芍药苷并作用一定时间后,采用MTT法、体外氧化DOPA反应法、NaOH法等分别测定黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素含量的变化。结果:40~160μg/mL芍药苷呈剂量依赖性抑制黑素细胞增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);5-20μg/mL芍药苷对酪氨酸酶活性呈剂量依赖性促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);10-20μg/mL芍药苷对黑素细胞黑素合成起促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:芍药苷在较高浓度范围内(40~160μg/mL)对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖有剂量依赖性抑制作用;在较低浓度范围内(10-20μg/mL)对其黑素合成有促进作用。     

倍他米松对毛囊外毛根鞘无色素黑素细胞激活的试验研究

目的：研究倍他米松（betamethasone,BT）对毛囊无色素黑素细胞（amelanotic melanocytes,AMMC）的激活作用。方法：以高、中、低3种不同浓度的BT作用于培养的人毛囊外毛根鞘AMMC,测定药物作用前后酪氨酸酶（tyrosinase,TYR）活性和黑素生成的变化。通过间接免疫荧光法结合激光共聚焦显微镜半定量分析药物作用前、后AMMC TYR、酪氨酸酶相关蛋白（tyrosinase related protein,TRP）-1和TRP-2表达的变化,透射电镜分析黑素小体在药物作用前后的变化。结果：BT促进了AMMC表达TYR和TRP-1,并且以剂量依赖方式促进TYR活性,诱导黑素生成。AMMC主要含有Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期黑素小体,但是BT作用后AMMC含有大量Ⅲ或Ⅳ期黑素小体,并且以Ⅳ期黑素小体为主。结论：BT能够激活AMMC,这可能部分解释了糖皮质激素治疗白癜风的机制。     

养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株酪氨酸酶mRNA转录水平的影响

目的 观察养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株酪氨酸酶mRNA转录水平的影响机制，探讨养颜青娥丸治疗色素增加性皮肤病的作用机制。方法 PCR-ELISA方法检测养颜青娥丸复方不同浓度及不同时间对黑素瘤细胞酪氨酸酶mRNA转录的影响。结果 PCR-ELISA方法研究结果表明在加药6h后养颜青娥丸对酪氨酸酶mRNA有抑制作用，48h后抑制作用不太明显；各浓度对mRNA的水平均有抑制作用；在加药6h后并在2．01mg／mL抑制作用最为显著。结论 养颜青娥丸能抑制黑素瘤细胞内酪氨酸酶mRNA转录，对色素增加性皮肤病可能有一定的治疗作用。     

姜黄素对正常人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的研究姜黄素对体外培养的正常人表皮黑素细胞黑素生成及酪氨酸酶活性的影响。方法采用MTT法测定姜黄素对人表皮黑素细胞的活力的影响,体外氧化DOPA反应方法测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素生成量。结果姜黄素在浓度小于或等于10μmol/L时无明显细胞毒性。姜黄素在浓度大于或等于2.5μmol/L时呈剂量依赖性抑制酪氨酸酶活性,减少黑素生成,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论姜黄素抑制培养的人表皮黑素细胞的黑素生成,可能具有开发成为美白产品的前景。     

The possible processing of tyrosinase in the Golgi complexes of the melanocyte

In mammals, melanin formation occurs only in melanosomes within the melanocyte, where tyrosinases are most highly accumulated; however tyrosinases exist as precursors of melanosomal enzymes in microsomes, where the enzymes are inactivated by unknown mechanism(s). The Km value of melanosomal tyrosinase for tyrosine was 0.6 mM, but that of the microsomal enzyme was 1.3 mM. The Km for tyrosine of microsomal tyrosinase was lowered to that of melanosomal tyrosinase after incubation of the microsomal enzymes with a Golgi fraction isolated from mouse melanoma. Further, the molecular weight of microsomal tyrosinase appeared to increase after incubation with the Golgi fraction; microsomal tyrosinase showed a slower mobility in SDS Polyacrylamide gel electrophoresis after incubation with the Golgi fraction than before incubation. These data suggest the possibility that microsomal tyrosinase is processed in the Golgi area during transfer to the melanosome in the melanocyte.